Microbiologa clnica 2008 - 2009

Antonio G. Pisabarro Catedrtico de Microbiologa

Estructura de los microorganismos

Clulas procariotas y eucariotas. Tamao y morfologa de las bacterias. Observacin microscpica de los microorganismos. Tinciones. Membrana bacteriana y peptidoglicano. Bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Ribosomas bacterianos. Elementos facultativos de la clula procariota. Cpsula y capas mucosa. Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias. Endosporas. Estructura de los virus.

Estructura de los microorganismos

Clulas procariotas y eucariotas. Tamao y morfologa de las bacterias. Observacin microscpica de los microorganismos. Tinciones. Membrana bacteriana y peptidoglicano. Bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Ribosomas bacterianos. Elementos facultativos de la clula procariota. Cpsula y capas mucosa. Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias. Endosporas. Estructura de los virus.

rbol filogentico universal

Eucariontes

Patgenas

Procariontes
Microorganismos Prescott

rbol filogentico universal

Biologa de los Microorganismos de Brock

Estructura interna de una clula eucariota

1- Ncleo con varios cromosomas 2.- Organismos diploides 3.- Citoplasma con orgnulos celulares (mitocondrias, retculo endoplsmico, Golgi, vacuolas, etc). 4.- Ribosomas eucariticos 80S Los microorganismos eucariticos ms relevantes en clnica incluyen ciertos animales de pequeo tamao productores de enfermedades parasitarias, protozoos y hongos unicelulares o pluricelulares.

Morfologa de bacterias (G+)

Mesosoma Ncleo Ribosoma Cuerpos de Inclusin Cpsula

Protenas Superficiales

Pared Celular

Espacio Periplsmico

Membrana Plasmtica

Flagelo

No existe la separacin entre ncleo y citoplasma Haploides

Estructura de los microorganismos

Clulas procariotas y eucariotas. Tamao y morfologa de las bacterias. Observacin microscpica de los microorganismos. Tinciones. Membrana bacteriana y peptidoglicano. Bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Ribosomas bacterianos. Elementos facultativos de la clula procariota. Cpsula y capas mucosa. Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias. Endosporas. Estructura de los virus.

Tamao y morfologa de las bacterias.

La forma de una bacteria viene determinada por la rigidez de su pared celular. Las bacterias poseen una de las tres formas fundamentales: esfrica, cilndrica o hlice.
Formas L: estado de una bacteria que carece de peptidoglicano (pared celular) Las formas L son conocidas desde 1930 Las formas L son similares a los micoplasmas Las formas L son resistentes a los antibiticos -lactmicos No se sabe si en la naturaleza las formas L son un accidente o una adaptacin que permite a algunas bacterias escapar del sistema inmune y emigrar a otras localizaciones en el cuerpo

Tamao y morfologa de las bacterias. Formas L

A B

Clulas normales de Bacillus subtilis (A) y formas L de esta bacteria (B)

Ryuji Shingaki et al. 2003. Induction of L-form-like cell shape change of Bacillus subtilis under microculture conditions. Microbiology (2003), 149, 25012511

Formas L

Tamao y morfologa de las bacterias.

Micrografas electrnicas de formas L de B. subtilis

Ryuji Shingaki et al. 2003. Induction of L-form-like cell shape change of Bacillus subtilis under microculture conditions. Microbiology (2003), 149, 25012511

Tamao y morfologa de las bacterias.

Las clulas esfricas se denominan cocos y suelen ser redondeadas aunque pueden ser ovoides o elpticas.
Estafilococo

Estreptococo Diplococo

Tamao y morfologa de las bacterias.

A las de forma cilndrica se las denomina bacilos. Los extremos de estas clulas suelen ser redondeados, rectos, en forma de huso o cuerno.

Bacillus anthracis

Escherichia coli

Tamao y morfologa de las bacterias.

A las de forma espiral o helicoidal se las denomina espirilos y se caracterizan por su forma de sacacorchos.

Treponema pallidum

Tamao y morfologa de las bacterias.

Existen modificaciones a estas tres formas fundamentales y aunque la mayor parte de las bacterias mantienen constante su forma, algunas especies pueden variar la forma por lo que se les llama pleomrficas. Arthrobacter es un ejemplo de pleomorfismo debido a que su forma cambia en funcin de la edad del cultivo.

Arthrobacter spp.

Tamao y morfologa de las bacterias.

Tamao: Invisibles al ojo humano las bacterias se miden en m que equivale a 10-3 mm. El tamao de las bacterias vara dependiendo de las especies entre menos de 1 m y 250 m; siendo lo ms habitual entre 1 y 10 m. En las clulas bacterianas la relacin superficie y volumen de la clula es muy alta lo que permite la entrada de muchos nutrientes para alimentar a un pequeo volumen y una alta actividad metablica

1 mm

10 m Lmite de resolucin ocular

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Antonie van Leeuvenhoek

Delft, Holanda 1632-1723 Fue el primero en ver espermatozoides, clulas de la sangre y bacterias

Antonie van Leeuvenhoek

Bacterias de la placa dental

Microscopio ptico
Debido a su pequeo tamao, la observacin de los microorganismos ha de realizarse mediante el uso de microscopios. En el caso de la mayora de los microorganismos procariticos, la observacin microscpica se limita a determinar la forma, el modo de agrupamiento, el movimiento y la presencia de algunos elementos extracelulares tales como las cpsulas. En el caso de microorganismos eucariticos, la informacin que se obtiene de la observacin microscpica es mucho mayor porque tambin lo es su diversidad morfolgica y anatmica.

Resolucin de microscopios
La resolucin indica el tamao mnimo distinguible La resolucin del mejor microscopio ptico est limitado unas 0,2 m con un de 540 nm (luz verde) La resolucin de un microscopio electrnico de transmisin (MET) es de cerca de 2 nm La resolucin del microscopio electrnico de barrido (MEB) es de 1 - 10 nm

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Tinciones
TINCIN SIMPLE Permite observar la forma, tamao y agrupamiento de las bacterias usando un nico colorante (normalmente bsico).

Escherichia coli

Bacillus coagulans

Tinciones
TINCIN DIFERENCIAL: Tincin de Gram Es un sistema de dos tinciones simples sucesivas, separadas por una fase de decoloracin selectiva. Permite diferenciar las bacterias que retienen el primer color (Gram-positivas) de las que no lo retienen (Gram-negativas). Esta diferencia en comportamiento refleja diferencias estructurales y fisiolgicas entre ambos grupos de bacterias.

Staphylococcus aureus

Neisseria meningitidis

Tinciones
TINCIN DIFERENCIAL: Tincin de Gram

Bacillus cereus

Klebsiella pneumoniae

Tinciones
TINCIN DIFERENCIAL: Tincin de Gram

Tincin de Gram de una muestra de lquido cerebroespinal infectado con B. anthracis

Tinciones
TINCIN DIFERENCIAL Tincin de esporas

Bacillus cereus

Clostridium botulinum

Tinciones
TINCIN DIFERENCIALTincin de Ziehl-Neelsen (cido-alcohol resistencia) Es un tipo especial de tincin que permite la identificacin de microorganismos de los grupos Mycobacterium y Nocardia de gran relevancia clnica

Mycobacterium leprae

Mycobacterium tuberculosis

Tinciones
TINCIN DIFERENCIAL Tincin de cpsulas Se trata de una tincin negativa usando tinta china que permite determinar la presencia de cpsulas polisacardicas.

Cryptococcus neoformans

Tinciones
TINCIN DIFERENCIAL Tincin de flagelos Permite teir flagelos usando un mordiente para incrementar su grosor y hacerlos visibles al microscopio ptico.

Vibrio cholerae

Proteus sp.

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Membrana bacteriana
ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA INTERNA La membrana interna est formada por una bicapa lipdica. En las bacterias los lpidos que forman esta membrana son generalmente fosfolpidos y no se encuentran esteroles (salvo en el caso de los micoplasmas). Esto diferencia claramente las membranas bacterianas de las de clulas eucariticas que s tienen esteroles en sus membranas FUNCIONES DE LA MEMBRANA INTERNA 1.- Barrera de permeabilidad selectiva 2.- Soporte ordenado de sistemas enzimticos

Membrana plasmtica
Fosfolpidos Grupos Hidroflicos

Grupo Hidro fbicos

Fosfolpido Protenas de Membrana

Biologa de los Microorganismos de Brock

Acciones de las Protenas de Transporte

Exterio r

Uniporte Molcula Transportada Molcula Cotransportada

Simporte

Antiporte

Interio r

Biologa de los Microorganismos de Brock

Comparacin del Transporte Activo con la Difusin Simple

Transporte activo Concentracin Interna de solutos

Difusin Simple

Concentracin Externa de solutos

Biologa de los Microorganismos de Brock

ESTRUCTURA DEL PEPTIDOGLICANO

Macromolcula que rodea a bacterias proporcionando resistencia mecnica y confiriendo la forma. Est formada por un polmero complejo (murena) que forma una macromolcula que recubre completamente la clula. Estructuralmente est formado por cadenas glucosdicas en que se repite una unidad elemental de N-acetil-glucosamina unida por un enlace glicosdico 14 a cido N-acetil-murmico. Las unidades elementales estn entre s mediante enlaces glicosdicos 14.

ESTRUCTURA DEL PEPTIDOGLICANO

Las cadenas glucosdicas estn orientadas de forma paralela y estn unidas entre s mediante puentes peptdicos formados por cadenas de aminocidos que estn unidos al resto de cido N-acetilmurmico.

ESTRUCTURA DEL PEPTIDOGLICANO

En las cadenas peptdicas se alternan aminocidos con configuracin L y con configuracin D.

Subunidades del Peptidoglicano

Sntesis del peptidoglicano

Exterior Peptidoglicano Peptidoglicano

-lactmicos
Punto de crecimiento de la pared celular

Pentapptido Membrana citoplasmtica Interior Bactoprenol

Biologa de los Microorganismos de Brock

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Clulas procariotas y eucariotas. Tamao y morfologa de las bacterias. Observacin microscpica de los microorganismos. Tinciones. Membrana bacteriana y peptidoglicano. Bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Ribosomas bacterianos. Elementos facultativos de la clula procariota. Cpsula y capas mucosa. Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias. Endosporas. Estructura de los virus.

ESTRUCTURA DEL PEPTIDOGLICANO

La capa de peptidoglicano de las bacterias Grampositivas es ms gruesa que la de las Gram-negativas
Gram Positiva

PG MI ME MI PG

PG MI ME

Gram Negativa

PG MI

Capa externa de Lipopolisacridos y Protenas (LPS)

O-Polisacrido

Ncleo Polisacrido Capa Externa de Gram Negativa

Protena

Lpido Porina A

LPS

8 nm Fosfolpido Espacio Periplsmico Lipoproten a Peptidoglicano Membrana Citoplasmtica

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Clulas procariotas y eucariotas. Tamao y morfologa de las bacterias. Observacin microscpica de los microorganismos. Tinciones. Membrana bacteriana y peptidoglicano. Bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Ribosomas bacterianos. Elementos facultativos de la clula procariota. Cpsula y capas mucosa. Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias. Endosporas. Estructura de los virus.

Ribosomas bacterianos.
Los ribosomas, procariticos o eucariticos, estn formados por protenas y ARN; sin embargo, ambos tipos de ribosmas son diferentes de suerte que puede disponerse de inhibidores (antibiticos) especficos de ribosomas procariticos que no afectan a los eucariticos y viceversa.

Estructura de los microorganismos

Clulas procariotas y eucariotas. Tamao y morfologa de las bacterias. Observacin microscpica de los microorganismos. Tinciones. Membrana bacteriana y peptidoglicano. Bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Ribosomas bacterianos. Elementos facultativos de la clula procariota. Cpsula y capas mucosa. Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias. Endosporas. Estructura de los virus.

Elementos facultativos
La capa S formada por protenas y glicoprotenas Participa en la adhesin de las bacterias a superficies, la proteccin frente a la fagocitosis y acta como barrera frente a enzimas o substancias que pudieran daar a las bacterias que la poseen.

Elementos facultativos
Las cpsulas estn formadas por polisacridos o polipptidos Participan en la adhesin de las bacterias a superficies, retardan la desecacin de las bacterias en ambientes secos y proporcionan proteccin frente a la fagocitosis. No solo las bacterias presentan cpsulas sino que tambin han sido descritas en algunos hongos unicelulares (Cryptococcus neoformans). Una caracterstica macroscpica fcilmente observable de los microorganismos con cpsula es que forman colonias de aspecto mucoso y liso. Las diferentes variantes de cpsula de distintas cepas de una misma especie se pueden identificar mediante mtodos serolgicos. El antgeno capsular se conoce como antgeno K.

Elementos facultativos
Las cpsulas estn formadas por polisacridos o polipptidos Participan en la adhesin de las bacterias a superficies, retardan la desecacin de las bacterias en ambientes secos y proporcionan proteccin frente a la fagocitosis. No solo las bacterias presentan cpsulas sino que tambin han sido descritas en algunos hongos unicelulares (Cryptococcus neoformans). Las diferentes variantes de cpsula de distintas cepas de una misma especie se pueden identificar mediante mtodos serolgicos. El antgeno capsular se conoce como antgeno K.

Estructura de los microorganismos

Clulas procariotas y eucariotas. Tamao y morfologa de las bacterias. Observacin microscpica de los microorganismos. Tinciones. Membrana bacteriana y peptidoglicano. Bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Ribosomas bacterianos. Elementos facultativos de la clula procariota. Cpsula y capas mucosa. Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias. Endosporas. Estructura de los virus.

Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias.

FLAGELOS
Bacterias mviles El antgeno flagelar se conoce como antgeno H. Las bacterias flageladas pueden tener entre uno y 20 flagelos por clula. Composicin proteica Tamao es de unos 20 nm de dimetro y de entre 5 y 20 m de longitud.

FIMBRIAS

PELO F

Pequeas fibras proteicas Su nmero vara entre 100 y 1000 por bacteria Tamao entre 2 a 9 nm de dimetro y 1 a 5 m de longitud. Gran importancia en la adhesin

PROLONGACIONES DE ADHESIN

Es un tipo especial de fimbria producido por bacterias capaces de transmitir su informacin gentica a otras mediante conjugacin bacteriana. Cuando est presente hay slo uno por clula. Su naturaleza es proteica. Su longitud llega a alcanzar las 10 m. Algunos tipos de microorganismos son portadores de prolongaciones con forma de ventosa que les permiten adherirse a las clulas animales que infectan. Esto ocurre, por ejemplo, en ciertos micoplasmas.

Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias.

PELO F Es un tipo especial de fimbria producido por bacterias capaces de transmitir su informacin gentica a otras mediante conjugacin bacteriana. Cuando est presente hay slo uno por clula. Su naturaleza es proteica. Su longitud llega a alcanzar las 10 m.

Estructura de los microorganismos

Clulas procariotas y eucariotas. Tamao y morfologa de las bacterias. Observacin microscpica de los microorganismos. Tinciones. Membrana bacteriana y peptidoglicano. Bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Ribosomas bacterianos. Elementos facultativos de la clula procariota. Cpsula y capas mucosa. Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias. Endosporas. Estructura de los virus.

Esporas

Biologa de los Microorganismos de Brock

Ciclo Celular
Clula Vegetativa

Clula Espolulante

Espor a

Germinacin Espora

Clula Vegetativa
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Fases de formacin de la Endoespora

Biologa de los Microorganismos de Brock

cido dipicolnico

Grupos Carboxilo

Biologa de los Microorganismos de Brock

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Clulas procariotas y eucariotas. Tamao y morfologa de las bacterias. Observacin microscpica de los microorganismos. Tinciones. Membrana bacteriana y peptidoglicano. Bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Ribosomas bacterianos. Elementos facultativos de la clula procariota. Cpsula y capas mucosa. Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias. Endosporas. Estructura de los virus.

Estructura de los virus.

Poliovirus

Rhinovirus Adenovirus

Virus hepatitis A

Poxvirus

Estructura de los virus.

Virus influenza

Estructura de un Bacterifago

Cabeza

Ncleo

Base

Biologa de los Microorganismos de Brock

Priones

Concepto de prin

Depsitos amiloides en un paciente con CreutzfeldtJakob