ALUMNO: BONIFACIO MUNGUIA, Jonathan O.

CURSO: Biotecnologia --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

LOS PLSMIDOS Son molculas de ADN extracromosmico circular o lineal que se replican y transcriben independientes del ADN cromosmico. Estn presentes normalmente en bacterias, y en algunas ocasiones en organismos eucariotas como las levaduras. Su tamao vara desde 1 a 250 kb. El nmero de plsmidos puede variar, dependiendo de su tipo, desde una sola copia hasta algunos cientos por clula. El trmino plsmido fue presentado por primera vez por el biologo molecular norteamericano Joshua Lederberg. Las molculas de ADN plsmidico, adoptan una conformacin tipo doble hlice al igual que el ADN de los cromosomas, aunque, por definicin, se encuentran fuera de los mismos. Se han encontrado plsmidos en casi todas las bacterias. A diferencia del ADN cromosomal, los plsmidos no tienen protenas asociadas. En la mayora de los casos se considera gentico dispensable. Sin embargo, posee informacin gentica importante para las bacterias. Por ejemplo,los genes que codifican para las protenas que las hace resistentes a los antibiticos estn, frecuentemente . Hay algunos plsmidos integrativos, vale decir tienen la capacidad de insertarse en el cromosoma bacteriano. Digamos que rompe el cromosoma y se sita en medio, con lo cual, automticamente la maquinaria celular tambin reproduce el plsmido. Cuando ese plsmido se ha insertado se les da el nombre de episoma. Los plsmidos se utilizan en ingeniera gentica por su capacidad de reproducirse de manera independiente del ADN cromosomal como as tambin por que es relativamente fcil manipularlos e insertar nuevas secuencias genticas. Los plsmidos usados en Ingeniera Gentica suelen contener uno o dos genes que les confieren resistencia a antibiticos y permiten seleccionar clones recombinantes. Hay otros mtodos de seleccin adems de la resistencia a antibiticos, como los basados en fluorescencia o en protenas que destruyen las clulas sin uso de antibiticos. Estos nuevos mtodos de seleccin de plsmidos son de uso frecuente en agrobiotecnologia, debido a la fuerte crtica de grupos ecologistas contra la posibilidad de presencia de antibioticos en los organismos modificados genticamente.

Otra forma de clasificar plsmidos es por funcin. Hay 5 clases principales:

Plsmidos de fertilidad: los cuales contienen tra-genes, son capaces de conjugarse. Plsmidos de resistencia: los cuales contienen genes que pueden constituir resistencia contra antibiticos o venenos. Histricamente conocidos como Factores R, antes de que se entendiera la naturaleza de los plsmidos. Col-plsmidos: los cuales contienen genes que codifican (determinan la produccin de) colinas y protenas que pueden matar a otra bacteria. Plsmidos degradativos: los cuales habilitan la digestin de sustancias inusuales como tolueno o cido saliclico. Plsmidos virulentos: los cuales convierten la bacteria en un patgeno.

APLICACIONES EN LA BIOLOGA MOLECULAR Los plsmidos sirven como una importante herramienta en laboratorios de gentica e ingeniera bioqumica, donde son comnmente usados para multiplicar (hacer muchas copias de) o como genes particulares expresos. Muchos plsmidos estn disponibles comercialmente para dichos usos. El gen a ser replicado se inserta en copias de un plsmido el cual contiene genes que hacen clulas resistentes a un antibitico en particular. En el paso siguiente el plsmido es insertado en la bacteria por medio de un proceso llamado transformacin. Luego, la bacteria es expuesta a un antibitico particular. Solo la bacteria que toma copias del plsmido sobrevive al antibitico debido a que el plsmido lo hace resistente. En particular, los genes protectores son expresados (usados para hacer protena) y la protena expresada evita la accin del antibitico. De esta forma, los antibiticos actan como un filtro que seleccionan nicamente la bacteria modificada. Ahora, estas bacterias pueden ser cultivadas en largas cantidades, cosechadas y el plsmido de inters puede ser aislado. Otro uso importante de los plsmidos es fabricar grandes cantidades de protenas.. En este se deja crecer la bacteria que contiene el plsmido que encierra al gen de inters. Solo como la bacteria produce la protena que le confiere si resistencia a los antibiticos, este tambin puede ser usado para producir protenas en grandes cantidades desde el gen insertado. Esta es una forma barata y fcil de producir genes o protenas que este codifica de forma masiva, como por ejemplo insulina, o inclusive antibiticos. CLONACION La clonacin (derivado del griego , que significa "retoo") puede definirse como el proceso por el que se consiguen copias idnticas de un organismo, clula o molcula ya desarrollado de forma asexual.1 Se deben tomar en cuenta las siguientes caractersticas:

En primer lugar se necesita clonar las molculas ya que no se puede hacer un rgano o parte del "clon" si no se cuenta con las molculas que forman a dicho

ser, aunque claro para hacer una clonacin necesitamos saber qu es lo que buscamos clonar (ver clonacin molecular). Ser parte de un animal ya "desarrollado", porque la clonacin responde a un inters por obtener copias de un determinado animal que nos interesa, y slo cuando es adulto conocemos sus caractersticas. Por otro lado, se trata de crearlo de forma asexual. La reproduccin sexual no nos permite obtener copias idnticas, ya que este tipo de reproduccin por su misma naturaleza genera diversidad.

Clonacin molecular La clonacin molecular se utiliza en una amplia variedad de experimentos biolgicos y las aplicaciones prcticas van desde la toma de huellas dactilares a produccin de protenas a gran escala. En la prctica, con el fin de amplificar cualquier secuencia en un organismo vivo, la secuencia a clonar tiene que estar vinculada a un origen de replicacin; que es una secuencia de ADN. -Transfeccin: Se introduce la secuencia formada dentro de clulas. -Seleccin: Finalmente se seleccionan las clulas que han sido transfectadas con xito con el nuevo ADN. Inicialmente, el ADN de inters necesita ser aislado de un segmento de ADN de tamao adecuado. Posteriormente, se da el proceso de ligacin cuando el fragmento amplificado se inserta en un vector de clonacin: El vector se linealiza (ya que es circular),usando enzimas de restriccin y a continuacin se incuban en condiciones adecuadas el fragmento de ADN de inters y el vector con la enzima ADN lisa. Tras la ligacin del vector con el inserto de inters, se produce la transfeccin dentro de las clulas, para ello las clulas transfectadas son cultivadas; este proceso, es el proceso determinante, ya que es la parte en la que vemos si las clulas han sido transfectadas exitosamente o no. Tendremos que identificar por tanto las clulas transfectadas y las no transfectadas, existen vectores de clonacin modernos que incluyen marcadores de resitencia a los antibiticos con los que slo las clulas que han sido transfectadas pueden crecer. Hay otros vectores de clonacin que proporcionan color azul/ blanco cribado. De modo, que la investigacin de las colonias es necesaria para confirmar que la clonacin se ha realizado correctamente. Clonacin reproductiva La clonacin reproductiva es la clonacin propiamente dicha, y se basa en la creacin de una copia genticamente idntica a una copia actual o anterior de un ser humano o animal. Es tcnicamente posible, pues se ha conseguido en animales, aunque tiene bajo rendimiento y conlleva ciertos riesgos, como por ejemplo, problemas epigenticos (sndrome LOS: el clon crece mucho ms, que el animal original) y de senescencia. Este tipo de clonacin est absolutamente prohibido en humanos, pues no tiene ningn sentido teraputico, aparte de que al no ser una tecnica perfeccionada, pueden morir los embriones humanos en el proceso.

En 1996, fue clonada la oveja Dolly. Fue el primer mamfero clonado a partir del ADN derivado de un adulta en vez de ser utilizado el ADN de un embrin. Pero aunque Dolly tenga una apariencia saludable, se cuestiona que envejeciera antes que una oveja normal, es decir, que la fuente (Dolly) trasmitio su edad celular al clon. Adems fueron necesarios 277 embriones para producir este nacimiento. ] Clonacin teraputica (o androptica) La clonacin teraputica s est legalizada actualmente, puesto que tiene fines mdicos, el tratamiento de enfermedades. Este tipo de clonacin consiste en fusionar el ncleo de una clula adulta (madre o diferenciada) y un ovocito enucleado para crear un embrin a partir del que se aislan clulas madre embrionarias compatibles con el futuro receptor del tejido. Las clulas madre se aislan de la masa celular interna del embrin clonado una vez alcanzado el estadio de blastocisto. Estas clulas madre poseen la misma dotacin gentica que el paciente del que se tom la clula adulta, por lo que expresar su misma dotacin antignica (protenas superficiales de reconocimiento), de forma que podremos evitar una reaccin inmunolgica de rechazo al trasplantarle el tejido obtenido a partir de ellas (se puede inducir la diferenciacin de estas clulas madre hasta el tipo celular deseado, para formar un tejido determinado). Una vez que se han extrado las clulas madre de la masa celular interna, se destruye el embrin clonado. En enero de 2008, se anunci que se haban creado 5 embriones clonados a partir de clulas de piel humana, con vistas a proporcionar una fuente viable de clulas madre embrionarias para el tratamiento de enfermedades; valindose de la misma tcnica que dio origen a la oveja Dolly, cientficos de la empresa californiana Stemagen Corporation (con sede en La Jolla, California), encabezados por Andrew French, han empleado las clulas de la piel de dos varones adultos as como los vulos de tres mujeres jvenes (entre 20 y 24 aos) que se estaban sometiendo a un tratamiento de fertilidad.2 El objetivo de la investigacin de la clonacin humana nunca ha sido el de clonar personas o crear bebs de reserva.3 La investigacin tiene como objetivo obtener clulas madre para curar enfermedades.4