Universidad Autnoma Chapingo Departamento de Enseanza e Investigacin en Zootecnia Practica III de Microbiologa Dr.

Jos Isidro Alejos de la Fuente TINCIN DE GRAM Y TINCIN SIMPLE

1. Introduccin Debido a la concentracin de solutos disueltos dentro de una clula bacteriana se desarrolla una considerable presin de turgencia y para resistir esta presin las bacterias poseen paredes celulares, que adems son las responsables de la forma y rigidez de la clula. Las bacterias se dividen en dos grandes grupos: las Gram positivas y las Gram negativas (Universidad de Cauca, 2010) En la pared celular de la bacteria Gram positiva la capa de peptidoglucano cubre el 90% y el resto de LPS mientras que en la Gram negativa es muy delgada y ocupa el 10% y el 90% LPS. La Universidad de Cauca (2010) seala que las bacterias Gram positivas tienen muchas capas de peptidoglucano, las cuales a su vez, sostienen molculas de cido teicoico. El cido teicoico reacciona con el cristal violeta y el yodo utilizado en este proceso de tincin. Un complejo de las molculas cristal violeta-yodo-cido teicoico es muy difcil de remover (Martinavarro, s.f.). Una mezcla de alcohol remueve el cristal violeta de la clula Gram negativa, pero no de la Gram

positiva. Esta mezcla de alcohol tambin disuelve mucho de la capa exterior de lipopolosacrido de la pared celular de la pared Gram negativa, lo cual acelera la remocin del colorante primario cristal violeta de estas clulas. Cuando otro colorante, usualmente safranina, se aade, las clulas Gram positivas siguen de color azul-violeta mientras que las Gram negativas absorben el

color rojizo de la safranina. Al final del procedimiento de tincin, las clulas Gram positivas sern del color del cristal violeta, o colorante primario, y las clulas Gram negativas sern del color de la safranina que es el colorante de contraste..

2. Objetivos Conocer la utilidad de la tincin de Gram y tincin simple como herramienta para el diagnstico microbiolgico de algunos procesos bacterianos. Emplear la coloracin de Gram para diferenciar las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas.

3. Metodologa 1. Fijar las muestras con calor. 2. Teir con cristal violeta y dejar el pigmento por 1 min. 3. Lavar con agua el exceso de colorante. 4. Aplicar Lugol por 1 min. 5. Lavar con agua el exceso de Lugol. 6. Baar con alcohol cetona por 5 seg. 7. Lavar con agua para eliminar el resto del disolvente 8. Teir con safranina por 1 min., transcurrido el tiempo lavar. 9. Secar la preparacin. 10. Realizar al microscopio las observaciones correspondientes.

4. Resultados y discusiones

Los resultados de la coloracin de Gram se presentan en el cuadro 1. Reacciones presentes en el proceso de tincin. Cuadro 1. Reacciones presentes en el proceso de tincin. Paso del proceso Solucin de cristal violeta y se deja actuar 1 min. Aplicar Lugol Las clulas permanecen violeta. Alcohol acetona Cristal violeta no sale de las clulas, conservan el color. Las clulas permanecen violetas. El cristal violeta se separa de las clulas, las clulas que pierden el color no pueden observarse. Solucin de safranina Las clulas conservan el color violeta. Las clulas decoloradas se tien de rojo-rosa. Gram Positivas Se tien color violeta Gram Negativas Se tien color violeta

Las bacterias observadas provienen del aparato digestivo son Gram negativas (se tieron de rojo-rosa) Para la tincin simple como ya se conoca de donde provenan las bacterias (aparato digestivo) se agreg directamente safranina reafirmando que son Gram negativas. Las bacterias Gram Positivas debido a la estructura y composicin bioqumica de su pared celular retiene el complejo cristal violeta-lugol y aun despus del tratamiento de un decolorante conserva el colorante bsico, por lo que se observan al microscopio de color azul oscuro o violeta una vez concluida la tcnica de tincin. Las Gram negativas pierden el colorante bsico cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipdico de la pared

celular lo que aumenta la permeabilidad celular, dando como resultado la prdida del complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razn por la cual estas clulas bacterianas se observan al microscopio de color rojo-rosado al terminar la tincin.

5. Conclusiones *El cristal violeta sirve como colorante bsico unindose a la pared celular bacteriana, con la ayuda del mordiente que refuerza la unin del colorante. *Las bacterias Gram negativas provienen del intestino mientras que por otra parte las Gram positivas provienen del aparato respiratorio. *La reaccin de la tincin de Gram se basa en la cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes celulares de estas bacterias. *La tincin simple es una tcnica que consiste en darle contraste a la bacteria dependiendo de dnde provenga (Aparato respiratorio, digestivo, etc.).

6. Referencias bibliogrficas

Tincin de Gram (2010) [material de apoyo]. Colombia: Universidad de Cauca. Recuperado el 12 octubre del 2013 de
http://facultadsalud.unicauca.edu.co/Documentos2010/DptoMedInt/Tencion_de_gram.pdf

Martinavarro D. A., (s.f.) Tincin de GRAM (Liquidos corporales esteriles) Mexico D.F., Recuperado el 12 octubre del 2013 de
http://www.a14.san.gva.es/laboratorio/Web/gram.htm