EL OXIGENO EN EL PROCESO DE FERMENTACIN Dependiendo de la presencia o ausencia de oxigeno molecular durante el proceso, es posible clasificar a las fermentaciones en:

Fermentacin aerobia http://www.ambientum.com/enciclopedia_medioambiental/suelos/mecanismos_fermentacion_a erobia.asp Fermentacin anaerobia En la fermentacin aerobia, el aceptor final de electrones es el oxigeno; es imprescindible su presencia para el desarrollo del microorganismo y la produccin de compuesto deseado. En este tipo de procesos, se produce fundamentalmente biomasa, dixido de carbono y agua. En la fermentacin anaerobia, el proceso de produccin del metabolito de inters se desarrolla en ausencia de oxgeno; los productos finales son sustancias orgnicas, por ejemplo, cido lctico, cido propionico, cido actico, butasnol, etanol y acetona. Sin embargo en la mayora de las fermentaciones anaerbicas, se requiere un poco de oxigeno al inicio del proceso para favorecer el crecimiento y la reproduccin del microorganismo. En los procesos anaerobios, los microorganismos producen mucho menos energa que en los aerobios y, para suplir sus necesidades de energa metabolizan una mayor cantidad de azcares; por consiguiente, elaboran ms metabolitos. Entonces a travs de la cantidad de oxigeno se puede manipular un proceso de fermentacin para incrementar la sustancia de inters; por ejemplo, cuando se trabaja con un microorganismo facultativo (capaz de crecer en presencia o ausencia de oxigeno) como Saccharomyces cerevisiae, se obtienen diferentes productos mayoritarios, segn la concentracin de oxgeno en el medio: si es muy limitada, habr una mayor produccin de etanol, mientras que si es alta, se favorece la reproduccin del microorganismo, osea la produccin de biomasa.

http://www.ambientum.com/enciclopedia_medioambiental/suelos/mecanismos_fermentacion_a naerobia.asp RUTAS BIOQUIMICAS DE LAS FERMENTACIONES Es importante conocer las rutas biolgicas de degradacin de los compuestos orgnicos, no solo para determinar cules pueden ser los productos que se obtendrn, sino por la posibilidad de manipular el proceso para producir otro tipo de sustancias. Existen varias rutas bioqumicas de utilizacin y conversin de loa azcares, las mas importantes desde el punto de vista industrial son: La glucolisis

El ciclo de Krebs La cadena respiratoria LA GLUCLISIS Es la ruta principal del metabolismo de la glucosa. Es un proceso anaerbico y se divide en dos etapas. En la primera, la glucosa se fosforila (incorpora el fosforo) a expensas de una molecula de trifosfato de adenosina (ATP); una vez fosforilada, se rompe para formar gliceraldehido 3- fosfato. Durante la segunda etapa, el gliceraldehdo 3-P es convertido en piruvato por oxidacin. El agente oxidante es el dinucletido de nicotinamida y adenina (NAD). En esta etapa se producen en total, ocho molculas de ATP por cada una de gliceraldehdo 3-P. El piruvato es el compuesto final de la gluclisis (por cada molcula de glucosa se forman dos de piruvato) y se considera como molcula clave para muchos tipos de fermentacin, pues, a partir de ella se producen una gran cantidad de compuestos de acuerdo con el microorganismo que se utilice y de las condiciones ambientales en las que se lleva a cabo el proceso. Despues de la obtencin del piruvato, si las condiciones siguen siendo anaerbicas, se pueden producir compuestos tales como el etanol y el cido lctico. Sin embargo, en condiciones aerbicas, la ruta bioqumica se desvia hacia ek ciclo de Krebs.

EL CILO DE KREBS Las vas mas comunes de la utilizacin del piruvato en condiciones aerbicas, es la via del cido ctrico o ciclo de Krebs, cuyas funciones son: Transportar electrones durante el metabolismo aerobio de los carbohidratos. Proporcionar esqueletos de carbono (intermediarios del ciclo) para que el microorganismo sintetice los comuestos que requiere. El ciclo consiste en una serie de reacciones catalizadas por enzimas, que se inician con la produccin de acetil CoA, por oxidacin del piruvato. La nueva molcula de dos carbonos se convina con el oxalacelato para formar el cido ctrico. Luegom, la molcula de dos carbonos se combina con el oxalacetato para formar el cido ctrico. Luego, lamolcula de pacido ctrico sufre una serie de transformaciones hasta que es descarboxilada y oxidada para producir nuevamente el oxaloacetato. Durante las reacciones del ciclo, se producen ocho tomos de hidrgeno que son transportados a la cadena respiratoria, transportadora de electrones: los electrones fluyen dentro de esta cadena a causa de una serie de reacciones enzimticas (inician en el compuesto NADH y finalizan en el oxgeno), y originan un gran cambio de energa libre que es utilizada para formar varias molculas de ATP. En el ciclo de Krebs, se producen quince molculas de ATP (doce en las reacciones cclicas y tres en la formacin de acetil CoA). Como cada molcula de glucosa proporciona dos de piruvat, se liberan por medio del ciclo de Krebs 33 molculas de ATP. En total, una molcula de glucosa se oxida por ambas rutas libera treinta y ocho molculas de ATP. ESTERILIZACION A NIVEL INDUSTRIAL

Esterilizacin significa la eliminacin de toda forma de vida de un medio o material, lo que se lleva a cabo generalmente por medios fsicos, por ejemplo, filtracin, o por muerte de los organismos por calor, productos qumicos u otra va. Esta definicin excluye por lo tanto cualquier tcnica que resulte solamente en un dao a los microorganismos o atenuacin de la actividad de cualquier tipo. Asepsia es la exclusin continuada de microorganismos contaminantes. As por ejemplo el cultivo de microorganismos en el laboratorio es llevado a

cabo aspticamente como en muchas fermentaciones industriales. El medio de cultivo es esterilizado para remover toda forma de vida y luego inoculado con el cultivo requerido. Se dice entonces que el sistema se mantiene en condiciones aspticas.

Para poder llevar a cabo una fermentacin con xito es imprescindible y obligatorio tener en todas las etapas cultivos libres de contaminantes, desde el cultivo preliminar hasta el fermentador de produccin. Por lo tanto, el fermentador y su equipamiento, as como el medio de cultivo deben estar estriles antes de la inoculacin. Adems, el aire que se suministra durante la fermentacin debe ser estril y no deben existir roturas mecnicas en el fermentador que podran permitir la entrada de microorganismos. Tambin se deben esterilizar los aditivos (antiespumantes), sin embargo los cidos y bases concentrados no es necesario esterilizarlos. Un biorreactor puede ser esterilizado, destruyendo los microorganismos, con algn agente letal como calor, radiacin o un producto qumico o bien separando los organismos viables mediante un procedimiento fsico como la filtracin. Durante la fermentacin se deben observar dos puntos para asegurar la esterilidad: - Esterilidad en el medio de cultivo - Esterilidad del aire que entra y sale Para lo cual es necesario una construccin apropiada del biorreactor que facilite la esterilizacin as como la prevencin de la contaminacin durante la fermentacin.

II. ESTERILIZACION DEL MEDIO DE CULTIVO El medio nutritivo que se prepara inicialmente contiene una variedad de clulas vegetativas diferentes y de esporas que proceden de los constituyentes del medio, del agua y del recipiente. Estos microorganismos deben ser eliminados por un procedimiento adecuado antes de la inoculacin. Existen un conjunto de procedimientos para la esterilizacin, pero en la prctica, para instalaciones a gran escala, el calor es el principal mecanismo utilizado. Un conjunto de factores influyen en el xito de la esterilizacin por calor: el nmero y tipo de microorganismos presentes, la composicin del medio de cultivo, el valor del pH y el tamao de las partculas en suspensin. Las clulas vegetativas son eliminadas rpidamente a temperaturas relativamente bajas, pero para la destruccin de las esporas se necesitan temperaturas de 121C.

La esterilizacin por filtracin se utiliza frecuentemente para todos los componentes de la solucin de nutrientes que son sensibles al calor y que seran por tanto desnaturalizados durante el proceso de esterilizacin por vapor utilizado normalmente en fermentacin industrial. Las vitaminas, los antibiticos o los componentes de la sangre son ejemplos de compuestos lbiles al calor que deben ser esterilizados por filtracin.

A.- Esterilizacin discontinua

La mayor parte de los medios de cultivo se esterilizan en la actualidad en volmenes discontinuos en el biorreactor a 121C. Los tiempos de esterilizacin aproximados pueden ser calculados a partir de la naturaleza del medio y del tamao del fermentador. No solamente debe ser esterilizado el medio nutritivo, sino tambin las uniones, vlvulas y electrodos del propio fermentador. Por consiguiente, los tiempos de esterilizacin reales son significativamente ms largos que los calculados y deben ser determinados empricamente para las soluciones especficas de nutrientes presentes en el fermentador. Un mtodo de esterilizacin es inyectar vapor en la camisa del fermentador o en los serpentines interiores (esterilizacin indirecta). Otro mtodo es inyectar vapor en la propia solucin de nutrientes (procedimiento directo), en cuyo caso un prerequisito es tener vapor puro (libre de aditivos qumicos). Muchos suministros de vapor industrial contienen productos qumicos txicos derivados de aditivos anticorrosivos utilizados en el proceso de produccin del vapor. Adems, con la inyeccin directa de vapor el condensado se acumula dentro del fermentador y de esta forma el volumen del lquido aumenta durante el proceso de esterilizacin.

Los inconvenientes del proceso de esterilizacin discontinua por calor de un fermentador discontinuo de 3000 L se muestran en la figura. Se necesitan de 2 a 3 horas para alcanzar la temperatura de esterilizacin (121C) lo que depende de la conduccin del vapor y del tamao del fermentador. Una vez se ha alcanzado la temperatura correcta se requieren otros 20 - 60 minutos para el proceso real de muerte, seguidos de enfriamiento durante una hora. Para enfriar el fermentador, la energa que se requiere para el calentamiento debe ser subsecuentemente retirada y, si el agua caliente que se obtiene durante el enfriamiento no se puede aplicar a algn uso, la esterilizacin por calor se hace muy costosa.

Otra desventaja de la esterilizacin por calor (y desde el punto de vista de la Microbiologa el defecto que resulta ms significativo) es que las fases de calentamiento, esterilizacin y enfriamiento no solamente matan a los microorganismos, sino que tambin alteran severamente la solucin de nutrientes. La decoloracin y los cambios en el valor del pH se originan como consecuencia de la caramelizacin y la reaccin de Maillard. Las vitaminas se destruyen y la calidad

del medio de cultivo se deteriora. La extensin en la que es afectada la fermentacin subsecuente depende del organismo y del proceso.

B.- Esterilizacin continua

Las dos desventajas principales de la esterilizacin discontinua, dao al medio de cultivo y alto consumo de energa, pueden ser evitadas en gran parte mediante el uso de un procedimiento de esterilizacin continua. Aunque la esterilizacin continua es la etapa preliminar lgica en una fermentacin continua a escala industrial, tambin se puede utilizar en la fermentacin discontinua obteniendo posibles mayores rendimientos en el tiempo y el espacio asignados. La razn para esto se debe a la relacin exponencial entre velocidad de muerte y temperatura, que hace ms corto el tiempo necesario para la eliminacin completa de los organismos vivos cuando se utiliza una temperatura ms alta. Mientras la esterilizacin discontinua se lleva a cabo en 30-60 minutos a 121 C, la esterilizacin continua se lleva a cabo normalmente en 30-120 segundos a 140 C. El calentamiento del medio de cultivo para la esterilizacin continua puede ser llevado a cabo mediante inyeccin de vapor o mediante intercambiadores de calor. La esterilizacin con inyeccin de vapor se hace inyectando vapor en la solucin de nutrientes. La temperatura se eleva rpidamente a 140 C y se mantiene durante 30-120 segundos. Debido a la formacin de condensados la solucin nutritiva se diluye; para corregir esto la solucin caliente se bombea a travs de una vlvula de expansin a un vaporizador y el condensado se retira mediante bombas de vaco de forma que la solucin esterilizada de nutrientes tiene la misma concentracin despus del proceso de enfriamiento que antes. La desventaja de este proceso es la sensibilidad que presenta a cambios en la viscosidad del medio y a variaciones en la presin.

En el proceso continuo que utiliza intercambiadores de calor, la solucin de nutrientes, en el primer intercambiador de calor, se precalienta a 90-120 C durante 20-30 segundos por la solucin nutritiva previamente esterilizada que sale. Luego, en el segundo intercambiador de calor, se calienta indirectamente con vapor a 140 C. Esta temperatura se mantiene durante 30-120 segundos en una tubera de mantenimiento antes de que sea colocada en el primer intercambiador mediante enfriamiento preliminar y posteriormente en un tercer cambiador para refrigeracin a la temperatura del fermentador. La fase de enfriamiento es slo de 20-30 segundos.

En el proceso que utiliza intercambiadores de calor el 90% del aporte de energa se recupera. La desventaja de este mtodo es que con algunas soluciones de nutrientes se forman sales insolubles

(p. ej. fosfato clcico u oxalato clcico) y aparecen incrustaciones en el primer intercambiador de calor debido a las diferencias de temperatura entre la solucin de nutrientes esterilizada y la solucin fra que entra. Si se produce una precipitacin, el coeficiente de transferencia de calor disminuye por lo que el sistema se debe detener y tratar con agentes que limpian (cido o base) y re-esterilizarlo. Esterilizando separadamente los componentes crticos de la solucin de nutrientes se mantiene constante el coeficiente de transferencia de calor por lo que el perodo til puede extenderse durante semanas.

Las soluciones que contienen almidn, que se hacen viscosas cuando se calientan, son difciles de utilizar en procesos de esterilizacin continua. Antes de la esterilizacin real debe llevarse a cabo una licuefacin e hidrlisis parcial mediante cidos o amilasas. Adems, si hay partculas en suspensin en la solucin de nutrientes, los cortos tiempos de esterilizacin en el proceso continuo pueden ser insuficientes para que el calor permanezca completamente a travs de ellas. El tiempo de calentamiento para partculas de 1 mm es de 1 segundo; para partculas de 1 cm es de 100 segundos. Por consiguiente el tamao de las partculas debera estar restringido a 1-2 mm en procesos continuos de esterilizacin.

III. ESTERILIZACION DEL AIRE DE FERMENTACION

La mayor parte de las fermentaciones industriales operan en condiciones de agitacin vigorosa y el aire que se suministra al fermentador debe ser esterilizado. El nmero de partculas y microorganismos en el aire vara en gran medida dependiendo de la localizacin de la planta, el movimiento del aire y el tratamiento previo del aire. Como media, el aire exterior tiene 10 100.000 partculas por m3 y 5 - 2.000 microorganismos por m3. De estos, el 50% son esporas de hongos y el 40% son bacterias G (-). Los fermentadores funcionan generalmente con velocidades de aireacin de 0,5 - 1,0 vvm (volumen de aire/volumen de lquido por minuto). Un fermentador que tenga un volumen de trabajo de 50 m3 con una velocidad de aireacin de 1 vvm necesita 3.000 m3 de aire estril por hora. La importancia crtica de la esterilizacin del aire en la microbiologa industrial puede ser deducida a partir de estos valores.

Los mtodos existentes para la esterilizacin de los gases incluyen la filtracin, inyeccin de gas (ozono), depuracin de gas, radiacin (UV) y calor. De todos estos, slamente la filtracin y el calor

son prcticos a escala industrial. Durante muchos aos el aire se esteriliz pasndolo sobre elementos calentados elctricamente, pero debido al alto coste de la electricidad a partir de la crisis del petrleo de los aos 70, este proceso ha sido reemplazado por la filtracin.

Actualmente, en los sistemas industriales el aire se esteriliza por filtracin. En los sistemas ms antiguos se instalaban filtros en profundidad como los de lana de vidrio en los que las partculas son atrapadas por una combinacin de efectos fsicos (inercia, bloqueo, difusin, gravedad y atraccin electrosttica). Los dos ltimos mecanismos tienen un efecto mnimo sobre la eliminacin de las partculas. Las desventajas de los filtros de lana de vidrio incluyen el arrugamiento y la solidificacin durante la esterilizacin por vapor.

Actualmente estn siendo reemplazados por filtros de cartuchos que utilizan membranas plegadas. Las ventajas de estos filtros es que son sustancialmente ms pequeos, debido a la construccin de los cartuchos es fcil reemplazar los elementos filtrantes utilizados, al poseer una estructura membranosa (steres de celulosa, polisulfona o nylon) tienen un efecto de filtros absolutos. La desventaja de la mayor parte de los sistemas instalados actualmente es que no existen todava, para uso industrial, filtros absolutos para bacterifagos. Los bacterifagos pueden ocasionar el fallo total de un sistema como por ejemplo en la produccin de cido glutmico por Corynebacterium glutamicum o al trabajar con Escherichia coli.

El aire que sale del fermentador tambin debe ser esterilizado, sobre todo si se trabaja con organismos recombinantes. No slo como medida de seguridad, sino tambin para prevenir que las cepas industriales se liberen al medio ambiente y por lo tanto estn disponibles de una forma gratuita para los competidores. De nuevo, se utiliza la filtracin.

http://books.google.com.ec/books?id=KFq4oEQQjdEC&pg=PA39&lpg=PA39&dq=el+ox%C3%ADge no+en+el+proceso+de+fermentacion+industrial&source=bl&ots=NZvMYHd21p&sig=OZGNi0knXoQ1kKeFkki9IfeRgU&hl=es419&sa=X&ei=LAl8UvqQGcrNsQThrIHYBw&ved=0CDoQ6AEwAg#v=onepage&q&f=false http://books.google.com.ec/books?id=00_6Q134GzYC&pg=PA70&lpg=PA70&dq=el+ox%C3%ADge no+en+el+proceso+de+fermentacion+industrial&source=bl&ots=fQtZxji66t&sig=SJQjSdPgizqxKSXTaZvnVpOB_k&hl=es419&sa=X&ei=LAl8UvqQGcrNsQThrIHYBw&ved=0CGkQ6AEwCA#v=onepage&q=el%20ox%C3%AD geno%20en%20el%20proceso%20de%20fermentacion%20industrial&f=false http://darwin.usal.es/profesores/pfmg/sefin/MI/tema13MI.html

http://host140.200-45-54.telecom.net.ar/microind/esterilizaci%C3%B3n.htm