Enzimologa

1. Funcin biolgica de las enzimas? 2. Estructura de la enzima? 3. Como se clasifican a las enzimas y cual es la funcin de cada una de ellas? 4. De que manera influyen el PH y la temperatura con la actividad enzimtica? 5. Cual es el papel que juegan las enzimas en los microbios?

1R/= las enzimas son protenas que tienen la funcin de acelerar reacciones qumicas en el sistema biolgico. Muchas reacciones necesarias para la clula vivas no se produciran con la suficiente rapidez a la temperatura y pH del del cuerpo sin enzimas. El termino que define la rapidez a la que se produce una reaccin qumica catalizadora o no, es la velocidad. La velocidad se define como el cambio en la cantidad (moles) de material inciales o de productos por unidad de tiempo. Las enzimas incrementan la velocidad de la reaccin qumica, pero sin cambiar el mismo durante el proceso.

2R/= La estructura qumica de una enzima activa u Holoenzima esta formada por una parte proteica (Apoenzima) formada por cadenas polipeptdicas ya que las enzimas son protenas qumicas y una parte o porcin no proteica (Coenzima). Dentro de la Apoenzima la unidad fundamental cataltica es una estructura tridimensional llamada sitio activo donde los aminocidos realizan las diversas funciones catalticas (hidrogenacin, deshidrigenacin, catlisis, sntesis, etc.), algunas enzimas requieren para su buen funcionamiento un componente no proteico llamado Coenzima, dentro de el se encuentran las coenzimas como el NAD, FAD, etc. y ciertos iones inorgnicos como el Fe, Mg, etc. llamados cofactores enzimticos. Las enzimas tienen como funcin primordial la de acelerar la velocidad de una reaccin enzimtica y adquieren la nomenclatura del sustrato al cual modifican, por ej., la enzima amilasa desdobla al almidn, las lipasas a los lpidos, las proteasas a las protenas. Se las encuentra en cada clula y en cada orgnulo celular, algunas actan individualmente y otras forman sistemas o complejos multienzimticos.

3R/=para designar una enzima se indican primero los sustrato y despus el tipo reaccin. Al cual se le aade el sufijo asa. Por ejemplo el alcohol deshidrogenasa es la alcohol: NAD (+) oxidorreductasa porque cataliza una reaccin de oxidacin reduccin y el dador de electrones es un alcohol y el aceptor es le NAD (+). Persisten muchos nombres comunes aceptados por la IUBMB y que son de uso habitual. Resumen de las clases enzimticas y las principales subclases: 1. Oxidorreductasa: Deshidrogenasas Oxidasareductasa Peroxidasa Catalasa Oxigenasa Hidroxilasa

2. Transferansas: Transaldolasa y trancetolasa Acil,-metil,-glucosily fosforiltransferansa Quinasas Fosfomutasa 3. Hidrolasa: Esterasas Glucosidasa Peptidasa Fosfatasa Tiolasa Fosfolipasa Amidasa Desaminasa Ribonucleasa

4. Liasas: Descarboxilasa Aldolasa Hidratasa Deshidratasa Sintasas liasas

5. isomerasas: racemasas epimerasas isomerasas mutasas(no todas) 6. ligasa: sintetasa carboxilasa

Clase 1: Oxidorreductasas: estas enzimas catalizan reacciones de oxidacin reduccin. Por ejemplo alcohol NAD (+) oxidorreductasa (una deshidrogenasa, especficamente la alcohol deshidrogenasa) cataliza la oxidacin d un alcohol a aldehdo. Esta enzima elimina 2 electrones y 2 tomos de hidrgenos de alcohol para producir un aldehdo; durante el proceso, los 2 electrones que originariamente estaban n el enlace carbono hidrogeno del alcohol se transfieren del NAD (+). Existen otras subclases de oxidorreductasas. Las oxidasas transfieren 2 electrones desde el dador al oxigeno y se forma perxido de hidrogeno (H2O2).

Clase 2: Transferansas: estas enzimas transfieren grupos funcionales entre dadores y aceptores. Las principales porciones tranferidas son los grupos aminos, acilos fosfato, glucosilo y los grupos pos monocarbonados. Las

aminotranferasas (transaminasas) transfieren un grupo amino de un aminocido y un nuevo cetoacidos. Las quinasas son las enzimas que catalizan la transferencia del grupo fosforilo, qumicamente lbil desde el ATP al hidroxilo de serinas de enzimas especficos. La forma fosforilada de la protena puede ser mas o menos activa que la especie no fosforilada, segn el caso. En general el grupo que que se ha de ser transferido debe estar en forma activada, es decir, se ha de hacer qumicamente lbil para que pueda tener lugar la transferencia. Esto se consigue frecuentemente formando un Ester con el ATP de la forma siguiente: ATP+R- OHR-O-ADP+Pi El grupo R puede ahora ser transferido a un aceptor pasa a formar un nuevo compuesto.

Clase 3: Hidrolasas: este grupo de enzimas se puede considerar como una clase especial de transferasas en las que el grupo dador se transfieren al agua. La reaccin generalizada implica la rotura hidrolitica de enlaces C-O, C-N, O-P y C-S. La rotura del enlace peptidico es un buen ejemplo de esta reaccin.

Las fosfatasas son enzimas que reemplazan un grupo fosfato por un grupo hidroxilo del agua en el caso de la protena fosfatasa su accin es la de revertir los efectos de las protenas quinasas.

Clase 4: Liasas: las liasas son enzimas que aaden o eliminan los elementos del agua, amonia o dixido de carbono. Las descarboxilasas eliminan unidades de CO2 de alfa y beta celoacidos o aminocidos.

Las deshidratasas eliminan H2O en una reaccin de deshidratacin. La fumarasa convierte el fumarato en malato.

Clase 5: Isomerasas: este es un grupo muy heterogneo de enzimas que catalizan isomerizaciones de diversos tipos. Entre ellas se encuentran intervenciones cis-trans y aldosa-cetosa. Las isomerasas que catalizan la transferencia intramolecular de un grupo tal como fosforilado. La transferencia puede ser directa pero puede implicar ms enzimas fosforilados como intermedio. Los fosfoglicerato mutasa cataliza la conversin del 2-fosfoglicerato en 3-fosfoglicerato.

Clase 6: Ligasas: dado quela ligasa significa unir, estas enzimas participan en reacciones sintticas en las que se unen 2 molculas a expensas de un enlace fosfato de alta energa del ATP el termino sintetasa se reserva para este grupo particular de enzimas. La formacin de los aminoacil-rRNA, acil piruvato son reacciones catalizadas por ligasas. La piruvato carboxilasa es un buen ejemplo de ligasa. Los 2 sustratos, bicarbonatos y piruvatos, se ligan formando un alfa-cetoacidos de 4 carbonos.

4R/= temperatura: en general, la temperatura aumenta la velocidad de la reaccin qumicas del mismo modo, la actividad enzimtica aumenta con el incremento de temperatura, sin embargo llegando a una determinada temperatura aparecen los fenmenos de desnaturalizacin dela protena enzimtica y la enzima se inactiva. La temperatura crtica es caracterizada

de cada enzima y oscila generalmente entre 50 y 60C. Por tanto, la velocidad mxima de las reacciones catalizadas enzimticamente se consigue algo por debajo de la temperatura crtica de la enzima (ptima temperatura). La temperatura a la cual la desnaturalizacin llega a ser un factor decisivo, vara de una enzima a otra. Mientras que en la inactividad debida al calor puede depreciarse por debajo de los 30C y empiezan a jugar un papel entre los 35 y 40C. Existen tambin algunas enzimas que puedan calentarse a 60C sin perdida significativa de actividad. por ello es aconsejable la determinacin de actividades enzimticas por debajo de 30C Es fundamental la correcta termostatizacion en la determinacin de la actividad enzimtica ya que errores de 1C en el control de la temperatura de reacciones puede ocasionar errores de hasta el 10 por 100 en el clculo de actividad de algunas enzimas. El control exacto de la temperatura solo es posible en los sistemas de anlisis cerrados.

PH: el valor del pH con el que la efectividad de la enzima es mxima se denomina (pH optimo) y depende de diversos factores (tipo de tampn, concentracin y tipo de substrato, presencia de activadores e inhibidores etc.) para conseguir dicho pH se utilizan diversos sistemas de tampones. . A la hora de elegir el sistema tampn hay que tener en cuenta 2 criterios A) la fuerza inica (dividida de su concentracin); el tampn ideal ser igual que nos proporciona mxima capacidad tampones a la mnima concentracin posible. B) B) naturaleza qumica de la sustancia tampn. por posible participacin en la reaccin as. no se debe utilizar tampones fosfato en la determinacin de actividad de fosfatasa alcalina

5R/= Las enzimas se pueden obtener de tres fuentes, tanto de origen animal, vegetal como microbiano (levaduras, hongo y bacterias): la eleccin de una u otra fuente depende de varias factores como son la estabilidad, especificidad de sustrato, temperatura y pH ptimo, coste, inocuidad, abundancias. Sin embargo la produccin de enzimas a partir de microorganismos presenta ciertas ventajas econmicas y tcnicas, ya que permite su produccin a gran escala con un rendimiento predecible, hay una disponibilidad continua y no hace falta diseccionar animales, por no olvidar que como hay gran versatilidad de microorganismos se puede obtener un gran nmero de enzimas diferentes. Adems hoy en da gracias a la ingeniera gentica se pueden desarrollar mutaciones en el metabolismo de los microorganismos para que estos produzcan ms cantidad de enzima. El primer paso para la produccin de enzimas es la eleccin del microorganismo adecuado, lo cual depender de las caractersticas de la enzima a producir. Una vez elegido el microorganismo, se le deja crecer en condiciones adecuadas de pH, temperatura y aireacin. A continuacin se debe extraer la enzima, lo cual depende de si la enzima es extracelular, intracelular o periplasmtica. De manera que si es extracelular no hay que romper ninguna membrana, pero si es intracelular hay que romper tanto la membrana externa como la interna, y si es periplasmtica slo la membrana externa. Para estos dos ltimos casos existen diferentes mtodos de rotura celular tanto qumicos (con disolventes orgnicos, detergente, choque osmtico) como fsicos (sonicacin, cizalla lquida o slida, congelacin y descongelacin)

Trabajo de bioqumica

Enzimologa

Presentado a: Lic. Franklin torres

Presentado por: Stephania castro Zayrith Gonzalez

Microbiologa (segundo semestre)

USB

Barranquilla / atlntico 2012