Captulo 13

REPLICACIN DEL ADN

La reproduccin necesita la correcta y precisa transmisin de la informacin gentica de padres a hijos, por lo que resulta imprescindible la previa replicacin o duplicacin del ADN geonmico. La replicacin del ADN es un mecanismo que tiene las siguientes caractersticas: Semiconservativa En Horquillas Bidireccional Discontinua Mltiples puntos de origen (en eucariontes)

La Replicacin del ADN es semiconservativa, porque cada hebra de la molcula original sirve como molde para la sntesis de una nueva hebra hija complementaria. Ambas molculas hijas son idnticas entre s y, a su vez, idnticas a la original.

El experimento de Meselson y Stahl en Escherichia coli permiti demostrar que la replicacin es semiconservativa.

La principal enzima implicada es la ADN polimerasa.

Cataliza la unin de los

desoxirribonucletidos para formar as las cadenas de ADN en crecimiento. Hay varios tipos de ADN polimerasas con funciones distintas en la replicacin y reparacin del ADN.

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Todas las ADN polimerasas comparten dos propiedades: Sintetizan ADN solamente en direccin 5 3, agregando nucletidos al oxhidrilo 3 libre (3'-OH), el punto a partir del cual se produce la elongacin del ADN. Agregan un nuevo nucletido solamente a una hebra con un cebador o iniciador formado previamente, unido por puentes de hidrgeno a la hebra molde.

La ADN polimerasa aade nucletidos al OH del carbono 3 de un cebador preexistente. ste puede ser un ARN cebador o primer o, tambin, un fragmento de ADN.

Este proceso se puede resumir en forma de ecuacin qumica: (ADN)n + dNTP (ADN)n+1 + PPi donde ADNn es la cadena que se est sintetizando, dNTP es un dinucletido trifosfato y PPi es el pirofosfato desprendido (dos grupos fosfato). La replicacin del ADN en eucariontes y procariontes comienza en una secuencia especfica denominada origen de replicacin que sirve como sitio especfico de unin para las protenas que inician el proceso de replicacin. En procariontes hay un nico origen de replicacin mientras que en eucariontes hay mltiples. A partir del punto de origen se forma una horquilla o burbuja de replicacin. Una vez formada la horquilla, se sintetiza el ARN cebador y luego la ADN polimerasa comienza a catalizar la formacin de las nuevas cadenas. Una de ellas es la conductora o lder, y es continua. La otra es la tarda o rezagada y es discontinua: se forma a partir de segmentos llamados Fragmentos de Okasaki.

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La sntesis de ADN se realiza en sentido 5 3 en ambas cadenas, pero la cadena conductora es continua mientras que la tarda es discontinua ya que est formada por los fragmentos de Okasaki.

La replicacin fue estudiada primero en procariontes y se observ que ocurre en tres etapas: 1. Desenrrollamiento y apertura de la doble hlice. en el punto de origen. Intervienen un grupo de enzimas y protenas, a cuyo conjunto se denomina replisoma * Helicasas: catalizan la ruptura de los puentes de hidrgeno entre bases complementarias, por lo que se separan las cadenas. * Girasas y Topoisomerasas: eliminan la tensin generada por la torsin en el desenrrollamiento. Las protenas SSBP que se unen a las hebras molde para que no vuelva a enrollarse. 2. Las ADN polimerasas sintetizan las nuevas hebras en sentido 5 lectura se hace en el sentido 3 5. Las protenas que intervienen son: 3, por lo que la

* ADN polimeras I y III: realizan la replicacin y la correccin de errores. La que cataliza la mayor parte de la sntesis es la ADN polimerasa III. * ADN polimerasa II: corrige daos causados por agentes fsicos. La cadena 3 5 es leda por la ADN polimerasa III y se sintetiza la cadena conductora.

La cadena 5 3 no puede ser leda directamente, por esto, la cadena tarda se sintetiza

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en pequeos fragmentos llamados fragmentos de Okasaki, que crecen en el sentido 5 3 y que ms tarde se unen. Esta sntesis es ms lenta. La ADN polimerasa III es incapaz de iniciar la sntesis por s sola, para esto necesita un cebador (ARN) que es sintetizado por la ARN polimerasa primasa. Este cebador es eliminado posteriormente por las la ADN polimerasa I que corta el cebador (actividad exonucleasa) y lo reemplaza por ADN. 3. Correccin de errores: la enzima principal en la funcin correctora es la ADN polimerasa III, que corrige todos los errores cometidos en la replicacin o duplicacin. Tambin intervienen otras enzimas como: * Endonucleasas: cortan segmentos errneos * ADN polimerasas I : rellenan correctamente el espacio * ADN ligasas : unen los extremos corregidos En eucariontes, la replicacin es similar a la de los procariontes: semiconservativa y bidireccional, con una hebra conductora y una hebra retardada, y con fragmentos de Okasaki. Se inicia en varias burbujas de replicacin (puede haber unas 100 a la vez). Intervienen enzimas similares a las que actan en las clulas procariontes y otras enzimas que han de duplicar las histonas que forman parte de los nucleosomas. Los nucleosomas viejos permanecen en la hebra conductora. Como las ADN polimerasas solamente extienden los cebadores en direccin 5 3, no pueden copiar los extremos 5, que son los telmeros. Hay entonces mecanismos especiales para replicar esas secuencias a cargo de la enzima telomerasa, enzima descubierta por Carol W. Greider, en 1984. Agrega secuencias repetitivas especficas de ADN (TTAGGG en todos los vertebrados), al extremo 3 de las regiones del telmero. Es un transcriptasa inversa, ya que lleva su propia molcula del ARN en el sitio activo y la utiliza como molde para alargar los telmeros, que se acortan despus de cada ciclo de replicacin. - Los telmeros se copian solo mediante accin de la Telomerasa - En clulas normales de adultos, existe un nmero determinado de replicaciones en las que interviene la Telomerasa. - En clulas cancerosas, se activa la Telomerasa en forma desregulada.

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Esquema de la accin de la Telomerasa.

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Estructura de la Telomerasa con ARN molde. La Telomerasa se une a la cadena de ADN en el extremo correspondiente al telmero.