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APOSTILA CURSO DE MICOLOGIA MDICA

1.- Introduo Identificao dos fungos Generalidades Os fungos so organismos eucariticos, desprovidos de clorofila e de celulose, uni ou pluricelulares sem a capacidade de formar tecido, imveis na sua maioria. Cada clula pode gerar, por si s, um novo organismo da mesma espcie. So considerados os principais biodegradradores de matria org nica de nosso planeta. !s clulas f"ngicas apresentam morfologia vari#vel, mostrando grande diferena em taman$o, estrutura e atividade metablica, formando diferentes tipos de col%nias &uando cultivados em meios apropriados, estruturas de frutificao comple'as e(ou elaborados mecanismos de propagao e disperso.

REINO EUMYCOTA
"D! #oo$ !t %& '((()
Divis !s

Zygomycota

Chytridiomycota

Ascomycota

Basidiomycota

REINO PROTOZOA: Rhinosporidium seeberi REINO CHROMISTA) Pythium insidiosum

Os fungos so organismos distintos das bactrias em taman$o, estrutura celular e composio &u+mica. Os fungos so eucariontes isto possuem n"cleos envolvidos por membrana prpria, $eterotrficos, com nutrio de absoro, uni ou pluricelulares, com parede formada de polissacar+deo incluindo glucanas, mananas, &uitina bem como glicoprote+nas, sem celulose. ! composio desses compostos vari#vel e depende da posio sistem#tica dos fungos, ergosterol o principal componente da membrana f"ngica. ! clula f"ngica constitu+da pelos componentes encontrados em outros organismos eucariticos. !s organelas citoplasm#ticas e inclus,es so) mitoc%ndrias, vac"olos, ves+culas, ret+culo endoplasm#tico, microt"bulos, ribossomos e cristais de glicog-nio. Os t+picos aparel$os de Golgi iro estar sempre presentes. .uase todos os fungos so aerbios e todos necessitam matria elaborada para sua alimentao /$eterotrficos0. Os fungos no ingerem seu alimento, mas possuem nutrio de absoro e parasitam seres vivos ou atacando matria morta como saprbios, parasitas, simbiontes ou patgenos. Os fungos se desenvolvem em meios de cultivos especiais, formam col%nias &ue so classificadas em dois tipos principais, leveduriformes e filamentosas, &ue se diferenciam pela macromorfologia e micromorfologia. !s col%nias de leveduras so, em geral, de consist-ncia cremosa de cor branca a creme, bril$antes ou opacas podendo apresentar 1s ve2es colorao escura ou alaran3ada. !s leveduras produ2em clulas simples, arredondadas, ovais ou alongadas &ue se reprodu2em &uase sempre por brotamento, geralmente na posio polar c$amadas de *&%sto+on,dio. !lgumas leveduras podem produ2ir, brotos simultaneamente em v#rios pontos. Os brotamentos ou clulas fil$as so liberados da clula me, formando clulas independentes ou continuar unidos formando clulas alongadas c$amadas de -s!udo.i/%s &ue se diferenciam das $ifas verdadeiras por apresentarem constrio nos septos. !lm dos blastocon+dios as leveduras podem apresentar %rtro+on,dios, -s!udo.i/%s e +&%0ido+on,dios t+picos. !s col%nias de fungos filamentosos podem ser granulares, cotonosas, aveludadas, pulverulentas, membranosas. O seu talo consiste de $ifas &ue podem ser cont+nuas ou

interrompidas em intervalos irregulares por septos /septada0 &ue dividem as $ifas em clulas. 5m con3unto de $ifas forma o miclio &ue pode ser vegetativo ou reprodutivo. O miclio vegetativo penetra no meio de cultivo, para absorver subst ncias nutritivas para o fungo. O miclio vegetativo o &ue fica na parte superior do meio e produ2 as estruturas de reproduo t+picas para cada grupo de fungos. Os fungos se'uados se reprodu2em por esporos &ue podem ser formados internamente /%s+o-or%s0 ou e'ternamente /*%sidios-or%s0. Os fungos se'uados tambm se reprodu2em asse'uadamente. 6a reproduo asse'uada, as estruturas de reproduo tomam nomes variados de acordo com o grupo a &ue pertencem os fungos. Con,dios so estruturas asse'uadas de reproduo encontradas entre os fungos filamentosos. 7odem apresentar taman$os, formao, cores e septos diferentes /0%+ro+on,dios, 0i+ro+on,dios, %0!ro+on,dios, didi0o+on,dios, /r%$0o+on,dios, di+tio+on,dios, etc.0. !s $ifas &ue sustentam os con+dios so denominadas de +onidi1/oros e as clulas &ue do origem aos con+dios +onidio$2ni+%s. Os con+dios podem ser claros ou $ialinos 8 .i%&o+on,dios ou pigmentados e escuros 9 /!o+on,dios. :ntre os fungos de $ifas no septadas, as $ifas areas produ2em esporos asse'uados /!s-or%n$ios-oros0 dentro de estruturas c$amadas !s-or3n$ios. !s $ifas &ue sustentam os !s-or3n$ios so con$ecidas como !s-or%n$i1/oros. Columela uma invaginao estril do esporangiforo na #rea frtil do espor ngio.

'.- Co&!t% d! M%t!ri%& 4io&1$i+o ! coleta de material biolgico a primeira etapa no processo de identificao dos fungos. .uando reali2ada incorretamente, dificulta a observao, isolamento e identificao do agente causal da doena. O primeiro passo consiste em obter os dados do paciente) nome, idade, <G, proced-ncia, endereo, telefone para contato, entre outros= dados epidemiolgicos) profisso, contato com animais, doena associada, estado imunolgico, etc= informa,es cl+nicas) local anat%mico acometido, aspecto da leso, suspeita cl+nica, antibioticoterapia prvia, evoluo e dados do mdico respons#vel. O procedimento de coleta varia segundo a regio acometida, suspeita cl+nica e tipo de material biolgico. ! &uantidade de amostra coletada deve ser suficiente para permitir o procedimento de identificao laboratorial do fungo) como e'ame microscpico direto e cultivos em v#rios meios, com eventuais repeti,es desses e'ames para confirmao dos ac$ados laboratoriais. Pro+!di0!nto d% +o&!t% 7ara efeitos pr#ticos, a coleta de material biolgico, depende da locali2ao e do tipo da micose. A0ostr%s d! 0i+os!s su-!r/i+i%is ! +ut3n!%s >ambm denominadas dermatomicoses acometem) pele, p-lo, un$as, provocando algumas delas altera,es somente de import ncia esttica. A.- A0ostr%s d! -!&!. ! prvia desinfeco da leso com algodo embebido em #lcool ?@A diminui a biota bacteriana, aumentando a sensibilidade do e'ame micolgico.

<aspar a leso com bisturi, cureta esterili2ada ou com l minas de vidro previamente flambadas. 6as les,es sugestivas de dermatofitose, a coleta deve ser feita nas bordas da leso, 3# &ue este o sitio ativo da infeco. .uando o raspado da leso no pode ser reali2ado, pode9se optar por mtodos tais como o de 7orto /s para pitir+ase versicolor0 &ue consiste em utili2ar uma fita adesiva transparente /Cure'0 &ue pressionada sobre a leso, removida e fi'ada sobre uma l mina ou a utili2ao de um tapetin$o estril de apro'imadamente ; cm &ue e pressionado sobre a leso, embrul$ado e transportado ao laboratrio /Dariat E >apia, 1FGG0. !s desvantagens so a falta do cultivo ao empregar a tcnica de 7orto e do e'ame direto, &uando se usa o tapetin$o. 4.- A0ostr%s d! un.%. ! leso pode9se locali2ar na regio subungueal distal, pro'imal ou l mina superficial da un$a. ! tomada amostra depender# do tipo de leso. Ceve9se remover a presena de esmalte antes da coleta. 6a onicomicose superficial branca, raspa9se as #reas esbran&uiadas da parte superficial com o au'ilio de bisturi estril. 6o acometimento sub9ungueal, deve9se raspar profundamente a #rea infectada desde a poro distal 1 pro'imal. Os primeiros detritos coletados da poro distal devero ser eliminados 3# &ue so ricos em contaminantes. !s escamas obtidas da poro profunda da leso podero ser usadas para o e'ame micolgico. .uando as un$as so distrficas, pode9se au'iliar a coleta com tesouras limpas e desinfetadas. C.- A0ostr%s d! +%*!&o ! -2&o. 6os casos de piedras cortam9se com tesoura os cabelos ou p-los apresentando ndulos f"ngicos /observados com au'ilio de lupa0. 6as tin$as do couro cabeludo e da barba, as amostras podem incluir escamas da pele e os p-los ou cabelos alterados. Os cabelos opacos e engrossados so facilmente arrancados, a partir das bordas das placas alopcicas com a3uda de uma pina limpa e flambada.

Os p-los, escamas de pele ou de un$as, podem ser col$idos e transportados entre duas l minas de vidro limpas, secas e flambadas, embrul$adas em papel, ou em placas esterili2adas, sempre com a identificao da amostra. D.- A0ostr%s o+u&%r!s. Daterial de con3untiva col$ida da mucosa, desde a poro pro'imal em direo a borda, com HsIabH estril, embebido em soluo salina. O HsIabH pode ser colocado num tubo estril, contendo meio semi9slido de transporte ou @,Bml de soluo salina. Daterial ocular /crnea0 col$ido s por oftalmologistas, raspando as #reas necrticas, ulceradas e supurativas da leso com esp#tula esterili2ada. :sta amostra ser# processada em l mina /e'ame microscpico direto0 e semeada imediatamente nos meios de cultivo apropriados ou tubo estril contendo soluo salina. :.9 !mostras ticas. Geralmente o material biolgico obtido a partir do conduto auditivo e'terno, com JsIabK esterili2ado umedecido previamente em soluo salina. E.- Mu+os%s. i9 Ducosa oral. !s amostras devem ser obtidas por raspado da superf+cie epitelial acometida, empregando esp#tula ou bisturi rombo esterili2ado. 6a candid+ase oral em &ue se verificam placas esbran&uiadas, o material pode ser col$ido com JsIabK estril, ou ala de platina, colocar em tubo esterili2ado contendo soluo salina. ii9 Ducosa nasal. O material nasal pode ser col$ido com esp#tula, bisturi, ala ou LsIabL. 6os casos de suspeita de aspergilose, feo$ifomicose, 2igomicose ou rinosporidiose, recomenda9se coleta do material com procedimento cir"rgico, como bipsia, etc.

iii9 Ducosa vaginal. !s amostras de flu'o vaginal se tomam sem asseio prvio da paciente, com JsIabK, colocar em um tubo com soluo salina esterili2ada. iv9 Ducosa genital Dasculina. ! amostra pode ser col$ida com sIab da #rea da glande &ue apresenta pontos esbran&uiados ou pseudomembranas, ou do prep"cio em onde podem ser encontradas, ves+culas. v9 Ducosa perianal. 7ode apresentar les,es esbran&uiadas ou ulceradas de aspecto granulomatosos. !s amostras so obtidas por raspado com bisturi rombo estril ou JsIabK Mi+os!s su*+ut%n2%s !.9 Mes,es sugestivas de :sporotricose. 6o caso de abscessos fec$ados a obteno de material purulento feita por puno, com seringa esterili2ada ou por drenagem com prvia limpe2a da 2ona implicada. .uando o abscesso drena espontaneamente, o material purulento deve ser col$ido com esp#tula, ala ou JsIabK e transferido a um tubo estril de tampa de rosca, com soluo salina. N.9 Mes,es sugestivas de Dicetoma. O material compreende pus &ue deve conter gros &ue podem ser vis+veis a ol$o nu. .uando dif+cil a coleta da amostra, recomenda9se colocar ga2e sobre a superf+cie lesada por 1O a *; $ o &ue permitir# recuperar os gros para o estudo micolgico completo. C.9 Mes,es sugestivas de Cromoblastomicose. 6a superf+cie cut nea lesada, observam9se geralmente pontos negros devido 1 eliminao trans9epitelial do fungo. O material biolgico deve ser coletado a partir dos pontos enegrecidos da leso. :scamas e crostas com au'ilio de bisturi e agul$as estreis, bipsias podem tambm ser obtidas.

C.9 Mes,es sugestivas de Mobomicose / Coena de Porge Mobo0. ! amostra compreende material biolgico coletado por biopsia ou secreo das les,es ulceradas col$idas com esp#tula, bisturi rombo, ala ou QsIabL e transferido a um tubo estril contendo soluo salina. O e'ame microscpico direto e(ou anatomopatolgico confirmam o diagnstico de lobomicose. Cultura no obtida, at o presente. :.9 Mes,es sugestivas de <inospor+diose O material biolgico deve ser col$ido da superf+cie de crescimento polipide. :'ame microscpico direto e cortes de tecido corados confirmam o diagnstico. R.9 Reo$ifomicose subcut nea Col$er o material dos abscessos subcut neos por puno ou bipsia. Ra2er e'ame microscpico direto, cultura e cortes sem colorao. G.9 Sigomicose subcut nea Col$er uma pe&uena poro do material por bipsia. Ra2er prepara,es, e'ame microscpico direto com TOU, an#tomo patolgico e cultura.

!mostras de micoses sist-micas !.9 >rato respiratrio. i9 :scarro. !mostras de escarro so coletadas aps prvia lavagem bucal preferentemente em 3e3um. O material dever# conter escarro profundo, livre de saliva e ser# col$ido em frasco estril de boca larga. 6o caso dos pacientes &ue no e'pectoram facilmente, podem ser usadas nebuli2ao, com soluo salina $ipert%nica.

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ii9 Mavado br%n&uico. 7rocedimento reali2ado pelo mdico com broncoscpio. O material cl+nico colocado em frasco estril e enviado ao laboratrio. !pro'imadamente 1 ml de escarro ou lavado br%n&uico, levado a um tubo c%nico de centrifuga contendo *B@ ul apro'imadamente de TOU *@A mais tinta, sendo incubada por 1* $ a 4?VC. O material biolgico centrifugado a *B@@ rpm durante 1@ minutos. ! preparao microscpica reali2ada a partir do sedimento. N.9 Nipsia. Cevem ser obtidas amostras representativas da patologia suspeita. O material deve ser dividido em dois frascos estreis diferentes, um contendo formol ao @.;A e outro contendo soluo salina, destinados ao e'ame $istopatolgico e micolgico, respectivamente. C.9 Dedula ssea. W um procedimento mdico &ue e'ige rigorosa assepsia. 7odem ser obtidas *94 ml do material com seringa com $eparina, &ue deve ser transportado imediatamente ao laboratrio micolgico.

C.9 M+&uido cefalorra&u+diano /MC<0 7ara o estudo micolgico devem ser col$idos B a 1@ ml de MC<, obtido por puno lombar, em condi,es de rigorosa assepsia. O MC< normalmente, livre de microrganismos. .ual&uer agente observado deve ser considerado como um patgeno potencial. :.9 Sangue <eali2ar assepsia do sitio escol$ido para puncionar com #lcool ?@ A esperar B segundos e aplicar soluo de Iodo9povidine a 1@A, coletar de O a 1@ ml de sangue venoso /adultos0 e de 1 a 4 ml /crianas0, para cada frasco coletado. >erminada a puno retirar a

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agul$a trocando9a por uma nova, inocular o sangue no frasco enviando de imediato ao laboratrio. 6"mero e intervalo das amostras) 9Suspeita de septicemia) col$er duas amostras de sangue de diferentes locais com intervalo de uma $ora. 9Rebre de origem descon$ecida) col$er duas amostras com intervalo de uma $ora. Se forem negativos, aps *; a 4G $, col$er as outras duas amostras com intervalo de 1 $ora. R.95rina ! assepsia com #gua e sabo da regio genital deve ser rigorosa pudendo aps lavar com povidine, en'ugar com #gua estril e secar com ga2e estril. /se'o masculino retrair o prep"cio e lavar a 2ona do glande e meato urin#rio0 Coletar 1@ ml de urina do segundo 3ato urin#rio /se'o feminino afastando os grandes l#bios0 em frasco esterili2ado. Crianas) Ra2er assepsia rigorosa dos genitais e regio perianal com #gua e sabo, colocar o coletor urin#rio ade&uado segundo se'o, uma ve2 obtida a amostra mandar o coletor fec$ado ao laboratrio. /o coletor dever# ser trocado a cada 4@9;@ minutos caso a criana no ten$a urinado0 7aciente com sonda vesical de perman-ncia) Cespre2ar a urina remanescente na sonda vesical permitindo a descida desta para a bolsa coletora, pinar a sonda vesical *@ cm de distal a pro'imal logo &ue a urina fresca se acumule. 7rvia assepsia com #lcool ?@ A, coletar 1@ ml da amostra puncionando no lugar do dispositivo para coleta de urina, e depositar em tubo esterili2ado ade&uadamente fec$ado e transportar ao laboratrio. /no caso da sonda urin#ria no apresentar dispositivo para coleta de urina recomend#vel desligar a sonda vesical do sistema de drenagem e obter amostra de urina mediante gota a gota diretamente no frasco estril. >odo o procedimento dever# ser reali2ado respeitando as normas de assepsia0.

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G.9 Re2es. !pro'imadamente *@g de fe2es recm emitidas devem ser coletadas em frasco esterili2ado e enviadas rapidamente ao laboratrio. 7ara cultivo de vigil ncia, utili2a9se JsIabK anal. U.9 Outros l+&uidos corporais. >odos os l+&uidos corpreos so obtidos por aspira,es percut nea ou drenagem, empregando procedimentos invasivos praticados pelo mdico. Ceve ser coletado tanto l+&uido &uanto se3a poss+vel * a 1@ ml ou mais, pois as concentra,es dos microrganismos podem ser muito bai'as e coletadas em recipientes com tampa rosca contendo $eparina 1)1@@@. >odas as amostras de material cl+nico devem ser col$idas ade&uadamente, em condi,es ideais e transportadas rapidamente ao laboratrio, com a solicitao do tipo de e'ame, suspeita cl+nica, dados cl+nicos e epidemiolgicos do paciente, para processamento micolgico imediato. 5.- E6%0! Mi+ros+1-i+o Dir!to ! Cu&tur% O e'ame microscpico direto de material cl+nico um dos procedimentos mais simples e "teis para o diagnstico laboratorial de infec,es f"ngicas. X#rios clarificadores podem ser usados, sendo TOU a 1@ ou *@A o mais empregado. ! observao de elementos f"ngicos em escamas de pele, p-los ou un$as pode proporcionar uma clara indicao do tipo de micoses envolvida) dermatofitose, candid+ase ou pitir+ase versicolor. O e'ame microscpico direto de fluidos, bipsia ou outro material cl+nico pode tambm estabelecer o diagnstico de uma micose sist-mica, orientando a etiologia da infeco como paracoccidioidomicose, $istoplasmose, 2igomicose, $ialo$ifomicose, feo$ifomicose entre outras.

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>cnica) Colocar parte do material biolgico a ser estudado sobre l mina limpa, adicionar uma a duas gotas de TOU a *@A, cobrir com lam+nula e flambar ligeiramente. !s l minas previamente marcadas sero colocadas em c mara "mida, Jovernig$tK a ; YC e posteriormente se reali2ar# a segunda observao microscpica. 6unca se deve pressionar a lam+nula com os dedos, uma ve2 &ue os #cidos gra'os naturais da pele dificultam a observao. .uando a amostra muito espessa aconsel$#vel pressionar a lam+nula com uma pina ou outro ob3eto. O fungo pode ser ento liberado do material biolgico, o &ue permite sua visuali2ao. ! adio de tinta 7arZer /.uinZ0 a2ul permanente ou tinta Sc$eaffer ** ao TOU, permite mel$or visuali2ao e contraste dos fungos em especial das clulas de Malassezia furfur &ue se tingem mais intensamente do &ue outras estruturas f"ngicas. Outras subst ncias tais como goma de Nerlesse, CDSO e C$loroblacZ : podem ser empregadas na visuali2ao do fungo a partir do material biolgico. 7ara verificao da presena de c#psula, devem9se fa2er prepara,es do material cl+nico com tinta da C$ina, dilu+da 1)1 em #gua destilada ou salina esterili2ada.

Cultura dos Rungos) Os fungos preferencialmente se desenvolvem 1 temperatura de *BC, sendo seu crescimento mais lento &ue o das bactrias. 7or isto $# necessidade de acrescentar inibidores bacterianos aos meios de cultura ao trabal$ar com material biolgico contaminado. :ntre os antibiticos cloranfenicol B@ a 4@@ mg(l empregado para inibir o desenvolvimento de bactrias. 7ara inibir o crescimento de determinados fungos contaminantes do ar &ue t-m desenvolvimento r#pido deve9se usar ciclo$e'imida. Rungos filamentosos crescem mel$or entre *; e *OYC e os leveduriformes entre *; e 4?YC, em pU de G,G a ?,*. :'iste um grupo de fungos &ue apresenta dimorfismo trmico) uma fase saprof+tica ou filamentosa 1 temperatura /*;9*OYC0 e uma fase parasit#ria ou leveduriforme a 4?YC. So os fungos dimrficos) S. schenckii, H. capsulatum, P. brasiliensis, B. dermatitidis.

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>cnica) ! semeadura est# na depend-ncia do tipo de amostra e da suspeita cl+nica. 7-los, escamas de pele ou de un$as, sero semeadas em G a O picadas com ala em M sobre #gar inclinado em tubo. Rluidos biolgicos como MC<, lavado br%n&uico, etc., sero centrifugados a 4@@@ rpm. por B minutos e semeados com pipeta 7asteur estril ou pipeta graduada sobre #gar inclinado. Daterial de biopsia deve ser fragmentado e semeado fa2endo picadas na superf+cie do #gar. !mostras de $emoculturas sero semeadas acrescentando @,B ml do caldo na superf+cie do meio. ! ade&uada coleta e transporte de material biolgico so essenciais para se obter o diagnstico micolgico preciso.

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LISTA DE MATERIAL 4IOL7GICO8 E9AMENS MICROSC7PICOS DIRETOS E MEIOS DE CULTURA PARA O DIAGN7STICO LA4ORATORIAL DAS MICOSES Dicoses 7itiriase Xersicolor >in$a negra !mostra cl+nica :scamas de 7ele !gentes etiolgicos Clulas leveduriformes esfricas [gar bile de boi Malassezia furfur ovaladas com ou sem brotamento adicionado de a2eite de e filamentos curtos septados. oliva Sabouraud9de'trose Hortae werneckii #gar\\= Mactrimel #gar\\ Sabouraud9de'trose Piedraia hortae #gar\\. Sabouraud9de'trose #gar\\= Mactrimel #gar\\ richosporon spp :'ame Dicroscpico Cireto Deio de Cultura >e tempo de incubao 4?C durante ? dias *BC durante *@ dias *BC durante 4@ dias. *BC durante ? dias

Uifas escuras septadas, irregulares. 7iedra negra Cabelo 6dulos marron 9 escuros, formados por artrocon+dios escuros= ascos com * a O ascosporos t+picos 7iedra branca 7-los regio 6dulos claros, formados por genitais, a'ilares, artroconids claros e blastocon. etc. Cermatofitose Cabelo com ra+2 !rtrocon+dios refringentes do couro ectot$ri', endot$ri' ou cabeludo ectoendot$ri'. 7arasitismo f#vico Cermatofitose da pele. :scamas e p-los Uifas septadas, ramificadas.

:scamas de 7ele

Sabouraud9de'trose Microsporum spp, *BC durante #gar\\= Mactrimel richophyton spp. 1B a 4@ dias #gar\\. D]cosel *BC durante 1B a 4@ dias *BC durante 1B a 4@ dias

Sabouraud9de'trose !pidermophyton #gar\= Mactrimel #gar\\. spp, Microsporum D]cosel spp, richophyton spp. Onicomicose :scamas l mina Uifas septadas com artrocon+dios Sabouraud9de'trose richophyton spp. borda livre interna da un$a retangulares ou esfricos. #gar\= Mactrimel #gar\\. espessa. /raramente l mina D]cosel e'terna0

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Onicomicose borda :scamas l mina livre fina e de borda interna da un$a e periungueal do arco /candid+ase0 periungueal Cromomicose Crostas, secreo ou pus.

Clulas leveduriformes e(ou Sabouraud9de'trose "andida albicans, *BC durante pseudo$ifas #gar\\= Mactrimel "andida spp. ? a 1B dias #gar\\ :struturas globosas de cor marrom, de parede grossa, septada em dois planos /corpos esclerticos0 ou talo moriforme. Meveduras alongadas como c$aruto, o observadas raramente. Gr nulos parasit#rios formados por aglomerao de $ifas claras ou escuras Sabouraud9de'trose Phialophora #gar\\= Mactrimel "ladosporium #gar\\ Rhinocladiella #onsecaea spp. Sabouraud9de'trose #gar\\= Mactrimel #gar\\. Sabouraud9de'trose #gar\\= Mactrimel #gar\\. spp, *BC durante spp, *@ dias spp.

:sporotricose

Secreo ou pus

:umicetoma

Secreo ou pus

<inosporidiose Mobomicose

Cescarga nasal ou tecido do plipo Daterial de leso &ueloides e tumores Secreo ou pus

Reo$ifomicose

Sigomicose

6dulos

:sfrulas at 4B@ paredes espessas em diversos graus de maturao Clulas leveduriformes *lenosporella loboi, taman$o uniforme F91@ um. +oboa loboi, P. loboi 5ma ponte tubular une uma clula a outra Uifas escuras septadas, Sabouraud9de'trose Phialophora spp, *BC durante elementos leveduriformes, #gar\\= Mactrimel "ladosporium spp., *@ dias sem corpos esclerticos #gar\\ #onsecaea spp., ,an&iella spp. Uifas largas no septadas Sabouraud9de'trose "onidiobolus

*BC e 4? C durante *@ dias Madurella spp %&r'os *BC durante escuros(, *@ dias Pseudallescheria boydii %&r'os claros(, )cremonium spp, P. romeroi Rhinosporidium seeberi Sporothri$ schenckii

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subcut nea 7aracoccidioido micose

subcut neos :scarro, pus, raspado de mucosa, etc.

com reao /corte0

Uistoplasmose

:scarro, raspado das les,es.

Criptococose

M.C.<., escarro, pus, etc

coronatus, Basidiobolus haptosporus Clulas esfricas de taman$o Sabouraud9de'trose Paracoccidioides vari#vel de membranas #gar\= Mactrimel brasiliensis duplas com um ou muitos #gar\\ brotamentos, clulas esfericas isoladas, clulas caten., Clulas caliciformes. Clulas leveduriformes Sabourad9de'trose Histoplasma pe&uenas *94m, esfricas #gar\=Mactrimel capsulatum ou ovaladas no interior de #gar, macrfagos ou mononucleares /colorao com Giemsa0. Clulas leveduriformes Sabouraud9de'trose "ryptococcus esfricas com c#psula grande #gar\= Mactrimel neoformans /em observao com tinta da #gar\\. C$ina0

eosinof+lica #gar\=

*BC e 4?C durante 4@ dias

*BC e 4?C durante 4@ dias

4?C durante 1B dias

Candid+ase

<aspado mucosa, Clulas leveduriformes ou Sabouraud9de'trose biopsia, escarro, pseudo$ifas #gar\= Mactrimel etc. #gar\\. Otomicose 7seudomembran Rilamentos com ou sem Sabouraud9de'trose a com pontos de cabeas aspergilares ou #gar\\= Mactrimel cores ou massa clulas leveduriformes e #gar\\. em migal$a de pseudo$ifas po \ Deio adicionado de Ciclo$e'imida e cloranfenicol.= \\ Deio adicionado de cloranfenicol

"andida albicans, 4?C durante "andida spp. 1B dias )sper&illus ni&er, ). *BC durante #umi&atus, )sper&illus 1B dias spp, "andida albicans, etc..

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Mi+o&o$i% 0:di+%8 0i+os!s ! s!us %$!nt!s :m micologia mdica, as micoses so divididas para seu estudo em)

MICOSES MICOSES SUPER=ICIAIS< SUPER=ICIAIS<

7I>I<I!S:S 7I>I<I!S:S X:<SICOMO< X:<SICOMO< >I6U! >I6U! 6:G<! 6:G<! 7I:C<! 7I:C<! 6:G<! 6:G<! 7I:C<! 7I:C<! N<!6C! N<!6C!

MICOSES MICOSES CUT;NEAS< CUT;NEAS< C:<D!>ORI>OS: C:<D!>ORI>OS: S S C!6CICI!S:S C!6CICI!S:S

MICOSES MICOSES SU4CUT;NEAS< SU4CUT;NEAS< :S7O<O><ICOS: :S7O<O><ICOS: C<ODONM!S>ODICOS: C<ODONM!S>ODICOS: DIC:>OD!S DIC:>OD!S <I6OS7O<ICIOS: <I6OS7O<ICIOS: :6>ODOR>O<ODICOS: :6>ODOR>O<ODICOS: DICOS: DICOS: CO CO PO<G: PO<G: MONO MONO

MICOSES MICOSES SIST>MICAS< SIST>MICAS< 7!<!COCCICIOICODICOS: 7!<!COCCICIOICODICOS: NM!S>ODICOS: NM!S>ODICOS: UIS>O7M!SDOS: UIS>O7M!SDOS: COCCICIOICODICOS: COCCICIOICODICOS:

MICOSES MICOSES OPORTUN?STICAS< OPORTUN?STICAS< SIGODICOS:S SIGODICOS:S UI!MOUIRODICOS: UI!MOUIRODICOS: R:OUIRODICOS: R:OUIRODICOS: C!6CICI!S: C!6CICI!S: C<I7>OCOCOS: C<I7>OCOCOS: !S7:<GIMOS: !S7:<GIMOS: 76:5DOCIS>OS: 76:5DOCIS>OS: M:X:C5<OS:S M:X:C5<OS:S

Mi+os!s su-!r/i+i%is Os agentes de micoses superficiais, formam um grupo $eterog-neo de fungos &ue no sensibili2am o indiv+duo, no provocam rea,es alrgicas a distancia como os agentes de micoses cut neas. Malassezia furfur, Hortae werneckii, fungos envolvidos nessas micoses. richosporon spp., Piedraia hortae so os

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Malassezia furfur - !gente da -it,ri%s! v!rsi+o&or, afeco cut nea assintom#tica &ue se caracteri2a por placas descamativas de diferentes cores) castan$o9avermel$adas, marrons ou brancas. O papel do fungo em doenas de nature2a seborreica como psor+ase, dermatite seborreica, foliculite discut+vel. M. furfur tem sido isolada tambm de infec,es sist-micas, principalmente em neonatos. Hortae werneckii - agente da tin$a negra, leso &ue se caracteri2a pela formao de manc$a pouca descamativas de colorao castan$a a preta, principalmente nas palmas das mos. :ssas les,es vo aumentando de taman$o, durante meses ou anos. richosporon spp 9 causa -i!dr% *r%n+%, &ue consiste em ndulos castan$o9claros e macios em torno de p-los da regio genital, a'ilar e do couro cabeludo. Os ndulos so menos aderentes &ue os da piedra negra. 6os pacientes com imunodefici-ncia, pode ocorrer invaso do sangue, dos rins, dos pulm,es e da pele. Piedraia hortae - produ2 -i!dr% n!$r%, &ue consiste em ndulos duros, pretos e firmes em torno dos cabelos. Mi+os!s +ut3n!%s !grupam as dermatofitoses e as candid+ase cut neas. Os agentes das micoses cut neas atacam a epidermes e as camadas mais profundas da crnea, c$egando a produ2ir granulomas, se locali2ando na pele, p-los, un$as e mucosas. Os dermatfitos so fungos relacionados entre si &ue invadem a &ueratina morta. 7ertencem aos g-neros Microsporum, !pidermophyton e seres $umanos. :sses fungos infectam locais espec+ficos do corpo, &ue servem de base para o diagnstico cl+nico. ! locali2ao da dermatofitose pode a3udar na identificao preliminar do fungo. richophyton. !s espcies geof+licas vivem principalmente no solo= as 2oof+licas, em animais= as antropof+licas, nos

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!G:6>: Microsporum !pidermophyton .menta&rophytes .rubrum . .errucosum .tonsurans .shoenleinii ..iolaceum

7:M: a a a a a a a a

56U!S a/raro0 9 a a a a a a

7^MO I6X!S_O :C>`><IC! a 9 a a /raro0 a 9 9 9

7^MO I6X!S_O :6C`><IC! 9 9 9 9 9 a a a

Microsporum canis - causa dermatofitose do corpo e do couro cabeludo, geralmente encontrado em crianas ad&uirido de animais infectados como ces e gatos. Microsporum &ypseum - causa dermatofitose inflamatria do corpo ou do couro cabeludo, contra+do por contato com solo contaminado. !pidermophyton floccosum - dermatofitose epid-mica /p de atleta0 em locais de veraneio, bem como dematofitose inguinal. richophyton rubrum - dermatofitose do corpo, dos ps, da viril$a e das un$as. :m paciente imunodeprimidos, pode causar ndulos ou abscessos subcut neos. richophyton menta&rophytes - dermatofitose inflamatria nos ps, no corpo, nas un$as, na barba e no couro cabeludo. W causa comum de p de atleta, apresenta as variedades granular e cotonosa. richophyton tonsurans - causa tin$a do couro cabeludo, tin$a capilar com pontos pretos e 1s ve2es dermatofitose do corpo, dos ps e das un$as. richophyton .errucosum 9 dermatofitose do couro cabeludo, da barba ou do corpo, geralmente ad&uirida por contato com o gado infectado.

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richophyton shoenleinii) dermatofitose do couro cabeludo c$amado R!XO /tin$a favosa0 com alopcia definitiva, raramente, dermatofitose do corpo ou das un$as. Candid+ases So causadas primordialmente por ". albicans, embora outras espcies de "andida este3am se tornando cada ve2 mais importantes como agentes etiolgicos. ! ". albicans e'iste como normal no trato gastrointestinal, na #rea vulvovaginal, na pele e fe2es. :m casos de comprometimento imunolgico e conse&bente &ueda da resist-ncia causados por !ICS, neoplasias, l"pus eritematoso, tuberculose ou terapias com esterides ou agentes citot'icos, as leveduras podem proliferar e causar auto9infec,es. !s candid+ases atingem principalmente as mucosas, e'emplo candid+ase oral. broncopulmonar, vulvovaginal= candid+ase mucocut nea cr%nica, cut nea, ungueal, etc. so algumas das manifesta,es &ue podem ocorrer. Mi+os!s su*+ut3n!%s Os agentes de micoses subcut neas, tem $abitat no solo. 7odem ocorrer micoses subcut neas &uando $# traumatismo por espin$os ou outro tipo de vegetao ou materiais contaminados por fungos. Os organismos alo3am9se na pele e passam a produ2ir infeco locali2ada na pele e no tecido subcut neo e 1s ve2es nos linfonodos da regio. <aramente a infeco se se dissemina. !s les,es subcut neas caracteri2am9se pela cronicidade de #reas duras, nodulosas, crostosas e ulceradas. .ue no cicatri2am e periodicamente produ2em e'sudao. Os membros inferiores, sobretudo os ps, so muitas ve2es comprometidos, visto &ue seu contato com espin$os e outros vegetais mais fre&bente. :sporotricose 8 :sta infeco decorre de ferimentos cut neos provocados por materiais contaminados, como espin$os de flores, gravetos, madeira, etc. 7rodu2 les,es ulcerativas subcut neas, nos membros, &ue podem avanar ao longo dos vasos linf#ticos. ! esporotricose pulmonar est# sendo observada com mais fre&b-ncia, deve ser distinguida da tuberculose, coccidioidomicose, $istoplasmose e sarcoidose. O agente etiolgico Sporothri$ schenckii, fungo dimrfico.

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Cromoblastomicose 8 !s les,es produ2idas evoluem com grande lentido torna9se, vo9se formando muitas protuber ncias sobrepostas, o &ue cria a apar-ncia de couve9flor. Geralmente, a erupo seca, mas pode ulcerar9se. 6a suas camadas mais profundas, encontram9se corpos esclerticos. Os principais agentes envolvidos) #. pedrosoi, #. compacta, P. .errucosa, ". carrionii, Rhinocadiella a/uaspersa. Dicetomas 8 O micetoma geralmente se restringe aos ps, mas pode ser visto em outras regi,es como mos e n#degas. Os ndulos, &ue periodicamente e'sudam um l+&uido oleoso contem gros &ue podem ser brancos, amarelos, vermel$os ou pretos. !os poucos as les,es comprometem toda a perna. ! infeco causada pelos fungos superiores /micetoma eumictico0 produ2 les,es fistulosas, com pouca dor ou destruio ssea, en&uanto a causada por bactrias fungiformes /micetoma actinomictico0 apresenta les,es tumorosas c%nicas semel$antes 1s erup,es de acne, com grande e'sudao e comprometimento sseo com dor. 7rincipais agentes de micetoma eumictico) Scedosporium apiospermum, )cremonium falciforme, )cremonium recifei, !$ophiala 0eanselmei, Madurella mycetomatis, Madurella &risea. 7rincipais agentes de micetoma actinomictico) 1ocardia asteroides, 1ocardia brasiliensis, 1ocardia otitidisca.arium, )ctinomadura madurae, )ctinomadura pelletierii, Streptomyces somaliensis, )ctinomyces israelii e )ctinomyces bo.is. <inosporidiose 8 doena &ue se caracteri2a pela formao de granuloma vegetante, poliposo, com sede predominantemente nasal ou ocular. /con3untiva palpebral, con3untiva bulbar e saco lacrimal0. P# foram verificados casos de locali2ao vaginal, retal e peniana, assim como no conduto auditivo e'terno. !gente etiolgico Rhinosporidium seeberi &ue no tem sido cultivado. :ntomoftoromicose ou 2igomicose subcut nea 8 Granuloma eosinofilico causados por 2igomicetos &ue invadem primariamente a gordura do tecido celular subcut neo. W

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comum em crianas, tradu2indo9se pelo aparecimento de um ndulo subcut neo &ue aumenta em volume, provocando intumescimento e'tensivo, progressivo e lento. Geralmente o paciente no apresenta imunodepresso !gentes envolvidos pertencentes aos g-neros "onidiobolus e Basidiobolus. Coena de Porge Mobo 8 dermatose &ue provoca les,es tipo &uelides com aus-ncia de comprometimento visceral, aus-ncia de adenopatia satlite, longa evoluo do processo. 6em sempre as les,es cut neas assumem aspecto puramente &ueloidiano ao lado e les,es papulosas, nodulares, verrucosas, e tuberosas podem ocorrer. !gente etiolgico, +acazia loboi /+oboa loboi0 ainda no cultivado.

Mi+os!s sist20i+%s Os fungos &ue causam micoses sist-micas vivem em forma saprbia no solo. !lguns animais de vida silvestre so reservatrios importantes. Os indiv+duos podem desenvolver a doena principalmente por inalao de prop#gulos. >odos os agentes de micoses profundas apresentam dimorfismo trmico. 6a nature2a e nos cultivos a *BC, formam col%nias filamentosas com reproduo asse'uada. 6os tecidos e cultivos a 4?C eles apresentam sua forma leveduriforme. :stes fungos so ta'onomicamente $eterog-neos) Histoplasma capsulatum, Paracoccidioides brasiliensis, Blastomyces dermatitidis, "occidioides immitis. Histoplasma capsulatum 8 agente de infeco relacionada a indiv+duos &ue visitam grutas ou lugares com morcegos. F@9FBA dos casos so assintom#ticos ou sub9 cl+nicos e os sintomas respiratrios gripais se resolvem espontaneamente. :sporadicamente algum paciente pode apresentar uma forma pulmonar aguda da doena, com suores noturnos, tosse, febre e emagrecimento. W fulminante em pacientes com imunodefici-ncia. Paracococcidioides brasiliensis 8 a infeco geralmente se caracteri2a por les,es pulmonares semel$antes 1s da tuberculose e de outras micoses. Mes,es nas mucosas nasais, oral, pele e outros rgos podem ocorrer.

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Blastomyces dermatitidis 2 O microrganismo ao ser inalado, produ2 infeco respiratria cr%nica e branda, &ue piora gradualmente, ao longo de semanas ou meses. :scarro torna9se purulento, sanguinolento. ! fase respiratria da doena tem semel$anas com tuberculose, coccidioidomicose, paracoccidioidomicose e $istoplasmose. 7ode provocar les,es subcut neas, sseas, etc. "occidioides immitis 2 7or inalao dos con+dios aps 1; dias, G@A dos pacientes apresentam infeco respiratria assintom#tica. O restante ;@A apresenta sintomas da doena respiratria gripal leve ou raramente grave. Complica,es pulmonares, na forma de cavidades ou de pneumonia ocorrem em BA. 7ode ocorrer disseminao por via $ematog-nica dos pulm,es para os ossos, as articula,es, a pele, os tecidos subcut neos, etc. Mi+os!s o-ortun,sti+%s ! maioria dos fungos &ue produ2em micoses oportun+sticas so saprfitos do meio ambiente, de crescimento r#pido, normalmente inalado. :sses organismos geralmente no so patog-nicos, mais atuam como patgenos oportunistas. O indiv+duo &ue apresenta algum tipo de depresso imunit#ria em decorr-ncia de doena ou em especial, do uso de medicamentos imunossupressores, antibioticoterapia por longo tempo, pode ser alvo de infec,es oportun+sticas. Sigomicose 8 infeco f"ngica aguda causada por fungos da diviso Sigom]cota, os esporos desses fungos podem infectar os seios paranasais e a #rea peri9orbital. ! infeco rapidamente se dissemina para os vasos sangu+neos vi2in$os, causando necrose e trombose, vascular /CIC0. ! partir da+ se difunde para o encfalo e para as meninges, produ2indo meningoencefal+te, rapidamente fatal. :ssa doena pode se disseminar para os pulm,es e para o tubo digestivo. 7rincipais agentes envolvidos) )bsidia sp., )pophysomyces sp., Mucor sp., Rhizopus sp., Saksenaea sp., "unnin&hamella sp..

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Reo$ifomicoses 8 Infec,es causadas por fungos dem#ceos &ue apresentam $ifas escuras nos tecidos. O n"mero de agentes envolvidas , em geral, muito grande e tende a aumentar. )lternaria spp. 8 produ2 &uadros como ceratomicose, infec,es cut neas, osteomielite, doenas pulmonares e infeco do septo nasal. Bipolaris spp. 8 causam ceratomicose e sinusite f"ngica, abscessos subcut neos, meningite, alergias e peritonite. "ladosporium spp., !picoccum spp. e 1i&rospora spp. 8 causa ceratomicose e alergias. "ur.ularia spp. 8 causam ceratomicoses, micetoma, endocardite, infeco pulmonar, alergias e infeco do septo nasal. !$serohilum spp. 8 sinusite f"ngica, embolia artica, "lcera de crnea e meningite. Uialo$ifomicoses 8 Infeco causada por fungos $ialinos /$ifas $ialinas0 )cremonium sp. 9 pode causar ceratomicose, les,es do palato duro, meningite, artrite e doenas sist-micas. )sper&illus sp. 9 o )sper&illus fumi&atus o patgeno oportunista mais comum do g-nero. !spergilose disseminada, doenas pulmonares, broncopneumonia alrgica, ceratomicose, otomicose e infeco dos seios paranasais. #usarium spp. 9 causa mais comum de ceratomicoses, onicomicoses, otomicoses, "lceras varicosas, micetoma, osteomielite. >em sido identificado tambm em les,es sist-micas em transplantados de medula ssea.

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Paecilomyces spp. 8 implicados em casos de peniciliose, endoftalmite, endocardite, derrame pleural e les,es cut neas. Penicillium spp. 8 causam ceratomicose, peniciliose, otomicose, onicomicose e, raramente, infec,es profundas. Penicillium marnefei produ2 uma forma disseminada de peniciliose, o "nico agente dimrfico do grupo. Scopulariopsis sp. 8 ceratomicose, otomicose e onicomicose. Criptococose 8 :m geral produ2 infec,es pulmonares brandas muitas ve2es subcl+nicas. :m pacientes sintom#ticos manifesta9se como tosse e febre, radiografias demonstra ndulos isolados ou m"ltiplos nos campos pulmonares mdio e inferior &ue podem calcificar. Duitos pacientes apresentam infiltrados densos pulmonares. 6a disseminao ocorre infeco $epato9espl-nica, osteomelite, comprometimento subcut neo e ndulos cut neos semel$antes ao molusco contagioso. ! meningites a forma grave da doena foi atinge grande parte de indiv+duos com !ICS. !gente etiolgico) "ryptococcus neoformans var neoformans, "ryptococcus neoformans var &attii, com os sorotipos !, N, C, C. Candid+se, >ric$osporonose e Dalasse2iose 8 descritos anteriormente. Meveduroses por) *eotrichum candidum 8 7rodu2 infec,es orais com placas brancas semel$antes 1s de candid+ase, ao passo &ue a forma intestinal da doena provoca colite e fe2es sanguinolentas. !s manifesta,es bron&uiais so as mais comuns= tosse cr%nica e o escarro mucide e sanguinolento &ue provocam lembra tuberculose. P# foram documentadas infec,es vaginais. >oluropsis glabrata 8 patgeno oportunista &ue geralmente provoca doenas em pacientes debilitados. Os pulm,es e os rins so os rgos mais afetados, embora esse fungo

*?

possa disseminar9se para o restante do corpo atravs do sangue, causando fungemia e c$o&ue sptico. Pneumocystis carinii 8 Pneumocystis se adere 1s clulas epiteliais e penetram ao citoplasma, aumentando a permeabilidade capilar do alvolo, produ2ido danos na membrana basal do alvolo formando e'udado alveolar eosinof+lico. O agente no tem sido cultivado.

4.- Id!nti/i+%o dos =un$os 7<I6CI7!IS C!<!C>:<IS>IC!S D!C<ODO<ROMOGIC!S COS R56GOS ;.a9 Identificao dos Rungos

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Os

caracteres

macromorfolgicos

da

col%nia

f"ngica

podem

variar

consideravelmente entre um meio de cultivo e outro, dependendo da constituio nutricional ou devido a diferentes tempos e temperaturas de incubao. Conse&bentemente fundamental em &ue meio e condi,es foi incubado o agente. ! an#lise macroscpica dos cultivos visa caracteri2ar. 19 >e'tura) serosa, cremosa, mucide, membranosa, pulverulenta, granular, camura, cotonosa. *9 >opografia) plana, conve'a, umbilicada, pregueada, cerebriforme. 49 !specto) bril$ante, opaco, seco, "mido. ;9 Superf+cie) lisa, fissurada, rugosa. B9 Nordas) regulares, irregulares, radiadas. G9 Cor da col%nia) branco, preto, verde, vermel$o, etc. ?9 7igmento) presena ou aus-ncia, cor do pigmento, difuso ou restrito 1 col%nia. O9 >empo de crescimento. F9 Ci metro da col%nia. >cnica de esgaramento) 5tili2ada para identificao micromorfolgica de fungos filamentosos. Com ala de platina em M, retirar um fragmento da col%nia, colocar em l mina com una gota de lactofenol a2ul de algodo e com au'ilio de agul$as esgarar bem. Cobrir com lam+nula, comprimir levemente e observar ao microscpio com aumento 1@c ou ;@c.

Cultivo em l mina. 6esta tcnica as estruturas permanecem devem permanecer +ntegras e o meio utili2ado pode ser Sabouraud de'trose #gar, batata #gar, lactrimel #gar ou XO. :sterili2ar placas de 7etri com uma l mina no interior, papel de filtro e lam+nula. Colocar o meio de #gar em placa. Cei'ar solidificar.

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Mam+nula

Com a ala em M, destacar por,es bem pe&uenas da col%nia do bolor, crescida no #gar e colocar nos &uatro lados do pedao de #gar. Cobrir com lam+nula esterili2ada, pressionando levemente.

M mina suporte 5medecer com ; ml de #gua esterili2ada

dgar batata M mina para microcultivo

Colocar um pouco de #gua destilada esterili2ada no fundo da placa esterili2ada, repor a #gua esterili2ada, sempre &ue necess#rio. Cei'ar por 1@91B dias, dependendo da velocidade de crescimento do fungo.

4@

7ara montar, retirar a lam+nula com pina estril. Ri'ar o fungo na lam+nula colocando 1 a * gotas de #lcool e esperar secar. Dontar essa lam+nula em uma l mina limpa, com uma gota de lactofenol a2ul9algodo. ! lam+nula pode ser vedada com esmalte de un$a ou :tellan para conservar por mais tempo. 7ode, tambm, ser montada a l mina do microcultivo, retirando9se o pedao de #gar, fi'ando com #lcool e colocando uma lam+nula limpa, com uma gota de Mactofenol a2ul9algodo. ! classificao e identificao dos fungos esto baseadas principalmente nos caracteres macro e micromorfolgicos, assim como no mtodo de reproduo se'ual do organismo isolado. O processo de identificao de leveduras inclui testes bio&u+micos, &ue sero discutidos posteriormente. Observamos atualmente em micologia, a participao crescente das tcnicas de biologia molecular, no au'+lio ta'on%mico. 6osso primeiro grande ob3etivo diferenciar col%nias leveduriformes e filamentosas. 1.9 Observe e descreva as principais caracter+sticas macroscpicas das diversas col%nias f"ngicas a serem analisadas) a0 Col%nias leveduriformes

b0 Col%nias filamentosas

Dicromorfologia dos fungos de interesse em micologia mdica ;b. <otina de Identificao de Meveduras

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l 9 ISOM!D:6>O 1 9 7rinc+pio) Rre&bentemente as leveduras crescem com bactrias em cultura, ou pode $aver o desenvolvimento de mais de uma espcie de levedura no mesmo cultivo. 7ara a correta identificao das leveduras essencial utili2ar culturas puras. O primeiro passo portanto, consiste na purificao dos cultivos.

* 9 Daterial utili2ado) 9 #gua destilada esterili2ado 9 ala de platina 9 cultivo de levedura a ser identificada 9 placas de Sabouraud de'trose #gar com cloranfenicol

4 9 >cnica) 7reparar uma suspenso da col%nia em #gua destilada esterili2ada de acordo com o no 4 da escala de DacRarland. Com o au'+lio de uma ala de platina semear em estrias em placa de Sabouraud de'trose #gar com cloranfenicol. Incubar a 4?C por ;O $oras. ! cultura isolada ser# utili2ada para as provas de identificao. ONS) .uando no $ouver crescimento ideal nesta temperatura, proceder o isolamento em outra placa e incubar 1 temperatura ambiente.

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ll 9 7rova do tubo germinativo 1 9 7rinc+pio) :sta uma prova presuntiva para "andida albicans. O tubo germinativo formado dentro de * $oras por ". albicans, mas outras espcies, como "andida tropicalis podem produ2i9lo aps 4 $oras. !pro'imadamente FBA das amostras de ". albicans so positivas. O tubo germinativo difere da pseudo9$ifa por no ser septado, apresentar paredes paralelas e no possuir constrio na sua e'tremidade JabauladaK. * 9 Daterial utili2ado) 9 @,B mM de soro $umano, de cavalo, de carneiro, etc. 9 pipetas 7asteur 9 l minas 9 lam+nulas 4 9 >cnica) Semear cultivo de *;9;O $oras, em tubo contendo @,B mM de soro. Incubar a 4? C durante duas $oras. !dicionar uma gota da suspenso com pipeta 7asteur em l mina e cobrir com lam+nula. :'aminar ao microscpio com ob3etivas de 1@ ' e ;@'. ; 9 :struturas observadas ao microscpio)

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lll 9 7rova do clamidocon+dio /microcultivo0 1 9 7rinc+pio) Observar a e'ist-ncia ou no de filamentao, a produo de clamidocon+dios, blastocon+dios e de artrocon+dios, assim como a disposio destes elementos no miclio. ". albicans produ2 clamidocon+dios arredondados em posio intercalar ou terminal em relao 1 pseudo$ifa. Ce modo geral, a maioria das espcies do g-nero "andida formam pseudo$ifas bem desenvolvidas. P# as leveduras dos g-neros orulopsis, Rhodotorula e "ryptococcus no produ2em pseudo$ifas. !lgumas leveduras ascosporadas apresentam pseudo$ifas rudimentares ou no as formam. ! presena de artrocon+dios sugestiva de *eotrichum spp. ou richosporon spp, este "ltimo associado a blastocon+dios.

* 9 Daterial utili2ado) 9 Cultivos de *;9;O $oras 9 [gar fub# 9 7lacas de 7etri /F@'1B mm0 9 !la de platina com e'tremidade retil+nea 9 Mam+nulas esterili2adas 4 9 >cnica) Rundir o meio de #gar fub# e verter sobre placa de 7etri. !ps a solidificao, com o au'+lio de uma ala de platina, fa2er 4 estrias finas, paralelas na superf+cie da placa e cobrir com lam+nula esterili2ada. Incubar a *BC, durante ;O9FG $oras. :'aminar ao microscpio, com ob3etivas de 1@ ' e ;@'. ; 9 Observao ao Dicroscpio)

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IX 9 7rova de assimilao de fontes de C e 6 /au'anograma0 19 7rinc+pio O teste de assimilao indica a $abilidade de uma levedura para utili2ar um composto na presena de o'ig-nio. Cada espcie possui seu padro prprio de assimilao. :ssas provas so muito sens+veis e "teis para a identificao das leveduras. :sto condicionados a fatores de permeabilidade, sistemas en2im#ticos &ue catalisam a degradao dos $idratos de carbono e ao sistema redutase &ue interv-m na reduo do nitrato.

*9 Daterial utili2ado 9 Cultivo de *;9;O $oras 9 Deio C 9 Deio 6 9 7lacas de 7etri 1B@ '1B mm esterili2adas 9 7lacas de 7etri F@ ' 1B mm esterili2adas 9 Rontes de carbono /de'trose, maltose, sacarose, galactose, lactose, trealose, melibiose, M9arabinose, celobiose, 'ilose, rafinose, dulcitol, ramnose, inulina, inositol0 9 Rontes de nitrog-nio /peptona e T6O40

49 >cnica 7reparar suspenso da levedura a3ustando a turbide2 de acordo com o padro B da escala de DacRarland. Rundir os meios C e 6 e estabili2#9los em ban$o Daria a B@ C durante a reali2ao da prova. 7ara verificar a assimilao de fontes de carbono, misturar * mM da suspenso com ;@ mM do meio C e verter em placa de 7etri de 1B@ ' 1B mm. 7ara observar a assimilao de fontes de nitrog-nio, misturar 1 ml da suspenso com *@ ml do meio 6, e verter em placa de 7etri de F@ ' 1B mm. !ps a solidificao dos meios, distribuir e&uidistantemente as fontes de carbono /meio C0 ou nitrog-nio /meio 60 sobre o

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#gar. Incubar a 4@C durante *;9;O $oras. <eali2ar leitura e observar surgimento de $alo de crescimento na #rea correspondente a cada fonte.

;9 Meitura Gli Gal Mal Sac Lac Raf Tre Mel Ra Dul Ino Cel Inu Ma Xil KN Pep m n O3

X 9 7rova de fermentao de !"cares /2imograma0 19 7rinc+pio ! $abilidade de uma levedura para fermentar um determinado a"car depender# da presena ou aus-ncia de um sistema de transporte &ue permitir# a absoro do a"car a bai'as tens,es de O* e da presena de um sistema en2im#tico &ue atuar# na degradao glicol+tica do a"car com a formao de etanol e anidrido carb%nico. ! fermentao positiva ou negativa de um determinado a"car um dado complementar para diferenciar as espcies.

*9 Daterial 9 Cultivos de *;9;O $oras 9 [gua destilada esterili2ada /;ml0 9 Deio de cultivo para a fermentao de a"cares) de'trose, maltose, sacarose, lactose, galactose, e trealose 9 Nateria de meios para fermentao /tubos de rosca com tubos de Cur$an0 9 7ipeta autom#tica calibrada para *@@ microlitros

4G

4. >cnica 7reparar uma suspenso de leveduras /turbide2 de acordo com o padro B da escala de DacRarland0. Inocular *@@el da suspenso em tubos de ensaio contendo os respectivos carboidratos. Incubar a 4?C por *;9?* $oras. <eali2ar leitura observando a produo de #cido /mudana de cor do meio0 e g#s /formao de bol$a no interior do tubo de Cur$an0. ! observao da prova v#lida at *@ dias aps a reali2ao da mesma.

;9 Meitura Acar G!" Dex Mal Sac Lac Galac Treal

4?

XI 9 7roduo de 5rease 19 7rinc+pio W prova complementar de grande utilidade para confirmar a identificao de algumas leveduras. 7or e'emplo, "ryptococcus spp., richosporon spp. e Rhodotorula spp. O dermatfito . menta&rophytes so urease positivos.

*9 Daterial 9Cultivo de *;9;O $oras 9Deio de uria de C$ristensen

49 >cnica Semear cultivos de *;9;O $oras na superf+cie do meio de uria de C$ristensen. Incubar 1 temperatura de 4@C durante *;9;O $oras e observar a viragem do indicador.

;9 Meitura Xermel$o f positivo !marelo f negativo

II 9 7roduo de C#psula 19 7rinc+pio ! formao de c#psula observada em espcies de "ryptococcus, embora possa ocorrer em outras espcies de leveduras. ! observao de c#psula no e'ame direto de uma levedura necessita complementao posterior da identificao atravs de outras tcnicas /prova da urease, cultivo em meio niger, au'anograma, etc.0.

4O

*9 Daterial 9Cultivo da levedura9problema 9M mina 9Mam+nula 9[gua destilada esterili2ada 9>inta da C$ina

49 >cnica !ps $omogenei2ar a levedura com uma gota de #gua destilada e uma gota de tinta da C$ina sobre uma l mina, sobrepor uma lam+nula e observar ao microscpio.

;9 Meitura !s prepara,es positivas iro mostrar a presena de uma #rea clara, a c#psula, em torno da clula leveduriforme, sobre um fundo negro. XIII 9 7roduo de pigmento no #gar9niger 19 7rinc+pio .uando "ryptococcus neoformans semeado num meio contendo e'trato de semente de niger, girassol ou alpiste, as col%nias tornam9se negras ou marrons devido a atividade de fenol o'idase da levedura. Col%nias de outras leveduras, incluindo outras espcies de "ryptococcus iro manter sua cor original. :sse meio deve ser utili2ado na triagem para isolamento de ". neoformans.

*9 Daterial 9Deio de #gar9niger 9!la de platina 9Cultivo da levedura9problema

4F

49 >cnica Semear a levedura9problema em placa contendo meio de #gar9niger, pelo mtodo do esgotamento. Observar o crescimento da levedura na placa incubada a 4?oC.

;9 Meitura ! col%nia de ". neoformans apresenta colorao marrom ou negra. Ic 9 7roduo de ascosporos /:ugenio <e]es !renas0 19 7rinc+pio !lgumas espcies de leveduras formam ascos, &ue alo3am esporos se'uados, as ascosporas. ! observao dessas estruturas importante para a identificao da levedura. 7ara estimular a produo de ascosporas necess#rio cultivar o isolado em meios especiais *9 Daterial 9Cultivo da levedura9problema 97laca contendo meio de Gesso, ou X9O. 9!la de platina 9Nateria de Sie$l 6ielsen 9M mina

49 >cnica Semear a levedura9problema em meio de apropriado e incubar a 4? C ou 1 temperatura ambiente, de acordo com a e'ig-ncia do isolado. !ps B9? dias, reali2ar esfregao em l mina, corar pela tcnica de Sie$l 6ielsen e observar ao microscpio com ob3etiva de 1@@ '.

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;9 Meitura :'aminar a forma e taman$o dos ascos e ascosporas e o n"mero de ascosporas em cada asco.

Prin+i-%is !strutur%s 0i+ros+1-i+%s dos /un$os #i/%< :struturas tubulares, constitu+das de talo filamentoso /Segundo a cor, podem ser classificadas como $ialina ou dem#cea0

Septada= dividida em compartimentos celulares atravs de septos parciais, completos ou perfurados.

Cenoc+tica= filamento cont+nuo no sendo JaparentementeK dividida por septos.

*. 4&%sto+on,dio) Organismo unicelular globoso, ovide ou elipside denominado levedura. Se origina &uando a clula me gera um ou mais indiv+duos por um processo denominado brotamento ou gemulao. 4. Ps!udo.i/%) Constitu+da pela se&u-ncia de brotamentos de leveduras sem separao entre as clulas fil$as gerando uma estrutura alongada, de paredes no paralelas, sem septo mas com ponto de contrio entre uma clula e outra. 7odem e'istir brotamentos laterais m"ltiplos &ue nascem a partir do ponto de contrico, formando assim o -s!udo0i+:&io.

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;. Artro+on,dios) So elementos retangulares de paredes grossas formados por fragmentao das formas cil+ndricas dos fungos previa diviso do material gentico.
B. C&%0ido+on,dios) :strutura de resist-ncia

produ2ida pelo fungo como resposta frente 1s condi,es adversas do meio. Clulas geralmente globosas ou ovides, de volume aumentado, parede dupla e espessa. ! locali2ao no miclio pode ser intercalar, apical ou terminal. Os con+deos tambm podem apresentar esta estrutura.

Os fungos t-m ciclos de reproduo asse'ual e se'ual, onde os elementos de frutificao podem ter uma disposio interna ou e'terna. 1. S]gom]cota) :sporos se'uados92igosporas. :sporos endgenos asse'uados9

esporangisporos, contidos em espor ngios. 4. !scom]cotina) :m algum est#gio da vida, produ2em esporos endgenos se'uados9 ascosporos dentro de estruturas em forma de saco denominados ascos. Segundo a morfologia do asco ad&uire a denominao de peritcio, apotcio ou cleistotcio. ;. Nasidiom]cotina) :sporos se'uados9 basidisporos situados e'ternamente sobre a clula me9baside. B. C$]tridiom]cota)

;*

Reprodu3'o !sse'uada

4isposi3'o :'terna Interna

!struturas Con+dios, picnidiocon+dios :sporangisporos Nasidisporos !scos simples, ascostroma, peritcio, cleistotcio, apotcio.

Se'uada

:'terna Interna

Observe e descreva os caracteres microscpicos dos seguintes e'emplos de reproduo dos fungos.

<eproduo asse'uada e'terna

<eproduo asse'uada interna

<eproduo se'uada interna

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*.9 Observe e desen$e as seguintes estruturas microscpicas dos seguintes fungos filamentosos) Trichophyton ru rum T! m"ntagrophyt"s T! tonsurans

Microsporum gyps"um

Microsporum canis

Epid"rmophyton #$occosum

Asp"rgi$$us s--

P"nici$$ium s--

Pa"ci$omyc"s s--

;;

%usarium s--

Rhi&opus s--

Mucor s--

Phia$ophora s--

C$adosporium s--

%ons"ca"a p"drosoi

A$t"rnaria s--

Cur'u$aria s--

(attrassia mangi#"ra"

;B

Sporothri) sch"n*ii '@

Histop$asma capsu$atum '@

Paracoccidioid"s rasi$i"nsis '@

5A

5A

5A

;G

B.- R!/!r2n+i%s *i*&io$rC/i+%s !rango D.= Castageda :. Dicosis Uumanas 7rocedimentos Ciagnsticos :'#menes directos. 1FFB. :llis C.U. Clinical D]colog]. >$e $uman opportunistic D]coses. 7. Ra2er Inc. Guillin$am 7rinters 7t]. Mtd. !ustralia 1FF;. Uoog G.S. et al !tlas of clinical fungi. Contraolbureau oor Sc$immelcultures,

6et$erlands(5niversitat <ovira Xirgili , Spain. *@@@. Tern D. !. Dedical D]colog]. ! Self9Instructional >e't. R. !. Cavis Compan]. 7$iladelp$ia, 4 er ed 1FOO. Maca2 C.S.= 7orto :.= Dartin P. C. Dicolog+a Ddica) Rungos, actinomicetos e algas de interese mdico ? de. So 7aulo) Sarvier, 1FO;. <ic$ardson D.C. E harnocZ C.h. Rungal Infection. Ciagnosis and managment. NlocZIell Scientific publication, london. 1er ed 1FF4.

;?

Autor!s !genor Dessias Punior !rnaldo Mopes Colombo :ugenio <e]es !renas Olga Risc$man Gompert2 7atr+cio Godo] Dartine2 Xictor Silva Xargas Co&%*or%dor!s Cled3a Soares de!morim :dma Uelena de Oliveira Rabiane Camargo G. 6unes Meila 7aula de !lmeida Muis Saror Corne3o Darl] Ror3a2 Selinda Daria 6aZagaIa