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Triglicridos(GPO)(Lquido)SetdeReactivos

(microbiana)200.000U/L,emulsificantes,estabilizadores yconservador,incluyendoazidasdesodio(0.01%). PREPARACIONDELREACTIVO Elreactivoestlistoparasuuso. ALMACENAMIENTOYESTABILIDADDELREACTIVO 0 ESPECIFICACIONESDEUSO Guardarelreactivoenrefrigeracinde28 C.Elreactivoes Determinacincuantitativainvitrodetriglicridosen establehastalafechadecaducidadmarcadaenla suerooplasmasanguneo. etiquetasiempreycuandosealmacenecomoseindica. Protegerdelaluzdirectadelsol.Evitarcualquier SIGNIFICANCIACLINICA contaminacinmicrobiana. Ladeterminacindetriglicridosesdeintersenel Noutilizarelreactivosi: diagnsticoytratamientodearterioesclerosis,diabetes LaAbsorbanciainicialdelreactivomedidaa500nm mellitusmalcontrolada,nefrosis,padecimientosdel esmayorde0.350,utilizandoaguacomoblanco. hgadoyotrasenfermedadesqueinvolucrenmetabolismo Sielreactivoestturbioopresentaevidenciade delpidos. contaminacinmicrobiana. RESUMENDELAPRUEBA PRECAUCIONES Elmtodoparaladeterminacindetriglicridos(GPO) Estereactivohasidopreparadosoloparauso estbasadoenladeterminacinenzimticadeglicerol diagnsticoenlaboratorio. utilizandolaenzimaoxidasaglicerolfosfatodespusdela Elreactivocontieneazidasdesodio(0.01%)como hidrlisisporlalipoprotenalipasa.Elprincipiodeeste conservador.Nodebeingerirse.Evitarcualquier mtodolodescribiporprimeravezFossaticonla contactoconlosojosopiel.Lasazidasdesodio secuenciaclsicadereaccionesTrinder.Este puedenreaccionarconelcobreocorroerlosmetales procedimientodenicoreactivocuantificaeltotalde yformarcompuestosexplosivos.Unavezutilizado, glicridosensueroincluyendomonoydiglicridos,as eliminarconsuficienteagua. comolasfraccioneslibresdelglicerol.Esteenfoqueesla Todaslasmuestrasycontrolesdebenmanejarse baseparaelmtodo. comopotencialmenteinfecciosos.Utilizarel procedimientoseseguridaddelaboratorioadecuado 3 PRINCIPIO (NCCLSM29T) TriglicridosGlicerol+cidosGrasos RECOLECCIONDELAMUESTRAYALMACENAMIENTO 1. Serequieredesueronohemolizado,claroy Glicerol+ATPGKGlicerol1fosfato+ADP fresco.Lamuestradebetomarseconformealagua adecuada. GPO 2. Elsuerodebesepararserpidamenteantesde Glicerol1fosfato+O2DAP+H2O2 queempieceacoagular.Evitarlosanticoagulantes quecontenganoxalatosofluoruro. H2O2+4AA+4ClorofenolTinturade 3. Elsuerodelplasmadebealmacenarsemximo quinonimina+HCl+2H2O unasemanaa280Copor3mesesa200C. 4. Lasmuestrascongeladasdebenllevarsea Lostriglicridosdelsuerosonhidrolizadosagliceroly temperaturaambienteymezclarseperfectamente cidosgrasoslibresmediantelalipasa.Enpresenciade bienantesderealizarelanlisis.Lasmuestras ATPylaquinasadelglicerol(GK)elglicerolseconvierteen descongeladasnopodrnvolverseacongelar. glicerol1fosfato.Elglicerol1fosfatoseoxidaporla accindelaenzimaoxidasaglicerolfosfato(GPO),para INTERFERENCIAS producirperxidodehidrgeno.Lacondensacindel 1. Algunosfrmacosysustanciasafectanla 8 perxidodehidrgenocon4clorofenoly4 determinacindetriglicridos.Young,etal public aminofenazona(4AA)enlapresenciadeperoxidasa(POD) unalistadeestassustancias. produceunacoloracinrojadelaquinoniminaquese 2. Elmtodonotieneinterferenciaporvalores absorbeaproximadamentea500nm.Laintensidaddel altosdehemoglobinaarribade100mg/dlopor complejocoloranteformadoesdirectamenteproporcional bilirrubinamayorde12mg/dl(5%). alaconcentracindetriglicridosdelamuestra. 3. Losdetergentespuedeninterferirconlaaccin delalipasa.Debetenersecuidadodela COMPOSICIONDELREACTIVO. contaminacindelmaterialyequipoconresiduosde BufferdeGood(pH7.40.1)50mM,4clorofenol3.5mM, detergente. ATP0.5mM,saldemagnesio12mM,4aminofenazona0.3 mM,quinasadeglicerol(microbiana)250U/L,Lipasa

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MATERIALPROPORCIONADO Reactivodetriglicridos(GPO). MATERIALREQUERIDO 1. Pipetasparamedirlosvolmenesexactosde muestrayreactivo. 2. Rejillasytubosdeensayo. 3. Cronmetro. 0 4. Parrilladecalentamientoobaomara(37 C) 5. Espectrofotmetroadecuadoparaleera500nm 6. Estndardetriglicridosocalibrador. PROCEDIMIENTO(DATOSFIJOS) LongituddeOnda:500nm Tipodeprueba:Puntofinal ProporcinMuestra/reactivo:1:101 Direccindelareaccin:aumento 0 Temperatura:37 C TiempodeIncubacin:300seg BajoNormal: 44mg/dl AltoNormal: 148mg/dl PROCEDIMIENTODEANALISIS(MANUAL) 1. Identificarlostubosdeprueba:blanco, estndar/calibrador,paciente,control,etc. 2. Pipetear1mldelreactivoenlostubosy precalentara370C. 3. Aadir0.010ml(10l)delamuestraasu respectivotubo.Agitarsuavemente. 4. Incubardurante5minutos. 5. Despusdelaincubacin,leerenel espectrofotmetroa500nmutilizandoelblancopara llevaraceroelequipo. 6. LeeryregistrarlasAbsorbanciasparatodaslas muestras.Elcolorfinalesestableporlomenos60 minutos. LIMITACIONES Elprocedimientoeslinealhastaunaconcentracin1000 mg/dl(11.3mM/L). Lasmuestrasarribadellmitedeberndiluirse1:1con solucinsalinaymultiplicarelresultadopor2para compensarladilucin. CALIBRACION Utilizarcualquierestndardetriglicridosouncalibrador desuero.Elprocedimientodebercalibrarsedeacuerdoa lasinstruccionesdecalibracindelequipo.Silos resultadosdelcontrolseencuentranfueradelrango,el procedimientodebercalibrarsedenuevo. CONTROLDELCALIDAD Sedebenaplicarlasprcticasestndardecontrolde calidadaesteprocedimiento.Debenmonitorearselas variacionesaceptablesdecadada.Debenprobarse controlessiemprequesecambieaunnuevolotede reactivo,encadacambiodeturnoodespusdel mantenimientodelequipo.Puedeobtenerseunnivel satisfactoriodelosprocesoscuandoseobtienenvalores delanalitoaceptablesestablecidosporellaboratorio. CALCULO Elresultadodetriglicridosseexpresaenmg/dlomM/L. Triglicridos=AbsMxConc.Std AbsStd Ejemplo: AbsM=0.243 AbsStd=0.310 Conc.Std=200mg/dl Triglicridos=0.243x200mg/dl 0.310 Triglicridos=157mg/dl Nota:ParaconvertirlosresultadosaunidadesSI(mmol/L) multiplicarelresultado(mg/dl)por0.0113.

VALORESESPERADOS 44148mg/dl(0.501.67mmol/L) Secreequedebidoaunampliorangodecondiciones (edad,dieta,geogrficas,etc.)losrangosnormalespueden variar,porloqueserecomiendaquecadalaboratorio establezcasuspropiosrangosdereferencia. DESARROLLO 1. LmitesdelaPrueba:01000mg/dl(011.3 mmol/L).Lasmuestrasqueexcedandeesta concentracindeberndiluirseconsolucinsalinay elresultadomultiplicarlopor2. 2. Comparacin:Serealizunacomparacinde estemtodoconunosimilarGPOutilizando167 muestrasentrelos41mg/dly1026mg/dl.El coeficientedecorrelacinfuede0.999.Elanlisisde regresinlinealarrojlasiguienteecuacin:y=0.97x 4.5Sy.x=5.84 3. Precisin:Losestudiosdeprecisinse llevaronacabosegnlasguasNCCLS EP5T210 ENUNDIA DIFERENTESDIAS MediaS.D.C.V.%MediaS.D.C.V.%

62.6 162.4 301.9

1.14 1.73 3.24

1.82 1.07 1.07

59.1 158.1 299.3

1.12 2.63 3.65

1.90 1.66 1.22

4. Sensibilidad:Lasensibilidaddelmtodose comprobleyendolasAbsorbanciasa500nmde solucinsalinaymuestrasdesuerodeconcentracin conocida.Serealizaron10rplicas.Losresultados indicaronqueelmtodonomuestradispersinenlas muestras.Bajoestascondicionesdereaccin1mg/dl detriglicridosproduceunaAbsorbanciade0.001.

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REFERENCIAS 1. Fossati, P., Lorenzo, P., Clin. Chem. 28:2077 (1982). 2. Trinder, P., Ann. Clin. Biol. Chem. 6:24 (1969). 3. NCCLS Document M29-T2, 2nd. Ed. (1991). 4. NCCLS Document H4-A3, 3rd. Ed. (1991). 5. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, PA, WB Saunders Co. p888 (1986). 6. Martin, E., Hazards of Medication, Philadelphia, PA, J.B. Lippincott Co. pp.169-189 (1971). 7. Constantino, N.V., Kabat, H., Am. J. Hosp. Pharm. 30:24 (1973). 8. Young, D.S., 3rd Ed. AACC Press, Washington DC (1990). 9. Rifkin, B.M., JAMA 250:1869 (1983). 10. NCCLS document Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices, 2nd Ed. (1992).

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