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PRCTICA DE LIPIDOS Los lpidos son un grupo de sustancias que se definen en trminos de sus caractersticas de solubilidad.

Son solubles en solventes orgnicos como: benzol, ter, acetona, tetracloruro de carbono, cloroformo y otros ms, son insolubles en agua, aunque algunos compuestos como los jabones, las sales biliares se dispersan coloidalmente en ella. Otros en cambio apenas son solubles en ter, entre ellos sobresalen los cerebrsidos, las esfingomielinas y las saponinas. Generalmente los lpidos se encuentran distribuidos en la naturaleza como steres de cidos grasos de cadena larga. Su hidrlisis alcalina(conocida como saponificacin) origina un alcohol y la sal de sodio o potasio de los cidos grasos constituyentes; estos productos de la hidrlisis pueden ser solubles en agua. Estos compuestos los podemos dividir en tres grandes grupos: 1. Lpidos simples. Comprenden los lpidos ms abundantes, grasas, triglicridos y las ceras, menos abundante. 2. Lpidos compuestos. Comprenden los fosfolpidos que contienen fosforo, y los galactolpidos que contienen galactosa. 3. Lpidos derivados. Comprenden productos de la hidrlisis de las dos primeras clases y otros compuestos, como estridos, aldehdos grasos, cetonas, alcoholes hidrocarburos, aceites esenciales, vitaminas liposolubles, etc., que son producidas por las clulas vivas. Desde el punto de vista cuantitativo, cabe sealar que el papel ms importante de los lpidos sea funcionar como combustibles aunque tambin ciertas clases de estos tienen funciones primordiales de estructura; en cierto sentido, los lpidos son superiores incluso a los carbohidratos como materia bruta para la combustin, pues durante sta proporcionan ms calor por gramo de substancia y, adems, puede almacenarse en el organismo en cantidades casi ilimitadas a diferencia de los carbohidratos. Tienen funciones de gran importancia como son: a) Como componentes estructurales de la membrana. b) Como formas de transporte y almacenamiento de combustible catablico. c) Como cubierta protectora sobre la superficie de muchos organismos. d) Como componente de la superficie celular relacionada con el reconocimiento de las clulas, la especificidad de especie y la inmunidad de los tejidos. Los grupos principales de los lpidos tienen caractersticas de solubilidad diferentes y sta propiedad se usa en su extraccin y purificacin a partir de materiales biolgicos.

1.- Prueba de solubilidad Colocar en un tubo de ensayo 2 ml. de aceite y aadir 2 ml. de un disolvente apolar (por ejemplo cloroformo o ter de petrleo). En otro tubo hacer lo mismo, pero aadir agua en vez de disolvente apolar. Agitar y anotar los resultados. 2.- Tincin con Sudn III Poner 2 ml. de aceite en un tubo, aadir 2 ml. de agua y dejar reposar. Una vez formadas las dos fases, dejar caer unas gotas de Sudn III y agitar. Dejar reposar el tubo y anotar los resultados. Colocar 2 ml. de leche en un tubo, verter 10 ml. de agua, unas gotas de Sudn III y agitar fuertemente. Observar que se tie todo de rosa. Si aadimos 1 ml. de HCl al 50 % y calentamos aparecern, dependiendo del tiempo de reposo, dos o tres fases: a) una superior, de color rosa oscuro, formada por las grasas teidas. b) una intermedia, con agua y lactosa disuelta. c) una inferior, con las protenas desnaturalizadas. 3.- Prueba de la emulsin. Poner 2 ml. de aceite en un tubo, aadir 10 ml. de agua, agitar fuertemente, esperar unos minutos y anotar lo sucedido. Aadir despus 1 ml. de una solucin concentrada de jabn lquido, volver a agitar, esperar unos minutos y anotar lo sucedido. 4.- Obtencin de lpidos en cerebro de pollo El tejido adiposo est constituido principalmente por las grasas neutras, pero el cerebro contiene relativamente pocas, los constituyentes lipdicos de estos tejidos son los lpidos complejos como: fosfolpidos y colesterol. Basados en la solubilidad de los lpidos en solventes orgnicos, es posible extraer y purificar lpidos del cerebro por sucesivas extracciones con diferentes solventes y posterior fraccionamiento de los extractos para obtener fracciones ricas en: esteroles, glicerofosfolpidos y esfingolpidos. El esquema se basa en los siguientes hechos: Los esteroles son solubles en acetona, al contrario de lo que sucede con otros lpidos complejos. Algunos glicerofosfolpidos, como las lecitinas, la fosfatidiletanolamina y la fosfatidilserina , son solubles en ter e insolubles en acetona. Los fosftidos y glucsidos de esfingosina, se disuelven en alcohol caliente y son insolubles en acetona y ter. Materiales de laboratorio: 1 vaso de precipitado de 250 ml 5 pipetas graduadas de 10 ml 3 pipetas Pasteur 2 tubos de centrifuga

1 varilla de vidrio parrilla centrifuga 3 frascos de 20 ml

Material Biolgico 1 cerebro de pollo (2.5 gramos)

Reactivos Acetona ter Etanol 95%

METODOLOGA Se pesan los frascos, etiquetndolos como fraccin 1 a la 3. Solo se pesa en papel aluminio 2.5 gramos de cerebro, este se tritura y se coloca en un tubo de centrfuga, adicionndole acetona, 1ml por cada 0.5 g. de cerebro, se homogeniza el tejido por 1 minuto y s centrfuga a 3000 rpm. Se decanta el sobrenadante en el frasco fraccin I, y al residuo se le aade 2 ml de acetona y se homogeniza nuevamente, se centrfuga y se vuelve a colocar el sobrenadante con la fraccin I, (fraccin I es colesterol). Por 5 minutos se deja el residuo a temperatura ambiente para evaporar la acetona. Se adicionan 3 ml de ter al residuo, esto s centrfuga por 2 minutos a 3000 rpm; el sobrenadante se colecta en otro tubo de centrfuga con la leyenda fraccin A, esto contiene fosfolpidos, nuevamente se har otra extraccin con ter y se junta el sobrenadante en la fraccin A. Ahora se quita los residuos de ter dejando que le d un poco de aire, entonces se adiciona 3 ml de etanol al 95% caliente (70), agitando y despus centrifugando (2 min. a 3000 rpm), el sobrenadante se colecta en el frasco de la Fraccin III, la cual vienen hacer glucolpidos, y se har otra vez la extraccin con 3 ml de etanol. Se calcula el volumen de la fraccin A y se agrega 2 volmenes de acetona, se homogeniza y se centrifuga al (mismo tiempo y rpm); el sobrenadante se coloca con la Fraccin I; al residuo se adiciona 3 ml de ter y se agita por 4 minutos y despus se centrifuga, el sobrenadante se coloca en el frasco de la Fraccin II (fosfolpidos), esta extraccin se repetire dos veces ms y los sobrenadante van al mismo lugar. En cada frasco se coloca dos perlas de ebullicin y se evapora a sequedad todos los frascos sobre la parrilla, no deben quemarse los residuos. Por ltimo se pesa los frascos nuevamente y se calcula la cantidad obtenida de cada fraccin. En este momento se calcula el porcentaje de cada una de las fracciones. Tomando los datos que obtuvimos al pesar los frascos como lo indica en la siguiente tabla:

Peso inicial del frasco Fraccin I (colesterol) Fraccin II (Fosfolipidos) Fraccin III (Glucolipidos)

Peso final del frasco

Rendimiento (grs)

Actividades complementarias Indica las distintas funciones de los lpidos en los seres vivos. Cul es el papel de los lpidos en la regulacin de la fluidez de la membrana plasmtica? Cules son las distintas funciones del tejido adiposo? Cul es la funcin de las prostaglandinas? Que son los cidos grasos esenciales? En la literatura apropiada, consulte tres pruebas que sirvan para identificar y cuantificar los lpidos complejos estudiados. Por qu se usan diferentes solventes para separar lpidos. Escriba las frmulas general de los lpidos que Ud. separ en cada fraccin y ubquelos en la Clasificacin de lpidos. Problemas: Los estrgenos (estrona y estradiol) se separan con facilidad de los andrgenos (androsterona y testosterona) en base a una de susu propiedades qumicas. Cul es esta propiedad y como se puede dar dicha separacin? Qu productos esperara obtener si cada uno de los siguientes terpenos se someteran a la ozonizacin y aun tratamiento posterior con zinc y agua? a. Mirceno b. Limoneno c. Geraniol d. Escualeno. Qu prueba qumica simple usara para distinguir entre el geraniol y el mentol? Cuando el limoneno se calienta fuertemente, genera 2 moles de isopropeno Qu tipo de reaccin se efecta aqu?