EVALUACIÓN DE LA OBTENCIÓN DE BIOETANOL A PARTIR DEL ALMIDÓN DE ÑAME (DIOSCOREA ROTUNDATA, DIOSCOREA ALATA Y DIOSCOREA TRÍFIDA) MEDIANTE LA HIDRÓLISIS

ENZIMÁTICA Y POSTERIOR FERMENTACIÓN.

JOSE DAVID MURGAS TORRES MIGUEL ANGEL VASQUEZ MONTERROSA

UNIVERSIDAD DE SAN BUENAVENTURA FACULTAD DE INGENIERÍAS, ARQUITECTURA, ARTE Y DISEÑOS PROGRAMA DE INGENIERÍA QUÍMICA CARTAGENA 2012

EVALUACIÓN DE LA OBTENCIÓN DE BIOETANOL A PARTIR DEL ALMIDÓN DE ÑAME (DIOSCOREA ROTUNDATA, DIOSCOREA ALATA Y DIOSCOREA TRÍFIDA), MEDIANTE LA HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA Y POSTERIOR FERMENTACION.

JOSE DAVID MURGAS TORRES MIGUEL ANGEL VASQUEZ MONTERROSA

Trabajo de grado presentado como requisito para optar al título de Ingeniero Químico

Asesora Externa Adriana Alejandra Pérez Bacterióloga

UNIVERSIDAD DE SAN BUENAVENTURA FACULTAD DE INGENIERÍAS, ARQUITECTURA, ARTE Y DISEÑOS PROGRAMA DE INGENIERÍA QUÍMICA CARTAGENA 2012

Nota de aceptación

Firma del Presidente del jurado

Firma del jurado

Firma del jurado

Cartagena,Mayo de 2012

DEDICATORIA Celebramos el fin de una etapa importante en nuestra vida dando las gracias. A mi querida madre María Lourdes por luchar junto a mí en la búsqueda de mis objetivos. que me ha brindado su confianza y que siempre estuvo ahí. para apoyarme cuando lo necesite. por ese motivo gracias te doy mi querido tío Jonny Torres Saurith. principalmente a nuestro señor Dios que nos permitió compartir este tiempo de enseñanza necesaria para nuestra formación. por su educación y valores inculcados a lo largo de mi vida. gracias por su apoyo incondicional. Dedico esto a una persona muy especial que ha sido una fuente inagotable de luz para mí. la persona que considero como mi padre. JOSE DAVID MURGAS TORRES . A mis amigos y todos lo que hicieron parte de esta formación. por brindarme siempre palabras de aliento y el apoyo en los momentos difíciles.

Miguel Ángel Vásquez Monterrosa . A mis demás tías Clara y Raquel quienes siempre estuvieron pendientes de mi proceso y me brindaron su cariño y comprensión. por creer en mí en la adversidad. A mis amigos María. A mi tía Marina quien a pesar de la distancia me dio su apoyo y consejo. A mi hermana Gina por ser fuente de alegría en todo momento. por darme tú ejemplo y educación me ayudaste a ser una mejor persona. siempre estuvo apoyándome en las buenas y en las malas.DEDICATORIA A dios principalmente ya que gracias a él todo esto fue posible A mí querida madre Milagros Monterrosa quien con mucho sacrificio me saco adelante durante todos estos años. le doy las gracias por su comprensión y paciencia. gracias por su amistad incondicional. A mi tía Carmenza Monterrosa quien siempre estuvo a lo largo del desarrollo de mi carrera apoyándome. Carlos y Fabián con quienes pude compartir alegrías y tristezas.

familiares y amigos que estuvieron siempre presente en cada uno de nuestros felices y difíciles.AGRADECIMIENTOS El desarrollo y culminación de este proyecto se debe al apoyo de todas aquellas personas que nos brindaron sus conocimientos y experiencia. A Adriana Alejandra Pérez. Bacterióloga quien estuvo asesorándonos en el desarrollo del proyecto de grado. Rosa Rangel. . Expresamos nuestros más sinceros agradecimientos: A nuestros padres. A todos muchas gracias. brindándonos su apoyo de manera incondicional. Al personal de los laboratorios: Aissa Rodríguez. A la Universidad de San Buenaventura por la excelente formación académica brindada. logrando formar profesionales integrales. Carmen Muskus y Alma Estrada por brindarnos su ayuda incondicional.

2 Fuentes secundarias 3.4 OBJETIVOS 1.1.2.2.1 Objetivo general 1.5.4 Dioscorea Rotundata 2.7 Almidón 2.1 Obtención de la harina de ñame 3.4.4 Destilación 3.4.2.2 BASES TEÓRICAS 2.3 Dioscorea Trífida 2.2.11 Fermentación 2.2 Objetivos específicos 2 MARCO DE REFERENCIA 2.1 Historia del etanol 2.2.2.10 Hidrolisis Enzimática 2.2.6.1 Ñame 2.13 Destilación 2.4 RECOLECCION DE LA INFORMACION 3.1 Hipótesis nula I Pag 1 1 4 4 5 5 5 6 6 6 7 10 10 11 12 13 14 15 16 20 21 22 24 38 40 42 44 46 46 48 48 48 50 52 56 56 56 56 57 57 57 58 58 .2 Dioscorea Alata 2.12 Etanol 2.4.2 POBLACIÓN Y MUESTRA 3.3 JUSTIFICACIÓN 1.2.3 Fermentación 3.6 HIPOTESIS 3.1.2.3.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN 3.3 METODOLOGÍA UTILIZADA EN EL PROYECTO 3.5 Producción Mundial de Ñame 2.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA 1.5.2.2 Materias primas y reactivos 3.3.4 MARCO CONCEPTUAL 3 DISEÑO METODOLÓGICO 3.1 Fuentes primarias 3.2.3 MARCO LEGAL 2.2 Hidrólisis enzimática 3.2 Estado actual en Latinoamérica 2.4.1 Instrumentos y equipos 3.9 Hidrolisis Química 2.5 INSTRUMENTOS 3.3.3.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 1.8 Hidrolisis 2.CONTENIDO 1 PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN 1.2.2.1 ANTECEDENTES INVESTIGATIVOS 2.6 Producción de Ñame en Colombia 2.

4.1 Conteo de microorganismos para Dioscorea Alata 4.8 Producción de etanol 4.8 OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES 3.8.3 Producción de etanol de Dioscorea Rotundata 4.9.2 Comportamiento de Dioscorea Trífida en la hidrólisis enzimática 4.4 Lectura de pH 4.1 Lectura de pH para Dioscorea Alata 4.2 Producción de etanol de Dioscorea Trífida 4.7 VARIABLES 3.3 Conteo de microorganismos para Dioscorea Rotundata 4.9.9. 4.6.6.2 Rendimiento para Dioscorea Trífida 4.1 Comportamiento de Dioscorea Alata en la hidrólisis enzimática 4.2 Lectura de °BRIX para Dioscorea Trífida 4.5.1 Variables Independientes 3. 4.7 Conteo de microorganismos 4.2 Variables Dependientes 3.4.10 ANÁLISIS ESTADÍSTICO 5 CONCLUSIONES 6 RECOMENDACIONES BIBLIOGRAFÍA ANEXOS 58 58 58 58 59 59 60 60 62 64 66 66 67 68 69 69 70 71 72 72 73 74 75 75 76 77 78 78 80 82 84 84 84 85 85 87 88 89 92 II .8.6.1 Producción de etanol de Dioscorea Alata 4.1 Lectura de azucares reductores para Dioscorea Alata 4.3 Rendimiento para Dioscorea Rotundata 4.2 Lectura de pH para Dioscorea Trífida 4.6.2 Conteo de microorganismos para Dioscorea Trífida 4.3.3 Lectura de pH para Dioscorea Rotundata 4.3 Lectura de °BRIX para Dioscorea Rotundata 4.4.2 Lectura de azucares reductores para la Dioscorea Trífida 4.5.1 Rendimiento para Dioscorea Alata .5.7.7.9 Rendimientos del proceso 4.6 Lectura de azucares reductores en la fermentación.3 Lectura de azucares reductores para Dioscorea Rotundata 4.7.8. 4.2 Hipótesis alternativa 3.5 Lectura de °BRIX 4.7.9 PROCESAMIENTO DE LA INFORMACIÓN 4 RESULTADOS 4.3 Comportamiento de Dioscorea Rotundata en la hidrólisis enzimática 4.7.1 Lectura de °BRIX para Dioscorea Alata.

LISTA DE FIGURAS Pag Figura 1. Esquema general del proceso de hidrólisis Figura 16. Esquema de distintas formas de levadura Figura 10. Lecturas de pH Figura 20. Imagen sobre hojas de Dioscorea (izquierda) y morfología del ñame (derecha) Figura 3. Diagrama de la estructura de una levadura Figura 11. Alata (izquierda) y tubérculo (derecha) Figura 4. Diagrama de flujo de un proceso de destilación Figura 13. Hojas D. Hojas de D. Estructura del almidón Figura 8.Trífida (izquierda) y tubérculo (derecha) Figura 5. Esquema del proceso de glucolisis. Montaje del equipo de Destilación III 6 10 12 13 14 16 18 27 34 35 37 42 42 49 52 53 54 55 55 56 . Proceso de extracción de harina de ñame Figura 15. Producción de ñame en los departamentos de Colombia año 2010 Figura 7. Figura 2. Toma de muestras Figura 19. Equipo de destilación simple Figura 14. Línea de tiempo de utilización de bioetanol a nivel mundial. Hoja de D. Curva de crecimiento de un microorganismo Figura 12. Hidrolizados Esterilizados Figura 17. Fermentadores usados Figura 18. Figura 9. Rotundata (izquierda) y tubérculo (derecha) Figura 6.

Comportamiento del descenso de °Brix durante la fermentación de D. Alata. Gráfica 10. Gráfica 12. Comportamiento azucares reductores en la hidrólisis enzimática de D. Rotundata. Alata. Gráfica 8. Gráfica 9. Comportamiento del descenso de °Brix durante la fermentación de D. Rotundata. Gráfica 6.LISTA DE GRAFICAS. Comportamiento del descenso de azucares reductores durante la fermentación de D. Gráfica 13. Comportamiento azucares reductores en la hidrólisis enzimática de D. Rotundata. Trífida. Comportamiento °Brix en la hidrolisis enzimática de D. IV 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 . Trífida. Comportamiento del pH durante la fermentación de D. Alata. Gráfica 7. Comportamiento del descenso de °Brix durante la fermentación de D. Comportamiento de azucares reductores en la hidrólisis enzimática de D. Comportamiento del pH durante la fermentación de D. Trífida. Rotundata. Gráfica 5. Gráfica 11. Pag Gráfica 1. Gráfica 4. Trífida. Alata Gráfica 2. Comportamiento del pH durante la fermentación de D. Comportamiento °Brix en la hidrólisis enzimática de D. Comportamiento °Brix en la hidrólisis enzimática de D. Alata Gráfica 3.

Comportamiento de la producción de alcohol durante la fermentación de D. Rotundata Gráfica 16. Rotundata Gráfica 19. Comportamiento del crecimiento de biomasa durante la fermentación de D. Comportamiento del crecimiento de biomasa durante la fermentación de D. Comportamiento del crecimiento de biomasa durante la fermentación de D. Gráfico de medias de la variedad Dioscorea Rotundata 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 83 V . Trífida Gráfica 15. Alata Gráfica 20. Comportamiento del descenso de azucares reductores durante la fermentación de D. Comportamiento de la producción de alcohol durante la fermentación de D. Gráfica 22. Trífida. Rotundata Gráfica 24.Gráfica 14. Alata Gráfica 17. Gráfico de medias de la variedad Dioscorea Trífida Gráfica 23. Trífida Gráfica 18. Comportamiento de la producción de alcohol durante la fermentación de D. Comportamiento del descenso de azucares reductores durante la fermentación de D. Gráfico de medias variedad Dioscorea Alata Gráfica 21.

Condiciones de la enzima AMG (Amiloglucosidasa) Tabla 9. Condiciones en el proceso de la fermentación Tabla 10. Tabla 5. Condiciones de la enzima α Amilasa Tabla 8. Tabla 6. Almidón presente en diferentes alimentos. Equipos e instrumentos laboratorio Tabla 11. Tabla 2. Tabla 4. Tabla 3. Cantidad de ñame utilizada en el proceso Tabla 7. Metabolitos microbianos comerciales.Lista de materias primas y reactivos Tabla 12. Operacionalización de las variables 15 19 29 29 34 49 51 51 53 57 57 59 VI . Compuestos producidos por el proceso de fermentación. Producción de Ñame A nivel Mundial año 2005. Tamaño de células en procesos Biotecnológicos.LISTA DE TABLAS Pag Tabla 1.

con el consumo desaforado de los combustibles fósiles.mediante el proceso de hidrólisis enzimática y posterior fermentación. las bases teóricas que fundamentan la investigación y se planteo la metodología empleada para la obtención de los resultados. también se proponen los objetivos los cuales deben ser alcanzables para que la investigación sea valedera. se recopilaron las investigaciones realizadas previamente a esta investigación.RESUMEN Hoy en día la búsqueda de energías alternativas y su utilización se ha convertido en una de las principales preocupaciones y desafíos para la humanidad. teniendo en cuenta las propiedades que posee este tubérculo y sualta producción en las zonas regionales. con lo que se busca darle un valor agregado al uso de este producto agrícola. además se establece las fuentes de información utilizadas y la descripción de las variables implicadas en el proceso. en el primer capítulo del proyecto se realizó el planteamiento y la formulación del problema. De seguir así. Por lo planteado anteriormente esta investigación tiene como finalidad realizar la evaluación de la obtención de etanol a partir de tres variedades de ñame como sustrato. En el segundo y tercer capítulo. que servirán como punto de referencia a futuros investigadores que decidan indagar o explorar en este campo o que deseen llevar a cabo el proceso a escala piloto o industrial VII . En el capítulo 5 y 6 se encuentran las conclusiones y recomendaciones que se pudieron extraer del proyecto. el futuro de la humanidad y del planeta se prevé desastroso debido al acelerado ritmo de contaminación y al gran impacto que se ha generando en la capa de ozono por su combustión. De acuerdo a lo planteado anteriormente. en donde se destaca la importancia de evaluar un nuevo sustrato (ñame) para la obtención de etanol y utilizarlo como alcohol carburante y así minimizar las emisiones de gases en la atmósfera reduciendo así el impacto ambiental.

las fábricas. que se puede utilizar como combustible o como aditivo de la gasolina. Este combustible debidamente procesado poco a poco comienza a penetrar como combustible en el mercado internacional1. porque se puede reducir la contaminación proveniente de la utilización de energía a partir de los combustibles fósiles. es sin lugar a duda una fuente importante a tener en cuenta. remolacha. microorganismos. incluso algunos residuos de animales). como el etanol o alcohol etílico. Por eso estos compuestos son claves en el desarrollo de la vida y sociedad de nuestro planeta.ESTUDIO DE LA OBTENCIÓN DE BIOETANOL A PARTIR DEL ALMIDÓN DE ÑAME (DIOSCOREA ROTUNDATA. que por su composición permite la obtención de bioetanol. en los últimos años se ha generado una gran preocupación por parte de los países de todo el mundo por buscar nuevas fuentes de energía. 1 Estudio realizado por Global Bioenergy Partnership (Asociación Global de Bioenergía) [GBEP (2007)] 1 . se han desarrollado innumerables estudios a lo largo de estas cuatro últimas décadas y en la literatura científica se reporta que una potencial fuente nueva energía es la biomasa. pero hasta el momento no se ha desarrollado una fuente de energía que reemplace por completo a los combustibles fósiles. debido a que poseen un gran potencial energético. la calefacción y las industrias de generación de energía eléctrica) son los combustibles fósiles (petróleo. PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN 1. MEDIANTE LA HIDRÓLISIS ENZIMATICA Y POSTERIOR FERMENTACIÓN. DIOSCOREA ALATA Y DIOSCOREA TRÍFIDA).1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Históricamente las fuentes de energía que se han utilizado en el desarrollo de muchos procesos (el transporte. que ayuden a la conservación y recuperación del medio ambiente. Es por esto que la energía a partir de la biomasa. producido a partir de la fermentación de los azucares que se encuentran en los productos vegetales (cereales. carbón y gas natural). maíz entre otros). caña de azúcar. 1. que supone la obtención de combustibles desde fuentes vivas (plantas. Sin embargo. Teniendo en cuenta esto. para la investigación se utilizó como biomasa un producto vegetal(ñame). Cada día que pasa se hace más evidente la necesidad de encontrar nuevas alternativas que puedan reemplazar a los combustibles fósiles. Debido al agotamiento progresivo de los combustibles fósiles.

: 11-18 Disponible en: http://www. Armando y VELEZ. Venezuela y Antillas Francesas. D. Bulbífera y D. Colombia. trífida. y algunos municipios de los departamentos del Cesar y la Guajira.757 ton/año3. D. ya que no se conocen transformaciones tecnológicas que permitan generar otro uso para este. donde el 78% de la producción se dirige al mercado en fresco. Alata). Trífida).unicordoba. género Dioscorea. Las especies más cultivadas corresponden a Dioscorea Alata. En Colombia se pueden encontrar varias especies de ñame. pero también se necesitan combustibles para atender las necesidades 2 Evaluación De Propiedades Tecnofuncionales De Variedades De Ñame De La Costa Atlántica. Su condición de alimento regional que no se sitúa como de primera necesidad ha estancado su explotación. Bulbífera). el ñame es solo importante en Brasil. la subregión natural de los montes de María en los departamentos de Sucre y Bolívar. en Colombia el ñame se ha caracterizado como producto de cultivo y consumo tradicional en la Costa Atlántica2. escasa infraestructura de acopio. de los cuales la primera es la preferida en la producción de tubérculos para el consumo humano. Rotundata son las especies de mayor importancia tanto por el área sembrada como por la demanda del tubérculo. que se realiza generalmente en predios de economía campesina con bajo nivel de tecnificación.co/pregrado/copia%20alimentos/proyectos/pba. pág. dulce de ñame y sancocho). El cultivo del ñame se considera abundante en la Costa Atlántica. ñame azúcar (D. Trífida. Japón. El cultivo de este tubérculo involucra a 9. además en la región de la Costa Atlántica. Oceanía y los países del Caribe. El área mundial cultivada comprende tres regiones principales: África occidental. ñame espino (D.pdf fecha:13/03/2012 3 ALVIS.scielo. Información Tecnológica-Vol. En América.edu.cl/scielo. ñame papa (D. Rotundata. Rotundata). a pesar de la alta producción en el año el ñame no es utilizado con otros fines a parte del alimenticio. transporte y almacenamiento y una reducida transformación. Disponible en: http://www. D. Esculenta. contiene fécula abundante y constituye un importante alimento en las regiones tropicales. como el ñame criollo (D. D. D. Alata y D.php?pid=S0718-07642008000500003&script=sci_arttext 2 . Carlos. las áreas de mayor producción en Colombia son: la zona costera del departamento de Córdoba. El uso del ñame se ve en reflejado en las comidas cotidianas como (mote de ñame. sur de Asia incluyendo parte de China. Es necesario realizar un análisis sobre cómo afecta la producción de biocombustible al campo. seguidas por D. donde se cultivan alrededor de 29. Aun cuando actualmente se le conoce en todo el mundo. Haití.El ñame pertenece a la familia DIOSCOREACEA. 19 N°5-2008.000 familias de pequeños productores cuyos sistemas de comercialización se caracterizan por bajos volúmenes. y hay que tener presente que se necesitan alimentos para vivir. Cayenensis. Se encuentra distribuido en las regiones tropicales de alta pluviosidad. Esculenta) y ñampin (D.

de transporte.000 litros de biodiesel. etc. elevar los rendimientos de producción agraria y reducir el consumo de combustibles por persona son alternativas viables para enfrentar la crisis.). 4 BARRIENTOS. tanto por el desarrollo económico. La elección entre alimentos y biocombustibles no se puede plantear en términos absolutos. Juan Carlos. mecanización.000 – 5. elevar la productividad y hacer más eficiente el uso de combustibles. comercio.000millones de hectáreas las que se ocupan en agricultura.5 %5. Para elevarla productividad agraria se tiene que aplicar nuevas tecnologías en la producción. existen y van a seguir existiendo. Alimentos o combustible ¿Sinergia o dilema? Revista “Análisis” ISSN 1999‐6233vol 1 Nr 1 2008. Se necesita tanto de los alimentos como de los combustibles. créditos.000 millones de hectáreas. Pero mejor si no los tomamos en cuenta. vivienda.000 – 9. ¿Habrá otras alternativas? Sí. que es un componente importante de los tubérculos encontrándose en una concentración aproximada de 15. Estudio de los factores que afectan la hidrolisis enzimática y el proceso fermentativo para la producción de alcohol a partir de la papa. El ñame en su composición química posee almidón. industria. Ambos mercados. mejoramiento del empresariado. porque no se puede renunciar a ninguno. Fuera de ampliar la frontera agrícola. Manuel. Si se mantiene la superficie agrícola actual solamente para la producción de alimentos. En el mundo son aproximadamente 5. es relevante realizar investigaciones relacionadas con la evaluación de nuevos sustratos y metodologías para la obtención de azucares fermentables por medio de hidrólisis. Starch: Chemistry and Technology (pp 87-101). In Whistler & Paschal (Eds. la que actualmente está cubierta por bosques. Esta competencia exige volcar la vista al campo. aproximadamente 4. Enero/Julio 2006.1984. Las nuevas tecnologías incluyen riego. como por el crecimiento poblacional. por lo que se puede considerar una buena fuente de dicho polisacárido 6. R.ibepa. entonces se necesitará incrementar las hectáreas arriba mencionadas. el de alimentos y el de combustibles. Manufacture of potato starch. entonces se necesitarían entre 220 y 800 millones de hectáreas para producir un volumen de bioetanol y biodiesel igual al volumen de gasolina y diesel consumidos actualmente. Sin embargo. fecha: 30/11/2011 6 GONZALES. técnicas más eficientes. Jorge y MOLINA. New York: Academic Press Inc.org 5 TREADWAY. La reducción del consumo de combustibles por persona tiene mucho que ver con el tipo de vehículos que se utilizan4. La demanda de alimentos y la demanda de combustibles van en aumento. Si hoy en día de una hectárea se puede obtener aproximadamente 3. etc. 16(1). H. Debido a la creciente necesidad en el país para la producción de bioetanol. semillas mejoradas. Revista de ingeniería vol. a la agricultura.000 litros de bioetanol/año y 1. están y seguirán compitiendo por los productos agrarios que son materia prima para la fabricación de biocombustibles.Disponible en www. todavía queda superficie cultivable. 3 .

razón por la cual se identifica con las políticas de la Universidad de San Buenaventura planteado en su PEB “ La Universidad de San Buenaventura concibe 4 .3 JUSTIFICACIÓN Los recursos no renovables (combustibles fósiles) en el país día a día se están agotando debido a la gran demanda que estos generan a nivel mundial por las diferentes aplicaciones y usos que estos tienen en procesos industriales.Por tal razón en esta investigación se evaluará un sustrato rico en almidón.5 y 15 en %m/v utilizando las enzimas alfa amilasa. para enfrentar los retos que se nos presenten a lo largo de nuestra carrera profesional. Es necesario realizar este estudio ya que busca dar un uso diferente a este alimento. 13. Este proyecto es importante para investigadores y la comunidad científica porque se aplican las bases y conocimientos prácticos adquiridos a lo largo del proceso de aprendizaje. Mediante la obtención de etanol a nivel de laboratorio se desarrollaran los pasos adecuados para realizar el proceso en mayores proporciones. debido a la generación de oportunidades para personas de escasos recursos que pueden desempeñarse en la siembra y recolección de la materia prima. utilizándolo como materia prima para la obtención de etanol a partir de la hidrolización del almidón mediante el uso de enzimas como la alfa amilasa. 1. Por otra parte generaría desarrollo en las investigaciones del país cerrando poco a poco la brecha tecnológica con los países industrializados de Suramérica como Brasil. teorías o procesos de fabricación las cuales conforman una ciencia más competitiva frente al ámbito laboral ya que el papel del ingeniero químico en la industria es fundamental en el desarrollo de muchos procesos. Esto permite tener una visión más amplia del papel que ocupa el profesional formado en la Universidad de San Buenaventura en la sociedad. Este proyecto se hace necesario para la búsqueda de alternativas energéticas viables con el fin de disminuir el consumo de los combustibles fósiles debido a la contaminación que estos generan y con el tiempo poder llegar a remplazarlos. mejorando así su calidad de vida.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ¿Se podrá obtener bioetanol a partir de la hidrólisis de almidón de ñame a concentraciones de 10. Amiloglucosidasa y la fermentación con Saccharomyces cerevisiae? 1. Amiloglucosidasa y posteriormente la fermentación con la Saccharomyces cerevisiae.5. Este proyecto se caracterizó por su proyección social. La Ingeniería Química como ciencia está a la expectativa de nuevas investigaciones.

4 OBJETIVOS 1.5y 15% m/v utilizando la enzima α amilasa y la amiloglucocidasa. biotecnología.4.5.5 y 15% m/v. Y con ellas se desarrollaran todas las actitudes y destrezas necesarias para la gestión del proyecto. 7 Proyecto Educativo Bonaventuriano.1 Objetivo general Evaluar la obtención bioetanol a partir del almidón de ñame (Dioscorea Rotundata. crecimiento microbiano y etanol producido) de las 3 variedades a las concentraciones 10. adquiridos durante la formación universitaria las áreas de operaciones unitarias.5. Dentro de la trascendencia de esta investigación.la proyección social como la relación permanente que la institución establece con la comunidad o medio externo para articularse en ella. tecnología ambiental. Realizar la fermentación del hidrolizado obtenido. Además en esta investigación se ponen al servicio de la sociedad los conocimientos adquiridos para mejorar la calidad de vida del hombre sin causar daño a la naturaleza. P49 5 . Arquitectura. 1. 2010. se hace necesaria relacionarlas con la orientación y aplicación de los programas académicos vistos en la Facultad de Ingeniería.”7 En la realización de este proyecto se hizo necesaria la utilización de conocimientos. ayudando por medio de estas a la conservación del medio ambiente en busca del mejoramiento de su entorno. 13. 1. Dioscorea Alata y Dioscorea Trífida) mediante la hidrolisis enzimática y posterior fermentación.4. Determinar los parámetros (azucares reductores. influir en los procesos de transformación social y en las realidades de su propio desarrollo. información. mediante la utilización de la levadura Saccharomyces cerevisiae. 13. Arte y Diseño de La Universidad de San Buenaventura.2 Objetivos específicos Realizar la hidrólisis enzimática de las tres variedades de harina de ñame a las concentraciones 10. comunidades regionales y nacionales. evaluación de proyectos entre otras. ética.

la preparación de vinos y cervezas se sugiere desde la prehistoria. Una de las primeras menciones. se han hallado en papiros egipcios que datan de 3. Este programa se basó en los siguientes conceptos:    Un volumen de compras y precio garantizados de etanol por parte de Petrobras. Una subvención a la compra de vehículos impulsados por etanol puro.C. La figura 1 ilustra la evolución del uso de bioetanol a nivel mundial en el siglo 20. sin embargo. MARCO DE REFERENCIA 2. Fuente:http://www.epn. el descubrimiento de yacimientos de Petrobras.2.500 A. Línea de tiempo de utilización de Bioetanol a nivel mundial. Figura 1. El establecimiento de incentivos a la inversión en nuevos centros de producción.edu.ec/bio2008/Documentos/BIOETANOLPPT. debilitaron el argumento de la independencia del petróleo y la caída de los precios 6 .1 ANTECEDENTES INVESTIGATIVOS La producción de alcohol existe desde que el hombre conoce el fenómeno de la fermentación.1 Historia – etanol El Programa PROALCOHOL.pdf fecha: 28/10/2011 2. A mediados de los 80’s. iniciado en 1975 por el gobierno brasileño a raíz de la crisis del petróleo. tenía por finalidad reducir la dependencia del país respecto a las importaciones del combustible fósil.1.

hizo para los productores de caña más atractivo la producción de éste que del etanol. José Guillermo.6 9 Ibíd. ya que el motor funciona con cualquier proporción de gasolina (mezcla E20-E25) y etanol anhidro (E100). popularmente conocidos como "Flex". 8 LEÓN. Perú9. Durante la década del 90.co/sisjur/normas/Norma1. En agosto de 2008 la flota de carros "Flex" ya había alcanzado 6 millones de vehículos. haciendo así más barato el etanol que la gasolina10. 2. Por otro lado. la evolución del mercado del azúcar.1.gov. Bolivia. Guatemala. Honduras. p. Punta del Este. año en que el gobierno aprobó la ley 693 que obligaba al enriquecimiento en oxígeno de la gasolina. Los Biocombustibles. Uruguay p. Nicaragua.2 Estado actual Latinoamérica El sector mundial de la producción de etanol se encuentra en plena expansión. Regulaciones más recientes eximieron al etanol elaborado a partir de biomasa de algunos impuestos que gravan la gasolina. el programa fue revisado a fondo y a partir de 1999 se produjo la apertura del mercado de etanol y el fin de los precios garantizados y con las siguientes modificaciones:    Orientación hacia el sistema de mezcla. Desgravación fiscal prácticamente total para la venta de etanol.7 10 Ley 788 de 2002 articulo 88 “Exención de impuestos para el alcohol carburante” disponible en:http://www. determinada por el gobierno8. Paraguay. Costa Rica.alcaldiabogota. La legislación sobre producción y uso de biocombustibles también se está aplicando en países como: Argentina. hizo que el apoyo a la producción de etanol decayera por el diferencial elevado de precios. incluyendo automóviles y vehículos comerciales livianos. La obligación de añadir a la gasolina una proporción mínima de etanol del 22-24%. En los últimos años.jsp?i=7260 7 . Al principio todo el interés en la producción del etanol vino de la industria de azúcar existente. Conferencia ARPEL 2009. representando un 23% de la flota de vehículos livianos de Brasil. disponibles en el mercado a partir de 2003. Esto se hizo inicialmente para reducir las emisiones de monóxido de carbono de los coches. ejemplo claro de esto se ve en su parque automovilístico que suma hoy casi tres millones de vehículos “dedicados” (solo etanol) y cerca de 16 millones de vehículos que consumen mezcla etanol – gasolina. En Colombia desde el 2005 se usa E10 en el 70% del territorio y a finales de 2009 estará el 100% del país usando esta mezcla.de este. En Colombia las investigaciones para utilizar el etanol como combustible comenzaron en 2001. la industria automovilística brasileña desarrolló vehículos que operan con flexibilidad en el tipo de combustible.

pero este es de los tubérculos con mayor presencia de almidón.En la industria del alcohol el ñame es muy poco empleado. Bulbífera en las concentración 16% m/v arrojo los menores rendimientos con un valor de 520. T. Termamyl 120 L y la AMG 300 L de la Novo Nordisk en la hidrólisis y Saccharomyces cerevisiae en la fermentación.4% v/v y un rendimiento de 129 L de etanol/Tm de harina de batata. durante un tiempo de fermentación de 56 horas. Assis. Empleando las enzimas comerciales Pectinex UltraSP-L. (2008) Evaluaron los rendimientos en el proceso de obtención de alcohol a partir de harina de Ñame ( Dioscorea Bulbífera. (2011) Evaluaron la producción de etanol a partir de harina de yuca en un sistema de hidrolisis enzimática y fermentación. pero aún no se ha conseguido producir carbohidratos a bajo precio. Las plantas del etanol están siendo incentivadas por tratos fiscales. Se obtuvo una concentración de etanol de 14. (2007). El rendimiento 8 .01 (mezcla de alfa amilasa y glucoamilasa) en la hidrolisis y la Saccharomyces cerevisiae en la fermentación. González y Molina en el 2006. Las investigaciones sobre el bioprocesamiento de ñame y de tubérculos afines son escasas debido a que por lo general su estudio va más dirigido como alimento. empleando como microorganismo Saccharomyces cerevisiae.96 L/Tm de harina respectivamente. Trífida) por vía enzimática. De forma similar se demostró que la variedad D.ya que es relativamente fácil añadir un módulo para desarrollar etanol al final de una fábrica de azúcar. Los resultados en la producción de alcohol demostraron que la variedad D. lo que lo convierte en materia disponible para el procesamiento de etanol. ASTURIZAGA y BOCANEGRA.5 g/h (48 horas de proceso) y con una concentración de harina de ñame de 28% m/v empleando la enzima STARGENTM0.33% v/v. y las necesidades energéticas son similares a las que se necesitarían para producir el azúcar. Ha habido interés en plantas de etanol de yuca (mandioca) y de nuevas plantaciones de la caña de azúcar.87 y 792.66 L/Tm de harina. algunos de los que se han utilizado con estos fines son la yuca y la papa. Trífida en las concentraciones 10% y 13% m/v presentó mayores rendimientos en cuanto a volúmenes de alcohol. El gobierno alienta a convertir gradualmente las fuentes de combustible de los coches a una mezcla del 10 por ciento de etanol y de 90 por ciento de gasolina. por lo tanto se realizó una recopilación de estudios e investigaciones afines con esta proyecto y que presentamos a continuación: CASTAÑO y colaboradores. en el estudio para la cuantificación de alcohol a partir de harina de batata obtuvo una concentración de etanol del 9. con valores de 786. quienes en el seguimiento del proceso de fermentación alcanzaron una concentración máxima de alcohol de 10. a fin de determinar las mejores condiciones para producir alcohol. estudiaron la hidrólisis enzimática y la fermentación de la papa (Solanum tuberosum).6% v/v con una productividad de 2.

El jugo de caña contenía una composición de 14% de sólidos solubles (14 ºBrix) y en la fermentación el microorganismo utilizado fue Saccharomyces cerevisiae. Los 9 .8% v/v de etanol. C. utilizando una concentración de 20% m/v de sustrato. 30% de fibra en base seca. En el diseño de un proceso de producción de etanol anhidro a partir de jugo de caña. necesitando un ajuste para su realización comercial. (2001). también en el 2006. Un análisis mostró que cerca del 75% de la materia seca inicial fue hidrolizado y el residuo presento 37% de almidón.de etanol del proceso fue de 94. en el estudio de la fermentación alcohólica de sustrato amiláceo hidrolizado enriquecido con melaza de caña. 11. de almidón para el extracto de glucoamilasa.45% de azucares. enriquecido con concentraciones de melaza de caña del 5. Para esto se usó como enzima complementaria la pectinasa para la hidrólisis del mosto.85% de proteínas y 0. obtuvieron una concentración de 6 . 1. P. 2. en Brasil 2004. A.4% v/v.. GRISALES. En el trabajo “Estudio preliminar para la obtención de jarabe de glucosa a partir de la hidrólisis enzimática del almidón de yuca utilizando extractos crudos de alfa amilasa (B. 20 y 30 ml/Kg. el objetivo de este trabajo fue desarrollar la evaluación técnica económica de la producción de alcohol a partir del subproducto de la obtención del almidón de yuca. el mosto obtenido presentó una concentración de 13 ºBrix siendo necesario concentrarlo. L y CABELLO. Licheniformis) y glucoamilasa (A. MAGALY L. C en el 2005. 45 ml/ Kg. obtuvieron concentraciones de etanol del 1.5 L de etanol/Tm de papa. Níger)”. 15 y 20% v/v respectivamente. 2% v/v. CEREDA M. al.31% del almidón inicial y un 80% de rendimiento de azucares totales. et.5% de fibra. 0. de almidón para el extracto de alfa amilasa y 15. 20. Se ensayaron tres relaciones enzimas /sustrato 10. L y CABELLO. 10.Desarrollaron un estudio sobre la utilización del residuo sólido obtenido en la extracción de almidón de yuca que es usado fundamentalmente en la alimentación animal..14% de cenizas.76% v/v a partir de residuos del proceso de obtención de harina y almidón de yuca usando una concentración del 18% m/v y enriquecido con un 12% de melaza residual del proceso de producción de sacarosa de caña de azúcar.6% v/v. 3. usando como microorganismo Saccharomyces cerevisiae. aplicaron extractos crudos enzimáticos a una solución de almidón de yuca 20% (m/v). obtuvieron una concentración de etanol del9. la fermentación alcohólica se realizó en 48 horas. en un volumen de reacción de 500 ml. BRINGHENTI. la caracterización del subproducto presentándolos siguientes resultados en base seca: 80% de almidón. BRINGHENTI. El proceso de hidrólisis tuvo una conversión de 86. el análisis económico demostró un proceso viable. 30% de azucares totales.6% v/v y4% v/v a partir de un hidrolizado de almidón residual de harina de yuca del 10%m/v.

licuefacción y 45 ml/Kg de almidón en la licuefacción. Figura 2. Revista Temas Agrarios. de almidón en la. Trífida) por vía enzimática. Carmen. Alvarino N. es muy popular en centro y sur América. 2001)11. con lo que se obtuvo un jarabe de glucosa de 83.2 BASES TEÓRICAS 2.2. 2. Programa de Biología. 10 . 2008. Universidad de Sucre. Facultad de Educación Y Ciencias. Evaluación de los rendimientos en el proceso de obtención de alcohol a partir de harina de Ñame ( Dioscorea Bulbífera..elapuron.com y www.mejores resultados de la hidrólisis del almidón de yuca se lograron con las relaciones de 30 ml/ Kg. En África occidental y en Nueva Guinea el de ñame es uno de los principales cultivos primarios.34% de equivalente de dextrosa (Lujan D. SIN 0127610. Sincelejo. Diversas variedades de ñame se cultivan a través de los trópicos y en parte de las regiones sub-tropicales y templadas.1 Ñame Nombre Científico: Dioscorea spp En la figura 2 se puede observar la forma de las hojas y del tubérculo de una de las especies de este género. Imagen sobre hojas de Dioscorea (izquierda) y Tubérculo (derecha) Fuente: www. al igual que en el Caribe. Salcedo J.com/blogs/cocina/9/el-ame/ fecha: 13/06/2011 Identificación del Producto El ñame es una de varias especies de plantas del género Dioscorea (de la familia Dioscoreácea). Yajaira y BOCANEGRA AMAYA. 11 ASTURIZAGA AVILEZ. nativo a regiones cálidas de ambos hemisferios. 108 p. África y partes de Asia.infojardin. Este tubérculo tropical cuya parte expuesta es en forma de enredadera.

con frecuencia manchadas de morado. estas son plantas de diferentes especies. y Canadá se presta a confusión). Dioscorea Alata (ñame de agua). Sobre el nivel del mar. estas especies tienen hojas de forma acorazonada y se propagan por rajas (trozos). cilíndricos.UU. Brasil y Venezuela. Diamante 22.Aunque el Camote "SweetPotato" y el ñame son similares en muchas formas. Dioscorea Cayenensis (ñame amarillo). Dioscorea Japónica. (y por ello en países como los EE. cada una con dos o tres yemas. con altura máxima de 800 más. 2. Mano de Tigre. A América fue introducido por los esclavos africanos y navegantes portugueses en el siglo XVII. La lámina es acorazonada.2. En el viejo continente su área de distribución solo incluye zonas de alta humedad. con las alas membranosas de borde irregular.200 mm y 1. dependiendo de la variedad del ñame. En la actualidad el ñame es el más difundido especialmente en las Antillas. seco y harinoso. con 3 a 5 nervios principales que salen de la inserción del peciolo. Baboso de Ocú. Ecología El ñame requiere para su cultivo temperaturas entre 18º C y 34º C y condiciones de precipitación de entre 1. 11 . y la piel desde blancuzca a chocolate oscuro. En nuestro medio el ñame se presenta por regla general en trozos y se vende por masa. púrpura o rosado. Culebra.2 Dioscorea Alata (Ñame Diamante) Tipos silvestres de esta especie se encuentran aún en las selvas húmedas de malasia. Como es una planta de cultivo muy antiguo se conocen numerosos clones. La textura de este tubérculo puede variar de suave y húmedo a áspero. Esta especie se caracteriza por sus tallos cuadrangulares. Características El ñame es un planta (tubérculo) cuya raíz comestible es muy apetecida por su valor alimenticio y rico sabor.. amarillo. Existen más de 150 especies de ñames en el mundo. Variedad Dioscorea spp.300 mm Y suelo franco arenoso (más arenoso que arcilloso). Dioscorea Rotundata (ñame blanco). estos se caracterizan principalmente por la forma de los rizomas (esféricos. La parte superficial de la planta es una enredadera trepadora con tallos (bejucos) que pueden alcanzar hasta más de 3 m. planos. la parte carnosa puede ser de diferentes tonalidades de blanco.

Jorge.com. provistos de dos a ocho alas membranosas. cada uno con dos semillas diminutas.2. compacta y varía de 12 LEÓN. La figura 3 ilustra el tipo de hojas y la forma del tubérculo de la especie Dioscorea Alata Figura 3.3 Dioscorea Trífida (Ñame Baboso). Las hojas miden hasta 25 cm de largo. Los tubérculos varían mucho en forma y tamaño. Costa Rica.org/Ubi. Alata (izquierda) y tubérculo (derecha) Fuente:http://www. generalmente en mayor número y desarrollo en la parte inferior del tallo. Las plantas son unisexuales. El color de la pulpa varía de blanco a amarillento12. son digitadas. raíces y estolones. La superficie es rugosa. El fruto es una cápsula. mientras que las inflorescencias pistiladas consisten de dos racimos simples qué nacen de la misma axila con flores de 12 a 24 mm de largo. estos últimos en círculos sucesivos.flickr. D. claviforme y a menudo con ramificaciones muy cortas.stuartxchange. a veces con raicillas. trífida es una planta de tallos volubles. con el central más grande. Las inflorescencias estaminadas son racimos simples o muy ramificados. El tallo subterráneo es un órgano irregular y corto del que emergen los tallos aéreos. Hojas D. con tres lóculos. 12 . se ensancha formando el tubérculo. delgados que enrollan hacia la izquierda. Fundamentos Botánicos de los Cultivos Tropicales. aladas. 92p. fusiforme. Esta especie florece más regularmente que las otras especies del genero Dioscorea spp cultivadas.encorvados y alargados) son de forma irregular generalmente. 1968. La pulpa es uniforme. con tres a siete segmentos o lóbulos. aun en la misma planta. El estolón que mide hasta 70 cm de largo.Fecha: 13/06/2011 2. se observa forma esférica.html y http://www. con flores verduzcas de 4 a 6 mm de diámetro.

4 Dioscorea Rotundata (Ñame Espino) El ñame espino (Dioscorea rotundata) es un cultivo de pequeños y medianos agricultores. con un sabor y apariencia muy agradable después de cocinado. Sucre y Bolívar”. Hoja de Dioscorea Trífida (izquierda) y tubérculo (derecha) Fuente:http://www. de empleo rural y de oferta de alimento a sus pobladores y también es un producto de exportación. presentan puntos elevados semejantes a pústulas que van a dar origen a raíces. Universidad de Sucre. C. L. que constituye en muchas regiones la principal fuente de ingresos. 2008.. El peso de los tubérculos está entre 300 y 400g cada uno13.5 millones anuales14. es cultivado por pequeños y medianos agricultores y constituye la principal fuente de ingresos y de empleo rural en muchas zonas. 14 SÁNCHEZ. el ñame se usa para alimentación de la población de la Costa Atlántica. Además su exportación a los mercados de Estados Unidos y Europa le genera al país más de US$2. de postcosecha y de comercialización del ñame en Córdoba.php?id_elem=160&famil=DIOSCOREACEAE fecha: 06/05/2012 2. La figura 4 muestra ejemplares que corresponden a las características descritas anteriormente. En Colombia. El tubérculo es una estructura del tallo y no de la raíz cuya función es el almacenamiento de gránulos de almidón. Trífida) por vía enzimática. Carmen. amarillo hasta morado. 13 . 108 p. Evaluación de los rendimientos en el proceso de obtención de alcohol a partir de harina de Ñame (Dioscorea Bulbífera. Programa de Biología.color blanco. “Descripción de aspectos productivos. Yajaira y BOCANEGRA AMAYA. La planta de ñame tiene un sistema de raíces fibroso. HERNÁNDEZ. Los tubérculos durante el período de almacenamiento. Corpoica.tramil. Figura 4.. Los gránulos de almidón son 13 ASTURIZAGA AVILEZ. 2003.net/fototeca/imageDisplay.2. Sincelejo. Facultad de Educación Y Ciencias.

Las especies más cultivadas son: D. Está estimado que existen más de 600 especies en el mundo. Alata). dependiendo de la especie. con una producción de 84900. Disease induced changes in carotenoid content of edible yam (Dioscorea spp) infected by Botryo diploid theobromaeandAspergillusNiger.org. Rotundata (izquierda) y tubérculo (derecha) Fuente:http://insumosdeamecoloso. D. En la figura 5 se observa la forma de las hojas y el tubérculo de la especie Dioscorea Rotundata. Además de almidones los tubérculos de ñame. 2004 ADELUSI A.blogspot. Mycopathologia 98:49-58. “Consideraciones sobre fisiología de la planta de ñame”. el Caribe.Cayenensis. Todas las estadísticas están reflejadas en la tabla 1. sur este de Asia. (1987).Bulbífera y D. La mayor producción de ñame y los mejores rendimientos de los cultivos se dan en el continente africano. rotundata) los concentran más que otras especies (D.wikimedia. D. India y partes de Brasil)16. Galo. Rotundata. siendo Nigeria el mayor productor con 26587000 toneladas. Corpoica. la arracacha y la batata ocupan un lugar importante en la alimentación humana. tienen concentraciones de sustancias urticantes. Esta planta se presenta como una enredadera y se caracteriza por la presencia de tubérculos subterráneos y aéreos. Colombia ocupa el séptimo lugar con una producción de 333532 y en el último lugar se encuentra se encuentra la República Democrática del Congo. D. y al género Dioscorea. de los cuales la primera es la preferida en la producción de tubérculos para el consumo humano.Esculenta.redondeados o elípticos y algunas especies de ñame (D. 15 16 GAMERO.5 Producción de Ñame a nivel Mundial La mayoría de los ñames cultivados pertenecen a la familia Dioscoreácea.com/y species. islas del Pacifico sur. Alata.2. Es el principal alimento cultivado en África occidental. trífida. LAWANSON AO. en donde en una escala de mayor a menor productor los primeros 9 países constituye a este continente. Figura 5. de taninos. la yuca. 14 . los cuales junto con la papa. D. Hojas de D.fecha: 13/06/2011 2. fenoles y otras sustancias como esteroides o corticoides15.

ica.dirección estadística.org . “principales productores de alimentos y productos agrícolas.000 Tm.fao. en el país se cultivan 25. Producción de Ñame A nivel Mundial año 2005 Fuente: www.Tabla 1. siendo los principales productores los 17 Articulo exportadores de ñame de la mano del ICA (2009) disponible en: www.000 hectáreas en ñame y se producen 200.2. Fecha: 06/05/2012 2.gov. con un rendimiento medio de 12 a 15 Tm/ha entre las variedades espino y diamante17. La producción se realiza principalmente en las regiones de las costas Atlántica y Pacífica.6 Producción de ñame en Colombia De acuerdo con las cifras del Ministerio de Agricultura y el Instituto Colombiano Agropecuario (2009).co 15 .

producción y rendimiento obtenido por los departamentos de Colombia entre los años 1997 – 2008. Figura 6. La comercialización de ñame es regional para consumo en fresco.Según rastros arqueológicos hallados en las tumbas de los reyes egipcios. generalmente asociado con cultivos de yuca y maíz.5 millones anuales. Además su exportación a los mercados de Estados Unidos y Europa le genera al país más de US$2. Los griegos los llamaron Anylon quizás debido a que el contrario de lo que sucede con la harina. Anuario estadístico (2010) fecha de actualización 27/03/2012 En Colombia el ñame es cultivado por pequeños y medianos agricultores. Barcelona: Gustavo Gill. En el anexo A se observa la superficie cosechada. sino por el lavado 18. Bolívar y Sucre. 1954 p. F.2. con bajo nivel tecnológico.7 ALMIDÓN Historia del almidón Exactamente no se sabe desde que época es conocido como el almidón. como se ilustra en la figura 6. enciclopedia de química industrial. 2. tomo VI. Producción de ñame en los departamentos de Colombia año 2010 Fuente: Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural. presentan muestras 18 ULLMAN. y constituye la principal fuente de ingresos y de empleo rural en muchas zonas de la Costa Atlántica. se obtenía no por el molino. España y Alemania para alimento de la población latina y uso farmacológico. aunque una parte se exporta a Estados Unidos. 16 .departamentos de Córdoba.

pero usando como materia prima el trigo. es transformado en azucares por medio de enzimas diastáticas. la celulosa forma parte del armazón de las plantas. son insolubles en agua fría. formando así el almidón transitorio. En las plantas existen tres clases de almidón: Almidón de asimilación. El almidón es un polisacárido de reserva alimenticia predominante en las plantas. O. 19 FERMEMA. si su membrana externa se rompe al ser molidos. transitorio y de reserva. Zaragoza. afrecho. El almidón se halla en forma de gránulos con la forma y tamaño característicos de la planta de la cual se obtiene.C. Después de la celulosa. sin contar el que se encuentra presente en las harinas usadas para hacer pan y otros productos de panadería. pasando primero por la fase de almidón soluble. mientras que el almidón representa su reserva de carbohidratos. 2 228-240 da ed. 17 . aprovechando su solubilidad. los cuales datan aproximadamente de año 3500 A. y proporciona el 70-80% de las calorías consumidas por los humanos de todo el mundo. Tanto el almidón como los productos de la hidrólisis del almidón constituyen la mayor parte de los carbohidratos digestibles de la dieta habitual. Química de los Alimentos. En la figura 7 se ilustra la estructura química del almidón. el cual puede transformarse algunas veces en gránulos muy finos. es llamado almidón de reserva. España 2000. Del mismo modo. además ayuda a determinar la presencia de materiales extraños. El almidón de asimilación es aquel que ha de hervir en la nutrición de la planta y el cual se encuentra en forma de almidón soluble. por lo que un análisis microscópico es muy útil para confirmar el origen del almidón. el desarrollo debió efectuarse muy lentamente al igual que en otros países. El almidón en el interior de la planta. la cantidad de almidón utilizado en la preparación de productos alimenticios. Cuando los gránulos están intactos. transformándolos por hidrolisis en glucosa la cual es transformada por medio de la savia.de pegantes a base de almidón. Editorial ACRIBIA. P. En la industria de almidón se conoce muy poco acerca de su aparición. el almidón es la sustancia orgánica más ampliamente distribuida en la naturaleza. insectos o residuos de estos. Se admite probablemente que los holandeses en el siglo XVI habían fabricado almidón a gran escala. estos gránulos se hinchan en agua fría y si se calienta por encima de 55 ºC. El resto de almidón es transportado a los sitios de almacenamiento donde tiene como función servir de alimento para los brotes jóvenes. forma un gel19.

ar/botanica/tema8/8-4plastidios. Fecha: 24/04/2011 Los almidones comerciales se obtienen de las semillas de cereales. Propiedades del almidón El almidón es un polvo blanco. es un hidrato del carbono (oxigeno. cuya densidad es 1. plástico. batata (Ipomoea batatas) y mandioca (Manihot esculenta). formador de películas. nitrógeno y carbono). Ejemplo: el trigo.Figura 7.6 mg/ml. pudiéndose identificar fácilmente. Su procedencia se distingue por el tamaño y la forma de los granos. Fuente: http://www. Al microscopio presenta características definidas. enturbiante. Ejemplo: la yuca. trigo (Triticum spp. humectante. estabilizante. glaseante. que incluyen las siguientes: adhesivo. Ejemplo: el arroz.edu. gelificante. amorfo. alcohol y éter. agente antienvejecimiento de pan. Almidones de gránulos truncos en uno de los extremos. ligante. Almidones de gránulos ovoides usualmente formando anillos concéntricos. particularmente de patata (Solanum tuberosum). 18 . estabilizante de espumas. Ejemplo: la papa. Grupo del sagú. varios tipos de arroz (Oryza sativa). Tanto los almidones como los almidones modificados tienen un número enorme de posibles aplicaciones en los alimentos. particularmente de maíz (Zea mays).htm.). y de algunas raíces y tubérculos. Almidones de gránulos ovoides con núcleo central.biologia. Almidones cuyos gránulos forman ángulos pequeños y poligonales. texturizante y espesante. que a veces se caracteriza por un brillo peculiar. En virtud de su forma podemos dividir los almidones en 5 clases:      Almidones de gránulos en forma de óvalos grandes formando anillos concéntricos y con el núcleo (hilum) colocado excéntricamente. Es insoluble en agua. Ejemplo: las leguminosas. con núcleo irregular. Estructura del almidón. Químicamente.

Esta parte es más soluble que la anterior y no forma una pasta. los restos de glucosa están unidos entre sí por uniones glucosidicas 1-4. ni da color con el yodo-yoduro. Químicamente es una mezcla de dos polisacáridos muy 19 . En el granulo de almidón podemos distinguir tres partes: La primera es una envoltura de amilopectina y α -amilosa o un almidón a menos soluble y que contiene un Ester fosfórico. Los carbohidratos en la nutrición humana. con orientación α. La diferencia entre la celulosa y el almidón radica en que en el almidón. Es difícilmente atacada por enzimas. el cual es un Ester amilofosfórico. el factor n tiene por lo menos un valor igual a 4. pero no como constituyente del granulo. Almidón presente en diferentes alimentos Cantidad de almidon presente en algunos alimentos Alimento % en masa de Almidon Cereal 65-75 Edulcorantes 10-12 Raices y Tuberculos 70-75 Frutas 5-8 Hortalizas 8-15 Legumbres 50-60 Fuente: FAO (1999).La tabla 2 muestra la concentración en masa seca de almidón presente en varios alimentos. la hemicelulosa. Además de esto se sabe que el almidón contiene alrededor del 20 % de una fracción soluble en agua llamado Amilosa y el 80% de una solución insoluble conocida como amilo pectina. llegándose a encontrar fórmulas con 100 a más átomos de carbono. Tabla 2. mientras que la celulosa tiene uniones 1-4 glucosidicas con orientación β. granulosa o βalmidón. Con dicho calentamiento forma una pasta y con una solución alcohólica de yodoyoduro da una coloración violeta La segunda parte es una sustancia inerte formada por β-amilosa. La tercera parte es hallada solo en los cereales. Estructura y composición Todos los almidones tienen fórmula empírica (C6H10O5)n. necesitándose para ello un calentamiento. estudio de alimentación y nutrición año 1997.

Amilopectina Presenta una cadena lineal de tipo α como en la amilosa.Química Orgánica. Puesto que la cristalinidad es producida por el ordenamiento de las cadenas de amilopectina. 1996. por lo tanto la unidad que se repite es la maltosa. Editorial ACRIBIA. Robert. 5 Ed. La disposición radial y ordenada de las moléculas de almidón en un gránulo resulta evidente al observar la cruz de polarización (cruz blanca sobre un fondo negro) en un microscopio de polarización cuando se colocan los polarizadores a 90° entre sí. además tiene alrededor de 4-5% de las unidades de glucosa unidas por enlaces α (1. los gránulos de almidón céreo tienen parecido grado de cristalinidad que los almidones normales. su aislamiento y el método utilizado. Este término también puede aplicarse a reacciones en donde un ácido se añade al agua.4).9 millones de daltons.glucosa se encuentran unidas mediante enlaces glucosidicos α (1. 20 21 Disponible en: http://www. la cual es la más utilizada industrialmente22.8 Hidrólisis Se denomina hidrólisis a las reacciones de la química inorgánica. Química de los Alimentos. El centro de la cruz corresponde con el hilum. P. en donde el agua efectúa una doble descomposición con otro compuesto. O. Zaragoza.1 y 1. (el H + va en un componente y el OH.htm ta MORRISON.2. Entre los valores aceptados para la amilosa están entre 1. el centro de crecimiento de gránulo20 Amilosa La α.es/~macromol/curso08-09/pls/quees. la amilosa y la amilopectina. 2. 228-240 20 .va en el otro). 2 ed. El peso molecular de la amilopectina es muy variable. Addison–Wesley Iberoamericana.uva. España 2000. ácidos orgánicos o por acción enzimática.similares. contienen regiones cristalinas y no cristalinas en capas alternadas. en mayor o menor cantidad para acelerar la reacción. las mejores valoraciones del peso molecular promedio (pro difracción) es de 10 a más de 20 millones de daltons21. 22 da FERMEMA.eis. Robert. El peso molecular de la amilosa depende de su origen botánico.amilosa está constituida por cadenas largas no ramificadas en las que todas las unidades de D.6) dando una estructura ramificada creciente. esta hidrólisis puede llevarse a cabo con ácidos inorgánicos. Y BOYD. USA.

Editorial ACRIBIA. quedando en suspensión en el jarabe y es muy difícil su separación por filtración23. El almidón tratado con ácidos se rompe en cadenas cortas de dextrina. Química de los Alimentos. la cantidad empleada referida a la cantidad de almidón.Reacción de hidrólisis enzimática: Con la finalidad de transformar las moléculas del almidón en azucares fermentables los cuales son asimilados por las levaduras o bacterias. 2 228-240 da ed. 23 FERMEMA. Los productos de degradación son principalmente el hidroximetulfurtutal. de ser lo más pura posible y libre de hierro. La recombinación de unidades de D-glucosa o de esta con fragmentos como maltosas. El almidón es sometido a un proceso de hidrolisis mediante la cual ocurre un desdoblamiento ya sea por un exceso de agua o por la presencia de una pequeña cantidad de fermento o acido. A medida que actúa el ácido. Zaragoza. Mediante este procedimiento se logra el desdoblamiento de las moléculas de almidón por la acción de ácido sulfúrico o ácido clorhídrico diluidos. El grado de degradación depende de la concentración del ácido. así como la presión y la temperatura ejercen gran influencia en la duración de la sacarificación. la cantidad de ácido empleado es tal que el valor de pH se ajuste a 1. y el ácido fórmico.9 Hidrólisis Química. La clase de ácido. ya que el ácido fosfórico que existe en el almidón forma después de neutralizarse fosfatos de hierro insolubles. que da al jarabe un sabor amargo. conducen a la formación de productos de reversión los cuales pueden ser hidrolizados. Si hervimos el almidón con ácido Clorhídrico 1N durante 1 hora. El agua utilizada. el ácido levulinico. la temperatura. y el tiempo de hidrolisis. 2. O.5 paz una solución al 33% de almidón. Por lo general. P. el peso molecular y la viscosidad de los productos decrecen y el poder reductor aumenta. finamente dividido. 21 . un ejemplo de estos productos en la Genciobiosa. Los ácidos utilizados para la producción de dextrinas son el Ácido clorhídrico y el Ácido Nítrico.2. su concentración. el almidón se rompe totalmente y se reduce a glucosa esta reacción es conocida como hidrolisis intensa. España 2000.

los jugos pancreáticos.1991.2004.10 Hidrólisis enzimática (sacarificación de materiales amiláceos) La sacarificación es el proceso que tiene por objeto la transformación del almidón de las materias primas amiláceas en azucares. que no dan color con el yodo. Blackie and Son Ltd. además de las de índole económica o tecnológica. Las enzimas son piezas esenciales en el funcionamiento de todos los organismos vivos. actuando como catalizadores de las reacciones de síntesis y degradación que tienen lugar en ellos25. Asimismo se puede trabajar en condiciones moderadas. por lo que debe ser sometido a un proceso de cocción para obtener una buena dispersión y rompimiento de los granos de almidón llevándose a cabo una hidrolisis rápida. I. su gran especificidad de acción hace que no se produzcan reacciones laterales imprevistas26. especialmente de temperatura.mx/publicaciones/avaype/sepoct02/HORCASITAS. en hongos y bacterias. La producción de jarabes de glucosa a partir de almidón se realiza en dos pasos. G y WOODS. Disponible en: http://www. Dicha transformación es catalizada por enzimas.cinvestav. 22 . dando productos semejantes a los obtenidos por hidrólisis acida.4 glucosídicos. Aprovechamiento Industrial de los productos agrícolas. las células de la sangre. los jugos pancreáticos. London. Una cadena lineal puede contener de 70 a 100 unidades de glucosa aproximadamente 24 Enzimas. Esta última se compone de cadenas longitudinales que contienen unidades de glucosa unidas por enlaces α-1. ya que el almidón consta de una mezcla de 75-80% de amilopectina y el recto de amilosa. Eds. Estas enzimas se encuentran en la saliva.Enzymes in Food Processing. 1964 MONTES. La función de estas enzimas se encuentra en la saliva. Beta-amilasas: convierten el almidón en glucosa.2. en hongos y bacterias. Enzimas con Aplicación Industrial. La acción de las amilasas sobre el almidón depende del origen del mismo. La función de estas enzimas es de romper las moléculas de almidón.2. L. lo que evita alteraciones de los componentes. se caracteriza por la facilidad de fragmentación de los almidones en dextrinas reductoras. las semillas y granos de muchas plantas. M y MAGANA. 26 TUCKER.La utilización de estas en la hidrolisis del almidón presenta una serie de ventajas.PDF. Barcelona. Las dos clases de amilasas más conocidas actualmente son: Alfa-amilasas: las cuales desdoblan el almidón en glucosa y maltosa. primero la 24 25 DE RAFOLS. W. las semillas y granos de muchas plantas. las células de la sangre. Las amilasas actúan muy lentamente sobre el almidón.

Universidad de Salamanca.licuefacción del almidón y segundo la sacarificación (conversión de la molécula de almidón en moléculas de glucosa). J. 2005 29 SATYANARAYANA. New Delhi. y WESTHOFF D. M. 2005. Microbiología de los alimentos.A 1993. In: Enzyme Technology. son las enzimas responsables de la degradación del almidón. 30 CARRERA. 1ª edición. de enlaces α 1-4 o α 1-6 glucosídicos (transglicosilación). que rompen enlaces α 1 -4 y enlaces α1-6 glucosídicos ordenadamente a partir de los extremos no reductores del sustrato28. España. Aplicaciones de las enzimas. Estas enzimas degradan amilopectina obteniéndose así polisacáridos de longitud lineal. Las amilasas se pueden dividir en tres grupos: α amilasas. T. Las enzimas hidrolizadas prefieren la hidrolisis acida. Se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza. poseen una estructura (β/α) o barril TIM conteniendo residuos 27 FRAZIER. Enzimas α – amilasas. Módulos de Biotecnología. C. CR. La familia de la α. C. las cuales rompen al azar enlaces α 1-4 glucosídicos presentes en la parte interior del sustrato o de la cadena de amilasa y amilopectina (endo amilasas).Añilases. RAO. Actúan sobre los residuos de glucosa externos de la amilasa y amilopectina produciendo solamente glucosa (glucoamilasa y glucosidasa) o maltosa y dextrinas y glucoamilasa que liberan unidades de glucosa a partir de los extremos no reductores del sustrato. a. EZHILVAN NAN. La isoamilasa hidroliza enlaces α 1-6 en la amilopectina y la pollulanasa tipo I hidroliza enlaces α 1-6 glucosídicos en pululan y amilopectina29. A. La licuefacción se realiza utilizando como catalizador las enzimas α -amilasas ó βamilasas. Soccol. Webb. W. Estas enzimas se caracterizan por actuar sobre los enlaces α glucosídicos e hidrolizan estos enlaces para producir mono u oligosacáridos α -anomericos (hidrolisis). Pandey. β amilasas o examilasas. Existen otras enzimas que degradan almidón tales como las desramificantes que hidrolizan enlaces α 1-6 glucosídicos. hidrolizan los enlaces glucosídicos α 1-4. estabilidad de los productos generados. Universidad del Cauca. Enzimas degradadoras de almidón (amilasas). India pp 189 – 220. Las enzimas que hidrolizan el almidón y las que lo modifican o enzimas transglicolisantes30. Acribia S. en los procesos de industria del almidón y de un número de ventajas tales como: especificidad de la reacción. Zaragoza.amilasas puede ser dividida en dos grupos. J. 431-438 28 ARTIME. bajo requerimientos de energía y eliminación de la etapa de neutralización. R. p. y la sacarificación se realiza utilizando como catalizador la glucoamilasa o la pollulanasa y también se puede utilizar mezclas de enzimas27. o una combinación de ambas actividades.). Enzimas industriales. Asiatech Publishers Inc. La roche (Eds. 23 .

The concept of the a-amylase family: structure Similarity and common catalytic mechanism. T. 1999. 2002. J.2. Bioeng. H. Una ruta bioquímica muy usada para la fermentación de la glucosa es la glucolisis. tiene lugar una rápida degradación de la amilasa para dar maltosa y maltotriosa. Inicialmente. La AMG es recomendada para la sacarificación del almidón y la producción de glucosa33. pp. de la fermentación es: Ahora bien la glucolisis se puede dividir en tres etapas principales.amilasas sobre la fracción de amilasa del almidón. 10 edición.AMG 300L. también denominada vía de Embdem-Meyerhof en atención a sus descubridores. 24 . Una fermentación es una reacción de oxidación-reducción interna equilibrada en la que algunos átomos de la fuente de energía (donador de electrones) se reducen mientras otros se oxidan34. La yuca en el tercer milenio. Editorial prentice hall. producida a partir de una cepa seleccionada de Aspergillus Níger. J.p87. CIAT. utilización y comercialización. 31 KURIKI. Facultad de Ciencias Agropecuarias Vol 3 No. 33 CARRERA. 34 BROCK y MADIGAN. B y Ceballos. El proceso. simplificado.11 Fermentación. La acción de la α. Biología de los Microorganismos. 32 LOPEZ. Semilla vegetativa de yuca. elimina gradualmente las unidades de glucosa de los extremos no reductores desacarificado. Ingrid. La enzima hidroliza los enlaces α 1-4 y α 1-6 del almidón licuado. Sistemas modernos de producción. se da en dos etapas. p. 2. En: Ospina. Biosci. más lenta ocurre hidrolisis de los oligosacáridos. Obtención de glucosa a partir de almidón de yuca Manihot sculenta. Jorge y MERA. IMANAKAT. formando glucosa y maltosa como productos finales. T. Enzimas β. procesamiento. Michael. La acción sobre la amilopectina produce glucosa. Cali. 114 p. y la energía se produce por fosforilación a nivel sustrato. La velocidad de hidrolisis depende del tipo de enlace y del rompimiento de la cadena. Colombia.1 Marzo 2005. 49-75. 557 – 565. En la segunda fase. 586 pp. cada una de las cuales comprende una serie de reacciones individuales catalizadas enzimáticamente. maltosa y una serie de dextrinas y oligosacáridos de cuatro o más residuos de glucosa todos con enlaces glucosídicos α 1-632.Amilasas. Es una Amiloglucosidasa de grado alimenticio. Durante la hidrolisis. 2004.del sitio catalítico y tienen cuatro regiones altamente conservadas en su secuencia primaria que contienen los aminoácidos que forman el sitio catalítico31.

La etapa 1 incluye una serie de reacciones preparatorias que no implican ni oxidación ni reducción y que no liberan energía, pero que conducen a la producción a partir de glucosa de dos moléculas del intermediario clave gliceraldehido-3-fosfato. En la etapa 2 ocurre un proceso redox, la energía se conserva en forma de ATP, y se forman dos moléculas de piruvato. En la etapa 3 tiene lugar una segunda reacción redox y se originan los productos de fermentación (etanol y CO2 o ácido láctico) Etapas I y II: reacciones preliminares y reacciones redox. En la etapa 1, la glucosa es fosforilada por el ATP dando lugar a glucosa-6-fosfato, que es convertida a continuación a una forma isomérica, la fructosa-6-fosfato, que mediante una segunda fosforilación se convierte en fructosa-1,6-difosfato, que es un metabolito intermediario clave de la glucolisis. Si se fermentan otros azucares distintos a la glucosa, se convierte antes a fructosa-1,6-difosfatopara poder ser utilizados por la ruta de Embdem-Meyerhof. La enzima aldolasa cataliza la rotura de la fructosa-1,6-difosfato en dos moléculas de tres átomos de carbono, el gliceraldehido-3-fosfato y su isómero dihidroxiacetona-fosfato. Existe una enzima que cataliza la interconversión de dihidroxiacetona-fosfato a gliceraldehido-3fosfato pero, para simplificar, se considera solo este último ya que es el que será metabolizado. En esta primera etapa no ha ocurrido ninguna reacción redox y que todas las reacciones, incluyendo las del consumo de ATP, tienen lugar sin transferencia de electrones. La primera reacción redox de la glucolisis tiene lugar en la etapa 2 durante la conversión del gliceraldehido-3-fosfato a acido 1,3-difosfoglicerico. En esta reacción (que ocurre dos veces, una por cada molécula de gliceraldehido-3fosfato), una enzima cuyo coenzima es NAD+ acepta 2 átomos de hidrogeno y el NAD+ se convierte en NADH; la enzima que cataliza esta transformación se llama gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa. Simultáneamente, cada molécula de gliceraldehido-3-fosfato es fosforilada por la acción de una molécula de fosfato inorgánico se convierte en orgánico, prepara el escenario para la conservación de la energía por fosforilación a nivel de sustrato; la formación de ATP es posible porque cada uno de los fosfatos de la molécula de ácido 1,3-difoglicerico y cuando más tarde se convierte en acido 1,3-fosfoglicerico y cuando más tarde en la vía, cada molécula fosfoenol piruvato se convierte en piruvato. En la glucolisis, se consumen dos moléculas de ATP en las dos fosforilaciones de la glucosa y se sintetizan cuatro moléculas de ATP (dos por cada molécula de ácido 1,3-difosfoglicerico convertida a piruvato). Por tanto, la ganancia neta del organismo es de dos moléculas de ATP por cada molécula de glucosa.

25

Etapa III Producción de productos de fermentación Durante la formación de dos moléculas de ácido 1-3, difosglicerico, se reducen dos moléculas de NAD+ a NADH. Sin embargo, las células contienen solo una pequeña cantidad de NAD+, y si todo se convirtiera en NADH se detendría la oxidación de la glucosa, la oxidación continuada del gliceraldehido-3-fosfato solo se puede proseguir si está presente una molécula de NAD+ para aceptar los electrones liberados. Este bloqueo se supera en la fermentación mediante la nueva oxidación de NADH a NAD+, a través de reacciones que suponen la reducción del piruvato a una extensa variedad de productos de fermentación. Se conocen muchas rutas para la oxidación del piruvato en procariotas fermentativos, pero el resultado final es el mismo; el NADH debe volver a la forma oxidada NAD+, a fin de que las reacciones que liberan energía en la fermentación puedan continuar. Como coenzima difusible, el NADH puede soltarse de la enzima gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa y unirse a una enzima que reduzca el piruvato de nuevo, haciendo que le ciclo de reconversión del NADH a NAD + y de NAD+ a NADH se repita otra vez. En cualquier proceso que produzca energía, la oxidación debe acompañarse de una reducción y debe haber un aceptor de electrones por cada electrón cedido. En este caso, la reducción del NAD+ en un paso enzimático de la glucolisis se equilibra con su oxidación en otro paso. Los productos finales deben estar también en equilibrio redox con el sustrato inicial, la glucosa. De aquí que los productos que aquí se generan, etanol más CO2 o lactato más protones, estén en equilibrio atómico y electrónico con la glucosa inicial35. En la figura 8 podemos ver una descripción del proceso de glucolisis.

35

BROCK y MADIGAN. Michael. Biología de los Microorganismos. 2004. Editorial prentice hall. 10 edición.120-123 p.

26

Figura

8.

Esquema

del

proceso

de

glucolisis.

Fuente: BROCK y MADIGAN. Michael. Biología de los Microorganismos. 2004. Editorial Prentice hall. 10edición.

27

butanol. en estos casos. Son moléculas de bajo peso molecular que se forman en la fase exponencial o tropofase e intervienen como productos finales o intermediarios. sin embargo. ácidos orgánicos. Que poseen importancia comercial se encuentran en la tabla 3. 2003. Microbiología industrial. Se debe observar que el concepto llega a excluir a los microorganismos del proceso. se pueden mencionar:    Células microbianas (biomasa) Metabolitos microbianos: metabolitos primarios y secundarias (enzimas. 36 HERNÁNDEZ. 37-39 28 . etc. Algunos ejemplos de éstos. Células Microbianas (biomasa). Editorial EUNED. la velocidad de obtención y los rendimientos del producto son menores. En general. Productos Finales de la fermentación Desde el punto de vista comercial se pueden clasificar tomando en cuenta los productos que se obtendrán entre ellos. La descomposición de los sustratos es llevada a cabo por enzimas producidas por microorganismos para tal finalidad. Alicia.Concepto Microbiológico de la fermentación Se entiende por fermentación aquel proceso en el que los microorganismos producen metabolitos o biomasa. y solo utilizan el sustrato para su crecimiento y hay poca producción de metabolitos36. Metabolitos primarios microbianos. se establecen divisiones con base en:   El tipo de producto final por obtener La presencia o ausencia de oxígeno en el proceso. etanol. a partir de la utilización de sustancias orgánicas en ausencia o presencia de oxígeno. Esto ocurre en el proceso de fermentación cuando hay un sobre crecimiento de células. siempre y cuando estén presentes sus enzimas. Edición 1 pág. Clasificación de los primeros procesos de fermentación La gran cantidad de procesos y productos que involucra el termino fermentación hace difícil no solo la definición del concepto si no también su clasificación. acetona. en las distintas rutas anabólicas y catabólicas del proceso.

en la tabla 4 podemos ver algunos de estos metabolitos. 39 Metabolitos Secundarios Microbianos. cítrico fumarico. Tabla 4. Edición. itaconico. pág. valina acetona. Acribia. testosterona acido ascórbico.3-butanodiol etanol. Alicia. Son moléculas orgánicas complejas que para su formación requieren un gran número de reacciones enzimáticas específicas. láctico Ácidos orgánicos Aminoácidos lisina. J. tetraciclina Antibióticos Esteroides cortisona. Biológicos. estreptomicina.M. levaduras. Metabolitos microbianos comerciales Metabolitos microbianos secundarios comercializados Metabolito Secundario Penicilina Cefalosporina Tretraciclina Estreptomicina Griseofulvina Actinomicina Pepstatina Ciclosporina A Krestina Betatina Gibberelina Utilidad Comercial Antibiotico Antibiotico Antibiotico Antibiotico Antibiotico (antifungico) Antitumoral Tratamientos antiulcerosos Inmunosupresor Tratamiento de cancer Tratamiento de cancer Regulador de crecimiento vegetal Fuente: WALKER. riboflavina Vitaminas Células de hongos. butanol. sustancias que no tienen un papel significativo en el metabolismo celular) y donde los metabolitos secundarios tienden a ser sintetizados de los productos intermedios y finales del metabolismo primario. insecticidas. metano. Pág. 2. SA. gluconico. hidrocortisona. Enzimas. cianocobalamina caroteno. Gingold. Biotecnología Molecular. Editorial EUNED. polisacáridos y saborizantes Otros Fuente: Hernández. metionina.Tabla 3. Compuestos producidos por el proceso de fermentación Algunos compuestos de interés comercial producidos por fermentación Tipo de Sustancia Productos acético. bacterias y algas Proteína Unicelular (biomasa) Alcaloides. 5-6 29 . 2003. Microbiología industrial. glicerol Alcoholes y Solventes bacitracina. triptófano. Edición 1. neomicina Penicilina. Estos se forman durante la ideofase (fase durante la cual un cultivo sintetiza productos distintos a los Metabolitos primarios.

M. ácido propionico. en el medio ambiente natural podrían ser implicados en procesos competitivos37. en realidad no constituyen productos intermediaros del catabolismo. como Saccharomyces cerevisiae. De acuerdo con esta división. ácido acético. Sin embargo. los productos finales son sustancias orgánicas. Edición 1. dióxido de carbono y agua. Oxígeno en el proceso de fermentación También es posible clasificar las fermentaciones con base en la presencia o ausencia de oxigeno molecular durante el proceso. los procesos se denominan: Fermentación aerobia. E. para suplir sus necesidades de energía. 2003.B. la producción de biomasa38. por consiguiente. habrá una mayor producción de etanol. . Fermentación anaerobia. el etanol y la acetona. Edición. Alicia. etanol. Sin embargo. En este tipo de fermentación el aceptor final de electrones es el oxígeno. se produce fundamentalmente biomasa. En los procesos anaerobios. S. se favorece la reproducción del microorganismo. butanol. En este tipo de procesos. según la concentración de oxígeno en el medio: si es muy limitada. elaboran más metabolitos. Pág.A. en la mayoría de las fermentaciones anaeróbicas se requiere un poco de oxígeno al principio del proceso para favorecer el crecimiento y la reproducción del microorganismo. 37 38 WALKERJ. Gingold. o sea. metabolizan una mayor cantidad de azucares. Biotecnología Molecular. Entonces. En este tipo de fermentación el proceso de producción de metabolito de interés se desarrolla en ausencia de oxigeno. 5-6 Hernández. los microorganismos producen mucho menos energía que en los aerobios y.A simple vista puede resultar extraño que los microorganismos elaboren compuestos que no parecen tener ninguna función metabólica y que. como por ejemplo. y acetona. 39 30 . a través de la cantidad de oxígeno. por ejemplo. ácido láctico. mientras que si es alta. es imprescindible su presencia para el desarrollo del microorganismo y la producción del compuesto deseado. Acribia. Editorial EUNED. se obtienen diferentes productos mayoritarios. se puede manipular un proceso de fermentación para incrementar la producción de la sustancia de interés: Cuando se trabaja con un microorganismo facultativo (capaz de crecer en presencia o ausencia de oxigeno). pág. muchos Metabolitos secundarios poseen propiedades anti-microbianas y por lo tanto. Microbiología industrial.

penicilina.Cultivo en lote Es un sistema cerrado. antiespumantes y bases o ácidos para el control de pH. y a diferencia del cultivo por lotes. y se extrae caldo de fermentación (medio de cultivo con microorganismos y metabolitos). Como resultado de la estabilidad. Alicia. estreptomicina. una población estable de microorganismos en condiciones uniformes. se debe alargar la fase logarítmica. durante el cual varia la composición del medio de cultivo. ácido láctico. la concentración de biomasa y la de metabolitos. a las mismas velocidades. glicógeno. 2003. celulasa y vitamina B1239. se interrumpe el proceso y se recupera el producto. 51-54 31 . los procesos fermentativos se pueden mantener por largos periodos. cloranfenicol. se buscan las condiciones de mayor producción de células. el volumen del cultivo. ácido gluconico. y las condiciones fisicoquímicas necesarias para el desarrollo del proceso. la cerveza y el etanol. se extiende la fase estacionaria y. es necesario conocer la curva de crecimiento del microorganismo: al saber el comportamiento de su crecimiento . Para realizar exitosamente una fermentación en lote. El estado estacionario se define como una condición de estabilidad. siempre y cuando el sistema se mantenga libre de contaminación. Para que el cultivo continuó sea efectivo es necesario que el proceso se encuentre en estado estacionario. butano. Así. para aumentarla cantidad de biomasa. Algunas sustancias obtenidas por fermentación continua son: acetona. una de las ventajas del sistema continuo es que se puede mantener estable la población en esta fase por periodos prolongados de tiempo. al respecto. Microbiología industrial. Editorial EUNED. El cultivo continuo se ha utilizado para fabricar una serie de productos. a una determinada velocidad. se adiciona constantemente medio de cultivo fresco a los microorganismos. también. entre ellos. ácido itacónico. pág. 39 Hernández. Proteína unicelular. la concentración celular y de metabolitos. porque. ácido cítrico. butanodiol. Después. en la que varios factores permanecen constantes a través del tiempo. se ha utilizado en el tratamiento de aguas residuales. si son metabolitos secundarios. ácido acético. glucosa-isomerasa. En muchas fermentaciones. solo se adiciona oxígeno. entre ellos. penicilinasa. La fermentación se lleva a cabo en un periodo definido de tiempo. etanol. se pueden manipular las condiciones de manera que se obtenga el producto deseado. el compuesto de interés se produce durante la fase exponencial. por ejemplo si lo que se requiere es la producción de metabolitos primarios . Edición 1. Cultivo continuo Se puede describir como un sistema abierto. después de iniciado el proceso (al mezclar los nutrimentos y el microorganismo). se logra mantener en el reactor.

ºBrix. Evaluación de las condiciones de la fermentación alcohólica utilizando Saccharomyces cerevisiae y jugo de caña de azúcar como sustrato para obtener etanol. Temperatura La temperatura ejerce un marcado efecto sobre la velocidad metabólica del organismo. pH. especialmente de las proteínas y de los componentes de la membrana. Es importante recordar que el pH es una función logarítmica.http://repositorio. El pH tiene un marcado efecto en la velocidad de crecimiento y en el rendimiento.0. ºBrix. El pH tiene una gran influencia en los productos finales del metabolismo anaerobio40. nutrientes y productividad entre otras. Las variables que se puede medir de manera continua son: temperatura.0 a 6.espe. pH La acidez o alcalinidad de una solución se expresa por su índice de pH en una escala de 0 a 14. Una de estas variables se mide de manera continua y otras intermitentemente. La temperatura tiene una influencia directa sobre la velocidad de reacción y esta puede cambiar la configuración de los constituyentes celulares. producto y consumo de sustrato. La temperatura optima de crecimiento de las levaduras especialmente de la Saccharomyces cerevisiae es de 30 a 35°C. Extraído del sitio web de la escuela politécnica del ejército ecuatoriano. pH. GALARZA.pdf 32 . Este último21puede afectar la floculación de la biomasa o la adhesión a las paredes. El pH óptimo para algunos organismos en especial para las levaduras se encuentra en un rango de 4.ec/bitstream/21000/990/1/T-ESPE-026782. 40 NIETO. Un cambio en el valor de pH puede afectar su composición o su naturaleza de la superficie microbiana al disociarse ácidos y bases. La temperatura afecta al organismo de manera notable ya que los organismos de una especie dada solo pueden crecer en un rango de temperatura y esto afecta de manera notable al organismo. nutrientes y las variables que se puede medir de manera intermitente son: biomasa. un cambio en una unidad de pH representa un cambio de diez veces en la concentración de iones hidrogeno. (2009). Una vez que el sustrato y el organismo han sido seleccionados es necesario darles las condiciones adecuadas de operación y optimización del sistema. Desde el punto de operación es importante decidir las siguientes variables: temperatura.Condiciones que deben medirse y controlarse en una fermentación discontinua.edu.

por lo que en un proceso fermentativo en base aeróbica se caracteriza por la producción de biomasa y en base anaeróbica generalmente por la producción de etanol. El tiempo de duplicación hace referencia al periodo de tiempo requerido para la duplicación del peso de la biomasa. o proteína) o numéricamente para los sistemas unicelulares (por número de células). Cuando el cultivo se produce en presencia de oxigeno molecular. mientras que el tiempo de generación se refiere al periodo necesario para duplicar el número de células.6 a20°C. cada ºBrix indica 1 gramo de sacarosa por cada 100 gr de líquido. pH y la aireación. DNA. La tabla 5 muestra el tamaño de las células de algunos microorganismos utilizados en procesos biotecnológicos. Principios del crecimiento microbiano. Saccharomyces cerevisiae es una levadura que posee alta actividad metabólica. la mayor parte del carbono se emplea como energía y solo el 2% se asimila como material celular. La cantidad de biomasa o de un componente celular específico en un biorreactor puede determinarse gravimétricamente (por peso seco. Conla escala a 20°C. El crecimiento de los microorganismos puede verse como el incremento de material celular expresado en términos de masa o número de células y procede de una serie de pasos biológicos coordinados y muy complicados catalizados enzimáticamente. 33 . Aireación La ausencia o abundancia de oxigeno permite una selección tanto de microorganismo como de productos metabólicos. Los tiempos de duplicación medios se incrementan con el aumento del tamaño celular. Normalmente las escalas ºBrix se calibran a 15. peso húmedo. la fermentación se denomina fermentación aeróbica y cuando se realiza en ausencia de oxigeno molecular se denomina anaeróbico.ºBrix El ºBrix o grados Balling es otra escala del hidrómetro utilizada en la industria azucarera. El crecimiento dependerá de la disponibilidad y transporte de nutrientes necesarios para la célula y su subsiguiente captación y del mantenimiento óptimo de los parámetros medioambientales tales como la temperatura. Si la fermentación es anaeróbico.

Algunas. Biotecnología. Levaduras Están agrupadas en unas 350 especies (clasificadas a su vez en 39 géneros). Edición 2. Editorial EUNED. Tamaño de células en procesos Biotecnológicos Tamaño aproximado de las células usadas en procesos biotecnológicos Tipo celular Tamaño (µm) Bacterias 1x2 Levaduras 7 x 10 Células de mamífero 40 x 40 Células Vegetales 100 x 100 Fuente: SMITH. Biotecnología. además de la forma unicelular o de levadura. 41 SMITH. Las levaduras son bastante heterogéneas en su morfología y fisiología. Editorial Acribia. más bien. John E. Ambas formas. se presenta en varios hongos patógenos. 2006. Figura 9. a medida que la concentración de este factor cae también lo hará el potencial de crecimiento del organismo41. 53 Un organismo raramente tendrá condiciones totalmente ideales para un crecimiento ilimitado. sin embargo.Tabla 5. en estos casos. La figura 9 ilustra las distintas formas de levadura que se pueden encontrar. 2006. pueden presentar micelio. el crecimiento dependerá de un factor limitante. por ejemplo un nutriente esencial. Fuente: GARCÍA CORTES. 2004. Pág. 53-54 34 . Edición 4. Esquema de distintas formas de levadura. Pág. la forma habitual en que se les encuentra es la unicelular. John E. dan simultáneamente en el medio donde se encuentra el microorganismo. 109 Es importante señalar que las condiciones ambientales influyen para que algunos hongos crezcan como filamentos o como levaduras. Vera. Edición 4. que se conoce como dimorfismo. Editorial Acribia. Introducción a la microbiología. lo que muestra que dentro de los hongos constituyen un pequeño grupo. Pág. Este fenómeno.

en el néctar de las flores y en ambientes acuático. Muchas pueden catabolizar la glucosa. como otros seres. El proceso típico es la disimilación anaerobia. minerales para su crecimiento. hierro. Introducción a la microbiología. cobre zinc. localizada en el suelo. Vera. Pág. en la superficie de las frutas. Se ha determinado que le potasio. muchas de ellas pueden crecer en medios con relativamente poca cantidad de agua como en soluciones con una 35 . Edición 2. 109 Requerimientos nutricionales Las levaduras son organismos heterótrofos. iodo y molibdeno. La mayor parte de las levaduras crece mejor en medios en los que está disponible una buena cantidad de agua.Las levaduras se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza. A continuación la figura 10 ilustra los componentes internos de la célula de la levadura Figura 10. manganeso. ya sea en forma aerobia (respiración) o anaeróbica (fermentación). Las levaduras requieren. el sodio y el calcio se incluyen dentro de los necesarios. Sin embargo. Fuente: GARCÍA CORTES. Los azucares constituyen el mejor alimento energético de las levaduras. En relación con los elementos traza. Sin embargo. requieren de carbono orgánico para la síntesis obtener la energía y el carbono para la síntesis de sus componentes celulares. el cual da como resultado etanol y dióxido de carbono. conocido comúnmente como fermentación alcohólica. el magnesio. se ha demostrado que para obtener un rendimiento óptimo en medios de cultivo sintéticos se requiere la presencia de boro. Editorial EUNED. por lo tanto. Diagrama de la estructura de una levadura. 2004. los requerimientos nutricionales específicos de las levaduras pueden variar entre las diferentes especies.

concentración elevada de solutos (sal o azúcar). Curva de crecimiento de un microorganismo Esta curva representa el comportamiento del crecimiento del microorganismo a través del tiempo. con base en ella. Existe un grupo que tolera cantidades de solutos mayores. Pág. pH En general se considera que las levaduras. Condiciones ambientales requeridas para el crecimiento.8 . tienen temperaturas optimas de crecimiento entre los 22 y los 30 °C. generalmente en un rango que va desde 0 a 50 °C. al igual que los mohos. por lo que se denominan osmófilas. Vera. 43 GARCÍA CORTES. 112 p. Editorial EUNED. Temperatura Existen levaduras que pueden crecer a muy diversas temperaturas. y las que pueden desarrollarse en medios aerobios como en anaerobios se denominan fermentativas. Oxigeno Las levaduras crecen bajo condiciones aerobias. Introducción a la microbiología. Edición 2. Sin embargo. Algunas son estrictamente aerobias y otras son facultativas. 42 Fuente: GARCÍA CORTES. la mayoría de las especies saprofitas. estas pueden tolerar un rango de pH que va desde 2 a 8.6). Editorial EUNED. los siropes y los concentrados de fruta43. La figura 11 ilustra el crecimiento de un microorganismo en el tiempo. Las facultativas crecen mejor en aereobiosis y bajo condiciones anaerobias lo hacen más lentamente. sin embargo. Las levaduras aerobias estrictas se conocen como oxidativas. Introducción a la microbiología. 2004. 112-114 36 .5. por lo que puede decirse que en general requieren para su crecimiento menos humedad que las bacterias 42. Edición 2. Estas tienen importancia en el deterioro de alimentos tales como la miel de abeja. se desarrollan mejor en medios ácidos (3. Vera. se determina cuando se produce la mayor cantidad de biomasa o metabólicos (primarios o secundarios). Concentración de solutos Generalmente pueden desarrollarse en medios con concentraciones altas de solutos. 2004.

37 .Curva de crecimiento de un microorganismo. En esta fase las células se multiplican a la máxima velocidad y su crecimiento puede ser cuantificado con base en el número de células que se producen por unidad de tiempo (para levaduras y bacterias) o por el aumento en la biomasa por unidad de tiempo (para hongos filamentosos). pues el microorganismo utiliza la energía disponible con el fin de sintetizar las enzimas que requiere para su desarrollo en el nuevo medio. Disponible en: http://www. Fase logarítmica o exponencial.html Fecha: 10/05/2012 Fase de latencia También conocida como fase lag. coincide con el periodo de adaptación del microorganismo a las nuevas condiciones nutricionales y ambientales.Figura 11. la fase lag es muy pequeña o puede no presentarse. Durante este periodo no existe aumento en el número de células. Se presenta inmediatamente después de la inoculación y su duración depende del estado fisiológico de la célula inoculada y de las condiciones ambientales. Si el microorganismo se encuentra en su fase logarítmica antes de la inoculación. La velocidad de crecimiento durante este periodo permanece constante y es independiente de la concentración del sustrato. siempre y cuando esta sustancia se encuentre en exceso.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/generalidades.unam.facmed.

El etanol está presente en diversas bebidas fermentadas. olor. da una mezcla azeotrópica. Otro método de purificación muy utilizado actualmente es la absorción física mediante tamices moleculares A escala de laboratorio también se pueden 44 HERNÁNDEZ. Edición 1. pág. de sustancias toxicas que impiden la multiplicación de las células. entre otras características. Su fórmula química es CH3 CH2 -OH y su fórmula molecular es C2H5OH. no es necesario (ni rentable) continuar el proceso cuando se alcanza la fase estacionaria. la producción de etanol disminuye. las condiciones ambientales indispensables para la célula se modifican o cuando la célula produce metabolitos tóxicos o que inhiben su reproducción.12 Etanol. como parte del metabolismo. De estas mezclas se destila a temperaturas más bajas el azeótropo. Al mezclarse con agua en cualquier proporción. Dependiendo del género de Bebida alcohólica que lo contenga. el alcohol aparece acompañado de distintos elementos químicos que lo dotan de color. la mayor acumulación de estas sustancias se presenta durante la fase estacionaria44. Desde la antigüedad se obtenía el etanol por fermentación anaeróbica de una disolución con contenido en azúcares con levadura y posterior destilación. sabor.La fase logarítmica termina cuando se produce alguna de estas tres situaciones: los nutrimentos se agotan. ya que una vez que se obtiene la máxima concentración de las células. El compuesto químico etanol es un alcohol que se presenta como un líquido incoloro e inflamable con un punto de ebullición de 78°C. Alicia. Fase de muerte Se inicia cuando los nutrimentos que están en el medio de cultico no son suficientes para que el microorganismo pueda reproducirse. Editorial EUNED. Microbiología industrial. Para obtener etanol libre de agua se aplica la destilación azeotrópica en una mezcla con benceno o ciclo hexano. Fase estacionaria La velocidad de crecimiento (reproducción) del microorganismo es igual a la velocidad de muerte y se llega a un equilibrio celular. Separación de la Mezcla Agua-Etanol (Destilación). mientras que el etanol se queda retenido. 2. La importancia de esta fase varía con el tipo de fermentación. 43-45 38 . Por el contrario en la producción de antibióticos. formado por el disolvente auxiliar con el agua.2. Otro de los motivos por los cuales empieza esta etapa es la producción. Si el objetivo final de la fermentación es la producción de etanol. 2003.

normalmente de alta graduación. alcoholes naturalizado (mezclado con sustancias amargas o toxicas que lo convierten en no apto para consumo en licores) y mezclas de solventes de marca registrada. finalmente. El gasohol posee un octanaje más alto que la gasolina normal y quema a menor temperatura. barbitúricos. 1990. desinhibición. 39 . en otra cierta cantidad de individuos se ve afectada la zona que controla los impulsos. etc. Muchas medicinas. productos alimenticios. mientras que los niños son especialmente vulnerables. pérdida temporal de la visión.Alcohol Industrial: Es alcohol etílico. volviéndose impulsivamente descontrolados y frenéticos. Alcohol Absoluto: Se usa como reactivo en laboratorio o en biomedicina. cremas . excepto bebidas.Según su pureza el etanol recibe distintas nominaciones:. por lo cual produce menores emisiones contaminantes tipo NOx. La ingesta en niños puede conducir a un retardo mental agravado o aun 45 E. En ciertos casos se produce un incremento en la irritabilidad del sujeto intoxicado como también en la agresividad. que reacciona con el agua formando hidrógeno y óxido de magnesio. conduce al coma y puede provocar la muerte. producido y vendido para cualquier uso. pegamentos. 215 p. México. Además de usarse como bebida alcohólica. Con concentraciones más altas impide la coordinación correcta de los miembros. Se utilizan para producir vacunas. tintes. el etanol se utiliza ampliamente en muchos sectores industriales y en el sector farmacéutico. somnolencia. jarabes. Tiempos históricos. plásticos y textiles. mareos. como combustible en motores de explosión y también en múltiples procesos industriales. de mayor peso y de menor altura. antisépticos. Se produce deshidratando alcohol puro de 96%. como principio activo de algunos medicamentos y cosméticos . Gasohol: Es un sustituto de la gasolina. tintas. detergentes. Se distribuye generalmente en forma de alcohol puro (96% en volumen). tiempos biológicos. El etanol puede afectar al sistema nervioso central.(la tierra o la muerte: los problemas de “la nueva ecología”. Aplicación. cosméticos. explosivos .utilizar disecantes como el magnesio. La resistencia al alcohol parece aumentar en las personas adultas. Toxicología. cloroformo. por medio de ácido sulfúrico concentrado. tónicos compuestos. condimentos y cosméticos no se podrían producir sin él. Se han comunicado casos de bebés que murieron por intoxicación debida a la inhalación de vapores de etanol tras haberles aplicado trapos impregnados de alcohol. hecho de una mezcla de gasolina y de 10% a 20% de etanol45. provocando estados de euforia. Tiezzi. confusión y alucinaciones. Fondo de cultura económica. cloruro de calcio anhidro o alúmina.

 Rectificación  Continua  Intermitente. lo que tiene como consecuencia la formación de un vapor de composición diferente a la del líquido del que procede. también llamada destilación súbita o destilación flash. Lógicamente. Evelin. el vapor generado y el líquido en ebullición están en equilibrio. La destilación simple se caracteriza porque no se establece ningún tipo de contacto entre el vapor generado por el líquido que hierve y un líquido cualquiera. de composición diferente a la del equilibrio. Destilación con enriquecimiento de vapor:  Repetida.  Destilación con arrastre de vapor. La separación se basa en la diferencia de volatilidades absolutas de los componentes. donde experimenta una expansión súbita que conduce a la 46 JIMENEZ.En el anexo se encuentra la ficha técnica del etanol o alcohol etílico 2. En la destilación simple cerrada o de equilibrio.2.13 DESTILACIÓN La destilación es una operación unitaria que consiste en la separación de los componentes de una mezcla líquida (en la que todos los compuestos son más o menos volátiles) por evaporación y condensación sucesivas.subdesarrollo físico y mental46. Para el cálculo de la composición del vapor que se desprende se supondrá que éste se encuentra en equilibrio con la fase líquida presente en cada instante. para la obtención de Grado el Título de ingeniero Químico. el producto a destilar se calienta y luego se descarga en un recipiente a presión muy reducida. Linda Luz y ACEVEDO. cuanto mayor sea la diferencia de volatilidades mayor será la separación que se puede conseguir.  Continua. Cartagena. es decir. MARBELLO. Sonia.  Cerrada o de equilibrio. Evaluación comparativa de la actividad fermentativa de Células libres e inmovilizadas de Saccharomyces cerevisiae Sobre cáscaras de naranja y gluten. 2008 40 .  Condensación parcial. Puede ser abierta o cerrada. Los distintos métodos empleados en la destilación se pueden clasificar del siguiente modo: Destilación simple:  Abierta  Intermitente o diferencial.

por tanto. En la destilación simple abierta se carga una caldera. donde se suministra el calor necesario para llevarla a su temperatura de burbuja. Estas condiciones pueden ser difíciles de conseguir en la práctica. que se mantiene mientras se va eliminando continuamente el vapor generado. consiguientemente. en este proceso tampoco podrá haber reflujo (el vapor se debe eliminar instantáneamente y separarse del líquido). en la destilación simple abierta diferencial. En ese instante comienza la ebullición. lo que se conoce como destilación fraccionada. en equilibrio. por tanto. La figura 12 muestra como se realiza el proceso de destilación y la figura 13 un montaje a nivel de laboratorio de un proceso de destilación simple. Destilación simple abierta diferencial La destilación simple abierta diferencial es una operación intermitente en la que la mezcla a destilar se carga en la caldera. El calor debe suministrarse en la caldera de modo que en todo instante el vapor generado esté en equilibrio con el líquido en la caldera. el calor latente de vaporización y el calor sensible del líquido. El destilado puede recogerse en distintos recipientes. Debe por tanto compensar las pérdidas. la composición del líquido cambia de forma continua y. 41 . el vapor (siempre en equilibrio con el líquido en la caldera) también cambiará continuamente su composición. Obsérvese que. vapor y líquido. Este vapor se condensa en el exterior dando lugar al producto destilado. Conforme transcurre el proceso se va modificando la composición del líquido. de forma intermitente o de forma continua. en consecuencia. Lógicamente.formación de las dos fases. la composición del líquido que hierve y la del destilado que se recoge (en fase vapor o en fase líquida. empobreciéndose en el componente más volátil. en función de su composición. Este tipo de destilación se usa frecuentemente en trabajos de laboratorio y en plantas piloto. El proceso se continúa hasta que se alcanza la separación deseada. el destilado que se va acumulando a la salida del condensador tendrá una composición que será el resultado de la acumulación de los sucesivos destilados de composición variable y. con lo cual va aumentando. mientras que en la destilación simple abierta continua y en la destilación simple cerrada. y el destilado se va recogiendo a la salida de un condensador. Lógicamente. ya que se eliminan preferentemente los componentes más volátiles. tras su condensación) permanecen constantes con el tiempo. también lo hace la del vapor. También se utiliza con fines analíticos en caracterización de fracciones de petróleo o distintos productos (por ejemplo en algunas normas ASTM para la determinación de intervalos de destilación). no estará en equilibrio con el líquido que va que dando en cada momento en la caldera. la temperatura de burbuja de la mezcla.

com/trabajos83/destilacionsimple/destilacionsimple. • A partir de septiembre 2005.monografias. generación de empleo. Diagrama de flujo proceso de destilación Figura 13.3 MARCO LEGAL A continuación se hace mención a la normativa en Colombia relacionadas con el alcohol como combustible.000 habitantes deben tener gasolina oxigenada.Figura 12. tendrán que contener compues tos Oxigenados tales como alcoholes carburantes. 42 . Equipo de destilación simple Fuente:http://www. Alcohol Carburante.shtml fecha:: 24/04/2011 2. • Se decreto que el uso del alcohol carburante recibirá un tratamiento especial en las Políticas sectoriales de autosuficiencia energética de producción agropecuaria y de Energética. Ley 693 de 2001 (Uso de alcoholes carburantes en Colombia) en donde se estableció lo siguiente: • Las gasolinas que se utilicen en el país. las ciudades de más de 500.

en este decreto se establecen estímulos para la implementación de zonas francas para de biocombustibles Tasa de proyectos agroindustriales en materia – renta diferencial y beneficios en materia de exenciones de aranceles en bienes de capital – proyectos con potencial exportador).secretariasenado.com 43 . con esta resolución Se definió la regulación técnica en 47 48 Disponible en: www. REGLAMENTACION TECNICA Resolución 18 0687 de 2003.26 dólares por galón). recientemente definido y un precio que reconoce los costos de oportunidad de las materias primas que se utilizan en la producción del alcohol (Paridad exportación del azúcar refinado).html Disponible en: Asociación colombiana de productores y proveedores de caña de azúcarprocaña. Vivienda y Desarrollo Territorial y Minas y Energía). modificada a través de la resolución 18 de Ministerio de Minas y Energía).gov. los artículos de mayor importancia en esta reforma fueron: • ARTÍCULO 31: Se declara exento del IVA al alcohol carburante con destino a la mezcla con el combustible motor. • ARTÍCULO 88: Se exoneró del pago del impuesto global y de la sobretasa al porcentaje de alcohol carburante que se mezcle con la gasolina motor. • Subsidios por us$80 millones para los productores47. CALIDAD DEL COMBUSTIBLE (Resolución 447 de 2003).co/senado/basedoc/ley/2001/ley_0693_2001. modificada por la resolución 1565 de 2004 (Ministerios del Ambiente. DECRETO ZONAS FRANCAS (Decreto 383 de 2007).594 pesos por galón para el Alcohol Carburante (que es equivalente aproximadamente a US$2. Se definió una banda de precios que toma el mayor valor entre un precio de estabilidad de $4. se establecen los requisitos técnicos y ambientales de los alcoholes carburantes y los combustibles oxigenados que se vienen distribuyendo en el país desde el año 2005 PRECIOS Resolución 18 0222 de 2006 (Ministerio de Minas y Energía). Actualmente se viene ajustando el precio gradualmente con el fin de alcanzar el precio piso48.ESTÍMULOS TRIBUTARIOS Ley 788 de 2002 (Reforma Tributaria) en donde se dan incentivos tributarios a la producción de alcohol carburante.

Con su acción. domésticos o agrícolas BIOMASA: se define como la energía solar convertida en materia orgánica por la vegetación. que incluyen el petróleo. acopio. comerciales. proporcionan la mayor parte de la energía que mueven a la sociedad moderna. una reacción exotérmica entre una sustancia (combustible) y un gas (oxidante). COMBUSTION: es un proceso químico. generalmente O2 para lanzar calor. los combustibles fósiles. BIOCOMBUSTIBLE: cualquier combustible sólido. el carbón y el gas natural. CARBOHIDRATOS: son los compuestos orgánicos más abundantes de la biosfera y a su vez los más diversos normalmente se los encuentra en las partes estructurales de los vegetales y también en los tejidos animales. ENZIMA: es un biocatalizador de naturaleza proteica cualquiera de las numerosas sustancias orgánicas especializadas compuesto por polímeros de aminoácidos. DESTILACION: método de separación de mezclas que se basa en el aprovechamiento de las diferencias de composición de las mezclas liquidas y de vapor originadas por la vaporización parcial de una mezcla liquida o por la condensación parcial de una mezcla vapor. que se recupera como combustión directa. regulan la velocidad de muchas reacciones químicas. o transformando la materia orgánica en otros combustibles.relación con la producción. Se produce directamente a partir de plantas o indirectamente de desechos industriales. liquido o gaseoso producido a partir de materia orgánica. COMBUSTIBLES FOSILES: sustancias ricas en energía que se han formado a partir de plantas y microorganismo enterrados durante mucho tiempo. AZÙCAR: termino aplicado a cualquier compuesto químico del grupo de los hidratos de carbono. que actúan como catalizadores en el metabolismo de los seres vivos. como glucosa o glucógeno. distribución y puntos de mezcla de los alcoholes carburantes y su uso en los combustibles nacionales e importados 2. 44 . ALCOHOL CARBURANTE: es un compuesto inflamable que no tiene color y tiene olor característico de los alcoholes.4 MARCO CONCEPTUAL ALCOHOL ANHIDRO: es un alcohol que se ha sometido a un proceso de deshidratación para eliminar el agua contenido en él.

y la molécula AB se descompone en A+ y B-. la molécula de agua se descompone n los fragmentos H+ y OH-.FERMENTACION: cambios químicos en las sustancias orgánicas por la acción de las enzimas. pH: es el logaritmo negativo de la concentración de los iones de hidrogeno. Se produce la hidrólisis de numerosos glucósidos naturales. con una molécula de una sustancia A-B en la que A y B representan átomos o grupos de átomos. Luego estos fragmentos se unen proporcionando los productos finales AOH y BH. 45 . En la reacción. HIDRÓLISIS: tipo de reacción química en que una molécula de agua reacciona. Es una escala numérica utilizada para medir la acidez y basicidad de una sustancia. GLUCOSA: azúcar monosacáridos de formula C6H12O6 se encuentra en la miel y en el jugo de numerosas frutas.

Donde la clave del positivismo lógico consiste en contrastar hipótesis probabilísticamente y en caso de ser aceptadas y demostradas en circunstancias distintas. refractómetro y Dicromato de potasio) para determinar el comportamiento de las variables (azucares reductores. se realizaran cálculos para determinar la cantidad de azucares que se obtenga de la hidrolisis. se refiere a un estudio de investigación en el que se manipulan deliberadamente una o más variables independientes (supuestas causas) para analizar las consecuencias de esa manipulación sobre una o más variables dependientes (supuestos efectos). su interés se centra en explicar por qué ocurre un fenómeno y en qué condiciones se da éste. La estadística dispone de instrumentos cuantitativos para contrastar estas hipótesis. están dirigidos a responder a las causas de los eventos físicos o sociales. en los proceso de hidrolisis y fermentación. El tipo de diseño que se adopta es el experimental ya que se manipularon las variables independiente como son: la concentración de reactivos y complejos enzimáticos así como los complejos de la levadura manteniendo fijos los valores óptimos de temperatura y pH. De acuerdo a Roberto Hernández Sampierí el tipo de investigación experimental se define como un“estudio explicativo” porque muchas veces los resultados experimentales no explican lo que en cierto fenómeno ha ocurrido. a partir de ellas elaborar teorías generales. Los fundamentos de la metodología cuantitativa se pueden encontrar en el positivismo. concentración de células.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN El tipo de estudio que se desarrolla es explicativo porque se tomaron 81 muestras. o por qué dos o más variables están relacionadas. Además se observó la relación de ciertas variables que afectan el rendimiento del proceso que explicaran los resultados. Según Roberto Hernández el término experimento que va más de acuerdo con un sentido científico del término. Este tipo de investigación va más allá de la descripción de conceptos o fenómenos o del relacionamiento entre conceptos. Luego se observó cómo se ven afectadas las variables independientes en el proceso. y para la etapa de fermentación se efectuaron 56 muestras. esta investigación cumple con todos los requisitos descritos. Como su nombre lo indica. debido a que eran 3 variedades de ñame con 3 concentraciones y se midieron a 9 tiempos diferentes en la etapa de hidrolisis. además se efectuaron pruebas (DNS. ºBrix y concentración de alcohol) que rigen el proceso. dentro de una situación de control para el investigador” El tipo de enfoque es cuantitativo de acuerdo a la teoría referenciada.3 DISEÑO METODOLÓGICO 3. se medirán concentraciones de sustratos y cantidades de aguas específicas. cámara Neuvauer. con el fin de garantizar la acción efectiva de estos complejos. Por tanto el método 46 .

medir con precisión las variables del estudio49. El enfoque cuantitativo pretende acotar la información. 49 FERNADEZ. Una vez planteado el problema de estudio delimitado y concreto Sobre la base de la revisión de la literatura construye un marco teórico. i) Con los estudios cuantitativos se pretende explicar y predecir los fenómenos investigados. buscando regularidades y relaciones causales entre elementos. tras una observación. El enfoque cuantitativo se caracteriza por los siguientes pasos que emplea el investigador:   Plantea un problema de estudio delimitado y concreto. g) Los estudios cuantitativos siguen un patrón predecible y estructurando (el proceso). h) En una investigación cuantitativa se pretende explicar y predecir los fenómenos investigados. d) En el proceso se busca el máximo control para lograr que otras explicaciones posibles distintas a la propuesta del estudio (hipótesis) sean desechadas y se excluya la incertidumbre y minimice el error. c) Debido a que los datos son productos de mediciones. Para obtener tales resultados el investigador recolecta datos numéricos de los objetos fenómenos o participantes. En general los métodos cuantitativos son muy potentes en términos de validez externa. genera una hipótesis que contrasta y emite posteriormente unas conclusiones derivadas de dicho contraste de hipótesis. b) La recolección de los datos se fundamenta en la medición. 47 . De esta teoría deriva hipótesis. La Coruña (España). S. 2002. sino que permite cuantificar la relevancia clínica de un fenómeno midiendo la reducción relativa del riesgo. Pita y PÉRTEGAS Díaz. Investigación cuantitativa y cualitativa.científico. se representan mediante números (cantidades) y se deben analizar a través de métodos estadísticos.  Somete a prueba las hipótesis mediante el empleo de los diseños de investigación apropiados. Unidad de epidemiologia Clínica y Bioestadística. a) Las hipótesis se generan antes de recolectar y analizar los datos. La investigación cuantitativa con los test de hipótesis no sólo permite eliminar el papel delazar para descartar o rechazar una hipótesis. e) Los análisis se interpretan a la luz de las prodiciones iníciales (hipótesis) y de estudios previos (teoría) f) La investigación cuantitativa debe ser lo más objetiva posibles.

para ello se seleccionaron las muestras siguiendo determinados criterios procurando que ésta sea representativa. la hidrólisis enzimática y la fermentación. teniendo en cuenta que no tuvieran ningún tipo de problema de descomposición. 3.j) Los datos generados poseen los estándares de validez y confiabilidad. Roberto Metodología de la investigación Editorial MC. l) La búsqueda cuantitativa ocurre en la realidad externa del individuo 50. con el fin de eliminar la babosidad del ñame o el residuo mucilaginoso del tubérculo. Graw-Hill México 2006 48 .1 Obtención de la harina de ñame Para la obtención de la harina de ñame se pesaron 1. En este caso las concentraciones en cada punto del Erlenmeyer varía. ñame diamante y ñame baboso) que se comercializa en el mercado Bazurto de Cartagena. las conclusiones derivadas contribuirán a la generación de conocimiento. debido a que no todos los sujetos de la población tienen la misma probabilidad de ser elegidos. fueron 3 kg del ñame fresco de cada una de las 3 variedades (ñame espino. 3. 3. se procedió al proceso de tamizado para obtener las partículas más 50 Hernández Sampierí.3 METODOLOGÍA UTILIZADA EN EL PROYECTO La investigación de la obtención de etanol a partir de 3 variedades de ñames se dividió en tres etapas: obtención de la harina de ñame. que comienza con la teoría y de esta se deriva expresiones lógicas denominadas hipótesis que el investigador busca someter a prueba. por lo cual. a continuación se describirá la metodología llevada a cabo en estas tres etapas. La caracterización de las muestra se determinó mediante un muestreo no probabilístico. a continuación se procedió a lavarlos con una solución de amoniaco 0. k) Este enfoque utiliza la lógica o razonamiento deductivo. por lo tanto no garantizan la representativa de la muestra y así no permiten realizar estimaciones inferenciales sobre la población. luego se cortaron en trozos pequeños para poder rallarlo con más facilidad y así lograr un completo secado.3. Las muestras tomadas en la etapa de fermentación fueron de 5ml en cada uno de los biorreactores por cada tipejo.3 kg por cada variedad. y para la extracción del almidón solo se utilizo1. luego de secado fue molido. al tomar la muestra no se garantiza que ésta tenga un valor promedio o real.2 POBLACIÓN Y MUESTRA La población tenida en cuenta para la producción de etanol a nivel de laboratorio.34 kg de cada una de las variedades y se procedió a ser pelados.1M.

34 D. Trifida 1.25 A continuación en la figura 14 se ilustra la metodología utilizada en la obtención de la harina de ñame.finas. Cantidad de ñame utilizada en el proceso Peso del ñame (kg) Peso sin cascara 1. En la tabla 6 se ilustra la cantidad de ñame utilizada.29 0. Figura 14.Alata 1.34 D. Proceso de extracción de harina de ñame Fuente: los autores del proyecto. Tabla 6.25 0. y finalmente fue empacado en bolsas ziploc.09 1.34 Fuente: los autores del proyecto Peso de la cascara 0. con el peso antes y después del proceso de pelado. 49 .05 1. Rotundata 1.09 Variedades Peso con cascara D.

Durante el tiempo de residencia de la enzima se realizaron mediciones. de los ºBrix. mediante la técnica del ácido 3.25. de acuerdo a estos lineamientos en esta investigación se evaluaron los sustratos a 10.5. Al momento de realizar la lectura de azucares reductores fue necesario diluir las muestras en 100 ml para que el espectrofotómetro pudiera captar un valor de absorbancia visible. La cantidad de harina de ñame con la cual se trabajó fue de 68. 13.5. en la tabla 7 se observa las condiciones utilizadas de la enzima alfa amilasa en la etapa de hidrólisis. En el anexo E se observa la técnica de DNS. Este proceso de hidrolisis de la harina de ñame se realizó en dos etapas: Licuefacción y sacarificación. en total fueron 9 Biorreactores.5 con una solución de HCl 0. 50 . 87. Rotundata (diamante. Licuefacción.5 gramos para un volumen de agua de 650ml. Alata. 3 por cada variedad de ñame D. mediante el Refractómetro (modelo VBR90A) y azucares reductores.5 y 15%m/v.5%. Para esta primera etapa se utilizó la enzima Alfa amilasa suministrada por la empresa Procesos y Fermentación S.5 Dinitrosalicilico (DNS). En el proceso de hidrolisis las soluciones preparadas se montaron en frascos de 750 ml con un volumen de reacción de 650 ml.A (Cartagena) en las cantidades y en las condiciones óptimas estipuladas en la ficha técnica del fabricante de acuerdo a su actividad enzimática. Ya con las soluciones preparadas se les midió el pH y se ajustó a 6. 13. D. baboso y espino respectivamente) con sus respectivas concentraciones 10.3. Trífida y D.5% y 15% m/v.5 y 97. esto se realizó por cada especie de ñame. junto con la curva de calibración empleada en la lectura de azucares reductores. 13.3.1N. luego se colocaron en horno con control de temperatura entre 90 – 95 ºC con un tiempo de residencia de 24 horas. que corresponde a las concentraciones de 10.2 Hidrólisis enzimática Basado en investigaciones anteriores citadas en el capítulo 2 de acuerdo al contenido de humedad los mejores rendimientos de etanol se han obtenido en el rango de concentraciones entre 10 y 16% en peso seco de la harina de ñame.5 y 15%m/v respectivamente.

072 0.072 0.4 3. Trífida AMG Temperatura ºC 55 55 55 pH 4.3 3.042 0.5 4.042 0.5% 15% 2. Alata Amilasa D. Condiciones de la enzima α Amilasa Cantidad de enzima por concentración (ml) 10.1N y se debió ajustar la temperatura a 55º.5% 15% 0.02 2.4 2. durante este tiempo se efectuaron mediciones de grados Brix. Para la etapa de sacarificación fue necesario ajustar el pH a 4. esta fue suministrada por la empresa Nutrianálisis (Bogotá) en las cantidades y en las condiciones óptimas estipuladas en la ficha técnica del fabricante de acuerdo a su actividad enzimática para este proceso.5 dinitrosalicilico (DNS).5% 13.5 4. Para esta etapa se agregó la enzima Amiloglucosidasa (AMG 300 L) para la obtención de glucosa en mayor proporción mediante la sacarificación.5 Fuente: los autores del proyecto 51 . Rotundata AMG D.5 6.02 4.072 Enzima Alfa D.4 3. Trífida Amilasa Variedad Temperatura 90 – 95 90 – 95 90 – 95 pH 6.02 Variedad Enzima D.054 0.5 con una solución de HCl 0.5 6.054 0. Tabla 8.3 4. Condiciones de la enzima AMG (Amiloglucosidasa) Cantidad de enzima por concentración (ml) 10.042 0. ir al anexo B. en la tabla 8 se ilustra las condiciones a las que se utilizo la enzima Amiloglucosidasa en la etapa de sacarificación.5% 13. y también se efectuaron mediciones de azucares reductores a partir de la técnica del ácido 3. Alfa Rotundata Amilasa Alfa D.5 Fuente: los autores del proyecto Sacarificación. Durante este proceso el tiempo de residencia de la enzima fue de 4 horas donde los azucares reductores se tornaron constante. Alata AMG D.3 4.054 0.Tabla 7.

para la obtención del caldo glucosado que posteriormente sería fermentado. Rotunda y D. Trífida) Acción Enzimática Licuefacción: Alfa amilasa Sacarificación: AMG 300 3 Biorreactores controlando Temperatura a 90 0C. 52 . Figura 15.En la figura 15 se presenta el resumen general del proceso de hidrólisis enzimática. pH de 6.3 Fermentación Culminando el proceso de hidrólisis se procedió a filtrar cada uno de las biorreactores.5 muestreo durante 24horas.5 muestreo durante 4horas. en la figura 16 se observa los biorreactores después de esterilizados. Esquema general del proceso de hidrólisis (D. DNS y 0 Brix 3 Biorreactores controlando Temperatura a 55 0 C. D. para que no se contaminaran con algún microorganismo hasta ser usados.3. pH de 4. DNS y 0 Brix Fuente: los autores del proyecto 3. el volumen final de este caldo fue de 350 ml por cada uno de los 9 frascos. A continuación los frascos se llevaron al proceso de esterilizado por 2 horas y posteriormente se sellaron lo más hermético posible. Alata.

2g/l)MgSO4 . 7H2O Los fermentadores se sellaron con tapones elaborados con gasa y algodón. los tapones fueron 53 . se adaptaron cánulas estériles las cuales permitirían la toma de las muestras y no hubiese contacto con el medio y este fuera contaminado. se procedió a la adición de levadura activa seca se humedeció en cada uno de los 9 fermentadores de 750 ml. Condiciones en el proceso de la fermentación Variables Volumen del Rx pH Temperatura Cantidad de levadura Nutrientes para el crecimiento Fuente: los autores Cantidad/unidad 350 ml 4.06 26°C 1g (0.25g/l) y (0. periodo que alcanza los 20min hasta notar un aumento del volumen tres veces mayor al inicial esta etapa se le denomina etapa de inoculación en donde se desea conseguir que el microorganismo reconozca el sustrato y se adapte más fácil al medio y así estimular su crecimiento. agitándose hasta disolución completa para estimular su crecimiento.Figura 16.5g/l). Tabla 9.5g/l) (NH4)2SO4 (0.5.66 .2 g/l) MgSO4. se utilizó 1 g de levadura y se le proporcionaron los nutrientes característicos para su crecimiento ((NH4)2SO4 (0. KH2PO4 (0. En la tabla 9 se muestran las condiciones utilizadas en la fermentación. Hidrolizados Esterilizados Fuente: autores del proyecto Teniendo en cuenta que la investigación era a escala de laboratorio y que el volumen del medio final fue de 350 ml se procedió a utilizar las relaciones correspondientes para este volumen. 7 H2O. el tiempo de fermentación fue de 52 horas.25 g/l) KH2PO4 (0.

la concentración de etanol y el crecimiento microbiano. Fermentadores usados Fuente: los autores del proyecto El proceso fermentativo se llevó a cabo durante 52 horas. para la medición de los ºBrix se utilizó el Refractómetro (Modelo VBR90A). aunque la gran mayoría de las investigación de fermentaciones de tubérculos este tiempo no sobrepasa las 50 horas. los ºBrix.asegurados con cinta de enmascarar para lograr el mayor hermetismo posible. y para el crecimiento microbiano se realizó por conteo directo en la cámara de Neuvauer. durante el proceso fermentativo se tomaron 3 muestras diarias. 54 . además para la medición de la concentración de etanol se aplicó el método de dicromato de Potasio mediante espectrofotometría (Spectronic 20D+ Instruments). La toma de muestras en esta etapa se midieron tres veces por día de cada uno de los fermentadores y los análisis que realizaron fueron: lecturas de pH en donde se utilizó un peachimetro digital. Figura 17. este tiempo fue un valor tomado de distintas referencias citadas en el capítulo 2 (Marco de referencia) donde aconsejan que este sea entre 2 y 3 días. En la figura 17 se ilustran los fermentadores sellados y hermetizados. con el fin de conocer y evaluar el comportamiento de las variables en esta etapa. En la figura 18 se ilustra en donde se conservaban las muestras para su posterior análisis. se le aplico también la técnica de DNS para conocer la concentración de azucares reductores presentes en la fermentación. se evaluaron los valores de pH.

Figura 19. En la figura 19 se ilustra la toma de la lectura de pH.06. Se notó durante todo el proceso para las 3 especies q hubo variaciones de pH debido a que en la fermentación hay formación de ácido láctico pero en este caso prevaleció la formación de etanol. Toma de muestras Fuente: los autores del proyecto Lecturas de pH En la etapa de inoculación se hizo el ajuste respectivo de pH en cada uno de los medios para el buen funcionamiento de la levadura y estuvo en un rango de 4. Las lecturas se efectuaron mediante la utilización de un pH metro digital y estas se realizaron 3 veces por día.Figura 18. Lecturas de pH Fuente: los autores del proyecto 55 .66 a 5.

Las fuentes primarias que se utilizaron para la realización de la investigación se obtuvo a partir de los diferentes experimentos y pruebas a realizar en el laboratorio. También se utilizó las asesorías y consultorías con docentes especialistas en el tema de investigación. Otra fuente de información que ayudarán al desarrollo de la investigación está relacionada en su mayoría por el internet. revistas. etc.3. así como tesis.4 RECOLECCION DE LA INFORMACIÓN 3. Figura 20. En la figura 20 se ilustra el montaje del equipo de destilación.3. como la técnica de DNS que permitió conocer la cantidad de azucares presentes durante la etapa de hidrolisis y fermentación. Fuentes: autores del proyecto 3. también el método colorimétrico para cuantificar el etanol (Dicromato de potasio). 3. que aportaron información de gran importancia para elaborar y ejecutar el proyecto de forma adecuada. prensa. Montaje del equipo de Destilación. en donde con el análisis de los resultados pudo establecer que tan viable es el proyecto. libros. donde se ha obtenido la mayor parte de la información. 56 . para esto se realizó el montaje del equipo de destilación en el laboratorio de ingeniería de la Universidad de San Buenaventura.4.1 Fuentes primarias. Se utilizaron recursos bibliográficos. manuales.2 Fuentes secundarias.4 Destilación El liquido fermentado se procedió a filtrar mediante papel filtro para eliminar los sólidos presentes (biomasa) y el liquido final se procedió ha realizar la separación del producto de nuestro interés (etanol) mediante el proceso de destilación.4. artículos especializados. el alcohol separado se procedió a envasar en frascos con sus respectivas etiquetas con la variedad y su respectiva concentración.

5. Lista de materias primas y reactivos MATERIAS PRIMAS Y REACTIVOS harina de ñame α Amilasa Amiloglucosidasa Saccharomyces cereviciae Acido Sulfúrico Depurado Yoduro de Potasio Sodio Sulfito Anhidro Tiosulfato de Sodio Pentahidratado Fenol o acido Fenico Hidróxido de Sodio Dicromato de Potasio Glucosa Anhidra Acido 3.5 INSTRUMENTOS 3.3. Tabla 11.2 Materias primas y reactivos Los reactivos utilizados en el proyecto se muestran a continuación en la tabla 11.5. Tabla 10.5. Equipos e instrumentos de laboratorio EQUIPOS espectrofotómetro Refractómetro Densímetro Medidor de Ph Balanza Analítica Secador de Bandejas Refrigerador Equipo de filtración al vacio Incubador Equipo de Destilación Simple INSTRUMENTOS Beaker Espátula Vidrio de Reloj Policía Mortero Erlenmeyer mechero Molino Rallador Matraz de 500 y 1000 ml Peras de Succión 3.1 Instrumentos y equipos Se utilizaron una gran cantidad de equipos e instrumentos durante la investigación la tabla 10 muestra cada uno de estos elementos.Dinitrosalicilico Fuente: los autores del proyecto 57 .

7. 3.7 VARIABLES 3.2 Variables dependientes Concentración de etanol Concentración de Azucares reductores Grados ºBrix Concentración de microorganismos Rendimiento 58 . humedad. 3. pH. temperatura) será posible obtener etanol con 10% v/v.6 HIPÓTESIS 3.1 variables independientes Concentración de levadura /sustrato Concentración de almidón de ñame en la solución Concentración de enzima / sustrato Temperatura pH 3.1 Hipótesis nula Estableciendo los parámetros fisicoquímicos y biológicos (concentración glucosa. temperatura) será posible obtener etanol con una %v/v diferente al 10%v/v.7. humedad.2 Hipótesis alternativa Estableciendo los parámetros fisicoquímicos y biológicos (concentración glucosa.6. pH.3.6.

monografías). Se describieron cada uno de los cambios observados durante el proceso. los datos obtenidos de las experiencias en el laboratorio y el estudio de las condiciones técnicas para el desarrollo del proceso.3. 59 . ºBrix análisis colorimétrico con Dicromato de potasio). mostraron que tan viable puede ser el proyecto. Operacionalización de las variables Variable Variable independiente Concentración de harina de ñame en la solución Concentración de enzima Concentración de levadura sustrato Temperatura pH Variable dependiente Concentración de etanol Rendimiento de etanol Concentración de microorganismo Concentración de azucares reductores Grados ºBrix Fuente: autores del proyecto Dimensión Física Física Física Física Química Indicador g/l L g C pH 0 Física Física Física Física Física g/L l/kg UFC/ml g/L 3. Esta información se organizó en tablas. las cuales son claves en la síntesis del producto deseado. El análisis de las variables. Tabla 12. revistas. se analizó la información recolectada (internet.9 PROCESAMIENTO DE LA INFORMACIÓN Para la realización del proyecto de grado. cuadros y graficas en Excel. Se analizaron las variables antes mencionas.8 OPERACIONALIZACION DE VARIABLES La Tabla 12 muestra la operacionalización de todas las variables que se tomaron para la investigación. además de las recomendaciones que se ofrecerán para el mejoramiento del mismo. en conjunto con los resultados que se obtuvieron en experimentos y pruebas en el laboratorio (DNS o azucares reductores.

68g/L 60 . En esta variedad las concentraciones de azucares con la adición de la enzima AMG 300L varían desde 35. dando una aumento en la concentración de azucares de manera transcendental y vertiginoso en todas las variedades. Con la adición de la enzima alfa amilasa se refleja su gran importancia en la primera etapa de la hidrolisis (licuefacción) por como aumenta la velocidad y alteración química de la composición química del almidón de ñame.1 Comportamiento de Dioscorea Alata en la hidrólisis enzimática.5% la conversión de almidón en ART a lo largo de todo el proceso fue normal. En la concentración de 10.32g/L y 61. En la gráfica 1 se observa el comportamiento de ART de la variedad de ñame Dioscorea Alata.57g/L que indica que hubo problemas de experimentación a la hora de la preparación de la solución. inicialmente había una concentración de 4.32g/L. con este análisis se observa que la mayor concentración para esta variedad lo presento la concentración de 13. existían partículas más grandes y no se tuvo en cuenta y esto dificulto la degradación de la enzima a lo largo de la etapa de la licuefacción.12g/L. afectando la conversión de almidón en azucares reductores. pero a partir de la 10 horas se empezó a regular y a las 24 horas posee una concentración de ART similar al de la concentración de 15%m/v.02g/L a 57.5% con un valor de 69.12g/L para la concentración de 10.5%.4 RESULTADOS 4. haciendo referencia de la concentración de azucares reductores finalizando así esta primera etapa y dando así paso a la ejecución de la etapa de sacarificación.5%m/v los valores oscilan entre 53. la concentración de 13.68g/L y para la concentración de 15%m/v los valores oscilaron entre 47. en la concentración de 13.5% m/v inicio con los valores más altos de ART y se observa un aumento en la concentración de forma abrupta. finalizando así la etapa de hidrolisis. en donde se adiciono la enzima AMG 300L que cobra un papel definitivo en este proceso.82g/L a 69. en donde se refleja cómo estos van en aumento a medida que se adicionan las enzimas y transcurre el tiempo.32 g/L. presentando como valor final de 57. Al examinar los resultados de esta variedad se observa que la concentración de 15%m/v presento los valores más bajos de concentración de azucares al iniciar la hidrolisis enzimática con un valor de 1.

00 [ART] g/L 40. aunque al iniciar el proceso no hay diferencias significativas en la cantidad de sólidos solubles en el jugo glucosado aun así la de mayor ºBrix al iniciar el proceso la tiene la concentración de 13. Alata 15% -20. 61 .00 -10.5% y 15%) usadas. Alata 13.00 0 5 10 15 20 25 30 hidrólisis α Amilasa D.00 HORAS Fuente: autores del proyecto En la gráfica 2 se presenta el comportamiento de los 0Brix de las tres concentraciones (10.5% D.00 30.00 60.00 20.00 50. en donde se refleja una notable diferencia en los valores máximos debido a la acción de la enzima en cada una de las concentraciones.5%m/v que coincide con la de mayor concentración de ART al iniciar.00 70. 13.5% AMG D.Gráfica 1.00 0. Comportamiento de azucares reductores en la enzimática de D.5%. Alata 10.00 10. Alata 80.

y en la concentración de 10. Alata 15% Fuente: autores del proyecto En el anexo C se encuentran los datos correspondientes a la concentración de azucares reductores y de grados Brix. aun así la concentración de 13.00 7. Se observa que menor concentración de ART la posee la concentración de 15%m/v se puede deber al aglutinamiento de las partículas de almidón y fue más difícil evidenciar la presencia de ART al inicio de esta etapa.5% y 15%). Comportamiento ºBrix en la hidrolisis enzimática de D.00 0 5 10 15 HORAS 20 25 30 D. aunque el máximo valor lo presento la concentración de 11.5%m/v presento los valores más altos de ART comparada con las otras 2 concentraciones. A pesar de que hubo un aumento progresivo en las 3 concentraciones.00 5.00 2. Alata 12.00 4. La gráfica 3 muestra el comportamiento que se dio durante el proceso de hidrólisis enzimática del ñame baboso a concentraciones de (10. con la adición de la enzima AMG en la segunda etapa se observan cambios representativos en la producción de azucares. 62 . 4.2 Comportamiento de Dioscorea Trífida en la hidrólisis enzimática.5% D.00 1.5% α Amilasa AMG D.00 10. 13.00 3.5%.00 9.21% con 0Brix. Alata 10. se observa un aumento en la conversión de almidón en ART debido a la actividad enzimática.00 11.00 -1.5%m/v aumento significativamente con respecto a la concentración de 15%m/v. se observa de acuerdo a estos datos que los grados 0Brix son directamente proporcional a los de azucares reductores. Alata 13.00 8.00 °BRIX 6.Gráfica 2.00 0.

trifida 13. Esta presento el mejor resultado con 12. 63 .64 como valor final.5% entre 0. la concentración de 13.trifida 10.6 y 13.00 10.00 5 10 15 HORAS 20 25 30 D.00 20.00 30. los comportamientos de los ºBrix son directamente proporcionales a la producción de azucares.92 y 9 con 8. Comportamiento azucares reductores en la hidrólisis enzimática de D. 80. Trífida.00 0. oscilo entre 1.Gráfica 3.24 y 11 con 10.00 70.5% D.5% D.99.00 [ART] g/L 40.5% entre 1.00 60. La gráfica 4 ilustra la cantidad de sólidos solubles generada para cada una de las concentraciones de ñame dentro de las cuales la del 15%.00 0 -10.trifida15% α Amilasa AMG Fuente: los autores del proyecto En el anexo C se encuentran los datos tabulados de la producción de azucares reductores y grados ºBrix.88 como valor final y la de 10.00 50.

00 10.00 0 -2.5% el valor inicial es de2.00 °BRIX 6.5% el valor mínimo fue de 11. 64 .3 Comportamiento de Dioscorea Rotundata en la hidrólisis enzimática.82gr/L a 67.5% D. Trífida 14.00 12.00 0.trifida 13.trifida 10.57g/L. Comportamiento ºBrix en la hidrólisis enzimática de D.00 D.5% D.37g/L y un valor final de 78.00 5 10 15 HORAS 20 25 30 Fuente: los autores del proyecto 4.00 α Amilasa 8. en donde los valores para la concentración de 10. en donde se observa que el comportamiento es similar al de las otras 2 variedades aumentando las concentraciones a medida que transcurre el tiempo y se desarrolla la hidrolisis enzimática.32g/L. La gráfica 5 ilustra el comportamiento de azucares reductores de la variedad de ñame Dioscorea Rotundata.82g/L que a diferencia de las otras variedades las mejores concentraciones de azucares reductores las presento la concentración de 15%. para la concentración de 13.trifida15% AMG 2. y los mejores rendimientos los presento la concentraciones de 15% con un valor inicial de 21.00 4.Gráfica 4.82g/L y el máximo fue de 71.

Gráfica 5.00 30. donde la acción de la enzima fue más efectiva.00 -10.5% y 15%) usadas.70 ºBrix y lo presentó la concentración de 15% 65 .00 [ART] g/L 40. Rotundata. para esta variedad tuvo un comportamiento similar al de las otras 2 variedades.00 50.00 60. el valor fue de 15.00 20.00 0. aunque a diferencia tuvo el mayor valor final de los ºBrix de todo el proceso de hidrolisis enzimático. 13.5% α Amilasa AMG D. Rotundata 13. 80. Rotundata 10.00 Fuente: autores del proyecto 0 5 10 15 20 25 30 D.00 10.5%. Rotundata 15% HORAS La gráfica 6 muestra que el comportamiento de los 0Brix de las tres concentraciones (10.5% D.00 -20.00 70. Comportamiento azucares reductores en la hidrólisis enzimática de D.

00 0 5 10 15 Horas 20 25 30 D.00 6.5% 8.5% D.00 12.4.00 10.4 Lectura de pH 4.00 4. 66 . mostrando disminución a través del tiempo.00 2. En la gráfica 7. Se ilustra el comportamiento del pH en el proceso fermentativo de esta especie. Rotundata 10. Rotundata 18.00 Fuente: autores del proyecto 4.00 16. a partir de las 44 horas presento variaciones mínimas y los valores se tornaron constante. Rotundata 15% α Amilasa AMG -2.1 Lectura de pH para Dioscorea Alata.00 14.00 0. Rotundata 13. En el anexo B se reportan los datos correspondientes a la variación de pH a través de todo el proceso fermentativo para Dioscorea Alata.00 °BRIX D.Grafica 6. Comportamiento ºBrix en la hidrólisis enzimática de D.

pero a partir de las 28 horas presento valores promedios a 4.2 5 4. Alata 10. se ilustra disminución a lo largo del tiempo.5% y 15% hasta finalizar el proceso fermentativo. En el anexo C se reportan los datos correspondientes a la variación de pH a través de todo el proceso fermentativo para Dioscorea Trífida.5% D.5% D. Alata 13.8 pH 4.2 Lectura de pH para Dioscorea Trífida La gráfica 8. Comportamiento del pH durante la fermentación de D. Alata 15% 4. 67 .4 4.27 para las concentraciones 10.2 4 0 10 20 30 HORAS Fuente: los autores del proyecto 40 50 60 D.Gráfica 7.6 4. Alata 5.4. Muestra un comportamiento similar del pH a la anterior especie.

trifida 13. Trífida 5.4.trifida 10. es evidente que en la concentración de 13. y este no logra a estabilizarse.3 Lectura de pH para Dioscorea Rotundata.5% 4.5% D.5% de esta especie comparada con las otras 2 especies sufrió un descenso de pH más rápido en donde pudo verse afectado el microorganismo y reteniendo la producción de Etanol.1 4.5 4. 68 .1 0 10 20 30 HORAS 40 50 60 D.7 D. En la gráfica 9.3 4.9 pH 4. Comportamiento del pH durante la fermentación de D.Gráfica 8.trifida15% Fuente: los autores del proyecto 4. Se nota claramente que hay una disminución pronunciada del pH.

90 4.5% D.5%. los valores finales en cada una de las concentraciones (10. Se destaca que la concentración de 10.80. 4. Rotundata 15% 4.1 Lectura de ºBrix para Dioscorea Alata.50 4. Alata donde se nota una disminución progresiva de los ºBrix a lo largo del proceso fermentativo. 13. 1.10 0 10 20 HORAS Fuente: los autores del proyecto 30 40 50 60 pH D. Comportamiento del pH durante la fermentación de D. Se ilustra el comportamiento de los ºBrix de las 3 concentraciones (10.12 y 1.5 y 15%) fueron 0.5%.5% D.10 4. En la gráfica 10.30 4. Rotundata 13. Rotundata 5. 69 .80 indicando que la fermentación fue completa.5% presento la mayor disminución 0.5 Lectura de ºBrix.5.13 respectivamente. 13.70 4.Gráfica 9.5% y 15% m/v) de la especie D. Rotundata 10.

el cual es el valor más pequeño de esta especie.5% D.00 0.00 14.2 ºBrix. 4.00 2. Alata 13.00 10. 70 . lo cual indica que su fermentación fue completa. Alata.00 4.5.2 Lectura de ºBrix para Dioscorea Trífida La concentración 13.5% D. Alata 10.00 °Brix 8.00 12.Gráfica 10. pero a las 44 horas descendió nuevamente para finalizar así el proceso con un valor de 2.00 0 10 20 30 HORAS 40 50 60 D. 16. Alata 15% Fuente: los autores del proyecto En el anexo B se presentan los datos correspondientes a los ºBrix en la etapa de fermentación para la especie Dioscorea Alata.00 -2.00 6. Comportamiento del descenso de ºBrix durante la fermentación de D.5% presento un comportamiento irregular donde a partir de las 30 horas los ºBrix no hubo variación considerable.

51 AGUILERA. 1986.5% D.00 0 10 20 30 HORAS Fuente: los autores del proyecto 40 50 60 En el anexo C se presentan los datos correspondientes a los ºBrix en la etapa de fermentación para la especie Dioscorea. La siguiente grafica 12. con disminución a lo largo del proceso y refleja para las concentraciones de trabajo (10. Arch.Role of mitochondria in ethanol tolerance of Saccharomyces cerevisiae. Comportamiento del descenso de ºBrix durante la fermentación de D. Vol 142.5% D.. esto es gracias a que el alcohol genera modificaciones en la organización y permeabilidad de las células presentes por concentración.00 4. T.trifida 10. A. 13.00 D.trifida 13.Gráfica 11.5.5 y 15% m/v) valores similares destacando que la concentración de 10% presento siempre los valores más bajos. pp 389–392.00 0.00 10. 71 . afectando su composición lipídica y el funcionamiento de proteínas de membrana involucradas en el transporte de azúcares y aminoácidos51.00 °Brix 8. Trífida 16. BENITEZ.00 14. Muestra que el comportamiento de esta especie es similar al de las otras 2 especies. Microbiol.00 12.3 Lectura de ºBrix para Dioscorea Rotundata. 4.00 6.5.trifida15% 2.

00 18.75g/L para 10.00 0. se observa que la concentración 10.00 -2. 20. Alata. Los valores finales de concentración de azucares reductores fue de 3. Comportamiento del descenso de ºBrix durante la fermentación de D.00 0 10 20 30 HORAS Fuente: los autores del proyecto 40 50 60 D.00 6. 72 . 4.5% D.1 Lectura de Azucares Reductores para Dioscorea Alata.6 Lectura de Azucares Reductores en la fermentación 4.5% D. En la gráfica 13 se ilustra como fue el consumo de azucares reductores para la especie D.12 g/L siendo este ultimo el valor más bajo y también se evidencia que la concentración de 15% presento a las 50 horas menos consumo de azucares reductores por lo tanto se espera que tenga una menor producción de etanol en comparación a las demás variedades.5% disminuyo rápidamente con un consumo notable de azúcar. Rotundata 10.00 12.12g/L. 13. A las 28 horas presentaba una caída de 9. 6. Rotundata. Rotundata 15% En el anexo D se presentan los datos correspondientes a los ºBrix en la etapa de fermentación para la especie Dioscorea Rotundata. Rotundata 13. el descenso de azucares en general fue muy similar.6.00 4.5% y 15% respectivamente.00 16.00 2.00 8.Gráfica 12.31 g/L y a las 50 horas un valor de 3.52g/L y 3.5%.00 14.00 °BRIX 10.

00 40.00 10.5% D. Alata 15% 30. Alata 13. se ilustra el consumo de glucosa para la especie D. Comportamiento del descenso de azucares reductores durante la fermentación de D.00 0 10 20 30 40 50 60 HORAS Fuente: los autores del proyecto Los datos correspondientes al consumo de azucares se encuentra en el anexo B.00 D.00 -10. Alata 90.00 80. 73 . Trífida En la gráfica 14.5% m/v y 15% m/v son los de menor valor. el valor final para estas dos concentraciones fue de 2.2 Lectura de azucares reductores para D. Alata 10.00 60.5% 4.16g/L y 2. y se observa un mayor consumo en las concentraciones de 13% y 15% m/v un comportamiento similar. aunque quien presento mayor producción de etanol es la concentración de 13. evidenciando la disminución de esta y que los valores finales de las concentraciones 10.00 20. al finalizar el proceso de fermentación.00 0.Gráfica 13.00 [ART] g/L 50..5% D.60g/L que indica eficiencia en la fermentación.6.00 70.

34g/L para las concentraciones restantes 13. 74 .00 0 10 20 30 HORAS 40 50 60 D. Trífida 90.00 40. A continuación en la gráfica 15. don la diferencia que al final el valor más bajo lo obtuvo la concentración de 10. Los valores finales de concentración de glucosa fueron 5.6.5% D.00 [ART] g/L 50.trifida 10.Gráfica 14.3 Lectura de azucares reductores para Dioscorea Rotundata.5% D.trifida 13.5% y 15% m/v respectivamente.00 0.00 Fuente: los Autores del proyecto En el anexo C se encuentra los datos correspondientes al consumo de Azucares evidenciando la disminución de la concentración de azucares reductores a lo largo de la fermentación y que los valores finales de las concentraciones 13.00 10.00 70. se ilustra el comportamiento del consumo de glucosa para Dioscorea rotundata en donde se puede inferir que es similar al de las otras 2 especies.22 g/L.5% con 2.5% m/v y 15% m/v existe poca diferencia.89g/L y 4. Comportamiento del descenso de azucares reductores durante la fermentación de D.trifida15% -10.00 80.00 60.00 20.00 30. 4.

como se puede observar en la gráfica 16. Rotundata 100. para el proceso de fermentación de la especie Dioscorea Rotundata.1 Conteos de microorganismos para Dioscorea Alata.7. 4.5%. esto corresponde del tiempo 0 al 10. C. Alata en sus tres concentraciones (10. y D del documento. La grafica muestra el comportamiento de la levadura durante el proceso de fermentación para el D.Gráfica 15.5% 40.00 [ART] g/L D. 4.5% D. esto es debido a que la levadura está reconociendo y se está adaptando al medio de donde debe tomar los nutrientes necesarios para desarrollarsu proceso productivo.5% y 15%).00 D. 13.00 80. Rotundata 10. durante el inicio del proceso se observa que el crecimiento del microorganismo es lento y pequeño. 75 . Rotundata 15% 20. Comportamiento del descenso de azucares reductores durante la fermentación de D.00 0 -20.7 Conteo de microorganismos Los datos para cada una de las variedades se encuentran en los anexos B.00 0.00 10 20 30 HORAS 40 50 60 Fuente: los autores del proyecto En el anexo D se presenta los datos correspondientes a la concentración de glucosa en el tiempo. Rotundata 13.00 60. aquí la célula reconoció al alimento enseguida y empezó a crecer por lo tanto no hubo fase de adaptación.

01E+07 D. Alata 13.10E+06 4. 4. Alata 15% 1.5% D. para esta concentración el crecimiento total va desde 1. Alata 13.40E+07/ml. Alata 1.16E+6 UFC/ml.4E+07 UFC/ml. A las 44 horas se ve un descenso en la concentración de células que puede ser el resultado de la formación de metabolitos secundarios durante el proceso.40E+06/ml hasta 1.Gráfica 16.81E+07 1.2 conteos de microorganismos para Dioscorea Trífida. para esta especie la levadura demoro un poco más tiempo en adaptarse al medio.7.10E+06 6. Alata 10.00E+05 0 10 20 30 HORAS 40 50 60 Fuente: los autores del proyecto Durante este proceso también podemos observar una segunda fase en donde se origina un crecimiento exponencial para las tres concentraciones.21E+07 UFC 1.41E+07 1. Comportamiento del crecimiento de biomasa durante la fermentación de D.00E+06 hasta 1.32E+07 UFC/ml. en donde se puede apreciar que la concentración de D. Alata. Esta variedad de ñame fue la que obtuvo la menor formación de microorganismo durante el proceso. En la primera etapa la adaptación del microorganismo fue similar al de la del D.5% es la primera que comienza con el crecimiento con 3. También se puede destacar que el mayor crecimiento se produce en la concentración de 15% con un valor de 1.61E+07 1.5% 8.10E+06 D. sin embargo la fase lag para esta especie es pequeña y la levadura toma acción y en la segunda fase se produce un incremento para las concentraciones 76 . Para esta concentración el crecimiento va desde 1.10E+06 2.

3 conteos de microorganismos para Dioscorea Rotundata.5% D.5% en las primeras 10 horas tuvo una etapa de adaptación normal.68E+07 UFC/ml.50E+06/ml hasta 2.20E+07 9.5% fue desde 2. Esto origino un incremento constante de la producción de biomasa este medio en general para las tres concentraciones como se ve en la gráfica 18.7.18E+06/ml hasta 1. prácticamente no hubo fase lag con esta especie.31E+06/ml hasta 1.trifida 10. 4.77E+07 UFC/ml como se puede ver en la gráfica 17.00E+06 0 10 20 30 HORAS 40 50 60 D.de 10.02E+07 UFC/ml. Gráfica 17.00E+06 6.trifida15% Fuente: los autores del proyecto El crecimiento total de la concentración 10. siendo este último el de mayor crecimiento para esta especie.5% fue desde 1.trifida 13. El crecimiento para esta especie en la primera fase fue pequeño pero acelerado ya que la levadura tuvo una muy buena adaptación al medio.5% D.5 y 15 % en donde el crecimiento fue constante.77E+07 UFC/ml y finalmente la concentración de 15% desde 4.00E+00 -3.50E+07 UFC 1. pero a las 20 horas se produjo un descenso en la concentración de las levaduras hasta 1. para la concentración de 13.10E+07 1.00E+06 3. para la concentración de 13.40E+07 2.80E+07 1. Comportamiento del crecimiento de biomasa durante la fermentación de D. aunque posteriormente se produjo un incremento en la producción de levadura para esta concentración y finalmente termino con 1. 77 .19E+06 UFC/ml esto se puede deber a que en el momento de tomar las muestras no hubo un rígido control y haya habido un aumento en la cantidad de oxigeno disminuyendo la actividad de la levadura e impidiendo su crecimiento normal.00E+06 0. Trífida 2. .

83E+07 2. Rotundata 2. observándose una Concentración final de etanol de 3.95E+07 UFC/ml y para la de 15% 8.00E+05 0 Fuente: los autores del proyecto 20 HORAS 40 60 D. Esta especie fue la que genero mayor producción de Biomasa durante el proceso de fermentación con la concentración 15% con un valor de 2. Rotundata 13. 4. Rotundata 15% Durante la fase logarítmica se logró un buen rendimiento en la producción de biomasa donde se obtuvieron los siguientes crecimientos. Alata se representan en la gráfica.23E+07 8. UFC 78 . Comportamiento del crecimiento de biomasa durante la fermentación de D.64% v/v y 3.46E+07 UFC/ml.30E+06 3.5% D.8 4.64% v/v.46E+07UFC/ml. observándose la producción de alcohol a partir de las 4 horas hasta alcanzar un valor máximo a las 50 horas para las tres concentraciones de D.1 Producción de etanol Producción de etanol de Dioscorea Alata. Sin embargo la que mayor valor obtuvo fue la D. para la concentración de 10.43E+07 2.27% v/v respectivamente.5% y 15%M/v de la variedad D.Gráfica 18.5% con 3.35E+06 UFC/ml hasta 1. La producción de etanol durante el tiempo de Fermentación para las concentraciones de harina de ñame del 10.30E+06 4.00E+06 hasta 2. Rotundata 10.63E+07 1. Alata donde se observa que las tres tienen valores muy similares.8. 3.5%.5% de 5.76E+07 UFC/ml.5% D. para la de 13.22% v/v.5% 1.03E+07 1. 13.30E+06 UFC/ml hasta 1. Alata 13.

Muestra el incremento de la producción de etanol durante el proceso de fermentación con Saccharomyces cerevisiae.00 D.05 lo que indica que no existen diferencias significativas entre las medias de alcohol de un nivel de concentraciones a otro. Alata 5. el análisis de varianza realizado para esta especie dio como resultado un valor de p> a 0.00 10 20 30 HORAS 40 50 60 Fuente: los autores del proyecto La grafica 19. Alata 10.Gráfica 19. Comportamiento de la producción de alcohol durante la fermentación de D. 79 .5% D. Ilustra la diferencia de medias para la variedad D. Alata 15% 1.00 %V/V 2.00 0 -1.00 0. La grafica 20.00 3.5% D. Alata 13. Alata.00 4. en donde esta especie obtuvo los menores porcentajes de alcohol de las tres variedades presentadas para el estudio.

5% y 10.5% a las concentraciones obtenidas por D.8. los mejores resultados se presentó en la concentración de 13.4% v/v Lo cual sedebe a un menor consumo de los Azucares reductores por parte de Saccharomyces cerevisiae.43% v/v y 3. variedad Dioscorea Alata Fuente: los autores 4.5%m/v dieron los mayores resultados para esta variedad con 4. En La grafica 21 muestra el comportamiento del D. Alata. 80 .2 Producción de Etanol de Dioscorea Trífida. Las concentraciones 13.53% v/v. Gráfico de medias. superando con la de 13.5% para esta especie. Trífida durante la producción de alcohol y no se observa mucha variación en la producción de etanol. La producción de alcohol para esta especie se produjo entre el tiempo 4 y 50 de fermentación en donde la concentración de 15% tuvo el menor valor con 3.Grafica 20.

00 D. Ilustra la diferencia de medias para la variedad D.trifida 10.trifida 13. el análisis de varianza realizado para esta especie dio como resultado un valor de p> a 0. Comportamiento de la producción de alcohol durante la fermentación de D.trifida15% 1. Trífida.00 0.00 3.00 %V/V D.Gráfica 21. 81 .5% 2.05 lo que indica que no existen diferencias significativas entre las medias de alcohol de un nivel de concentraciones a otro. Trífida 5.5% D.00 0 10 20 30 HORAS Fuente: los autores 40 50 60 La grafica 22.00 4.

5% m/v con un 3.5%de los datos obtenidos por la variedad D. se observa como aumenta la concentración de alcohol a partir de las 4 horas hasta alcanzar un punto máximo a las 50 horas para las tres concentraciones de D.8. Gráfico de medias. En la gráfica 23. Las concentraciones 15% m/v y 13. con lo que se puede asumir que la concentración más rentable para el proceso de obtención de alcohol es la de 15%m/v de D. Rotundata. En la grafica 82 . Rotundata donde el menor valor lo obtiene 10.55% v/v y 3.5%m/v presentaron los mejores resultados. este valor es mayor al valor obtenido por la concentración 13. de la variedad Dioscorea Trífida Fuente: los autores 4.Gráfica 22.7% v/v respectivamente. Alata.3 Producción de etanol de Dioscorea Rotundata. esto es de 4.62% v/v.

00 0.5% D. Rotundata 15% La grafica 24 ilustra la diferencia de medias para la variedad D.Gráfica 23.00 3.00 1.05 lo que indica que no existen diferencias significativas entre las medias de alcohol de un nivel de concentraciones a otro.00 0 -1. Rotundata 6. Rotundata.5% D. Rotundata 10.00 2.00 5. Gráfica 24. para la variedad Dioscorea Rotundata Fuente: los autores %V/V 83 . Rotundata 13. Gráfico de medias. el análisis de varianza realizado para esta especie dio como resultado un valor de p> a 0.00 4. Comportamiento de la producción de alcohol durante la fermentación de D.00 Fuente: los autores del proyecto 10 20 30 HORAS 40 50 60 D.

sustrato P: concentración de etanol (g/L) S: concentración de glucosa (g/L) Hay que tener en cuenta que al iniciar el proceso de fermentación en P 0 no hay producción de etanol.5% m/v ( ) ( ( Remplazando los valores ) ) Concentración 13.1 Rendimiento para Dioscorea Alata Concentración 10.9.5% m/v ( ) ( ) 84 . Esta ecuación se aplicó para cada una de las especies y para las 3 concentraciones de trabajo.9.4.5% m/v ( ( ) ) Concentración 15% m/v ( ) ( ) 4. 4.5% m/v ( ) ( ( Remplazando los valores ) ) Concentración 13.9 Rendimientos del proceso Para calcular el rendimiento del proceso se procede de la siguiente manera de acuerdo a la ecuación entonces ( ) Yp/s: Rendimiento producto.2 Rendimiento para Dioscorea Trífida Concentración 10.

13.3 ) ) Rendimientos para Dioscorea Trífida Concentración 10.5% que representa un 96. Ingeniería. 2007 52 85 .1 y Statistical Package for the Social Sciences (SPSS).5% m/v Remplazando los valores ( ) ( ) ( ) Concentración 13.5% y 15%) m/v la concentración que presento mayor rendimiento fue la concentración de 15% con 49. lo cual supera el rendimiento alcanzado a nivel industrial que varía entre 87 y 95%.9.J.8% del rendimiento teórico. O./dic.Concentración 15% m/v ( ( 4.8 n.05) que permitió determinar si los datos arrojados en la investigación existen o no variaciones significativas de las variables que interesan a los investigadores. se realizaron 3 análisis de varianza. VÁZQUEZ. H. es decir uno por cada especie. y DACOSTA.10 ANÁLISIS ESTADÍSTICO Para el análisis estadístico de esta investigación se utilizaron como herramientas tecnológicas los software Statgraphics 5.5% m/v ( ) ( ) Concentración 15% m/v ( ) ( ) De acuerdo al cálculo de los rendimientos de cada una de las 3 especies a las diferentes concentraciones de trabajo (10. el primero para realizar el análisis de varianza (ANOVA)en donde se trabajó con un nivel de significancia o error estadístico del 5% (0. investigación y tecnología.1%52 4. Fermentación alcohólica: Una opción para la producción de energía renovable a partir de desechos agrícolas.5%.4 México oct. v. siendo el rendimiento teórico o estequiométrico 51.

en el anexo G se encuentran los resultados del ANOVA de las 3 variedades.5% y 15%). para un total de 9 pruebas y se aceptó la hipótesis alternativa en las 9 pruebas. es decir.5 %m/v. la primera prueba dio positivo. ya que con la concentración de 15%m/v se desaprovecha mucha materia prima y no hay diferencias significativa en los resultados que con las otras dos concentraciones. La prueba se realizó a las 3 especies y a cada una de las concentraciones. 86 . El segundo software se utilizó para contrastar las hipótesis propuestas en el capítulo 3 en donde la Hipótesis nula afirmaba que la concentración de etanol es igual a 10% y la hipótesis alternativa es diferente al 10%. 13.5%. para comprobar las hipótesis fue necesario realizar inicialmente la prueba no paramétricas Kolmogorov-Smirnov para una muestra que se busca comprobar si los datos proviene de una distribución normal y así aplicar la prueba T de Student que es la prueba que permite el contraste de las Hipótesis. es decir que los datos si provienen de una distribución normal y si se puede aplicar la prueba T de Student.El análisis de varianza en cada una de las especies determino que no hay estadísticamente diferencias significativas entre las medias de etanol de una concentración a otra (10. que la concentración es diferente de 10%. En el anexo H se reportan los resultados de las pruebas no paramétricas Kolmogorov-Smirnov y de las pruebas T de Student. también se determino con el análisis de varianza que la variedad que ofrece los mejores resultados en cuanto a la producción de etanol es la Dioscorea Trífida y con las concentraciones de 10.5 y 13.

55%v/v a la concentración de 15%m/v.25x107UFC/ml. Dioscorea Alata y Dioscorea Trífida) utilizadas en esta investigación. en las variedades Dioscorea Rotundata. Dioscorea Trífida y Dioscorea Alata respectivamente. Al calcular los parámetros cinéticos. 4. Dioscorea Trífida y Dioscorea Rotundata) con valores máximos de concentración de 4. Es posible obtener bioetanol con cualquier de las especies de ñame (Dioscorea Rotundata.90x107UFC/ml en la concentración de 15%m/v.43%v/v a la concentración de 13.69x107UFC/ml en la concentración de 15%y en la variedad Dioscorea Alata.82g/L en concentración de 15%m/v en la variedad Dioscorea Rotundata. 73.66%v/v a la concentración de 13.5% m/v y para la variedad Dioscorea Trífida valores mínimos 3.32g/L y el crecimiento de microorganismos presento valores máximos al final de la etapa exponencial en la variedad Dioscorea Rotundata de 1. alcanzándose máximos valores al final del proceso de 78.34g/L para la concentración de 15% en la variedad Dioscorea Rotundata.5% en la variedad Dioscorea Trífida. Durante la etapa de hidrolisis enzimática (licuefacción y sacarificación) los azucares reductores y ºBrix aumentan significativamente. fue de 1.18g/L en la concentración de 13.5%m/v y 3. los valores mínimos obtenidos de azucares reductores al final de la fermentación fueron de 4. 87 . cualquiera de las concentraciones utilizadas. en la variedad Dioscorea Trífida.5%m/v.5 CONCLUSIONES Se obtuvo etanol a partir de tres variedades de ñame (Dioscorea Alata. el valor fue de 1. . 9.84g/L en la concentración de 13.5%m/v.68g/L a la concentración de 13. mientras que para la variedad Dioscorea Alata e obtuvieron valores de 61.

Se recomienda trabajar con la especie Dioscorea Trífida debido a que presento un comportamiento estable durante toda la investigación.6 RECOMENDACIONES Para este tipo de investigación es recomendable el empleo de la enzima Pectinex ultra. 88 . Para la cuantificación de etanol es importante emplear el método cromatografía de gases debido a que es un método más exacto y representa mayor confiabilidad en los resultados. este estudio se recomienda para futuros investigadores en donde le darían un valor agregado a este promisorio tubérculo. Evaluar los rendimientos durante el proceso de obtención de alcohol usando otro tipo de microorganismos como las bacterias Zymomonas mobilisque transforman la glucosa en etanol con un rendimiento del 5 al 10 % mayor que la mayoría de las levaduras. antes de usar la enzima alfa amilasa. En cuanto a la celulosa liberada (cascara del ñame) está también se puede utilizar para la producción de etanol o de compostaje y así aprovechar los residuos de cualquier proceso en donde se trabaje con ñame. Se recomienda reducir el tiempo de residencia de la enzima alfa amilasa debido a que esta trabaja entre 88 a 95ºC el mantener esta temperatura por mucho tiempo implica altos costos de combustible. para complementar y que haya una ataque oportuno sobre el almidón en la hidrolisis y así obtener mayores resultados y altas concentración en cuanto a la conversión de azucares reductores que garantizan mayor producción de alcohol. además hay que tener en cuenta que este proyecto es un estudio preliminar y se desea que quede como línea base para futuras investigaciones.

.Role of mitochondria in ethanol tolerance of Saccharomyces cerevisiae. pág. ALVIS.: 11-18 Disponible en: http://www. Obtención de glucosa a partir de almidón de yuca Manihot esculenta. CARRERA. 1ª edición. 2008.php?pid=S071807642008000500003&script=sci_arttext ARTIME. Michael. Vol. Información Tecnológica-Vol.1987 AGUILERA. 19 N°5-2008. Enzimas industriales. 10 Edición. J. 142.Departamento de Energías Renovables DE RAFOLS. Ingrid. Yajaira y BOCANEGRA AMAYA. Evaluación de los rendimientos en el proceso de obtención de alcohol a partir de harina de Ñame (Dioscorea Bulbífera. Biología de los Microorganismos. Aprovechamiento Industrial de los productos agrícolas. W. 2005 ASTURIZAGA AVILEZ. 3 No. Sincelejo. R. Universidad del Cauca. LAWANSON AO. Universidad del Cauca. T. Barcelona. 2008 ADELUSI A. pp 389–392. Trífida) por vía enzimática. Aplicaciones de las enzimas. Módulos de Biotecnología. 1964 Disponible en: www. Armando y VELEZ.cl/scielo. Sonia y MARBELLO. Mycopathologia 98:49-58. Facultad de Educación Y Ciencias. Facultad de Ciencias Agropecuarias Vol. Jorge y MERA. 1986. Evelin. 108 p.BIBLIOGRAFÍA ACEVEDO.scielo. Universidad de Salamanca. Para la obtención de Grado el Título de ingeniero Químico en la Universidad de San Buenaventura.1 Marzo 2005 CIEMAT . Disease induced changes in carotenoid content of edible yam (Dioscorea spp) infected by Botryodiplodia the obromae and Aspergillus Niger. Carlos.com 89 . BROCK y MADIGAN.Evaluación comparativa de la actividad fermentativa de Células libres e inmovilizadas de Saccharomyces cerevisiae Sobre cáscaras de naranja y gluten. Programa de Biología. BENITEZ. Editorial Prentice Hall. Microbiology. Carmen. Arch. A.abengoabioenergy. JIMENEZ.2004 CARRERA. Universidad de Sucre. Linda Luz . Cartagena.

S.6. Biosci. 431-438 GARCÍA CORTES. J. Graw-Hill México 2006 KURIKI.p 87. José Guillermo. Punta del Este. Los Biocombustibles. 90 .Disponible: http://www.com Disponible en: http://www.gov. 557 – 565. T. Edición 1 pág. Microbiología industrial. 2003. 2002.1999. Corpoica. p. “Consideraciones sobre fisiología de la planta de ñame”. Manuel. 228 FERNADEZ. Bioeng. 2009. T. Conferencia ARPEL. Vera. 2da ed.co/pregrado/copia%20alimentos/proyectos/pba. 2004 GAMERO. The concept of the a-amylase family: structure Similarity and common catalytic mechanism. Editorial ACRIBIA. Pita y PÉRTEGAS Díaz.A 1993. España 2000. 2004 GONZALES. Galo.edu.unicordoba. Pág. Química de los Alimentos.co/senado/basedoc/ley/2001/ley_0693_2001.uva. HERNÁNDEZ. p. y WESTHOFF D. Acribia S.secretariasenado. Pág. España.html Disponible en: Asociación colombiana de productores y proveedores de caña de azúcar. 112-114. Editorial EUNED. Zaragoza. Uruguay. HERNANDEZ SAMPIERI. Disponible en: http://www. La Coruña (España).eis. Jorge y MOLINA. LEÓN. Roberto Metodología de la investigación Editorial MC. FRAZIER. Editorial EUNED. Enero/Julio 2006. 3739. Zaragoza. Revista de ingeniería vol. Alicia.pdf FERMEMA. Microbiología de los alimentos. Unidad de epidemiologia Clínica y Bioestadística. W. IMANAKAT. Estudio de los factores que afectan la hidrolisis enzimática y el proceso fermentativo para la producción de alcohol a partir de la papa.procaña. pág.es/~macromol/curso08-09/pls/quees. Edición 2.htm Estudio realizado por Global BioenergyPartnership (Asociación Global de Bioenergía) [GBEP (2007)] Evaluación De Propiedades Tecnofuncionales De Variedades De Ñame De La Costa Atlántica. Investigación cuantitativa y cualitativa. O. Introducción a la microbiología. 16(1).

Enzimas con Aplicación Industrial. SATYANARAYANA. M. C. Para la obtención de Grado el Título de ingeniero en biotecnología. Edición.1991. E. Semilla vegetativa de yuca. New York: Academic Press Inc. Eds. investigación y tecnología. 2005. Asiatech Publishers Inc. 586 pp. Fermentación alcohólica: Una opción para la producción de energía renovable a partir de desechos agrícolas. Blackie and Son Ltd. Pág. Ingeniería. En: Ospina. pp.M. John E.mx/publicaciones/avaype/sepoct02/HORCASITAS. Introducción a las operaciones de separación calculo por etapas. A. B y Ceballos. MONTES. La yuca en el tercer milenio. SMITH.4 México oct. Starch: Chemistry and Technology (pp 87-101). J.A. 2002. Evaluación de las condiciones de la fermentación alcohólica utilizando Saccharomyces cerevisiae y jugo de caña de azúcar como sustrato para obtener etanol. Química Orgánica. EZHILVAN NAN. Edición 4. In Whistler & Paschal (Eds. J. Manufacture of potato starch. USA. H. Pág.B. H. Robert. TUCKER. La roche (Eds. Cali. 2009. Pág./dic. 1996. Colombia. 5-6 91 . O.J. y BOYD. Extraído del sitio web de la escuela politécnica del ejército ecuatoriano. In: Enzyme Technology. utilización y comercialización.). Disponible en: http://www. Biotecnología. Biotecnología Molecular. T. NIETO. y DACOSTA. Gingold. 49.a. 2006. Pandey. I. TREADWAY. 2010. New Delhi. CR.http://repositorio.PDF. Acribia.Amylases. MARCILLA GOMIS. C.). Sistemas modernos de producción.edu. M y MAGANA. 53-54 VÁZQUEZ. H. Soccol.pdf. S. procesamiento. R. CIAT.ec/bitstream/21000/990/1/T-ESPE 026782. London. Editorial Acribia. A.cinvestav. (1984). India pp 189 – 220. 49-75. L. 2004 MORRISON. . v.espe. Webb. Enzymes in Food Processing. RAO. Robert. 2007 WALKER J. 5taEd. G y WOODS. GALARZA. Proyecto Educativo Bonaventuriano.LOPEZ.8 n. Addison–Wesley Iberoamericana.

ANEXOS 92 .

ANEXO A. SUPERFICIE COSECHADA. PRODUCCIÓN Y RENDIMIENTO DEL CULTIVO DE ÑAME EN COLOMBIA AÑOS 1997 – 2008 93 .

5 Parámetros óptimos Temperatura 90-105 °C Calcio 50-70 ppm Amiloglucosidasa Industria alimenticia: producción de glucosa y fructosa Aplicaciones industria del papel: protección contra daños mecánicos Industria de la Cerveza: producción de cerveza clara Apariencia: liquido no viscoso de grado alimenticio Características Color: marrón Densidad : 1. vitaminas. PH: 4.ANEXO B. FICHAS TÉCNICAS DE LAS ENZIMAS Α AMILASA Y AMILOGLUCOSIDASA α Amilasa cerveza. Propiedades 94 .20 g/ml Actividad: 1 unidad Novo Amiloglucosidasa (AGU): cantidad de la enzima que Propiedades Parámetros óptimos Hidroliza 1µmol de maltosa/min a condiciones estándar.20 -1.5 Temperatura 55 .26 g de almidón Por hora. avalado por el método estándar de Novozymes A/S). antibióticos Aplicaciones industria textil y adhesivos Apariencia: liquido no viscoso de grado alimenticio Características Color: marrón oscuro Densidad : 1. PH: 6. industria de aminoácidos.60 °C fermentaciones.25 g/ml Actividad: 120 KNU/g (1 KNU: cantidad de enzima que rompe 5.

36 4.96 8 4.31 4.25 4.0 27 7.52 26 10 15.49 4.06 4 4.82 1.5% 15% 0 4.52 45.32 42.5% 13.0 8.2 11. RESULTADOS PARA LA ESPECIE D.56 28 4.32 AMG Concentraciones 10.32 12.97 5.29 50 4.32 b.62 32. Azucares reductores en la hidrolisis enzimática α Amilasa Concentraciones Tiempo Tiempo (H) 10.9 1.9 7. Comportamiento De pH Durante El Proceso De Fermentación De D.02 53.32 64.3 1.9 18 4. A continuación se registraron los resultados obtenidos durante la etapa de hidrolisis enzimática y de la fermentación para la especie Dioscórea Alata a.32 16.12 69.06 5.6 3. α Amilasa AMG Concentraciones Concentraciones Tiempo Tiempo (H) 10.52 27 18 22. D.32 48.52 51.32 41.21 4.32 61.44 4.2 26 6.82 47.5% 13.3 10 2.47 34.5% 13.5% 15% 0 0.41 44 4.5% 15% (H) 0 4.68 61.32 54.9 4 1.70 4.84 4.5% 15% 35.16 95 . ALATA.27 66.5% 15% (H) 10.ANEXO C.5 28 7. Alata.11 4.1 8.55 4.90 4.2 c.1 6.74 23 4. Comportamiento De Grados ºBrix Durante La Hidrólisis Enzimática.4 2.0 25 5.64 4.7 5.7 8.84 19 4.3 10.13 4.72 28 24 33.5% 13.9 10.82 42.7 0.32 36.6 8.57 25 4 7.4 7.79 4.2 7. Alata Concentraciones Tiempo (H) 10.82 58.2 24 4.5% 13.1 9.

Alata D.30 8 42.1 4.0 19 4.1 f.90E+06 9.3 9.80E+06 9.3 11.69E+06 1.d.31E+07 1.5% 15% 0 7. Alata Concentraciones Tiempo (H) 10.5% 15% 0 8.40E+06 4 1.7 0.54E+06 23 6.9 4.2 5.73 21.32E+07 1.3 9.17 36.8 8.7 8 6.8 1.64 12.32 4 50.6 44 1.0 8.98 44 6.28 28 9.1 5.12 6.27 35. Alata Concentraciones Tiempo (H) 10.00E+06 1.56E+06 8 1.10E+06 3.5% 13.52 50 3. Alata.6 7.5% 13.27 23 21.16E+06 1. Alata.00E+06 1.4 2.36E+07 50 7. Descenso de Azucares Reductores durante el proceso de Fermentación de D.52 3.15E+07 1. D.1 23 4.8 11. Crecimiento de Biomasa durante el proceso de Fermentación de D. Alata Concentraciones Tiempo (H) 10.22 8.3 4 6.08 19 29.5 12.75 e.5% 13.5% 15% 0 65.22 48.74 50.25E+07 28 8.33E+07 44 1.40E+07 96 .32 70.0 50 0.31 18. Descenso de Grados ºBrix durante el proceso de Fermentación de D.5 28 2.32 60.80E+06 1.5 8.34 45.81 61.50E+06 6.04E+07 1.00E+06 1.12 29.50E+06 19 4. D.28 7.00E+05 1.00E+06 2.

7 97 .4 44 3.0 0.0 28 3. Producción de Alcohol durante el proceso de Fermentación de D.6 2.1 3.5% 13.1 2.0 3. Alata Concentraciones Tiempo (H) 10.1 3.5 50 3.3 8 1.2 3.4 2.5 2.0 3.5% 15% 0 0.4 3.0 0.g.6 3.0 4 1.8 23 2. Alata.8 2.5 19 2.5 3. D.1 2.

4 10 3.84 67.1 8.46 4.32 45.0 9. Trífida.1 27 7.18 24 44.18 4.42 73.21 98 .25 4.33 4.9 12.5 1.2 c.43 28 4.5% 15% 0 4. Trífida Concentraciones Tiempo (H) 10.41 4.5% 13.8 7.29 4.62 47.9 26 55.8 26 7. Resultados de la Hidrólisis Enzimática Para la D. Trífida α Amilasa AMG Concentraciones Concentraciones Tiempo Tiempo (H) 10.5% 13.ANEXO D.8 27 61.32 35.32 2.5% 15% 0 0.23 50 4.3 28 8.4 28 67.32 41.02 4.9 1.9 13.75 8 4.32 20.32 48.32 18 25.93 4.5% 13.32 58.9 2. D.0 24 5.5 10.8 b.75 4.6 25 6. Comportamiento de pH durante el proceso de Fermentación de D. α Amilasa AMG Concentraciones Concentraciones Tiempo Tiempo (H) 10.8 9.2 11.42 51.6 4.27 44 4.58 4.5% 15% 0 5.88 4.6 10. TRÍFIDA.82 10 19.5 25 48.87 4 4.5% 15% (H) 10.62 4 8.5% 13.32 58. Trífida.2 1.82 53.66 5.52 38.5% 13.3 6.5 7.32 66.61 4.2 8.32 52.5% 15% (H) 10.21 4. Comportamiento de Grados Brix durante la Hidrólisis enzimática de D.9 9.24 4.55 23 4.85 14.53 4. A continuación se registraron los resultados obtenidos durante la etapa de hidrolisis enzimática y de la fermentación para la especie Dioscórea Trífida a.6 4 1.82 42.0 18 4.67 19 4. RESULTADOS PARA LA ESPECIE D.

Trífida Concentraciones Tiempo (H) 10.5% 13.3 4.0 5.94 4 62.4 12.83 19 43.2 3.7 6.82 74.5% 13.2 8.5 4.4 2.1 4.4 10.5% 15% 0 68.0 2. Trífida. Descenso de Azucares Reductores durante el proceso de Fermentación de D.83 12.2 2.27 50 9.d. Trífida Concentraciones 10.75 2.9 5.6 99 .60 e.7 7.1 4.7 10.1 8.2 10.2 Tiempo (H) 0 4 8 19 23 28 44 50 15% 13. D.60 20. D.15 23 34.57 28 26. durante el proceso de Fermentación de D.1 12.75 8 48.19 36.52 68.12 34.31 44 14.81 57.08 11.68 52.05 63.51 44.55 46.8 11. Descenso de Grados ºBrix Trífida.16 2.5% 8.66 41.5 3.31 23.9 8.

76E+07 1.61E+06 19 7.5 3.45E+07 1.31E+06 4. D.5% 13.7 3.7 2. Producción de Alcohol durante el proceso de Fermentación de D.57E+06 8 1.19E+06 1.2 100 .91E+07 50 1. Trífida.9 44 3.7 28 3.7 3.3 3.5 3.77E+07 2.0 3.4 2.5% 15% 0 1.30E+07 23 1.18E+06 2.f.59E+06 4.9 4.7 8 2.5% 15% 0 0. Trífida.45E+07 1.9 2.50E+06 4 1.09E+07 1.0 0.68E+07 1.7 4.0 50 3.69E+07 28 1.2 2.5 23 3.86E+07 44 1.54E+07 1.79E+06 6.65E+07 1.2 3. Crecimiento de Biomasa durante el proceso de Fermentación D.02E+07 g. Trífida Concentraciones Tiempo (H) 10.0 4 1.60E+06 1. Trífida Concentraciones Tiempo (H) 10.1 19 2.5% 13.3 3. D.61E+06 2.0 0.51E+06 2.

7 12.72 50.82 21.5% 13.5% 15% 1.82 26 63.3 9.5% 13.1 12.57 69.32 4 7.4 12.32 48. ROTUNDATA.5% 15% (H) 10.82 11.22 58.07 78.6 10.32 59.1 15.ANEXO E.82 b.1 12.82 56.7 101 .0 14.37 25 54. Resultados de la Hidrólisis Enzimática Para la D.32 10 18 24 14.02 34.62 53. Comportamiento de Grados Brix durante la Hidrólisis enzimática de D.8 2.2 7.4 11.4 15.5% 13. RESULTADOS PARA LA ESPECIE D.0 11.5% 13.82 70.6 8.32 53.77 67.7 10.82 27 28 66.32 71.9 14.5 1.8 6. Rotundata.07 31.7 Tiempo (H) 0 4 10 18 24 Tiempo (H) 25 26 27 28 15% 13.9 4.92 40. Rotundata.2 8.17 63.4 2.5% 15% 0 2.5 13. α Amilasa AMG Concentraciones Concentraciones Tiempo Tiempo (H) 10.32 67.22 71.62 45.5% 10.0 AMG Concentraciones 10. A continuación se registraron los resultados obtenidos durante la etapa de hidrolisis enzimática y de la fermentación para la especie Dioscorea Rotundata a.3 14.6 11. α Amilasa Concentraciones 10.

c.07 23.72 23 4.47 4.5% 15% 0 67.98 8 4.15 28 31.22 5.34 102 .30 50 2.12 44.04 16.5% 13.82 41.411 4. D.18 51.04 4 4. D.81 23 43.22 51. Rotundata.63 4.41 4.55 4.89 4.87 4 50.5% 15% 0 4.81 33. Rotundata Concentraciones Tiempo (H) 10.84 19 4.58 44 4.66 28 4.32 8 47.76 26.23 d. Descenso de Azucares Reductores durante el proceso de Fermentación de D.72 30. Comportamiento de pH durante el proceso de Fermentación de D.81 4.281 4.7 5.86 19 46.521 4.27 79.92 60.32 70.97 4.32 13.76 44 25. Rotundata.36 4.607 4.421 4.5% 13.29 4.21 4.05 65. Rotundata Concentraciones Tiempo (H) 10.757 4.46 50 4.

Rotundata Concentraciones Tiempo (H) 0 4 8 19 23 28 44 50 10.49E+06 6.35E+06 8. durante el proceso de Fermentación de D.9 14.7 3.5 11.2 12.37E+06 9.00E+06 4 1.2 13.5% 12.2 9.4 9.00E+07 44 1.e.8 12.3 f.0 2.58E+07 23 1.90E+07 28 1. D.6 5.46E+07 103 .06E+07 19 1.5% 13. Crecimiento de Biomasa durante el proceso de Fermentación D.4 14. Rotundata Concentraciones Tiempo (H) 10.2 9.8 8.80E+07 2.58E+07 1.04E+06 8 4.3 7.9 11.41E+07 1.88E+07 2.30E+06 5.10E+06 7.30E+07 1.76E+07 1.5 7.2 1.7 12.95E+07 2.0 15.3 7.10E+07 1.7 8.30E+07 50 1.04E+06 1. Rotundata.2 14.5% 15% 0 1. D.5% 15.4 15% 16.56E+07 1. Descenso de Grados ºBrix Rotundata.60E+07 1.

4 3.4 3.0 2.1 3.9 104 .4 3.0 3.0 4.6 13.0 2. D.0 2.2 3.g.9 4.0 1.7 3.0 2. Rotundata Concentraciones Tiempo (H) 0 4 8 19 23 28 44 50 10.5% 0. Producción de Alcohol durante el proceso de Fermentación de D.2 15% 0.4 4.3 2.4 4.5 2.7 2.0 3.5% 0.6 3. Rotundata.

La lectura se realiza a 575 nm. 0.(Fer.5 g Sulfito de sodio anhidro 0. Pipeta o distribuidor automático Matraz aforado de 100ml o 1000ml Frasco color ámbar Macerador de tejidos Potter Espectrofotómetro para leer a 575 nm Balanza analítica Agitador de tubos (vórtex) Centrifuga Baño de María Baño de Hielo Reactivos Reactivos 1 g Ácido 3. Curva estándar Establecer una escala estándar de 0 a 1mg/cm 3 dentro de una serie de tubos de ensayo introducir: 0.5. 0.P. 105 .8 y 1 cm 3 de la solución estándar y Completar a 1 cm 3 con agua destilada. Ventajas y desventajas: Altas concentraciones de proteínas interfieren en la determinación de los Azúcares reductores.ANEXO F. dinitrosalicilico en presencia del calor se reduce un color amarillo café.2 Fenol 100cm 3 Agua destilada C.6. Además de que es un método sencillo y rápido. Otra desventaja es el costo de los reactivos Principalmente en del ácido 3.5 dinitrosalicílico 1 g Hidróxido de sodio (NaOH) 0. AZUCARES REDUCTORES (METODO DEL DNS) Referencia: MILLER.L.AnalyeChen. 31:426429.2.4. G.B. Interferencias.5 dinitrosalicilico y fenol. Una de las ventajas de este método es que el calor final desarrollado es estable hasta 24 horas. Use of dinitrosalicylieachlreagattforDetermination of reducing sugar. 1959. Pipeta de 5ml. Labo MT205) Fundamento: El ácido 3.. Materiales y equipo Tubos de ensayo con tapa Pipeta de 1ml. 0. 0.

M = pendiente. X = concentración (mg de azúcar/1) b = ordenada al origen.2 800 0 1000 Cálculos Con los valores obtenidos de la curva estándar de D.8 200 0. la pendiente y la ordenada al origen. se hace una regresión lineal.4 0. Reordenando la ecuación (1) en términos de X.6 400 0.99). Sustituir estos valores en la ecuación de la recta: ( ) Dónde: Y = absorbancia.2 0.O. tenemos: ( ) Sustituir las lecturas que se obtengan en la ecuación (2) para conocer X concentración de azúcares.4 600 0. Curva de Calibración 106 .6 0. sacar el coeficiente de correlación (el cual no debe ser menor a 0.Tubo concentracion (Mg de azucar/1) 0 1 2 3 4 5 Muestra 0 0.8 1 Agua destilada ml 1 0 0.

ANEXO G. MÉTODO COLORIMÉTRICO DICROMATO DE POTASIO EVALUACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE ETANOL (Método Colorimétrico de Dicromato de potasio). Para cuantificar la cantidad de etanol producido en la fermentación se realizara aplicando el Método Colorimétrico de Dicromato de Potasio. PROCEDIMIENTO: Se colocan 4 ml de solución oxidante (mezcla formada por 4.165 g de Dicromato de potasio y 250 ml de ácido sulfúrico, aforado con agua destilada a un litro) en tubos de ensayo; luego se adicionan 2 ml de solución saturada de carbonato de potasio gota a gota por las paredes del tubo hasta que cese el burbujeo y agitar por 10 segundos, seguidamente agregan 2 ml de la muestra a analizar, previamente centrifugada a 3000rpm durante 20 minutos y diluida al 5% v/v con agua destilada. Después, todos los tubos se agitan a 1500 rpm durante 10 segundos. Para homogenizar la solución se calienta en un baño de maría termostato a una temperatura ambiente se procede a leer la absorbancia a 440 nm en el espectrofotómetro UV-Vis, se recomienda realizar este procedimiento por duplicado. Los datos obtenidos se deben llevar a una curva patrón que se trazara a partir de estándares de etanol, los cuales se elaboran por medio de una solución patrón de etanol al 1% (7894 ppm) en el rango de 315.76 ppm hasta 1894.56 ppm (hacer por duplicado y sacar promedio) a los que se les aplica el método descrito anteriormente. Con las absorbancias obtenidas de la serie de patrones estimar la ecuación de la recta (coeficiente de determinación R2) y luego hallar las diferentes concentraciones.

107

ANEXO H. ANÁLISIS DE VARIANZA PRUEBA ANOVA SIMPLE Análisis Estadístico para el alcohol producido D. Rotundata Este procedimiento realiza un análisis de la varianza simple para Alcohol. Realiza varios test y gráficos para comparar los valores medios de Alcohol para los 3 diferentes niveles de Concentraciones. El F-test en la tabla de ANOVA comprobará si hay alguna diferencia significativa entre las medias. Si hay, los Test de Rangos Múltiples le indicarán las medias que son significativamente diferentes unas de otras. Si le preocupa la presencia de valores atípicos, puede elegir el test Kruskal-Wallis que compara las medianas en lugar de las medias. Los diferentes gráficos le ayudarán a juzgar la significación práctica de los resultados, y le permitirán buscar las posibles violaciones a las asunciones subyacentes en el análisis de la varianza.

Resumen Estadístico para Alcohol

Esta tabla muestra los datos estadísticos de Alcohol para cada uno de los 3 niveles de Concentraciones. El análisis de la varianza simple está pensado principalmente para comparar las medias de los diferentes niveles, listados aquí bajo la columna Media. .

108

Tabla ANOVA para Alcohol según Concentraciones

La tabla ANOVA descompone la varianza de Alcohol en dos componentes: un componente entre grupos y un componente dentro de los grupos. El F-ratio, que en este caso es igual a 0,755223, es el cociente de la estimación entre grupos y la estimación dentro de los grupos. Puesto que el p-valor del test F es superior o igual a 0,05,no hay diferencia estadísticamente significativa entre las medias de alcohol de un nivel de Concentraciones a otro para un 95,0%. Grafica 23.Gráfico de dispersión para D. Rotundata

109

Grafica 24. Gráfico de cajas y bigotes para D. Rotundata

Análisis Estadístico para el alcohol producido D. Alata Este procedimiento realiza un análisis de la varianza simple para Alcohol. Realiza varios test y gráficos para comparar los valores medios de Alcohol para los 3 diferentes niveles de Concentración. El F-test en la tabla de ANOVA comprobará si hay alguna diferencia significativa entre las medias. Si hay, los Test de Rangos Múltiples le indicarán las medias que son significativamente diferentes unas de otras. Si le preocupa la presencia de valores atípicos, puede elegir el test KruskalWallis que compara las medianas en lugar de las medias. Los diferentes gráficos le ayudarán a juzgar la significación práctica de los resultados, y le permitirán buscar las posibles violaciones a las asunciones subyacentes en el análisis de la varianza.

110

que en este caso es igual a 0.Resumen Estadístico para Alcohol producido ñame D. Tabla ANOVA para Alcohol según Concentración. La tabla ANOVA descompone la varianza de Alcohol en dos componentes: un componente entre grupos y un componente dentro de los grupos.283889. 111 . Alata Esta tabla muestra los datos estadísticos de Alcohol para cada uno de los 3 niveles de Concentración. es el cociente de la estimación entre grupos y la estimación dentro de los grupos.0%. El análisis de la varianza simple está pensado principalmente para comparar las medias de los diferentes niveles. El F-ratio.05. listados aquí bajo la columna Media.no hay diferencia estadísticamente significativa entre las medias de alcohol de un nivel de Concentración a otro para un 95. Puesto que el p-valor del test F es superior o igual a 0.

Gráfico de cajas y bigotes para D. Grafica 27. Gráfico de dispersión para D. Alata. Alata 112 .Grafica 26.

Si le preocupa la presencia de valores atípicos. 113 . Trífida. Resumen Estadístico para Alcohol producido ñame D. los Test de Rangos Múltiples le indicarán las medias que son significativamente diferentes unas de otras. El análisis de la varianza simple está pensado principalmente para comparar las medias de los diferentes niveles. Este procedimiento realiza un análisis de la varianza simple para Alcohol.Análisis Estadístico para el alcohol producido D. El F-test en la tabla de ANOVA comprobará si hay alguna diferencia significativa entre las medias. Si hay. Esta tabla muestra varios estadísticos de Alcohol para cada uno delos 3 niveles de Concentraciones. puede elegir el test Kruskal-Wallis que compara las medianas en lugar de las medias. Trífida. Realiza varios test y gráficos para comparar los valores medios de Alcohol para los 3 diferentes niveles de Concentraciones.

05. Grafica 29. Trífida. El F-ratio. Puesto que el p-valor del test F es superior o igual a 0. es el cociente de la estimación entre grupos y la estimación dentro de los grupos.0%. que en este caso es igual a 0.Tabla ANOVA para el etanol según las concentraciones La tabla ANOVA descompone la varianza de Alcohol en dos componentes: un componente entre grupos y un componente dentro de los grupos. Gráfico de dispersión para D.no hay diferencia estadísticamente significativa entre las medias de alcohol de un nivel de Concentraciones a otro para un 95. 114 .0705905.

Trífida 115 . Gráfico de cajas y bigotes para D.Grafica 30.

463 .7308 Superior -6.983 Prueba T Estadísticos para una muestra Desviación típ.156 .83250 Inferior -8. (bilateral) a La distribución de contraste es la Normal.ANEXO H. PRUEBAS NO PARAMETRICAS Y PRUEBA T DE STUDENT.9342 116 . 1.000 Diferencia de medias -7.164 -. ALATA 10.37989 N etanol 8 Media 2. b Se han calculado a partir de los datos. 8 2. A continuación se encuentran reportada las pruebas de no paramétricas y la prueba T de Student en donde se comprueba que en todas se acepta la Hipótesis alternativa.1675 Prueba para una muestra Valor de prueba = 10 95% Intervalo de confianza para la diferencia t etanol -20. asintót.07449 .164 . Dioscorea. (bilateral) .618 gl 7 Sig. de la media .5% Pruebas no paramétricas Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra Etanol N Media Parámetros normales(a.1675 1.07449 Error típ.b) Diferencias más extremas Desviación típica Absoluta Positiva Negativa Z de Kolmogorov-Smirnov Sig.

163 .163 .984 N Prueba T Estadísticos para una muestra Desviación típ.122 -. b Se han calculado a partir de los datos. 1.0883 Superior -6.8092 etanol 117 .0513 Prueba para una muestra Valor de prueba = 10 95% Intervalo de confianza para la diferencia t -16.36307 Error típ.b) Diferencias más extremas Desviación típica Absoluta Positiva Negativa Z de Kolmogorov-Smirnov Sig.0513 1. de la media . asintót.48192 etanol N 8 Media 2.494 gl 7 Sig. (bilateral) .5% Pruebas no paramétricas Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra etanol 8 Media Parámetros normales(a. 2. (bilateral) a La distribución de contraste es la Normal.36307 .000 Diferencia de medias -7.460 .94875 Inferior -9.D. ALATA 13.

20983 Error típ. asintót. 1.2648 etanol 118 .2877 Superior -7. (bilateral) .165 .7238 Prueba para una muestra Valor de prueba = 10 95% Intervalo de confianza para la diferencia t -19.b) Diferencias más extremas Desviación típica Absoluta Positiva Negativa Z de Kolmogorov-Smirnov Sig.981 N Prueba T Estadísticos para una muestra Desviación típ. b Se han calculado a partir de los datos.20983 .42774 etanol N 8 Media 1.27625 Inferior -9.000 Diferencia de medias -8.143 -.165 .D.467 . ALATA 15% Pruebas no paramétricas Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra etanol 8 Media Parámetros normales(a. (bilateral) a La distribución de contraste es la Normal. de la media .7238 1. 1.349 gl 7 Sig.

1362 119 .2638 Superior -7. 1. 1.D. TRÍFIDA 10.343 1.27250 Error típ.44990 Etanol N 8 Media 1.b) Diferencias más extremas Desviación típica Absoluta Positiva Negativa Z de Kolmogorov-Smirnov Sig.121 . b Se han calculado a partir de los datos. (bilateral) a La distribución de contraste es la Normal.8000 1.109 -. asintót.121 .27250 .226 gl 7 Sig.000 N Prueba T Estadísticos para una muestra Desviación típ. (bilateral) .000 Diferencia de medias -8.8000 Prueba para una muestra Valor de prueba = 10 95% Intervalo de confianza para la diferencia t Etanol -18.5% Pruebas no paramétricas Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra Etanol 8 Media Parámetros normales(a.20000 Inferior -9. de la media .

2078 Superior -6.5% Pruebas no paramétricas Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra Etanol 8 Media Parámetros normales(a.107 .D.95375 Inferior -9.000 N Prueba T Estadísticos para una muestra Desviación típ.b) Diferencias más extremas Desviación típica Absoluta Positiva Negativa Z de Kolmogorov-Smirnov Sig. asintót. (bilateral) a La distribución de contraste es la Normal. (bilateral) .997 gl 7 Sig.0463 1. b Se han calculado a partir de los datos.6997 120 . TRÍFIDA 13. 2.301 1.50003 .000 Diferencia de medias -7.0463 Prueba para una muestra Valor de prueba = 10 95% Intervalo de confianza para la diferencia t Etanol -14. de la media .095 .50003 Error típ. 1.53034 Etanol N 8 Media 2.107 -.

116 -.1591 Superior -7.43787 N Etanol 8 Media 1.0884 121 .23848 .b) Diferencias más extremas Desviación típica Absoluta Positiva Negativa Z de Kolmogorov-Smirnov Sig.D.553 gl 7 Sig.8763 Prueba para una muestra Valor de prueba = 10 95% Intervalo de confianza para la diferencia t Etanol -18. b Se han calculado a partir de los datos.157 .8763 1. de la media . 1.443 . TRÍFIDA 15% Pruebas no paramétricas Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra Etanol 8 Media Parámetros normales(a. asintót.000 Diferencia de medias -8. (bilateral) a La distribución de contraste es la Normal.157 .23848 Error típ. 1. (bilateral) .989 N Prueba T Estadísticos para una muestra Desviación típ.12375 Inferior -9.

ROTUNDATA 10. (bilateral) a La distribución de contraste es la Normal.3494 Superior -7.5% Pruebas no paramétricas Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra Etanol 8 Media Parámetros normales(a.16104 .6213 1.412 gl 7 Sig.4081 122 . asintót.16104 Error típ.D.6213 Prueba para una muestra Valor de prueba = 10 95% Intervalo de confianza para la diferencia t Etanol -20.131 .844 N Prueba T Estadísticos para una muestra Desviación típ.37875 Inferior -9.615 .b) Diferencias más extremas Desviación típica Absoluta Positiva Negativa Z de Kolmogorov-Smirnov Sig.217 . (bilateral) . 1. de la media .217 -.41049 Etanol N 8 Media 1.000 Diferencia de medias -8. 1. b Se han calculado a partir de los datos.

9050 Prueba para una muestra Valor de prueba = 10 95% Intervalo de confianza para la diferencia t Etanol -17.09500 Inferior -9. ROTUNDATA 13.000 N Prueba T Estadísticos para una muestra Desviación típ.32571 Error típ. de la media . (bilateral) a La distribución de contraste es la Normal.46871 Etanol N 8 Media 1. asintót.D.119 .123 . 1.9867 123 .32571 .5% Pruebas no paramétricas Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra Etanol 8 Media Parámetros normales(a. 1.123 -. b Se han calculado a partir de los datos.9050 1.348 1.271 gl 7 Sig. (bilateral) .2033 Superior -6.b) Diferencias más extremas Desviación típica Absoluta Positiva Negativa Z de Kolmogorov-Smirnov Sig.000 Diferencia de medias -8.

8226 Superior -6.092 .079 -.57000 Inferior -8. asintót.D. 1. (bilateral) a La distribución de contraste es la Normal.290 gl 7 Sig. ROTUNDATA 15% Pruebas no paramétricas Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra Etanol 8 Media Parámetros normales(a. de la media . (bilateral) .49834 .4300 1.52974 Etanol N 8 Media 2.49834 Error típ.000 N Prueba T Estadísticos para una muestra Desviación típ.b) Diferencias más extremas Desviación típica Absoluta Positiva Negativa Z de Kolmogorov-Smirnov Sig.3174 124 . b Se han calculado a partir de los datos.4300 Prueba para una muestra Valor de prueba = 10 95% Intervalo de confianza para la diferencia t Etanol -14. 2.092 .000 Diferencia de medias -7.260 1.

Estimación de costos de proyecto FUENTES DE FINANCIACIÓN Recursos propio Recursos propio Recursos propio Recursos propio Recursos propio Recursos propio Recursos propio Recursos propio Recursos propio Recursos propio RUBROS Kg D. Diamante Kg D. Trífida Ñ. Rotundata Ñ. Espino Reactivos Gasa Estéril Jeringas de 10 ml Cinta de Enmascarar Algodón Venoclisis de Macrogoteo Tubos Cónico con tapa COSTO TOTAL Fuente: los autores del proyecto COSTOS 4800 5400 7200 724000 12000 10000 10000 3000 25000 44080 845480 Al observar los costos presentados en la tabla anterior. 125 .ANEXO I. debido a que los costos de estas enzimas comercialmente son bastante elevados y la siembra de células supone costos más bajos por los requerimientos del cultivo. Baboso Kg D.ESTIMACIÓN DE COSTOS El estudio fue realizado a escala de laboratorio y a continuación en la tabla 13 se presentan los costos de los reactivos y materiales. Tabla 13. alfa amilasa y glucoamilasa. Alata Ñ. se puede realizar una proyección a escala industrial ya que los costos de materia prima no son tan elevados lo cual puede sustentar viabilidad para proyectos futuros. claro está que se propone como alternativa la siembra de células productoras de las enzimas.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful