"AO DE LA INTEGRACION NACIONAL Y EL RECONOCIMIENTO DE NUESTRA DIVERSIDAD"

UNIVERSIDAD CONTINENTAL DE CIENCIAS E INGENIERA

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS (COMUNES Y ESPECIALES)

INFORME N 2
Curso: MICROBIOLOGA Profesor: BIOLOGO. CORDERO AZABACHE JORGE. Alumna: ALVARADO POMAYAY, SHIRLEY. FLORES HUANCA, MERCEDES. HUAROCC CCANTO, SADAM HUSEIN. LLANCO TAYPE, ROMEL.

HUANCAYO PER

INTRODUCCION

Por su tamao , los microrganismos no pueden estudiarse como individuos , sino que es necesario manejarlos como poblaciones, para ello es necesario cultivarlos en MEDIOS DE CULTIVOS, es decir favorecer su multiplicacin in vitro, en ambientes especiales que proporcionen las condiciones semejantes a las de sus hbitats naturales, en estos ambientes se debe eliminar a todos aquellos microrganismos que interfieren en el estudio del microrganismo de inters, al que los dems de proporcionar los nutrientes necesarios para su crecimiento.

Objetivos. Objetivos generales:

Preparar diferentes medios de cultivo.

Objetivos especficos:
Aprender a preparar los diferentes medios de cultivo. Distinguir, discernir los diferentes medios de cultivos. Familiarizarnos deshidratados. Familiarizarnos con los materiales de vidrio y de otra naturaleza de uso frecuente en microbiologa, as con el uso correcto de las placas Petri y tubos de ensayo. con los medios de cultivos o sus componentes

1. Marco terico. MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo son las soluciones nutritivas que se usan en el laboratorio para el cultivo de los microrganismos. En microbiologa se usan dos tipos generales de medios de cultivo: Los qumicamente definidos: se preparan aadiendo cantidades precisas de compuestos orgnicos o inorgnicos purificados a un volumen de agua destilada. Complejos o no definidos para este tipo de medios se emplean hidrolizados de

casena como la protena de la leche, carne, soja, levaduras u otras sustancias muy nutritivas, tales hidrolizados estn disponibles en forma de polvo y pueden ser pesados con facilidad y disueltos en agua destilada para preparar un medio- a estos no se puede controlar su composicin nutritiva exacta [1]

2. Experimentacin y procedimientos:
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO CALDO NUTRITIVO

3. Resultados: 4. Discusin: 5. Conclusin:

6. Recomendacin:
Para cada practicar de laboratorio llevar los materiales que el docente asigne (indispensable) Leer la practica para tener conocimientos previos y aplicarlo sin dificultad en el laboratorio. Tener un ambiente limpio y ordenado para poder trabajar sin dificultad. Para la preparacin de medios de cultivo, se debe de seguir los procedimientos al pie de la letra para obtener mejores resultados.

Al momento de hervir el agua en la cocinilla no dejar de mover hasta que la solucin este homognea. Para la distribucin de los diferentes tipos de agar en la placa Petri se debe de trabajar en condiciones aspticas para evitar el contactos con bacterias que se encuentran en el ambiente.

al finalizar la practica dejar el laboratorio ordena y limpio.

7. Bibliografa: 1.- Brock, biologa de los microrganismos, 1 edicin, Michael T. Madigan , JOHN M. MARTINKO Y JACK PARKER. PAG 107 [1].

8. Anexos:

9. glosario

10. Bibliografa:

INFORME N 2: PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO (COMUNES Y ESPECIALES) MARCO TERICO Las caractersticas de los microorganismos a tener en cuenta al momento de preparar un medio de cultivo adecuado para su desarrollo en el laboratorio son: Tipo trfico: se refiere a los requerimientos de carbono y energa, segn los cuales se los clasifica en auttrofos, hetertrofos, quimiotrofos (litgrafos u organotrofos) y fotgrafos. Tipo respiratorio: aerobios, anaerobios, anaerobios facultativos y microaerfilos.

Temperatura ptima de crecimiento: segn el rango de temperatura al cual el microorganismo presenta su mayor crecimiento, se los clasifica en psicrfilos, mesfilos y termfilos. Rango de pH: en general el rango ptimo de pH para la mayora de las bacterias oscila entre 6,6 y 7,2. MEDIOS DE CULTIVO

Son sustancias nutritivas lquidas o slidas, que se utilizan en el laboratorio para el crecimiento de los microorganismos, pudiendo ser similares a sustratos naturales, en los cuales estos crecen normalmente. CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SEGN SU ORIGEN Los medios de cultivos pueden clasificarse en: Natural es: Son aquellos que existen como tales en la naturaleza, por ejemplo, agua, suero, papa, huevos, leche, sangre, tierra, etc. Artificial es: Estn compuestos de substancias que son manipuladas por el hombre en el laboratorio. A los medios artificiales a su vez se los puede dividir en sintticos y complejos. Un medio del cual se conoce exactamente su composicin qumica se denomina sinttico o qumicamente definido; puede ser una simple solucin de sales con una fuente de carbono o puede contener muchos compuestos orgnicos. Un medio no sinttico o complejo es aquel del que se desconoce su composicin qumica exacta; se trata bsicamente de extractos de tejidos vegetales,

animales o microbianos, cuya concentracin no se conoce con exactitud y que proveen todos los nutrientes necesarios, como por ejemplo el caldo nutritivo. CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS ARTIFICIALES COMPLEJOS SEGN SU FINALIDAD I. Medios comunes: Permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos, como el caldo carne y agar carne. Medios especiales: se los clasifica segn su finalidad. Medios enriquecidos o mejorados: se obtienen a partir de un medio comn, con el agregado de elementos nutritivos elegidos segn las necesidades. tales como sangre, albmina, yema de huevo etc. Se utilizan para el cultivo de microorganismos exigentes en cuanto a sus requerimientos nutricionales. Se citan como ejemplos el agar sangre y el agar chocolate. Medios selectivos: Estos medios han sido modificados de alguna manera para que, en una flora mixta, permitan el desarrollo de determinadas especies y al mismo tiempo inhiban la proliferacin de la flora acompaante. Para esto ltimo se busca establecer condiciones desfavorables de pH, nutrientes y de temperatura, o por el agregado de inhibidores.

II. III.

IV.

El agar Saburaud es un ejemplo de medio selectivo, en el que el pH de 5,6 favorece el desarrollo de hongos al mismo tiempo frena el desarrollo de la mayora de las bacterias. Ejemplos de sustancias inhibidoras son algunos colorantes (cristal violeta, verde brillante), los antibiticos, el alcohol fenil etlico y la azida de sodio. Medios selectivos para enriquecimiento son medios en los que los microorganismos crecen en libre competencia, vindose favorecidos aquellos para los cuales las condiciones de desarrollo son las ms apropiadas, no llegndose a inhibir totalmente el crecimiento del resto de microorganismos. Se logra as la multiplicacin de los microorganismos que se desea identificar, hasta un nmero suficiente tal que sea posible su aislamiento en medios selectivos apropiados. Medios selectivos para aislamiento: son medios selectivos slidos, se utilizan para sembrar directamente con la muestra incgnita o a partir del medio selectivo para enriquecimiento. Medios diferenciales: permiten el desarrollo de muchas de las especies que coexisten en una mezcla que se desea aislar. Aunque dos o ms tipos de microorganismos pueden crecer en este medio, algn elemento presente en l permite diferenciarlos, por ejemplo un indicador. Estas diferencias se basan en alguna propiedad bioqumica que unos poseen y otros no. En su mayor parte los medios diferenciales son asimismo selectivos, por el agregado de agentes que inhiben el crecimiento. Estos medio selectivo diferenciales resultan muy tiles para el aislamiento de un microorganismo separndolo de la flora acompaante. Se ponen en evidencia las colonias de

los microorganismos que se desea aislar y a su vez se diferencian de aquellas que pudieran haber desarrollado provenientes de la flora acompaante. CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Los elementos citados a continuacin, son los ms frecuentemente usados en la preparacin de los medios de cultivo, aunque pueden no ser los nicos e incluso alguno de ellos puede estar ausente de la preparacin. Agua destilada o desionizada. Libre de inhibidores del crecimiento.

Agar. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. El componente dominante en el agar es un polisacrido, al que acompaan algunas impurezas y que se obtiene de ciertas algas marinas. Existe en rama o en polvo, se solubiliza en agua a ebullicin (funde hacia los 98C) y al enfriarse forma un gel inodoro e inspido (se gelifica alrededor de los 42C), dependiendo de su grado de pureza, por lo que tiene la ventaja de ser slido a la temperatura de incubacin. Con la excepcin de algunos microorganismos marinos, el agar no es empleado como nutriente. Para preparar un medio slido se le agrega agar al 12-18 %. Si se desea visualizar movilidad se usa agar blando se le agrega agar al 3 %. Extractos. Para su preparacin, ciertos rganos o tejidos animales o vegetales (por ejemplo: carne, hgado, semillas, etc.) son extrados con agua y calor, y posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son frecuentemente empleados en la confeccin de medios de cultivo. Ejemplos: extracto de carne, de levadura, de malta, etc. En el caso del extracto de carne en polvo o pasta, provee sustancias nitrogenadas, minerales y vitaminas, mientras que el extracto de levaduras provee vitaminas del grupo B, nitrgeno y carbono. Peptonas. Son mezclas complejas de compuestos orgnicos nitrogenados y sales minerales que carecen de identidad qumica definida; se obtienen por digestin enzimtica o qumica de protenas animales o vegetales (soja, carne, gelatina, casena, etc.). Las peptonas son muy ricas en pptidos y aminocidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales. Proveen proteasas, peptonas, poli pptidos y aminocidos. Fluidos Corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguneo son frecuentemente aadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos patgenos. La sangre no puede ser esterilizada y debe, por tanto, ser obtenida en condiciones aspticas directamente de un animal sano. Los fluidos corporales no solamente contribuyen con factores de crecimiento, sino tambin con sustancias que neutralizan inhibidores del crecimiento de algunas bacterias. Sistemas amortiguadores. Algunos componentes son incorporados al medio de cultivo para mantener el pH dentro del rango ptimo del crecimiento bacteriano. Los microorganismos ms comunes son neutrfilos (el pH ptimo para su crecimiento est prximo a la neutralidad), y sales como fosfatos bisdicos o bipotsicos, o sustancias como las peptonas, previenen una desviacin del pH. Indicadores de pH. Indicadores cido- base se aaden a menudo a los medios de cultivo con objeto de detectar variaciones del pH.

 Agentes reductores. Cistena, tioglicolato y otros son agentes reductores que se aaden a los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes microaerfilos o anaerobios. Agentes selectivos. La adicin de determinadas sustancias al medio de cultivo puede convertirlo en selectivo (ver ms adelante, clasificacin de los medios de cultivo). Por ejemplo, cristal violeta, sales biliares, azida sdica, telurito potsico, antibiticos, etc., a la concentracin adecuada, actan como agentes selectivos frente a determinados microorganismos. METODOLOGA / TCNICAS LUGAR DE EJECUCIN El trabajo realizado PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO (COMUNES Y ESPECIALES) se dio en el laboratorio de la UNIVERSIDAD CONTINENTAL de qumica y biologa. INSTRUMENTOS DE LABORATORIO MATERIALES

Vaso precipitado.

Probeta.

Varilla de vidrio.

Envase de vidrio.

Placas Petri.

EQUIPOS

Cocinilla.

Balanza analtica.

REACTIVOS

o Agua destilada.

o Agar dextrosa.

PROCEDIMIENTOS

Pesar los ingredientes segn la cantidad requerida por los medios a preparar.

Colocar la cantidad pesada en el matraz Erlenmeyer, adicionar agua destilada en la proporcin requerida. Homogenizar la mezcla mediante la varilla de vidrio.

 Colocar el matraz sobre un trpode provisto de una rejilla de asbesto. Calentar la muestra (mezcla), empleando la llama del mechero, hasta lograr la total disolucin de los ingredientes. Disueltos los componentes, enfriar a 50-55C y ajustar el pH a 7.2 - 7.4 con HCI 0.1 N NaOH 0.1 N. Distribuir los medios en las botellas de vidrio hasta la mitad. Taponar.

Esterilizar a la autoclave a 15 Ib de presin (121 C) por 15 minutos. Terminado el tiempo de esterilizacin, esperar que la aguja del manmetro descienda y extraer los medios.

 Los medios slidos sometidos al proceso de esterilizacin y enfriados a 50-55C, deben de repartirse en alcuotas de 12 a 15 mL en 1-2 placas Petri en condiciones aspticas; al solidificarse los medios invertir las placas para evitar que el agua de condensacin se acumule sobre la superficie del agar. Incubar las placas a 37C por 24 h, para control de esterilidad. Para medios slidos de igual forma.

Rotular datos: nombre del medio y fecha de preparacin.

RESULTADOS

 Se Obtuvo el agar que se solidific para el cultivo y crecimiento de microorganismos, de un nutriente lquido, al igual que la gelatina y el gel de slice. El agar nutritivo debe satisfacer componentes bsicos nutricionales para el desarrollo microbiano.

DISCUSIN DE RESULTADOS Bacilos difteroides, largos y ligeramente gruesos de color azul claro, con granulaciones de color azul intenso o violeta. En caso de coloracin purprea (violeta), el color se debe a la oxidacin del colorante por el lcali que lleva la frmul

Segn la Universidad del Valle de Mxico, sus resultados obtenidos con respecto a preparacin de medios y cultivos (especiales y comunes) fueron los siguientes: Se investigaron previamente para la realizacin de esta prctica conceptos bsicos para la preparacin de medios de cultivo, as como los tipos de esterilizacin para los mismos, que en este caso se utiliz un mtodo fsico: presin a vapor, es decir la autoclave que posee los requisitos indispensables (temperatura y tiempo de exposicin) para eliminar los microorganismos que pudieran haber quedado en el medio. Antes de servir en las cajas de petri, se realiz la asepsia del rea limpiando meticulosamente la mesa de trabajo y despus eliminando impurezas restantes con alcohol prendido. Despus se colocaron 2 mecheros (uno en cada lado, paralelamente) para por medio del calor eliminar cualquier impureza proveniente del are, para servir el medio en las cajas de petri esterilizadas colocando la boca del matraz en el fuego (antes de servir) y despus sirviendo en las cajas una cantidad considerable, para despus semitaparlas y dejando las muestras cerca de los mecheros sobre la mesa de trabajo. Esto se realiz para todas las cajas de petri. Despus de 10 minutos se revis que se hubieran solidificado las muestras para despus proceder a taparlas y envolverlas en papel (volteadas boca abajo) para que si se evaporaba el lquido lo hiciera hacia la misma muestra y de esta manera no quedaran gotas del lquido sobre la tapa ya que sera despus esto una posible contaminacin cuando se quisiera sembrar una muestra y para evitar la deshidratacin. Por ltimo se coloc el paquete en refrigeracin.

Comparando mi resultado con los antecedentes consignados obtuve el mismo mtodo de esterilizacin en autoclave y se tuvo el mismo cuidado en la asepsia del rea de trabajo.

CONCLUSIONES Es muy importante haber saber utilizar bien los materiales a utilizar en el laboratorio y saber su utilidad para la prctica. Tambin era necesario para prevenir cualquier accidente no provocado y no

lamentar consecuencias. Una de las conclusiones es haber reconocido algunos reactivos que se debe tener cuidado y cogerlo con los guantes para prevenir algn tipo de contaminacin. Saber desinfectar las placas cuando se encuentren con algunas bacterias u hongos o cidos, tambin saber desinfectar las manos y los materiales a utilizar.

RECOMENDACIONES Utilizar el guardapolvo, los guantes y la mascarilla.

 Repetir ambas tcnicas tantas veces como sea necesario, 2 a 3 veces hasta obtener buenos resultados. Al momento de hervir el agua en la cocinilla no dejar de mover hasta que la solucin este homognea. Envolver cuidadosamente las placas petri con el papel Graf.

AGRADECIEMIENTOS Agradezco el presente informe al docente Dvila Maldonado Estanislao (ING.QUMICO) de la universidad peruana los andes (UPLA) por haberme facilitado informacin sobre el tema dado y por su tiempo dedicado.

BIBLIOGRAFA

Rodolfo Ertola, Osvaldo Yantorno y Carlos Mignone, Microbiologa.pag: 45 53.

Madigan, Michael T.; Martinko, John M; and Parker, Jack (2004). Brock. Biologa de los Microorganismos .pag:205 217.

ANEXOS

CUESTIONARIO 1. Para qu se utiliza los medios de cultivo? Para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. 2. Qu componentes presenta el agar Mc Conkey y para qu se utiliza? EL GAR MCCONKEY UTILIZACIN:

Es un medio diferencial utilizado para la deteccin, aislamiento y enumeracin de bacterias coliformes y patgenas intestinales en aguas, productos lcteos y muestras biolgicas. Su accin diferencial radica en que las bacterias hbiles de fermentar lactosa provocan un descenso de pH, junto con una absorcin del colorante, surgiendo en la colonia el color rojo. Las colonias de bacterias que no fermentan la lactosa quedan incoloras.

COMPOSICIN POR LITRO OBSERVAMOS: 17 g de pancretico digestivo de gelatina 1.5 g de pancretico digestivo de casena 1.5 de peptona de tejido animal 10 g de lactosa 1.5 g de sales biliares 5 g de cloruro Sdico 0.03 g de rojo Neutro 0.001g de cristal Violeta 13.5 g de agar un pH de 7.1 (+ - 0.2 a 25).

3. En qu se diferencia los medios selectivos con los medios diferenciales? Los medios de cultivo se utilizan para cultivo de una amplia variedad de organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina; a diferencia de los medios diferenciales que son utilizados para formulaciones especiales en las que se estudian las peculiaridades fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo) especficas de las bacterias. 4. Para el crecimientos de bacterias extremofilas que medios utilizaras. El medio que utilizara es el Agar McConkey, Ellas se encuentran en los ms aisladas por millones de aos, y en desiertos donde jams ha llovido. increbles

lugares: en las surgencias volcnicas del fondo del ocano, en cavernas que han estado

5.- Que agar utilizaras para el crecimiento de bacterias degradadoras de petrleo y porqu Todos los ecosistemas acuticos y marinos contienen algn tipo de microorganismos degradadores de petrleo. Bacterias Achrornobacter Acinetobacter Actinomyces Aeromonas Alcaligenes Arthrobacter Bacillus Beneckea Brevebacterium Coryneforms Erwinia Flavobacterium Klebsiella Lactobacillus Leumthrix Moraxella Nocardia Peptococcus Pseudomonas Sarcina Hongos Aspergillus Aureobasidium Botrytis Candida Cephalosporium Cladosporium Cunninghamella Debaromyces Fusarium Gonytrichum Hansenula Helminthosporium Mucor Oidiodendrum Paecylomyses Phialophora Penicillium Rhodosporidium Rhodotorula Saccharomyces

6. Esquematice los procedimientos hechos en el laboratorio.

Pesar el Agar de acuerdo a la cantidad a preparar.

En un vaso de precipitado disolver el Agar en H2O .

Llevar el vaso a la estufa hasta que empiece a ebullir.

Repartir los medios slidos enfriados en placas petri.

Cerrar todos los tubos con las torundas y colocarlos en las rejillas.

Trasvasar la solucin a los tubos de ensayo hasta llenar la mitad.