Biofuel

Protocolo 1: Construccin da curva de calibrado.

[p-nitrofenol] (nmol/mL) 0,0 12,5 25,0 50,0 100,0

Absorbancia a 410nm 0,000 0,222 0,470 0,911 2,184

Curva de calibrado
Absorbancia a 410nm 2,500 2,000 1,500 1,000 0,500 0,000 0,0 -0,500 20,0 40,0 60,0 80,0 100,0 120,0 [p-nitrofenol] (nmol/mL) y = 0,0218x - 0,0614

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Protocolo 2: Determinacin da velocidade de reaccin en presencia e ausencia de enzima.
Cubeta Tempo (minutos) Absorbancia a 410nm [p-nitrofenol] (nmol/mL) Comenzo 0 0,083 6,612393515 B1 2 0,463 24,01644225 B2 3 0,718 35,69547495 B3 4 0,974 47,42030778 B4 6 1,358 65,00755702 B5 8 1,832 86,71681781 Fin 8 0,178 10,9634057
2 1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0 5 10

Absorbancia a 410nm

Reaccin catalizada Reccin no catalizada

Tempo (minutos)
100

[p-nitrofenol] (nmol/mL)

80 60 40 20 0 0 5 10 Reccin no catalizada Reaccin catalizada

Tempo (minutos) Como se pode observar nos dous grficos adxuntos, a presencia de enzima na reaccin fai que a velocidade da mesma sexa notablemente maior que naquelas reaccins nas que non est presente.

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Protocolo 3: Determinacin do efecto da temperatura na velocidad de reaccin.
Temperatura (C) 0 22 (T ambiente) 37
1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0 0,5 1 1,5 2 2,5 22C (T ambiente) 37C 0C

Absorbancia a 410nm 0,035 0,753 1,644

[p-nitrofenol] (nmol/mL) 4,413987359 37,29847944 78,1063937

Absorbancia a 410nm

Tempo (min)

[p-nitrofenol] (nmol/mL)

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 1 2 3 22C (T ambiente) 37C 0C

Tempo (min)

Supoendo que a tempo 0 minutos a cantidade de p-nitrofenol obtida 0 podemos ver nos grficos adxuntos como ao aumentar a temperatura que ten lugar a reaccin aumenta tamn a velocidade da mesma debido ao efecto da termodinmica.

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Protocolo 4: Determinacin do efecto do pH na velocidade de reaccin.
pH 5,0 6,3 8,6 Absorbancia a 410nm
1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0 0,5 1 1,5 2 2,5 pH 5 pH 6,3 pH 8,6

Absorbancia a 410nm 1,414 1,274 0,020

[p-nitrofenol] (nmol/mL) 67,5723642 61,16034625 3,726985436

Tempo (min)

[p-nitrofenol] (nmol/mL)

80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 0,5 1 1,5 2 2,5 pH 5 pH 6,3 pH 8,6

Tempo (min)

Supoendo que a tempo 0 minutos a cantidade de p-nitrofenol obtida 0 podemos ver nos grficos adxuntos como ao aumentar o pH do medio no que ten lugar a reaccin, dimine a velocidade da mesma debido posiblemente desnaturalizacin da enzima por terse superado o pH ptimo, no que a reaccin tera acadado a sa mxima velocidade.

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Protocolo 5: Determinacin do efecto da concentracin de enzima na velocidade de reaccin.

Tempo (minutos) 1 2 8 1 2 8
1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0

Cubetas A1 A2 A3 B1 B2 B3

Absorbancia a 410nm 0,152 0,321 1,050 0,123 0,281 0,716

[p-nitrofenol] (nmol/mL) 9,772602363 17,51282404 50,90111752 8,444398644 15,68081891 35,60387469

Absorbancia a 410nm

Enzima alta concentracin Enzima baixa concentracin 0 2 4 6 8 10

Tempo (min)

[p-nitrofenol] (nmol/mL)

60 50 40 30 20 10 0 0 2 4 6 8 10 Enzima alta concentracin Enzima baixa concentracin

Tempo (min) Observando os grficos adxuntos podemos afirmar que canto maior sexa a concentracin de enzima presente na reaccin maior ser a velocidade da mesma.

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Protocolo 6: Determinacin do efecto da concentracin de sustrato na velocidade de reaccin.
Tempo (minutos) 1 2 8 1 2 8 Cubetas A1 A2 A3 B1 B2 B3 Absorbancia a 410nm 0,554 1,076 2,605 0,115 0,217 0,649 [p-nitrofenol] (nmol/mL) 28,18425392 52,09192086 122,1203169 8,077997618 12,7496107 32,5352661

Absorbancia a 410nm

3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 0 5 10 Sustrato alta concentracin Sustrato baixa concentracin

Tempo (min) [p-nitrofenol] (nmol/mL)

140 120 100 80 60 40 20 0 0 5 10 Sustrato alta concentracin Sustrato baixa concentracin

Tempo (min)

vista dos grficos adxuntos podemos conclur que ao aumentar a concentracin de sustrato na reaccin aumenta tamn a velocidade da mesma.

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Outros datos de interese
- Efecto da presencia/ausencia de enzima na velocidade de reaccin: As enzimas son biocatalizadores que aceleran as reaccins que teen lugar no organismo sen alterar o equilibrio das mesmas. - Efecto da temperatura na velocidade de reaccin: A velocidade da reaccin aumenta ao aumentar a tempertura que a mesma ten lugar debido efecto da termodinmica ata que se acada a temperatura ptima, temperatura que a reaccin acada a sa velocidade mxima e a partir da cal esta ltima comeza a diminur debido desnaturalizacin da enzima. - Efecto do pH na velocidade de reaccin: A velocidade de reaccin aumenta a medida que o fai o pH do medio no que a mesma ten lugar ata que se acada o pH ptimo, momento no que a reaccin acada a sa mxima velocidade e a partir do cal esta ltima comeza a diminur debido desnaturalizacin da enzima. - Efecto da concentracin de enzima na velocidade de reaccin: Ao aumentar a concentracin de enzima presente na reaccin enzimtica aumenta tamn a velocidade da reaccin. - Efecto da concentracin de sustrato na velocidade de reaccin: Ao aumentar a concentracin de sustrato na reaccin faino tamn a velocidade da mesma ata que a disolucin chega ao seu punto de saturacin, momento a partir do cal a velocidade da reaccin se estabiliza.

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