27/11/2013

TEMA 8 BASES DEL DIAGNSTICO MICROBIOLGICO (I): DIAGNSTICO DIRECTO

Miguel ngel Bratos Prez

TIPOS DE DIAGNSTICO MICROBIOLGICO

Diagnstico directo
Deteccin

del microorganismo Deteccin de alguno de sus componentes Deteccin de algn producto metablico

Diagnstico indirecto
Deteccin

de anticuerpos Deteccin de clulas sensibilizadas

27/11/2013

DIAGNSTICO DIRECTO

Muestras

Toma de muestras Examen microscpico Medios de cultivo: tipos y utilidad. Condiciones de incubacin: temperatura, duracin, atmsfera Deteccin antignica

Cultivo

Deteccin de componentes bacterianos

Ltex, IFD, inmunocromatografa, EIA Sondas PCR

Tcnicas genmicas

27/11/2013

EXAMEN MICROSCPICO

Usos: Deteccin inicial, identificacin inicial o definitiva Tipos: Campo claro, fondo oscuro, contraste de fases, fluorescencia, microscopio electrnico Mtodos

Examen directo: examen en fresco, 10% KOH, tinta china, lugol Tinciones diferenciales: Gram, hematoxilina, plata metanamina, azul de toluidina, tricromica, Giemsa cido alcohol resistente: Ziehl-Neelsen, Kinyoun, auramina, Z-N modificados Fluorescentes: naranja acridina, auramina, calcofluor, IFD

27/11/2013

DETECCIN DE COMPONENTES MICROBIANOS

Mtodos qumicos/fsicos (deteccin metabolitos):

Cromatografa lquido-gas Deteccin de CO2 radiomtrica y espectrometra de infrarrojos, etc.

Hemocultivos, etc.

Mtodos inmunolgicos:

Deteccin de Ag: Aglutinacin partculas de ltex, CIEF Enzimoinmunoensayo, Radioinmunoensayo, Inmunofluorescencia, etc.

Mtodos genmicos:

Hibridacin de ac. nucleicos: Sondas especficas Mtodos de amplificacin genmica: PCR

27/11/2013

CROMATOGRAFA LQUIDO-GAS

LTEX E INMUNOFLUORESCENCIA

27/11/2013

DIAGNSTICO MOLECULAR
Deteccin de ADN, ARN, protenas Ventajas

Sensibilidad:

muestras muy diluidas Especificidad: distincin de cepas relacionadas

Identificacin

virus y bacterias resistentes a Ab

Seguridad:

no aislamiento, muestras inactivadas, agentes sin replicar

DETECCIN DE MATERIAL GENTICO MICROBIANO

Anlisis electrofortico y RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)

Enzima de restriccin y electroforesis Hibridacin in situ Dot blot: extraccin nitrocelulosa hibridadcin Southern blot: restriccin nitrocelulosa hibridacion DNA-DNA Northern blot: obtencin RNA nitrocelulosa hibridacion RNA-DNA RT-PCR (o PCR-TI): transcriptasa inversa o retrotranscriptasa PCR-tiempo real

Sondas DNA

PCR

27/11/2013

RFLP (RESTRICTION FRAGMENT LENGH POLYMORPHISM)

IDENTIFICACIN DE CLULAS INFECTADAS CON VIRUS MEDIANTE SONDAS

CMV en tbulo renal

27/11/2013

TCNICAS DE HIBRIDACIN DE CIDOS NUCLEICOS

PCR (REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA)

27/11/2013

DETECCIN DE PROTENAS
Actividad de una protena (ej. transcriptasa inversa) Patrn de protenas

SDS-PAGE
Western

(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)

blot: SDS-PAGE Ac

WESTERN BLOT

27/11/2013

CULTIVO

Cultivo de bacterias
Medios

comunes Medios enriquecidos no selectivos Medios selectivos Medios diferenciales Medios especiales

Cultivo celular
Virus Bacterias

parsitas intracelulares estrictas

LOCALIZACIN DE AG EN CLULAS POR EIA O IF

HSV en neuronas

10