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Universidad Nacional Autnoma de Mxico

#a ultad de Cien ias

In&or)e &inal- .iologa de /ro ariontes"

$iologa de %ro ariontes %ro&esora' (uz del Car)en *ierra +,,, Equipo: Aguilar Montes Juan Daniel Rodrguez Hernndez Zoar Itayuski Valle Calle Manuel Vazquz Gar a Meztli Velzquez Villanue!a Csar A"

BACTERIAS_____________________________
0.1eti!o' Aislar e identi&i ar un gnero .a teriano a /artir de ara tersti as )or&ol2gi as )a ro y )i ros 2/i as" Identi&i ar /or /rue.as .ioqu)i as y e3igen ias nutri ionales la es/e ie del gnero aislado" Mar o 4e2ri o'
53isten dos ti/os de lulas /ro ariotas' Ar 6eo.a teria y eu.a terias" A las eu.a terias se les ono en o)o 7.a terias !erdaderas8 y son )i roorganis)os /ro ariotas- uni elulares y su ta)a9o !ara entre : y :, )i r2)etros" Cierto ti/o de eu.a teria re/resenta un /ro.le)a /ara la salud de las /ersonas" Hay otras .a terias que son .ene&i iosas /ara la salud de las /ersonas" Dentro de 5u.a teria se /resentan !arias ra)as e!oluti!as- que in luyen a todos los /ro ariotas ausantes de en&er)edades ;/at2genas< y a la )ayor /arte de las .a terias que se en uentran nor)al)ente en el aire- suelo- aguas- tra to digesti!o de ani)ales y 6o).re ;%gina digital de la #a ultad de Cien ias $si as e Ingenieras< 5n el e3terior de las lulas .a terianas /ueden en ontrarse tres lases de estru tura' los &lagelos- y orgnulos rela ionados on la lo o)o i2n y qui)iota3is= las &i).rias o /iliy la /sula- o a/a )u osa que rodea la lula ;;$urro>s- :?@+<< (as .a terias- a su !ez se /rin i/ios' lasi&i an segAn los siguientes

Segn su forma y agrupacin: (a di&eren ia )s o.!ia entre las .a terias es su &or)a y 6ay tres ti/os )or&ol2gi os generales lara)ente e!identes' es&ri as o o os= alargadas o .a illos- y &or)as es/iraleson su.ti/o !i.rio- es/irilo y es/iroqueta ;$urro>s- :?@+< Co os' In luyen las .a terias de ta)a9o !aria.le- on &or)a es es&ri a u o!oide y general)ente son aero.ios estri tos" Algunas !e es estas .a terias tienden a agru/arse" Cuando se /resentan aso iadas dos .a terias re i.en el no).re

de di/lo o os- uando los o os se agru/an en tres- uatro o )s lulas dis/uestas en &or)a lineal re i.en el no).re de estre/to o os- uando los o os se reAnen de )anera irregular &or)ando ra i)os se ono en o)o esta&ilo o os" (as sar inas- son es/e ies de .a terias o ales que se di!iden en tres /lanos /er/endi ulares /ara &or)ar /aquetes de o 6o- die isis- treinta y dos- o )s )i ro o os" $a ilos' *on .a terias que tienen &or)a de .aston illo- se /ueden en ontrar en gru/os de dos deno)inados di/lo.a ilos- o en adenas si)ilares a las que /resentan los o os /or los que se les lla)a estre/to.a ilos" 5s/irilos' *on .a terias .a ilares- 6eli oidales on )o!ilidad &lagelar- que se lasi&i an dentro de las Gra) negati!as" 5s/iroquetas' *on .a terias )uy largas- que /resentan &or)a de es/iral on diez o )s !ueltas" 5n algunas o asiones on un &lagelo en ada e3tre)o ; o)o /or e1e)/lo el es/irilo res/onsa.le de la s&ilis' 4re/one)a<" Ha.itual)ente se 6allan en a).ientes a uti os o en el uer/o de ani)ales"

Segn su tincin:

(a tin i2n de Gra) es la t ni a /rin i/al utilizada /ara el e3a)en )i ros 2/i o de las .a terias" Casi todas las .a terias de i)/ortan ia lni a /ueden dete tarse on este )todo" ;Gual/a- B,,C< 53isten algunas e3 e/ iones 2)o los )i roorganis)os que no tienen /ared

elular- o los )i roorganis)os de un ta)a9o )uy /eque9o que no se /ueden o.ser!ar /or el )i ros o/io 2/ti o" Esta &un i2n tiene 2)o &unda)ento la di&eren ia entre las /aredes elulares de las .a terias 53isten dos ti/os' Gra) %ositi!a' (a /ared elular de estas .a terias tienen una gruesa a/a de %e/tidogli ano y dos lases de idos teoi os' 7el ido li/otei oi o- y el ido tei oi o" De.ida a sta a/a gruesa de /e/tidogli ano su /ared elular es )ayor)ente resistente no es solu.le en un sol!ente orgni o- si no que des6idrata los /oros errndolos- /or lo que i)/ide que el ristal !ioleta se es a/e y as se tenga la tin i2n azulF!ioleta" Gra) Gegati!a' en estas .a terias la a/a de //tidogli ano es delgada- y se en uentra unida a la )e).rana /las)ti a e3terior ;/rotena- &os&ol/ido y li/o/olisa rido< a tra!s de li/o/rotenas" (a di&eren ia que )uestra en las olora iones se de.e a que en las .a terias on Gra) negati!as- su /ared- es solu.le en sol!entes orgni os" De.ido a su a/a delgada de /e/tidogli ano no le es /osi.le retener el ristal !ioleta- /or lo que se /ierde la tin i2n azulF!ioleta" ; Art ulo 7#unda)entos de di&eren ia i2n de Gra) /ositi!o y Gra) negati!o8- B,:B< Morfologa colonial:

Hna olonia es una agru/a i2n de .a terias &or)ada a /artir de la re/rodu i2n de una Hnidad #or)adora de Colonia ;H#C<

so.re un )edio s2lido= aunque !ara de ta)a9o general)ente es !isi.le a si)/le !ista"

Prue as io!umicas: Indol- Ro1o de Metilo- VogesF%roskauer y Citratos son uatro /rue.as .ioqu)i as" *e e)/lean &unda)ental)ente /ara la identi&i a i2n de las 5ntero.a terias ;.a ilos Gra) negati!osanaero.ios &a ultati!os on )eta.olis)o &er)entador<" De/endiendo de las ondi iones- las entero.a terias- /ueden realizar un )eta.olis)o aero.io ;si dis/onen de o3geno<realizar una res/ira i2n anaero.ia ;si 6ay nitratos u otro a e/tor de ele trones< y distintas &er)enta iones" Jo!a s<" 5l tri/t2&ano &or)a /arte de las /e/tonas del )edio" Rojo de metilo: Dete ta la &er)enta i2n idoF)i3ta" *e a u)ulan idos ;a ti o- &2r)i o- et "<relati!a)ente &uertes y .a1an el /H del )edio 6asta IF+" Di 6o a).io de /H se dete ta a9adiendo un indi ador ;ro1o de )etilo< al ulti!o Voges-Proskauer: Dete ta la &er)enta i2n .utanodi2li a" Mediante un rea ti!o- ;al&aF na&tol y J0H al I,K<- se dete ta la /resen ia de un /re ursor del .utanodiol ;a etil)etil ar.inol o

Produccin de Indol: *e deter)ina si la .a teria /osee una enzi)a ;tri/to&anasa<" (a tri/to&anasa 6idroliza el tri/t2&ano en indol y alanina" 5l indol se dete ta e)/leando un rea ti!o es/e &i o ;Rea ti!o de

a etona<" (a a etoina en /resen ia de o3geno se o3ida a dia etilo" 5l dia etilo origina una olora i2n ro1a al rea ionar on los restos guanidni os de algunos a)ino idos de la /e/tona del )edio ;51" Arginina<" Consumo de citratos: *e deter)ina la utiliza i2n del itrato o)o Ani a &uente de ar.ono y energa" (a /rue.a e)/lea un )edio de&inido on itrato o)o Ani a &uente ar.onada" Alternati!a)ente se utiliza el )edio de *i))ons' utiliza un )edio s2lido on itrato s2di o y un indi ador idoF.ase ;azul de .ro)oti)ol<" 5n este aso se dete ta la al aliniza i2n del )edio /or el onsu)o del itrato" Catalasa: (a atalasa es una enzi)a que /rote1e a las lulas &rente al /er23ido de 6idr2geno /rodu ido en el )eta.olis)o del o3geno" Cataliza la &or)a i2n de agua y o3geno a /artir del /er23ido de 6idr2geno" (a a ti!idad atalasa se dete ta a9adiendo unas gotas de /er23ido de 6idr2geno so.re las olonias en /la a que no sea de agar sangre ;dara &alsos /ositi!os<"

TSI: (a la tosa- sa arosa y glu osa son los 6idratos de ar.ono &er)enta.les" 5l tiosul&ato de sodio es el sustrato ne esario /ara la /rodu i2n de ido sul&6dri o- el sul&ato de 6ierro y a)onio- es la &uente de iones #eDL - los uales se o).inan on el ido sul&6dri o y /rodu en sul&uro de 6ierro- de olor negro" 5l ro1o de &enol es el indi ador de /H- y el loruro de sodio )antiene el .alan e os)2ti o" %or &er)enta i2n de azA aresse /rodu en idos- que se dete tan /or )edio del indi ador ro1o de &enol- el ual !ira al olor a)arillo en )edio ido" 5l tiosul&ato de sodio se redu e a sul&uro de 6idr2geno el que rea iona luego on una sal de 6ierro /ro/or ionando el t/i o sul&uro de 6ierro de olor negro" Hidrlisis del almidn: (os /olisa aridoso)o el al)id2n son de)asiados largos /ara ser trans/ortados al interior de la lula" (os )i roorganis)os e3 retan a)ilasas que 6idrolizan esos /ol)eros 6asta oligo o )onosa ridos que /ueden usarse o)o sustratos /ara re er"

(a 6idr2lisis de al)id2n es analizada en )edios onteniendo al)id2n en /la a" Des/us de in u.ar se inundan las /la as on lugol que al unirse on el al)id2n inta to &or)a un o)/le1o /Ar/ura" Licuefaccin de la gelatina: (a /rue.a de li ue&a i2n de gelatina se utiliza o)o )edio de ulti!o gelatina nutriti!a- en esta /rue.a se /retende deter)inar la a/a idad de un )i roorganis)o de /rodu ir enzi)as de ti/o /roteolti as ;gelatinasas< que li uanN6idrolizan la gelatina o )uestran a).ios ara tersti os de.ido a los /rodu tos de degrada i2n" (a gelatina o)o /rotena deri!ada del olgeno ani)al es 6idrolizada /or la gelatinasa en sus a)ino idos onstituidos- on /rdida de sus geli&i antes" Hidrlisis de casena: (as /roteasas son e3 retadas al )edio /ara la degrada i2n de /rotenas- la asena es la /rotena de la le 6e que le on&iere el olor .lan ouando la asena es 6idrolizada desa/are e el ara tersti as

olor .lan o alrededor del re i)iento )i ro.iano"

LI : 5n el )edio de ulti!ola /e/tona y el e3tra to de le!adura a/ortan los nutrientes /ara el desarrollo .a teriano" (a glu osa es el 6idrato de ar.ono &er)enta.le- y la lisina es el sustrato utilizado /ara dete tar la /resen ia de las enzi)as de ar.o3ilasa y dea)inasa" 5l itrato de 6ierro y a)onio- y el tiosul&ato de sodio- son los indi adores de la /rodu i2n de ido sul&6dri o" 5l /ur/ura de .ro)o resol- es el indi ador de /H- el ual es de olor a)arillo a /H igual o )enor a +"B- y de olor !ioleta a /H igual o )ayor a M"@" %or de ar.o3ila i2n de la lisina- se /rodu e la a)ina ada!erina- que al aliniza el )edio y esto /rodu e el !ira1e del indi ador al olor !ioleta" (a de ar.o3ila i2n de la lisina- tiene lugar en )edio ido- /or lo que es ne esario que la glu osa sea /re!ia)ente &er)entada" (os )i roorganis)os que no /rodu en lisina de ar.o3ilasa- /ero que son &er)entadores de la glu osa- /rodu en un !ira1e de la totalidad del )edio de ulti!o al a)arillo- /ero a las BI 6s de in u.a i2n se

o.ser!a el /i o de olor !ioleta de.ido al onsu)o de las /e/tonas- y el &ondo a)arillo"

(a /rodu i2n de sul&uro de 6idr2geno- se !isualiza /or el ennegre i)iento del )edio de.ido a la &or)a i2n de sul&uro de 6ierro"

"ise#o experimental: Material: Hso de .ata en todo el /ro edi)iento del dise9o e3/eri)ental" Ca.ello re ogido" 5sterilizar rea de tra.a1o al ini io y &inal de la /r ti a"

Para medio de culti!o:

Siem"ra $edios de culti!o en cajas de %etri+ sa $ec)ero $arcador indele"le 'ncendedor

Tincin #ram Cristal !ioleta &ul de metilo Portao"jetos gua lco)ol Safranina Lugol #uantes Cu"re "oca $icrosco%io %tico

Pruebas bioqumicas Rojo $etilo lfa ,aftol -.H Reacti!o de -o!acs

$edios de culti!o Pesa de mono%lano Vidrio de reloj gua destilada lgodn $atra& 'rlenme(er $ec)ero de *unsen Cajas Petri Tu"os de ensa(o

Procedimientos: Para medio de cultivo: Gos /one)os .ata- guantes y u.re.o as" De a uerdo on el en!ase- se agregan /or ada litro de /re/ara i2n la antidad de agar se9alada" *e /one en relo1 de !idrio so.re la /esa )ono/lano" *e /esan los gra)os de /ol!o de /re/ara i2n" *e introdu e el /ol!o ya /esado en el )atraz y agrega)os agua"

Calenta)os y al )is)o tie)/o agita)os la )ez la on una !arilla tratando de quitar todos los gru)os" Retira)os del &uego" 4a/a)os el )atraz on un algod2n de )anera que u.ra /er&e ta)ente .ien la .oquilla" Introdu i)os los )atra es a una auto la!e /ara su esteriliza i2n" Al on luir la esteriliza i2n en auto la!e- se en&ra a 6orro de agua &ra el )edio" *e esteriliza la .oquilla del )atraz antes de !a iar en ada a1a /etri" 4ra.a1ar en ondi iones as/ti as"

Para siembra: Se toma el asa de siembra y se esteriliza en el mechero. Una vez que la punta se ponga de color rojo vivo, rascamos en la colonia de bacterias para obtener una pequea muestra. Se abre la caja petri, y en condiciones aspticas, se siembra cuadrante por cuadrante por siembra de agotamiento, esterilizando el asa al pasar en cada cuadrante. Esterilizamos el asa para que la podamos volver a usar. Se tapan las cajas y se incuban para el crecimiento adecuado de las bacterias. Para tinci n: 5steriliza)os el asa de sie).ra" *e to)a una )uestra de la olonia deseada" Colo a)os en el /orta o.1etos una gota de agua- y /osterior)ente la )uestra"

#i1a)os las .a terias al /orta o.1etos /asando /or el )e 6ero D !e es la )uestra- uidando que no se quede )u 6o tie)/o /orque /odra que)ar a los organis)os" Agrega)os ristal !ioleta y de1a)os re/osar /or ;: )in"<" Agrega)os gotas de agua /ara lle!ar a a.o el /ro eso de la!ado" A9adi)os lugol y de1a)os re/osar ;: )in"< Agrega)os gotas de agua /ara lle!ar a a.o el /ro eso de la!ado" A9adi)os al o6olFa etona" ;:, seg< Agrega)os gotas de agua /ara lle!ar a a.o el /ro eso de la!ado" A/li a)os un olorante sa&ranina y lo de1a)os a tuar ;D, seg"< (le!a)os a a.o el /ro eso de la!ado De1a)os se ar 0.ser!a)os en el )i ros o/io"

Para pruebas bioqumicas: R$VP: Ro1o de )etilo Adi ionar + gotas de ro1o de )etilo al tu.o /re!ia)ente in u.ado" Inter/retar el resultado del olor in)ediata)ente" Voges %roskauer Agregar dire ta)ente los rea ti!os al tu.o des/us de la in u.a i2n en el siguiente orden' :< ,"M )l de al&a na&tol B< ,"B )l de J0H D< Agitar el tu.o sua!e)ente- de1ar re/osar de :, a :+ )inutos antes de la inter/reta i2n" Indol:

:,

Aadir unas gotas de reactivo de Kovacs al tubo previamente incubado. Agitar y dejar reposar el cultivo. Interpretar resultados TSI: *e).rar /or /i adura y estra" In u.ar a ondi iones ne esarias" Inter/retar resultados" LI : *e).rar /or /i adura" In u.ar en ondi iones ne esarias" Inter/retar resultados" Citrato: *e ino ula on una estra Ani a en la su/er&i ie" In u.ar en ondi iones ne esarias" Inter/retar resultados" #elatina: *e ino ula /or di&usi2n" In u.ar en ondi iones ne esarias Inter/retar resultados" lmidn: *e).rar /or estra en la a1a /etri on el )edio de al)id2n" In u.ar" Agregar lugol a las olonias" Inter/retar resultados" Lec)e descremada: *e).rar /or estra en la a1a /etri on el )edio de le 6e des re)ada"

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In u.ar en ondi iones ne esarias" Inter/retar resultados" Catalasa: 4o)ar una )uestra on el asa de la olonia deseada" Colo ar en el /orta o.1etos" A9adir una gota de /ero3ido de 6idr2geno Inter/retar resultados" Resultados' Mor&ologa
Muestra Al.er a Co)/uerta Medio de ulti!o Agar 5M$ Agar Vogel Jo6nson Mor&olga )a ros 2/i a %unti&or)es- /lanas-.orde redondo" In oloras #ila)entosaon .orde entero y se)i on!e3a" In olora" 5l olor del )edio !ira a rosa" 4ierra Agar nutriti!o" #or)a irregular- ele!a i2n /lana.orde lo.ulado" 4e3tura se a y entro o/a o" $a ilos es/orulados gra)!aria.le" Mor&ologa )i ros 2/i a" Co o.a ilos gra)negati!os" Co os gra)negati!os" Inter/reta i2n Go &er)entadoras de la tosa" Go &er)entadoras de )anitol" Al degradar la /e/tona tienen o)o /rodu tos )eta.2li os sustan ias al alinas"

%or su &or)a de re eres/oras- y su .a1a e3igen de nutrientes- /uede ser .a illus" (a gra) /uede un error de los olorante del la.oratorio"

%rue.as .ioqu)i as'


Muestra Catala sa L 4*I (IA Indol MRN V% Citrato $elatina Al)id2n

%ase

Co os gra) negati!os no &er)entador de )anitol ; o)/uerta<

kNa &er)enta glu osa Go HB* Go gas

*u/er&i ie /Ar/ura.ase /Ar/ura Go HB*

F indol

A)arillo Nnada

Co)/leto azul ;L<

:B

$a illus

JNA &er)enta glu osa Go HB* kNa &er)enta glu osa Go HB* Go gas

*u/er&i ie /Ar/ura.ase a)arilla Go HB* *u/er&i ie /Ar/ura.ase /Ar/ura Go HB*

F indol

Garan1a Nnada

Co)/leto azul ;L<

Co o.a ilos gra)negati!o Go &er)enta la tosa ;al.er a<

F indol

A)arillo Nnada

Azul ;L<

Con lusi2n'
Muestra de Tierra: Por la forma de crecer en el medio nutritivo, sus escasas exigencias nutricionales , el lugar en donde fue tomada la muestra, que haya podido ser cultivada despus de haber pasado por un proceso de pasteurizacin, la formacin de esporas y la forma de bacilos, fundamentan que es una bacteria del gnero bacillus !l no contar con una manera de llevar un control de la tincin de gram, no se puede rectificar que sea grampositiva, pero sabemos que ninguna gramnegativa produce esporas "n cuanto a las pruebas bioqu#micas, las realizadas durante la pr$ctica no son suficientes para especificar un especie de bacillus, ya que son muy diversas y se necesita informacin m$s detallada obtenida mediante otras pruebas como la de movilidad, ureasa, coagulasa, oxidasa, de hemlisis, hidrlisis de l#pidos, de la acidificacin de un medio por la degradacin de diferentes compuestos, entre otras %on las pruebas llevadas acabo, se tienen & gneros posibles, que son: 'acillus (mithii, 'acillus lentus y bacillus circulans Muestra !lberca y compuerta: )a eleccin de medios selectivos se llev a cabo pensando en un gnero que coincid#a con las car$cter#sticas macro y microscpicas identificadas en el medio nutritivo y la tincin de gram *ebido a la confusin de la gram, los medios no cumpl#an con las exigencias nutritivas de las bacterias, impidiendo su identificacin en los medios debido a que su crecimiento era escaso, sin caracter#sticas destacables y que pudiesen encontrarse en la literatura *esde ese punto, se perdi la identificacin de los gneros, y por ende, la identificacin de especies por pruebas bioqu#micas

:D

$i.liogra&a'
Velas o M"- (2/ez R"- Ro)ero M"- *ala)an a C" Biolo!a "# Bac$illerato' 5dite3- 5s/a9a B,,M" Audesirk 4eresa- Audersik Gerald- $yers 5" Biolo!a% ciencia & naturale'a: %earson 5du a i2n de M3i o- M3i o B,,M" 'ob ! , +reeman, Ph * Microbiologa de Burrows: Mc,ra-./ill, Mxico 0121 % 3 4oese,: !rchaebacteria (cientific 6tt/'NN>>>"u )/".erkeley"eduNar 6aeaNar 6aea"6t)l !merican

*ireccin 5acional de (ervicios !cadmicos 6irtuales, 7niversidad de %olombia : %lasificacin de las 'acterias 6tt/'NN>>>"!irtual"unal"edu" oN ursosN ien iasNB,,,,BINle ionesN a/,:N, :O,DO,I"6t) 3asiman 8 , ,onz$lez M : /ipertextos de biolog#a, bacteriana 6tt/'NN>>>".iologia"edu"arN.a teriasNnutri PB"6t) nutricin

(thefani ,ualpa ( , Tcnicas de Tincin para la microscopia ptica, +acultad de %iencias Mdicas 6tt/'NNes"s ri.d" o)Ndo N+:MBCBB@N%RAC4ICAFDF(aFColora ionFdeFGra) +undamentos de diferenciacin de ,ram positivo y ,ram negativo 6tt/'NNes"s ri.d" o)Ndo N+DM@BC@N#unda)entosFdeFlaFtin ionFdeFGra)

Pruebas de identificacin, micro usual : http:99edicion. micro usal es9-eb9identificacion9!yudaPruebas html Atlas de pruebas bioqu#micas:

http:99es scribd com9doc9&1:;<;2&9!tlas.=nteractivo.de. pruebas.bioquimicas


Pruebas del =M6ic: http:99--- ugr es9>pomif9pom.bac9pb.

v9pb.v.&.imvic htm

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