Cultivo de clulas animales y procesos enzimticos

Ing. (C) M. Sc. Eliana Lozano Romero

Julio 17 de 2013

CONTENIDO
CULTIVO DE CLULAS ANIMALES
Para qu? Quin? Cmo? Ejemplo prctico

PROCESOS ENZIMTICOS Para qu? Quin? Cmo? Ejemplo prctico

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

Cmo?

Ejemplo prctico

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

Cmo?

Ejemplo prctico

Herramienta para el estudio de la biologa celular empleando modelos de crecimiento in vitro Imitacin del comportamiento in vivo de clulas de inters (ej. Cncer) Ambientes altamente selectivos y fcilmente manipulables (optimizacin de condiciones) Es posible realizar experimentos reproducibles Los cultivos pueden ser sometidos a condiciones extremas (drogas, radiacin, etc.)

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

Cmo?

Ejemplo prctico

Evita conflictos ticos, morales y legales de experimentacin en humanos y en animales. Produccin de molculas biolgicas

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

Cmo?

Ejemplo prctico

1878: Claude Bernard propone que los sistemas fisiolgicos de un organismo pueden mantenerse vivos luego de la muerte del mismo. 1885: Roux mantuvo clulas de embrin de pollo en medio salino. 1897: Loeb demostr la supervivencia de clulas aisladas de sangre y tejido conectivo en suero y plasma. 1910: Burrows detall el desarrollo de la mitosis

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

Cmo?

Ejemplo prctico

Uso de antibiticos para inhibir crecimiento de contaminates Uso de tripsina para remover clulas adherents durante subcultivo Uso de medios qumicamente definidos.

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

Cmo?

Ejemplo prctico

Condiciones de esterilidad Definicin de tipo de clulas SUPERFICIE DE CULTIVO Generacin de un soporte adecuado Proteccin por matriz de otras protenas (colgeno, gelarina, fibronectina, etc.)

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

Cmo?

Ejemplo prctico

FORMULACIN DEL MEDIO Estudios preliminares emplean fluidos corporales. (plasma, suero, extractos celulars, etc.) Medios Estndar (sales, aminocidos, azcares, vitaminas, suplementado con suero) Medios completamente definidos

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

10

Cmo?

Ejemplo prctico

FASE GASEOSA Oxgeno

CO2

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

11

Cmo?

Ejemplo prctico

Control de pH pH =7 (fisiolgico)

CO2 (buffer junto

con el bicarbonato de sodio presente en el medio)

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

12

Cmo?

Ejemplo prctico

Y A ESCALA?

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

13

Cmo?

Ejemplo prctico

PRODUCCIN DE VACUNA DE FIEBRE AMARILLA

Cultivo clulas animales

14

Cultivo clulas animales

15

Cultivo clulas animales

16

Cultivo clulas animales

17

Cultivo clulas animales

18

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

19

Cmo?

Ejemplo prctico

PRODUCCIN ROTAVIRUS COMO AGENTE ONCOLTICO

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

20

Cmo?

Ejemplo prctico

Cultivo clulas animales

Para qu? Quin?

21

Cmo?

Ejemplo prctico

Procesos Enzimticos
Para qu? Quin?

22

Cmo?

Ejemplo prctico

Procesos Enzimticos
Para qu? Quin?

23

Cmo?

Ejemplo prctico

Enzimas = Protenas Catalizan reacciones qumicas necesarias para la sobrevivencia celular Es posible manipularlas en forma extracelular

Procesos Enzimticos
Para qu? Quin?
Sin enzima Con enzima

24

Cmo?

Ejemplo prctico

E+S

La Ea de la hidrlisis de la urea baja de 30 a 11 kcal/mol con la accin de las enzimas, acelerando la reaccin 1014 x El aumento de temperatura necesario para producir la reaccin no catalizada seria de 529C

E+P
Tiempo de la reaccin

Procesos Enzimticos
Para qu? Quin?

25

Cmo?

Ejemplo prctico

1835: Obtencin de azucar a partir de malta 1877: Usan el trmino enzima para describir los qumicos mediante los cuales la levadura fermenta los azcares 1897: Edward Buchner extrae una enzima de la levadura y demuestra que puede emplearla fuera de las clulas 1905: Otto Rohm extrae proteasas pancreaticas para suplir necesidades enzimticas de sus pacientes

Procesos Enzimticos
Para qu? Quin?

26

Cmo?

Ejemplo prctico

1926: Se produce la primera enzima cristalina pura (ureasa) y se demuestra ue las enzimas son proteinas 1930 1936: John Northrop logra cristalizar enzimas digestivas y demuestra su mecanismo. 1946 Sumner gana el Premio Nobel gracias a su trabajo con enzimas

Procesos Enzimticos
Para qu? Quin?

27

Cmo?

Ejemplo prctico

Una enzima puede transformar 1000 molculas de sustrato/ segundo Las enzimas tienen 3 propiedades que los catalizadores NO tienen Especificidad por el sustrato

Se inactivan por desnaturacin

Pueden ser reguladas

Procesos Enzimticos
Para qu? Quin?

28

Cmo?

Ejemplo prctico

Enzima
Sitio activo

Complementariedad geomtrica
Sustrato Complementariedad de cargas, uniones inicas

Procesos Enzimticos
Para qu? Quin?

29

Cmo?

Ejemplo prctico

PRODUCCIN DE BIOETANOL A PARTIR DE MATERIAL LIGNOCELULSICO DE MORINGA OLEFERA

Procesos Enzimticos
Para qu? Quin?

30

Cmo?

Ejemplo prctico

PRODUCCIN DE BIOETANOL A PARTIR DE MATERIAL LIGNOCELULSICO DE MORINGA OLEFERA

Variacin en la composicin de los lignocelulsicos: Celulosa: 35 50% Hemicelulosa: 2035%; Lignina;1025%; Proteinas, aceites y cenizas; 3 15%

Procesos Enzimticos
Para qu? Quin?

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Cmo?

Ejemplo prctico

PRODUCCIN DE BIOETANOL A PARTIR DE MATERIAL LIGNOCELULSICO DE MORINGA OLEFERA

La biomasa de lignocelulsicos nativos es resistente al ataque enzimtico, por lo tanto se realizan algunos pretratamientos.

Procesos Enzimticos
Para qu? Quin?

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Cmo?

Ejemplo prctico

PRODUCCIN DE BIOETANOL A PARTIR DE MATERIAL LIGNOCELULSICO DE MORINGA OLEFERA

Posibilidades: Mtodo biolgico:

Trichoderma reesei Cellulomonas fimi Aspergillus

Mtodo enzimtico

PREGUNTAS

UNIVERSIDAD DEL PONENTE

UNIVERSIDAD DEL PONENTE

Contacto: Jose Angel Beleo Alcazar E-mail: jabelenoa@unal.edu.co Universidad Nacional de Colombia Sede Bogot