INTRODUCCIN

Conocer de manera cualitativa directo del cultivo que gnero bacteriano puede ser, adems los cultivos tienen sustancias nutritivas pero tambin indicadores (que maneja un pH) con el que ayuda a reconocer los gneros que crecen en dichos cultivos. Cuando las bacterias crecen en la superficie de un medio nutritivo solidificado con agar o gelatina, las clulas que proliferan quedan prcticamente en posicin fija y forman masas de millones y millones de clulas observables a simple vista. Las colonias as formadas tienen dimensiones desde las mnimas apenas visibles hasta masas de varios milmetros de dimetro. Presentan caractersticas no solo de volumen sino tambin de forma y textura, y en algunos casos de color que, si bien hasta cierto punto depende de la naturaleza del medios de cultivo y de las condiciones de incubacin, en circunstancias establecidas son constantes y muchas veces de gran valor diferencial. La morfologa de las colonias constituye una de las caractersticas morfolgicas de las bacterias indispensables para su aislamiento. La dimensin de las colonias bacterianas es muy uniforme para cada especie o tipo. La forma de la colonia depende de su borde y de su espesor. El borde puede ser liso o irregular, y aserrado en mayor o menor grado. Cuando el espesor es mucho mayor en el centro y disminuye uniformemente hacia el borde, se dice que la colonia es elevada, en ocasiones tanto que casi tiene forma hemiesfrica o puede ser uniforme. La consistencia y la textura de la masa de clulas tambin son caractersticas disitintivas de la morfologa colonial. La pigmentacin es ms frecuente en las bacterias saprofitas, y la masa celular puede tener color rojo, anaranjado, amarillo, etc., por la presencia de pigmentos carotinoides y es verde en caso de algunas bacterias fotosintticas que contienen bacterioclorina. Como estas caractersticas ocurren en grados y combinaciones variables segn los tipos de bacteria, el aspecto de la colonia muchas veces es plenamente caracterstico y pueden distinguirse tipos de bacterias entre s en cultivos mixtos o contaminados. Sin embargo, la diferenciacin por la morfologa de las colonias no solo ha sido provisional; se necesita un estudio detallado de la fisiologa y las caractersticas inmunolgicas de una bacteria para identificarlos.

CULTIVO DE HONGOS
Introduccin

La rama de la microbiologa que estudia los hongos (reino Fungi) se conoce como la micologa. Los hongos se clasifican en 4 grupos principales a base de su modo de reproduccin sexual: 1. Las esporas reproductivas son externas y descubiertas. Ascomycetes: levaduras (yeast) y mohos. Poseen esporas llamadas ascoesporas. Estas se producen en sacos llamados ascos. 3. como basidioesporas en estructuras llamadas basidios. 4. no tienen Deuteromycetes: Tambin llamados hongos imperfectos porque fase reproductive sexual. Los hongos son organismos heterotrficos, eucariotas capaces de metabolizar gran variedad de sustratos orgnicos. Los hongos pueden ser de gran beneficio as como tambin perjudiciales al ser humano. Aquellos que habitan en el suelo ayudan a descomponer plantas y animales muertos, manteniendo frtil el terreno. Los hongos que llevan a cabo fermentacin son de gran importancia industrial. La industria de la cerveza, el vino, los quesos, los antibiticos, las enzimas, la repostera, dependen de los hongos. Algunas actividades detrimentales de los hongos son por ejemplo: el moho que le d a las frutas , vegetales y granos, el dao a los alimentos en general. Algunas especies son capaces de producir drogas como toxinas y halucingenos. Algunas especies pueden causar enfermedades al hombre, ejemplo de stos son las micosis superficiales (en piel, pelo y uas) y las micosis sistmicas (en pulmones, sistema nervioso, genitales). Basidiomycetes: setas. Forman esporas reproductivas conocidas Phycomycetes: mohos (molds) del agua, del pan y trerrestres.

2. sexuales

La asociacin entre la densidad de hongos y las descargas orgnicas a cuerpos de agua o en el suelo, sugieren que los hongos pueden ser indicadores de contaminacin. Desafortunadamente no se han identificado especies o grupos de hongos importantes en este rol. Algunas especies de levaduras y hongos filamentosos son caractersticos de aguas calientes y pueden ser indicadores tiles de contaminacin termal. La identificacin de hongos es dependiente de la morfologa (forma) de las colonias cuando se crecen en medio slido, as como su crecimiento y morfologa de estructuras reproductivas. Para la identificacin de las levaduras es importante la actividad fisiolgica en cultivos en el laboratorio.

Mtodo:

Muestras: 1. envases forma 2. de 24 horas de se recoleccin el campo. Si el anlisis no se comienza prontamente, se debern refrigerar. derecha y deben descartarse luego de su uso. Almacenamiento: las muestras deben ser procesadas no ms tarde Envases: las muestras de agua o suelo se debe coleccionar en estrilizados con tapas. El transporte de los envases debe ser de

Medios de Cultivo: Es donde se ponen a crecer los hongos. Se pueden usa los siguientes medios: Agar Sabouraud Agar Neopeptone-glucose-rose Bengal-aureomycin Agar Czapek (para Aspergillus, penicillium y hongos relacionedos Agar Yeast extract-malt extract-glucose Agar Diamalt (para levaduras)

Preparacin y diluciones:

Una vez recolectada las muestras en el campo se deben hacer diluciones de las mismas antes de sembrar en placas. Cuando se procesan muestras de agua de quebradas se deber hacer diluciones de 1/10 de la muestra original. Para muestras de agua con gran material orgnico se debern hacer diluciones de 1/100 o 1/1,000. Para muestras de suelo, utilizar diluciones de 1/1,000 o 1/10,000. Para realizar diluciones de las muestras se deber usar agua esteril y toda la cristalera tambin esteriles. Cultivo en placas: Preparar placas para cada dilucin a ser examinada. Transferir 10 ml de medio a 45 0C a placas petri de 9 cm. Aadir 1 ml de la muestra diluda y mezclar mediante rotacin de la placa. Solidificar el agar lo ms rpido possible. Tapar de inmediato las placas para evitar contaminacin. Incubacin: Incubar las placas sin invertirlas a temperatura de saln (20-240C) en luz, pero evitar que sea directa. Examinar y contar las colonias en las placas luego de 3, 5 y 7 das. Conteo e inventario: El conteo de hongos en una placa proveer la base para comparaciones cuantitativas entre muestras tomadas en distintas localidades. El inventario nos hablar de la abundancia de especies de hongos en la zona. Descartar placas con ms de 300 colonias. Se puede calcular el nmero de hongos por volmen de agua en las muestras y as comparar varios sitios muestreados. # de hongos/ ml de muestra = suma del nmero de colonias en las 5 placas X dilucin de una misma dilucin Para realizar un inventario se deber utilizar el microscopio para ver morfologa y estructuras reproductivas que ayuden en la clasificacin de las especies.

Referencias: Laboratory Exercices in Microbiology, R. A. Pollack. 2002 John Wiley & sons, Inc J.G. y N. Sherman.1992. Microbiology a Laboratory Manual 3ra edicin Cappuccino Benjamin/Cummings Inc. A.E. Greenberg, L.S. Clesceri y A. D. Eaton 1992. Standard Methods for Examination of Water and Wastewater 18th edicin

Mtodos para el cultivo de Hongos.

Mtodos de cultivo y descripcin morfolgica de hongos microscpicos

MICROBIOLOGA
Yo eleg esta materia porque aprend a: Conocer las tcnicas de cultivo y manipulacin de diferentes tipos de hongos microscpicos, as como. Las principales caractersticas morfolgicas de dichos microorganismos. Para lograr identificarlos llevamos a cabo un procedimiento que es inocular los diferentes hongos desarrollados en los alimentos en descomposicin (tortilla con moho) en cajas de Petri con medio de cultivo Papa Dextrosa Agar (PDA), que es un medio complejo. Para la siembra de los hongos filamentosos que en este caso es el de la tortilla con moho y la segunda muestra que son las levaduras (pulque) se realizara lo siguiente: Siembra de hongos 1. se deber separar una parte de micelio de los tubos de cultivo con aguja de diseccin, previamente calentada en la flama del mechero y enfriada.

2. Colocar el micelio en el centro de una caja de Petri con PDA. 3. Las levaduras se inocularn por estra cruzada sobre la superficie de las cajas, en forma similar a la inoculacin de bacterias. 4. Colocar las cajas envueltas en papel o en bolsa de plstico en forma invertida dentro de una incubadora a 28-30 C durante 3-5 das.

Posteriormente: para la Descripcin macroscpica de levaduras y mohos: Hacer la descripcin de la forma, tamao, aspecto, textura y color de las colonias de Saccharomyces sp. Descripcin microscpica de levaduras: 1. De las colonias de levaduras preparar un frotis fijado al calor y teirlo con azul de metileno. 2. Hacer observaciones al microscopio con objetivo de 40X y 100X.

OPINION:

Yo opino que es de gran importancia saber identificar un hongo microscpico de un macroscpico ya que algunos hongos pueden ser patgenos hoy en da existen 1.5 millones de especies de hongos, de las cules se han descrito ms de 250 000 y de stas solo se conocen 150 especies patgenas para el hombre y otras tantas para plantas y animales.

Tambin es de gran importancia por que Establecen asociacin simbitica con muchas plantas, benficas para el hombre,A si como realiza sntesis de antibiticos, procesos de fermentacin.
Visualizacin, cultivo e identificacin de los hongos - EXAMEN MICROSCPICO.- El exmen microscpico de los hongos en las muesras clnicas o de los cltivos se efecta previa tincin o directamente en fresco. Los hongos se observan en nuestras clnicas tedas con la tincin de Gram como grampositivos. Tambin se visualizan bien contrastando las muestras con una gota de azul de lactofenol. En productos fluidos en los que se sospecha la existencia de levaduras capsuladas, como el criptococo, puede depositarse en el prota una gota de material, y aadir una gota de tinta china, lo que permite observar la levadura con la cpsula. Muchas veces el examen microscpico de las micosis de los tejidos y rganos profundos se hace por tcnicas histolgicas a partir de biopsias. La hematoxilina-eosina se til para examinar las lesiones inflamatorias que, en ciertas ocasiones, orientan el diagnstico, pero no permite la deteccin de elementos fngicos, que se tien mal por esta tcnica. La tincin de PAS colorea

intensamente la pared polisacrida de los hongos y permite na deteccin rpda de los elementos fngicos en los tejidos. Las tinciones argnticas permiten igualmente reconocer los elementos fngicos ya que la pared se tie en negro. En los tejidos de los hongos pueden observarse como levaduras aisladas, o como filamentos ramificados infiltrantes. - CULTIVO.- Los hongos crecen bien en medios artificiales y tienen requerimientos nutritivos simples, una fuente de carbono orgnicco, generalmente azcar, y de nitrgeno suelen ser los elementos suficientes para obtener un buen crecimiento. Junto a ellos, un soporte slido, el agar, permite a los hongos filamentosos el desarrollo del micelo areo, donde se localizan las estructuras resproductoras y el desarrollo de colonias en el caso de las levaduras. El medio de cultivo ms utilizado para los hongos es el medio de Saouraudm que rene estas caractersticas y un pH de 5,6, que dificulta el crecimiento bacteriano. No es cierto que los hongos requieran necesariamente para su crecimiento ser cultivados en el medio de Saboureaud, la mayro parte de medios de cultivo utilizados en basteriologa permiten su desarrollo, pero su utilizacin est consagrada por la costumbre. De hecho, la mayora de las descripciones de crecimiento y caractersticas morfolgicas de las colonias fngicas se han hecho sobre el medio Saboureaud. La adicin al medio de antibiticos como el cloranfenicol o la gentamicina,, que inhiben el crecimiento bacterias contaminantes, o antifngicos especiales (como la actidiona o cilohexamida) que inhiben el crecimiento de uchos hongos no patgenos, transforman al medio de Sabouraud en un medio ms selectivo. Los medios de cultivo espus de sembrados, se incuban en aerobiosis y la temperatura ptima suele ser 25-30 C para los que preducen infecciones prefundas. Los hongos levaduriformes dan lugar en 24-48 horas a colonias de aspecto y morfolog similar a las basterias. El desarrollo de las colonias de os hongos filamentosos es mucho ms variable; algunos crecen muy lentamente, pero sus colonias son muy caractersticas y en general se diferencian fcilmente de las levaduras.

Medio de cultivo Sabouraud. Medios para aislamientos especiales: Medio de patata: T.rubrum Aadiendo zanahoria y bilis (Cndida albicans) o glucosa (Tricophyton rubrum). Medio de arroz: Microsporum auduinii Medio Czapek: Aspergillus spp. Medio de alpiste: Criptococcus neoformans. Medio Chromagar Candida: Cndida spp. - IDENTIFICACIN.- Un hongo se identifica en primer lugar por la morfologa macroscpica de la colonia, color, textura y velocidad de crecimiento. Para observar la estrucutra microscpica puede tomarse un pequeo fragmento de cultivo y montarlo entre cubre y porta, en fresco o contrastado

con un colorante para su posterior observacin, lo que permitir confirmar la sospecha de hongo levaduriforme o filamentoso basada en la morfologa colonial. Los hongos filamentososo se identifican a nivel de gnero especie por la morfologa del micielo, pero sobre todo por las caractersticas microscpicas de sus esporas asexuadas y los elementos que las originan. Para conseguir la produccin de esporas a veces se requieren medios de cultivo especiales que facilitan la esporulacin. Las estructura repoductivas asexuadas (conidioforos) son muy friles y para poder observarlas al microscopio sin distorsionarlas o destruirlas se emplean tcnicas especiales (microcultivo). Los hongos no esporulados (micelio estril) son difcilmente identificables. Los hongos levaduriformes se identifican mediante pruebas metablicas, de modo semejante a las bacterias. Medidas de crecimiento de hongos Medidas directas Medida directa de crecimiento del ratio Medidas microscopicas Peso seco Turbidometria Medidas indirectas Actividad metablica Medicin de exoenzimas Contenido de ATP Componentes de biomasa Requerimientos fsicos para el crecimiento de los hongos Temperatura, en su mayora crecen bien entre 15-30C Humedad Aireacin, en su mayoria son aerobios es decir necesitan aire pH, la mayora crecen bien a pH neutros y cidos. Luz, incide en la velocidad de crecimiento. Nutrientes (carbono, nitrgeno, vitaminas, oligoelementos, ...). Antigenos fngicos La composicion antignica de los hongos es compleja y vara segn la estructura anatmica considerada (levadura, hifa, espora) y el resultado metablico. En algn caso los antgenos principales de los hongos han sido purificados y caracterizados tanto en su composicin qumica como en su localizacin celular, pero en otros casos se trabaja con extractos antignicos ms o menos purificados, cuya composicin precisa se desconoce. Estos extractos antignicos pueden ser celulares o metablicos, en este ltimo caso son productos celulares segregados al medio de cultivo. En el criptococcus el antgeno ms studiado es el capsular, d estrucuctura polisacardica. Su deteccin en los lquidos orgnicos constituye un mtodo de diagnstico de la infeccin. La mayora de los antgenos fngicos se localizan en la pared, siendo principalmente mananos y protenas estructurales. La complejidad antignica de los hongos, puede documentarse en el estudio de Aspergillus. Sus antgenos son muy vriados y los extractos celulares enfrentados a sueros de paciente infectads pueden mostrar ms de 52 bandas antignicas diferentes reconocidas por el suero inmune. Algunos antgenos, como el polisacrido capsular del criptococcus, algunos de Candida e incluso de aspergilos, se han purificado y obtenido anticuepros especficos (monoclonales) que han permitido su caracterizacin precisa. Tambin han sido muy estdiados los antgenos de otros hongos patgenos para el hombre como los de histoplasma, coccidioides y otros.

Especial inters poseen los antgenos de los dermatofitos que son utilizados en pruebas cutneas para evaluar la respuesta inmune celular de un paciente. Caractersticas diagnsticas de laboratorio Cultivo en un medio complejo (agar de Sabouraud) Color del micelio, caracterstico de las colonias Tipo de hifas, septadas y no septadas. Estructuras reproductoras Test inmunolgicos Test bioqumicos, utilizando azcares o complejos nitrogenados. - Auxonograma (patrn de utilizacin de hidratos de carbono). - Zimograma (patrn de fermentacin de hidratos de carbono). Test de identificacin gentica, basados en la tecnologa del ADN

PATOLOGIA CAUSADA POR HONGOS Capacidad patognica de los hongos:

o o o

Micetismo: Afeccin causada por la ingestin de hongos, por ejemplo Amarita phalloides, Claviceps purprea. Micotoxicosis: Patologa que deriva de la ingestin de alimentos contaminados con metabolitos txicos Granos de maz con aflotoxinas (Asprgillus) Patulinas (penicillinum) Trichotecenos (Fusarium) Alergia: Cuadro producido por accin de hipersensibilidad frente a hongo, como el Aspergillus que casua rinitis alrgicas y asma. Infecciones: Se da en hospedadores que le permitan al hongo colonizar y/o diseminarse por el organismo.

Las micosis son las infecciones causadas por hongos. Se pueden clasificar en:

Micosis superficiales: Son infecciones superficiales por hongos de la piel o del cabello. No se invade el tejido vivo y no hay respuesta celular del husped. No hay cambios patolgicos. Estas infecciones son a menudo tan inocuas que los pacientes no son conscientes de ellas. Ejemplo:

pitiriasis versicolor, dermatitis seborrica y la caspa, incluyendo folicular rosada: Malassezia furfur (una levadura lipoflica)

Micosis cutneas: Son infecciones superficiales por hongos de la piel, cabello o uas. No se

invaden los tejidos vivos, sin embargo, una variedad de cambios patolgicos se producen en el hospedador debido a la presencia del agente infeccioso y sus productos metablicos. Ejemplos

Dermatofitosis(tia del cuero cabelludo): Dermatofitos (Microsporum,Trichophyton, Epidermophyton) Candidiasis de la piel, membranas mucosas y uas: Candida albicans y especies afines.

Micosis subcutneas: Son infecciones crnicas localizadas de la piel y el tejido subcutneo tras una implantacin traumtica del agente etiolgico. Los hongos causantes son saprfitos del suelo cuya capacidad para adaptarse al entorno provocan patologa extremadamente variable. Ejemplos:

Esporotricosis: Sporothrix schenckii

Micosis sistmicas o profundas: Son infecciones en los rganos o tejidos internos,causadas por hongos patgenos dimrficos que pueden combatir a las defensas del husped humano normal cambiando su forma morfolgica. Son geogrficamente limitadas y el sitio principal de infeccin es generalmente pulmonar, producido por la inhalacin de las conidias . Ejemplos:

Histoplasmosis: Histoplasma capsulatum Blastomicosis: Blastomyces dermatitidis

Micosis oportunistas: S on infecciones que se producen casi exclusivamente en p acientes con la inmunidad alterada. Los organismos involucrados son hongos con una virulencia muy baja. Ejemplos * Candidiasis: Candida albicans y especies relacionadas

Criptococosis:Cryptococcus neoformans

* Aspergilosis: Aspergullus fumigatus

Patologa causada por micotoxinas: Las micotoxinas son compuestos txicos producidos por los hongos, que se acumulan en alimentos contaminados.

Amatoxinas, Aflatoxinas