XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química Bucaramanga, Agosto 13 a 15 de 2003

Incremento de la producción de alcohol en fermentación de melazas mediante la utilización del complejo enzimático Rhyzozyme
Astrid Acevedo(1,2), Rubén Godoy (1, ) y Gustavo Bolaños(2,
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SUCROMILES S.A., Km. 14 Recta Cali-Palmira y Escuela de Ingeniería Química, Universidad del Valle, Apartado 25360, Cali

Resumen Se realizó un estudio sobre el efecto del complejo enzimático Rhizozyme en la producción de alcohol mediante la fermentación de melazas con S. Cerevisiae. Se construyó un dispositivo a escala piloto de 220 L, que cercanamente representa las características dinámicas, térmicas, químicas y biológicas de un fermentador industrial de 240000 L. Se preparó un diseño experimental para estudiar el efecto de la adición del complejo enzimático en la evolución del grado alcohólico, los azúcares reductores totales y la demanda química de oxígeno resultantes de la fermentación alcohólica. Se observaron incrementos en el grado alcohólico hasta de un 8%, a una concentración de enzima de 35 ppm, sin aumento significativo de la demanda química de oxígeno en la vinaza resultante. La utilización de este complejo enzimático constituye una manera sencilla de aumentar el rendimiento de la producción de alcohol etílico en fermentación de melazas.

Introducción La producción de alcohol etílico mediante fermentación de materias primas ricas en azúcares, melazas entre ellas, es un proceso conocido desde la antigüedad. Sin embargo, debido a su importancia económica, en muchas compañías y centros de investigación alrededor del mundo actualmente se realizan esfuerzos para maximizar la producción de alcohol, y para minimizar el impacto ambiental del proceso. En este trabajo se estudió la utilización del complejo enzimático Rhyzozyme para incrementar la capacidad de producción de alcohol en fermentación de melazas de caña con Sacharomyces cerevisiae. Hipotéticamente, el complejo enzimático actuaría sobre las sustancias no fermentables presentes en la melaza, convirtiéndolas en monosacáridos, aminoácidos libres o simplemente moléculas más sencillas que podrían ser fácilmente asimilables por la levadura, otorgándole de este modo una nutrición más completa y mayor
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Universidad Nacional de Colombia (Bogotá). En pasantía en Sucromiles S.A. Autor a quien debe dirigirse la correspondencia. e mail: gbolano@univalle.edu.co (G. Bolaños).
http://supercriticos.univalle.edu.co

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2003 vitalidad. en tres reactores (cada uno de 220 L). La Figura 1 muestra un esquema del sistema de fermentación a escala piloto que se diseñó y construyó en este trabajo. Mayores detalles sobre el diseño del equipo piloto de fermentación se encuentran en la literatura [1]. en dos reactores de 240000 L. la cual se prepara y almacena en el tanque de cabeza. y su sistema de enfriamiento lo constituye un intercambiador de calor de placas. 2. 3. un visor de nivel. químicas y biológicas de un fermentador de 240000 L. cuyo sistema de agitación funciona mediante recirculación del licor de fermentación por medio de eductores. El sistema esta conformado por tres reactores plásticos de 220 L cada uno. un serpentín en acero inoxidable como sistema de enfriamiento. Cada fermentador esta dotado con un sistema de alimentación con medidor de flujo. Cerevisiae. una válvula para toma de muestras. De esta manera. En cada experimento. térmicas. agitados mecánicamente mediante un impulsor tipo hélice marina que opera a 300 rpm y un serpentín interno como sistema de enfriamiento. en erlenmeyers de 500 mL cerrados con algodón. con un volumen de fermentación individual de 187 L. y con el cual se efectuó la mayor parte de los experimentos de este estudio. uno de los fermentadores se utilizó para correr un blanco.2 Acevedo. Como se mencionó. A escala de laboratorio. un sistema de agitación tipo hélice marina que puede operar a 300 rpm. Equipo de fermentación a escala piloto Se realizaron fermentaciones en discontinuo con levadura S. Los experimentos de fermentación se realizaron a tres escalas: 1. Para este efecto se especificaron similitudes en el número de Reynolds. entre otros. térmicas. la adición del complejo enzimático al proceso fermentativo podría tener un impacto significativo en la economía del proceso al inducir la producción de mayor cantidad de alcohol por unidad de materia prima. químicas y biológicas de un fermentador industrial de 240000 L. el tiempo de recirculación del fluido. el sistema de fermentación se diseñó para representar cercanamente las características dinámicas. . Godoy. A escala de planta piloto. La tubería de salida de este tanque tiene un sistema de distribución con tres válvulas y tres buretroles para garantizar una alimentación homogénea a los tres fermentadores. y la relación potencia consumida a volumen de fermentación. Estos reactores se diseñaron y construyeron en este trabajo para representar cercanamente las características dinámicas. A escala industrial. y un medidor de dióxido de carbono que trabaja por desplazamiento de volumen. El sistema de fermentadores se alimenta con melaza diluida. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química.

se determinó la concentración de etanol por medio de una oxidación con dicromato de potasio (0. los tres reactores piloto se inocularon paralelamente con levadura proveniente de la etapa de reproducción de la planta industrial. 2003 3 Figura 1. Cali) a las fermentaciones a escala piloto e industrial. El volumen de inóculo fue 30% del volumen total de fermentación.2 mEq/cm3 ) y de la titulación . El inóculo en cada caso fue un 30 % del volumen total de fermentación. Se esterilizó la melaza utilizada en los experimentos a escala de laboratorio. Durante la fermentación se controló el pH en 4. Godoy. Luego se cargó durante 8 h continuas la melaza diluida a una concentración de azúcares reductores de 23 %m/v. Una vez realizada la inoculación. se encendió la agitación y se adicionó una cantidad especificada del complejo enzimático. Materiales y Métodos Durante una corrida experimental. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química.Acevedo. La población de levadura del inóculo típicamente estuvo por encima de 100x106 células/mL. y luego por 18 h adicionales sin agitación. mientras que en los experimentos a escala planta piloto y a nivel industrial se adicionó antibiótico con el mismo propósito. Esquema del sistema de fermentación a escala piloto. con una viabilidad mínima del 97 %. Se adicionó antiespumante PROPEG EM-300 (Protécnica Ingeniería. Se permitió entonces la fermentación por 30 h con agitación.7 y la temperatura se mantuvo entre 32 y 34 °C. Después del período de fermentación de 48 horas.

y amilopectinasas cuyas actividades son: amilasa. celulasas. Esta diferencia representa un incremento en la producción de etanol del 6. Dicho complejo es el producto de la fermentación de Rhizopus sp. sobre salvado de trigo. 12 experimentos realizados en planta piloto en condiciones similares a las del laboratorio no mostraron un incremento significativo de la producción de alcohol.7% a las 48 horas de fermentación. Puede observarse que a partir de la fase de adaptación se desarrolla una mayor producción de alcohol cuando la fermentación se suplementa c on 50 ppm del complejo enzimático. y contiene esencialmente una mezcla de amilasas. Esta baja concentración de antiespumante permite controlar la formación de espuma y como se observa. tipo de melaza. concentración de glucosa en el alimento. utilizando 50 ppm de antiespumante y dos concentraciones de complejo enzimático. Notése en esta figura que no existe una diferencia significativa entre adicionar 35 ppm y 50 ppm del complejo enzimático a la fermentación. 2500 CMC-ase. Entre los factores evaluados se cuentan: presencia del hongo Rhizopus niveus en la fermentación. Se encontró que solo este último factor tiene un efecto detectable sobre el progreso de la fermentación en presencia del complejo enzimático. adición de antibiótico. De acuerdo con la literatura. La concentración del complejo enzimático utilizada para los experimentos estuvo entre 35 y 60 ppm. Pese a lo anterior. Experimentos posteriores a escala de l aboratorio mostraron que a concentraciones superiores a 500 ppm el antiespumante inhibe la acción del complejo enzimático.4 Acevedo. este componente desactivaría las enzimas presentes en el complejo [7-10]. por encima de cierta concentración. Este antiespumante se prepara con base en silicona [6]. 50000 SKB. y adición de antiespumante. concentración del complejo enzimático. amilopectinasa. Para explicar estos resultados. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química. Godoy. Durante el período de fermentación también se determinaron los azúcares totales reductores por el método de Fehling [2]. . La Figura 3 muestra el efecto inhibitorio del antiespumante a la fermentación alcohólica suplementada con el complejo enzimático. En todos los experimentos el complejo enzimático se adicionó inmediatamente después de haber inoculado el fermentador. la cual corresponde a cerca de la décima parte de la concentración recomendada por los proveedores con base en estudios de fermentacion de materias azucaradas de maíz. celulasa. no inhibe la actividad del complejo enzimático. 2003 del exceso con sulfato ferroso amónico (0. Resultados y discusión La Figura 2 muestra la evolución de la concentración de alcohol en fermentaciones a escala de laboratorio. La Figura 4 muestra la evolución de la concentración de etanol en fermentaciones a escala piloto. se realizó una campaña experimental a escala de laboratorio para establecer el factor o factores que podrían inhibir la actividad del complejo enzimático a escala piloto. 5000 AP [3-5]. El complejo enzimático utilizado se obtuvo de ALLTECH [3].15 mEq/cm3 ) en medio ácido [2].

Acevedo. de fermentación 10.5 9 8. Evolución de la concentración de alcohol en fermentaciones a escala de laboratorio. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química.5 8 Con antiespumante Blanco 50 ppm de complejo enzimático Sin antiespumante Figura 3.5 10 9. Efecto inhibitorio del antiespumante en la fermentación alcohólica suplementada con el complejo enzimático. 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 8 16 24 32 Tiempo de fermentación (h) 40 48 Blanco 50 ppm de complejo enzimático Figura 2. . Godoy. Grado alcohólico ( %v/v) a las 30 h. 2003 5 10 Concentración de alcohol (% v/v).

2003 Concentración de alcohol (% v/v) 8 7 6 5 4 3 2 0 35 ppm de complejo enzimático 50 ppm Blanco de complejo enzimático 5 10 15 20 25 30 Tiempo de fermentación (h) Figura 4. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química. y 50 ppm de complejo enzimático. Evolución de la concentración de etanol en fermentación a escala piloto. Note que una concentración del complejo enzimático de 35 ppm tiene un efecto tan importante como una concentración de 50 ppm. al cabo de 30 h. . Luego de establecer el efecto que el complejo enzimático tiene sobre la producción de etanol a escalas laboratorio y piloto.6 Acevedo.5 % a las 25 horas de fermentación. Evaluaciones financieras realizadas con base en la información obtenida en este trabajo muestran que esta concentración de complejo enzimático hace que el proceso sea económicamente factible. con 50 ppm de antiespumante y dos concentraciones de complejo enzimático. La Figura 5 muestra la evolución de la concentración de alcohol en experimentos a escala industrial.5 % a las 30 h de fermentación. Esta figura se construyó con los resultados de 12 corridas experimentales a nivel industrial. Godoy. lo cual se atribuye a la evaporación del alcohol y a la formación de compuestos indeseados al finalizar la fermentación. se procedió a realizar fermentaciones a escala industrial. los cuales no fueron determinados en este trabajo. 35 ppm puede lograr el mismo incremento de la concentración de alcohol a un costo menor. Este valor tiende a disminuir hasta 6. En estos experimentos se utilizó una concentración de 50 ppm de antiespumante. En consecuencia. Puede observarse que se presenta un incremento de la producción de alcohol de 7. La Figura 6 muestra el efecto de la concentración del complejo enzimático sobre la fermentación.

. para dos concentraciones del complejo enzimático. Godoy.5 4.0 8. al cabo de 30 h.0 6.5 6. 2003 7 Concentración de alcohol (%v/v) 9.Acevedo. Concentración de alcohol (%v/v) 9.5 6. Efecto de la concentración del complejo enzimático sobre la fermentación.5 3.5 8.0 7. Concentración de alcohol después de 30 h de fermentación a escala industrial.5 9.5 7.0 Blanco 50ppm 35 ppm Concentración de complejo enzimático Figura 6 . Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química.5 8.5 7.5 5.5 0 5 10 15 20 Tiempo de fermentación (h) 25 30 50 ppm de complejo enzimático Blanco Figura 5.

Sc.ar/aam/revbol32/v32-4-04. Mariani G. Nottingham University Press. 37-49. Asociación Argentina de microbiología. 1999. y Balatti P. con incrementos en la producción de alcohol de hasta un 8%. Acribia S. Tesis M. A. 2nd edition. pp. Godoy. 1990. 2000. Cali. 1995. Universidad del Valle. “The alcohol textbook”. Lyons T.. Normas “ISO 9000 de SUCROMILES S.R. Murtagh J. John Wiley. España. Bailey J.P. “The alcohol textbook”. 2.A”. Murtagh J. Gacesa P.com. 1998. . pp. y Hubble J. and Ollis D.. 4. Los autores agradecen a estas dos entidades por hacer posible este proyecto.A. concentraciones de 50 ppm de antiespumante controlan la formación de espuma sin inhibir la actividad del complejo enzimático. En este trabajo se encontró que para concentraciones del complejo enzimático entre 35 y 60 ppm. Sucromiles. 2001. “Industrial enzymes and their applications ” pp 40-72 y 216-218. Zaragoza. 5. Palmira. Bibliografía 1.E. 2003. Lorda G. “Ficha técnica del antiespumante Propeg Em-300”. Nottingham University Press.8 Acevedo. Kelsall D. 9.. 8.. Agradecimientos Este trabajo ha sido elaborado gracias a la colaboración de la Universidad del Valle y la financiación de SUCROMILES S. 2000. 19-32.P. Lyons T. “Biochemical engineering fundamentals”. Nottingham University Press.1986. http//www.E. Acevedo. Kelsall D. Cali. Uhlig H. 10. “Influencia del amaranto en la producción de α -amilasa empleando Aspergillus niger nrrl 3112”..A. “Tecnología de las enzimas”. 6. (2002). pp. Alltech “Ficha técnica del complejo enzimático ”. 3.R. Protécnica Ingeniería.drwebsa. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química. Mc Graw-Hill... Para su utilización hay que tener en cuenta que las enzimas son altamente sensibles a los factores externos y se pueden inhibir fácilmente. La utilización del complejo enzimático Rhyzozyme constituye entonces un método sencillo de incrementar la producción de alcohol en fermentación de melazas de caña. 2003 Conclusión La utilización del complejo enzimático Rhyzozyme constituye una alternativa técnica y económicamente factible para el mejoramiento de la productividad de etanol a escala industrial. 7. 81-88. “Estudio de planta piloto sobre el efecto del complejo enzimático Rhyzozyme en la fermentación alcohólica”.

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