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EspectrofotometraMolecular
UV/Vis
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Contenido
El espectro electromagntico
Interaccin de la luz con la materia: transiciones electrnicas
Componentes principales del espectrofotmetro: fuente de luz, sistema de aislacin de
longitud de onda, compartimiento de la celda/referencia, detector
Ley de LambertBeer
Limitaciones de la ley de LambertBeer
Usos de la espectrofotometra UV/Vis
Identificacin de sustancias y determinacin de estructuras
Anlisis cuantitativo: determinacin de componentes por curvas de calibracin
Estudio de sistemas en equilibrio (complejacin, pH, redox)
Titulaciones espectrofotomtricas y fotomtricas
Anlisis de mezclas
Mtodos especiales
Espectroscopa derivada
Turbidimetra
Nefelometra
Espectrofotometra molecular de fotoluminiscencia: Fluorescencia y fosforescencia.
Referencias
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Energa.
Viajaatravsdelespaciovaco.
Campoelctricoymagnticoquevaranrepetidamente.
Comportamientodeondaydepartcula.
Radiacinelectromagntica
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Longitud de onda ()
Distancia lineal entre dos puntos equivalentes de
ondas sucesivas (sucesivos mximos o mnimos).
Longitud
deonda
Max Max
Min
=10
10
mnm =10
9
mm=10
6
m
Frecuencia (v)
Nmero de crestas de onda que pasan por un punto
dado cada segundo.
Hertz(Hz):1Hertz=1ondaporsegundo=s
1
PropiedadesGeneralesdelasOndas
1 8
10 00 . 3

= = s m v c

c
v =

1
= v
Numero de onda
Nmero de unidades de que hay en 1 centmetro.
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RegionesdelEspectroElectromagntico
Bajas
frecuencias
Longitudesdeonda
Largas
Altas
frecuencias
Longitudesdeonda
Cortas
RadiacinElectromagntica
BAJAENERGA
RadiacinElectromagntica
ALTAENERGA
E= hv
E=

hc
ConstantedePlanck (h)=6.6260755 10
34
Js
Velocidaddelaluz (c)=3.00 10
8
ms
1
v hc E =
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RegionesdelEspectroelectromagntico:
Interaccinconlamateria
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Espectroscopas:Intercambiodeenerga
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EspectroUV/Vis
Formadependede
Transicioneselectrnicas
quepuedenocurrir.
Estadofsico
Ambienteatmicoenel
queocurrenlas
transiciones
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Espectroselectrnicos:Definiciones
Cromforo
Grupo covalente insaturado responsable de la absorcin en la regin
UV/Vis.
Ejemplos: C=C ; C=O ; NO
2
Auxocromo
Grupo saturado que al enlazarse a un cromforo cambia la longitud de
onda y la intensidad del mximo de absorcin.
Ejemplos: OH ; NH
2
; Cl
Efecto hipercrmico
Incrementa la intensidad de absorcin
Efecto hipocrmico
Disminuye la intensidad de absorcin.
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Radiacinelectromagntica:
Interaccinconlamateria
Reflexin
Dispersin
Absorcin
Absorcinyreemisin
Fluorescencia/fosforescencia
Absorcinyrupturadeenlaces
Reaccinfotoqumica
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EspectroUV/Vis:Transicioneselectrnicas
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Transicioneselectrnicas
Involucran electrones ubicados en orbitales o, t y n.
Comparacin de E: n t* < t t* < n o* << o o*
Transicin o o*
Requiere energa del UV lejano (125135 nm).
Hidrocarburos saturados: transparentes en UV cercano
Transicin n o*
Enlaces simples C C y electrones no compartidos (O, N, S, Cl).
Intensidad moderada (180220 nm).
Ejemplos: metanol, ter, etilamina, 1clorobutano.
o
o *
t
t *
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Transicioneselectrnicas
Transicin n t *
DebehaberparesdeelectronesnocompartidosyademsC=C oCC
Ej:carbonilos,nitros,azo compuestos.
Transicin t t *
Debehabergruposquetengandoblesotriplesenlaces.
Fuerteabsorcin.
Ej:etilenos,acetilenos,carbonilos,azocompuestos
Transicin d d
Salesinorgnicas
DbilabsorcinenlareginVis
Ejemplo:[Cu(H
2
O)
6
]
2+
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EfectodelDisolvente
Hipsocrmico (cambioalazul)
Tpicaentransicionesnt*
Estadobasalmspolarqueestadoexcitado
Solventepolarestabilizaporsolvatacinamolculaantesdeabsorcindelfotn
Posicindemximodeabsorcinsedesplazaalongitudesdeondacortas(|E)conrespecto
alosobtenidosconsolventesnopolares
Batocrmico (cambioalrojo)
Tpicaentransicionestt*
Estadoexcitadomspolar queestadobasal
Solventepolarestabilizaporsolvatacinamolculaexcitada
Posicindemximodeabsorcinsedesplazaalongitudesdeondalarga(+E)conrespectoa
losobtenidosconsolventesnopolares.
Losdos efectos tambinpuedenocurrircomoresultadodelasustitucindeungrupofuncional
EfectodelpH
CambiodepHafectalaestructuradegruposcidobsicosyocurreuncambioenla
posicinde
max
.
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Componentesdelespectrofotmetro
Fuente de radiacin electromagntica.
Sistema de dispersin:
Seleccionan una longitud onda particular (ancho de banda).
rea de muestra
Detectores
Miden la intensidad de la radiacin.
Fuente
deluz
Sistema
de
dispersin
Muestra Detector
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Espectrofotmetro:Fuentederadiacin
Lmpara de arco de
deuterio: UV
Lmpara de tungsteno
halgeno: parte del UV
y toda la regin visible
Seleccin de la fuente
de luz
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Espectrofotmetro:Sistemadedispersin
Diferentes longitudes de onda
de radiacin se dispersan en
ngulos diferentes.
En combinacin con una
rendija de salida se utilizan
para seleccionar una longitud
de onda en particular (ancho
de banda) de la fuente de luz
Dos tipos:
Prismas
Rejillas hologrficas
Monocromador =
Rendija de entrada +
Sistema de dispersin +
Rendija de salida
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Espectrofotmetro:Detector
Convierteluzensealelctrica.
Tubofotomultiplicador
Fotodiodo
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Espectrofotmetro:Detector
Fototubos
Es el principio por el que trabajan los
fotomultiplicadores. Son sensibles a la luz, la cual
se transforma en corriente elctrica. Formados
por un tubo que se encuentra al vaco relleno con
algn gas inerte (argn o similar) y un ctodo.
Al contrario que en los tubos
fotomultiplicadores, no se
produce amplificacin.
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Unidad I
Espectrofotometra ultravioleta visible molecular
INSTRUMENTACIN INSTRUMENTACIN
Tubofotomultiplicador
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Unidad I
Espectrofotometra ultravioleta visible molecular
Tubofotomultiplicador
Los fotones impactan en una primera placa
denominada fotoctodo.
Desprendimiento uno o ms electrones.
Atraccin y aceleramiento coulombimtrico de los
electrones a una segunda placa (dnodo) con un
potencial de 90 V por encima del fotoctodo
Este proceso se repite a travs de una cadena de 9
dnodos, se genera una corriente elctrica de 10
6
a
10
7
electrones por cada fotn
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Diodos
Consisteenunaunin pn polarizadainversamentequese
montaenunchipdesilicio.
Lapolarizacininversareduceacerolaconductanciadela
unin
Unidad I
Espectrofotometra ultravioleta visible molecular
Diodo
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La radiacin que incide forma agujeros y
electrones que generan una corriente proporcional a la
potencia radiante
Los arreglos de diodos estn integrados por fotodiodos
individuales montados sobre un chip de silicio
Unidad I
Espectrofotometra ultravioleta visible molecular
Diodos
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pticainvertida
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Configuraciones
Unsolohaz(1)
Doblehaz(2)
Hazdividido(3)
1.Reference.Solvent,memoria
2.Solvent +Analyte
1.Reference,solvent
1.Reference.Solvent
2.Solvent +Analyte
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readelamuestra:Celdas
Elmaterialdebesercompletamentetransparenteatodaslaslongitudes
deonda.
Referencia:Compensalareflexin,dispersinyabsorcindebidaala
celdayaldisolvente.
320nm
210nm
190nm
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readelamuestra:Celdas
Tpicopasoptico:10mm
Muestraspocoabsorbentes:mayorlongituddepaso.
Muestrasmuyabsorbentes:menorlongituddepaso.
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Cuidadosdelasceldas
Evitar rayaduras.
No tocar paso ptico con los dedos. Grasa de
los dedos genera absorbancia significativa.
Superficies pticas sucias: limpiar con tejido o
material suave.
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Seleccindelsolvente
Solventeideal:noflamable,notxico,sinabsorcinentodaslas
longitudesdeonda(transparente).
Elsolventedebesercompatibleconelmaterialdelacelda.
Solventesmuyvoltiles(acetona,diclorometano):utilizarceldacontapa.
Disolvente Puntodecortede
transparencia
(Cutoff)
Disolvente Puntodecortede
transparencia
(Cutoff)
Acetonitrilo 190nm Etanol 210nm
Agua 191nm 1butanol 210nm
Heptano 197nm Metoxietanol 210nm
Glicerol 207nm 1,4dioxano 215nm
Hexano 210nm ter etlico 218nm
Ciclohexano 210nm Tetrahidrofurano 220nm
Metanol 210nm Diclorometano 235nm
%T=10%,celdade1cmdepasoptico(A=1):Cualitativo
%T=90%,celdade1cmdepasoptico(A=0.05):Cuantitativo
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Celdadeabsorcin
LeydeLambertBeer:Deduccin
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dP = de poder radiante en capa
infinitesimalmente pequea.
N = # especies absorbentes
y x db c = N
3
3 3
cm
cm
mmol
cm cm cm
cm
mmol
= =
c
LeydeLambertBeer:Deduccin
Segmentodelaceldadeabsorcin
especies 10 6.023
23
= = mmol
db c y x
mmol
especies

(

= ) )(
10 023 . 6
( N
23
db c
mmol
cm especies

(

=
2 23
10 023 . 6
N
db c = K N
#choques N Pdp N P=K c db P
dP = K c db P
K=constantedeproporcionalidad
Signo( ):Pdecrececuandodb aumenta
Incidente Transmitida
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LeydeLambertBeer:Deduccin
c b
K
P
P
bc K
P
P
c b K
P
P
b c K
P
P
db Kc
p
dp
T
T
T
T
b
P
P
T
=

=
=
=
=
} }
303 . 2
log
303 . 2
log
log 303 . 2
ln
0
0
0
0
0
0
c b
P
P
T
= c
0
log
ncia transmita de Porcentaje T 100
0 T 1 ancia) T(transmit
P
P
0
T
=
> > =
c b T = c log A c b logT = =
M in, concentrac c
cm ptico, paso b
cm M molar, ad absortivid
al adimension a, absorbanci A
1 - 1 -
=
=
=
=
c b A =
= valor caracterstico de una molcula o in
absorbente en disolvente determinado a una
determinada.
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Transmitancia ylongituddepasoptico,b
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AyTvs.concentracinaunadeterminada yb
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Absorbancia,TransmisinyColor
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LeydeLambertBeer:Problemas
El hexano puro apenas presenta absorbancia en el UV por
encima de 200 nm. Una disolucin preparada disolviendo 25.8
mg de benceno (C
6
H
6
, PM 78.114) en hexano y diluyendo a
250 mL, presenta una banda de absorcin a 256 nm y una
absorbancia de 0.266 en una celda de 1.0 cm. Hallar la
absortividad molar (c) del benceno a dicha longitud de onda.
Una muestra de hexano contaminada con benceno dio una
absorbancia de 0.070 a 256 nm en una celda de 5 cm de paso
de luz. Hallar la concentracin del benceno en mgL
1
.
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LeydeLambertBeer:Condiciones
Para que se cumpla
Radiacin: monocromtica.
Concentraciones bajas: 10
2
y 10
7
M.
Absorcin debe ocurrir dentro de un volumen de
seccin transversal uniforme.
Celda y disolventes: transparentes a radiacin
empleada.
Disolucin: no fluorescente o heterognea
(partculas).
Solutos: no experimentar reacciones fotoqumicas.
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LeydeLambertBeer:Limitaciones
Fundamentales
Concentraciones elevadas
(>0.01 M) del analito o
electrolitos.
Especies qumicas no se
comportan de manera
independiente.
Cambio en el ndice de
refraccin de la
disolucin.
Consecuencia: cambia el
valor de c.
c b A =
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LeydeLambertBeer:Limitaciones
Qumicas
Formacin de productos
con caractersticas
absorbentes distintas a
las del analito.
Disociacin.
Asociacin
Reaccin con disolvente
Equilibrios
cidobase.
Complejacin.
Figura:Principiosdeanlisisinstrumental,5edicin,Skoog,Holler,Nieman
pKa = 4.87
pH no
amortiguado en
la disolucin
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LeydeLambertBeer:Limitaciones
Instrumentales
Radiacin policromtica.

2
c varia
c constante
Figuras:Principiosdeanlisisinstrumental,5edicin,Skoog,Holler,Nieman
MedirAenbandadeabsorcinancha.
MedicindeAenlapendiente:utilizarestrechoanchodebandaefectivoparamejorarlinealidad.
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LeydeLambertBeer:Limitaciones
Instrumentales
Radiacin parsita o dispersada (P
stray
)
Dispersin y reflexin de superficies: rendijas filtros y ventanas.
Diferente
No atraves la muestra: no sigui camino de fuente a detector.
Figura:
FundamentalsofUVvis
Spectrometry Primer,
Agilent Tecnologies
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EspectrofotometraUV/Vis:Aplicaciones
Anlisis cuantitativo
Determinacin de componentes por curvas de calibracin
Anlisis de mezclas
Estudio de sistemas en equilibrio (complejacin, pH, redox)
Titulaciones espectrofotomtricas y fotomtricas.
Espectroscopa de derivadas
Identificacin de sustancias y determinacin de estructuras.
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Anlisisdeespeciesnoabsorbentes
Derivatizacin:
transformacinqumica
delanalitoaunaespecie
absorbente.
Reaccinde
derivatizacin:
Especfica
Cuantitativa
Rpida
Reproducible
Productoestableen
solucin
Tpicas aplicaciones
El analito est presente en
una matriz que tiene
constituyentes que
absorben en el mismo
intervalo espectral.
El analito no tiene
cromforo (no hay
absorcin) o la absorcin
es dbil.
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Anlisisdemezclas
Aditividad de absorbancias
La A de una mezcla a cualquier longitud de onda es
igual a la suma de la A de cada componente en la
mezcla a dicha longitud de onda (se asumen las
mismas concentraciones molares).
Fuente
b
A
1
C
1
A
2
C
2
b
Detector
Abs.
A
A=A
1
+A
2
C
1
+C
2
Detector
Abs.
A
Fuente
b
1 1 1
c b A =
2 2 2
c b A = ( )
2 2 1 1
c c b A + =
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Anlisisdemezclas
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Anlisisdemezclas
Caso simple:
Medida de A al # de = a #
de componentes en mezcla.
Metodologa:
Eleccin de para cada
componente: A
Max
Determinacin de c para cada
componente a : medida de
A de soluciones estndar de
concentracin conocida de
componentes puros
(calibracin).
Medida de A de mezcla a
seleccionadas.
y
nm 210
y x
nm 210
x
nm 210
y
nm 210
x
nm 210
y) (x
c b c b A A A + = + =
+
y
nm 230
y x
nm 230
x
nm 230
y
nm 230
x
nm 230
y) (x
c b c b A A A + = + =
+
nm 230
y) (x
A
+
nm 210
y) (x
A
+
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Anlisisdemezclas:Problema
1. Las absortividades molares (c) de los
compuestos X e Y se midieron con muestras puras
de cada uno de ellos.
Una mezcla de los compuestos X e Y en una celda
de 1.000 cm dio una absorbancia de 0.957 a 272
nm y de 0.559 a 327 nm. Hallar las
concentraciones de X e Y en la mezcla.
2. El Pd (II) y el Au (III) se analizaron
simultneamente por medio de una reaccin con
metiomeprazina (C
19
H
24
N
2
S
2
). La absorcin
mxima para el complejo de Pd ocurre a 480 nm
y para el complejo de Au a 635 nm (valores de
c
480nm
y c
635nm
en la tabla).
Una muestra de 25 mL se trat con exceso de
metiomeprazina y se diluy a 50 mL. Calclese las
concentraciones molares de Pd (II) y Au (III) en la
muestra si la solucin diluida tuvo una
absorbancia de 0.533 a 480 nm y de 0.590 a 635
nm cuando se midi en una celda de 1 cm de
paso ptico.
Absortividad molar,c
Complejo 480 nm 635 nm
Pd 3.5510
3
5.6410
2
Au 2.9610
3
1.4510
4
Absortividad molar,c
,nm X Y
272 16440 3870
327 3990 6420
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Anlisisdemezclas:Puntoisosbstico
Longitud de onda a la que
se cruzan entre si los
espectros de A de dos
especies.
En una disolucin en la que
ocurre una reaccin qumica
es una prueba de que:
Solo hay 2 componentes
La concentracin total es
constante.
Aplicacin: estudio de
concentracin total de dos
especies en equibrio.
A
acido
=A
base

c
acido
=c
base
( )
base acido o isosbstic punto
base base acido acido o isosbstic punto
c c A
c c A
+ =
+ =
b
b b
cido
Base
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Valoracionesfotomtricas
Identificacin de puntos de equivalencia de titulaciones.
Uno o ms de los reactivos o productos debe absorber
radiacin (alternativa: indicador).
titulante :
producto :
analito :
t
p
s
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
V
t
,mL
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Valoracionesfotomtricas
Analitos:Bi(III)+Cu(II)
Concentracin:0.002M
V
disolucin
:100mL
Valorante:EDTA0.1M

analtica
:745nm
Cu(II)+BiY

CuY
2
+BiY

CuY
2
+BiY

+Y
4
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Espectroscopa derivada

Max
-
-
-
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Espectroscopa derivada:Aplicaciones
Anlisis cualitativo: Identificacin de una sustancia
por comparacin de espectro medido vs un espectro
de referencia.
Derivadas de orden superior: Aumentan nmero de
bandas de un espectro (espectro ms complejo).
Ejemplo: Testosterona
Espectro de cero orden: solo una banda ancha (330 nm)
Espectro de segundo orden: seis bandas distintas
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Espectroscopa derivada:Aplicaciones
Reducir efectos de interferencia originados por
dispersin, matriz de muestra u otros compuestos
que absorben luz en la regin UV/Vis (anlisis
cuantitativo)
10%
1%
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Espectroscopa derivada:Aplicaciones
Zerocrossing
Simultaneous Determination of %Furfuraldehyde and 5
(Hydroxymethyl) 2furfuraldehyde by Derivative
Spectrophotometry
J. Agric. Food Chem. 1002, 40, 10221025
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Espectroscopa derivada:Aplicaciones