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r
e
o
(
g
)
Tratamientos
Peso seco areo
C. pubescens
C. officinalis
a
a
a
a
RESULTADOS Y ANLISIS
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*,
Los resultados muestran que las especies evaluadas no presentaron diferencia significativa (p=
0.60) entre ellas. Tampoco hubo entre tratamientos diferencia significativa (p= 0.50).
Podemos visualizar en el grfico, que T2 con C. pubescens (0.021 g) y C. officinalis (0.019 g)
dieron un mejor resultado en cuanto al peso seco areo de la planta, seguido de T1 con C.
officinalis (0.017 g). Mientras que el T3 con C. pubescens fue el que mas bajo resultado obtuvo
(0.0006 g).
3.3.2.9. Peso seco raz:
Graf. 9: Promedio + Desviacin estndar de la variable peso seco radicular de las plantas de C. pubescens y C.
officinalis en los cuatro tratamientos. T1: Inculo Galpagos, T2: Inculo MUCL41833, T3: Fertilizante, T4: Testigo. Las lneas
verticales indican desviaciones estndar. Las letras diferentes, muestran diferencias significativas (p ! 0.05).
Los resultados muestran que las especies evaluadas no presentaron diferencia significativa
(p= 0.47) entre ellas. Tampoco hubo entre tratamientos diferencia significativa (p= 0.10).
En el grfico se observa, que T2 con C. pubescens (0.0059 g) dieron un mejor resultado en
cuanto al peso seco radicular, seguido de T1 con C. officinalis (0.0036 g). Mientras que el T3
con C. pubescens fue el que mas bajo resultado obtuvo (0.0001 g).
Por lo tanto no es raro que las variables peso fresco y seco respondan de mejor manera con
los HMA, tanto con el MUCL41833 inculo que ya ha demostrado ser efectivo como tambin
con el de Galpagos; pues la literatura menciona, que la presencia de HMA produce un
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RESULTADOS Y ANLISIS
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*-
aumento de biomasa dada la mayor y mas rpida disponibilidad de nutrientes en el sistema
vascular de la planta, lo cual acelera su actividad fotosinttica y resulta en un aumento
considerable de su produccin de biomasa fresca y seca.
65
Tambin se puede observar que las desviaciones estndar se presentan mayor en la grfica 6
(peso areo), con T2 y C. pubescens; en la grfica 7 (peso radicular) con T1 y C. officinalis y T2
con C. pubescens; en la grfica 8 (peso areo seco) con T2 y C. pubescens y en la grfica 9
(peso seco radicular) con T2 y C. pubescens, debido asimismo a la alta dispersin de los datos
y al hecho de que ningn organismo responde de igual forma que otro durante un experimento.
Luego de haber evaluado todas las variables queda claro que las plantas micorrizadas
presentaron mejores resultados que las no micorrizadas; es as, que los hongos micorrzicos
arbusculares contribuyeron a mejorar el estado fisiolgico y el crecimiento de las plantas
estudiadas en ambas especies.
Los diferentes resultados obtenidos de todas las variables, nos hace pensar que la capacidad
de crecimiento y desarrollo de una planta viene determinada en gran medida por las
caractersticas ambientales del ecosistema receptor, as mismo de la especificidad de los HMA
y cmo responden las plantas a ellos. Segn lo dicen Klironomos, et al. (2000)
66
y Munkvold et
al. (2004)
67
, a pesar que los HMA carecen de especificidad en su capacidad de infectar plantas
hospederas, una misma especie de hongo no tiene el mismo efecto sobre todas las plantas,
indicando que diferentes especies difieren funcionalmente. Por lo tanto nuestros resultados
apoyan el hecho que algunas plantas inoculadas con MUCL41833 o con Inculo de Galpagos,
presentaron mejores respuestas en los parmetros de crecimiento planteados con respecto a
los otros tratamientos evaluados. Igualmente se ha demostraron que la formacin y funcin de
las micorrizas arbusculares suele ser bastante variable entre aislados de diferentes especies e
incluso, entre aislados de la misma especie
22
. De modo que las plantas responden de manera
diferente a la micorrizacin y que en funcin de su grado de dependencia se puede considerar
65
ALINHOFF C., CACERES A., LUGO L., (2009), Cambios en la biomasa de races y micorrizas arbusculares en cultivos itinerantes del
Amazonas Venezolano. INCI, 34(8):571-576.
66
KLIRONOMOS J., MCCUNE M., NEVILLE J., (2000), The influence of arbuscular mycorrhizae on the relationship between plant diversity
and productivity. Ecol. Letters 3:137-141.
67
MUNKVOLD L., KJOLLER R., VESTBERG S., JAKOBSEN I. (2004). High functional diversity within species of arbuscular mycorrhizal
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*=
cmo las especies de HMA y su abundancia influirn en la estructura de las plantas, en el
funcionamiento de los ecosistemas y en la diversidad de las comunidades vegetales donde se
desarrollen
10
.
3.3.3 Evaluacin del Porcentaje de colonizacin:
Tras analizar las races teidas, se pudo encontrar estructuras micorrzicas que confirmaban la
colonizacin. Algunas de las estructuras que se observaron se presentan en la Fig. 13
Fig. 13: Evaluacin de la colonizacin de las plantas de C. officinalis y C. pubescens en estudio: a). Arbsculos, b).
c). Vesculas colonizando la raz, d). Hifas; estructuras encontradas en las dos especies de plantas de Cinchona,
evaluadas despus de tres meses desde su inoculacin.
3.3.3.1 Anlisis estadstico del Porcentaje de colonizacin:
Para el anlisis estadstico de la colonizacin, tomamos en cuenta nicamente a los datos de
los Tratamientos T1 y T2, debido a que en los otros dos no se evidenci colonizacin
micorrzica alguna.
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*;
3.3.3.1.1 Frecuencia de Micorrizacin %F:
Graf. 10: Promedio + Desviacin estndar de Porcentaje de Frecuencia de Micorrizacin %F de las plantas de C.
pubescens y C. officinalis en los tratamientos. T1: Inculo Galpagos, T2: Inculo MUCL41833. Las lneas verticales indican
desviaciones estndar.
En el porcentaje de Frecuencia de micorrizacin (%F) no hubo significancia estadstica entre
especie (p=0.60), mientras que si lo hubo entre tratamientos (p= 0.0509).
Segn lo muestra el grfico, los mejores resultados se obtuvieron con T2 (MUCL41833) en
ambas especies, C. pubescens con un %F promedio de 92.64, y C. officinalis con un %F de
80.72. Vemos tambin que con T1 ambas especies responden a este inculo, aunque en menor
porcentaje que con T2., puesto que su %F fue de 66.76 y 67.22 en C. officinalis y C. pubescens
respectivamente.
0
20
40
60
80
100
120
T1 T2
%
F
Tratamientos
Frecuencia de Micorrizacin %F
C. pubescens
C. officinalis
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*>
3.3.3.1.2. Abundancia Arbuscular en el sistema radical %A:
Graf. 11: Promedio + Desviacin estndar de Abundancia Arbuscular %A de las plantas de C. pubescens y C. officinalis
en los tratamientos. T1: Inculo Galpagos, T2: Inculo MUCL41833. Las lneas verticales indican desviaciones estndar.
Se determin que el porcentaje de Abundancia Arbuscular %A tuvo significancia estadstica
entre especie (p<0.0001), y tambin entre tratamientos (p<0.0001). Los mejores resultados se
obtuvieron con T2 (MUCL41833) y C. pubescens con un %A promedio de 12.28. En los dems
resultados fue casi nula la presencia de arbsculos.
Los arbsculos tienen un periodo de vida muy corto, cuando un arbsculo muere es
remplazado por otro ms joven siempre y cuando el intercambio de nutrientes est activo.
Cuando ste cesa los arbsculos mueren y de la colonizacin interna solo quedan las
vesculas, que son las estructuras de reserva de nutrientes del hongo
10
. Al observar bajo el
microscopio las placas teidas se lo constat, pues para ambas especies la presencia de
vesculas fue abundante.
Si bien nuestro control positivo MUCL41883 mostr mejores resultados de colonizacin (%F y
%A), podemos finiquitar este estudio mencionando que las especies nativas de hongos
micorrzicos arbusculares aisladas de suelos con Cinchona pubescens de la islas Galpagos,
tambin demostr tener capacidad infectiva en ambas especies para ser utilizado como material
fngico til. Es importante resaltar que un inculo con races colonizadas como propgulos
infectivos es de excelente calidad siempre y cuando se utilice de inmediato, porque sin la
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
T1 T2
%
A
Tratamientos
Abundancia Arbuscular %A
C. pubescens
C. officinalis
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+(
planta viva, el micelio colonizador muere en pocas semanas an almacenado en un ambiente
fresco
15
; es por esto que nuestro Inculo de Galpagos fue usado de inmediato sobre las
plantas de ambas especies que se encontraban aptas para su inoculacin, con lo cual
aseguramos la asociacin hongo-planta.
Solis G. et al (2009)
68
, pone de manifiesto que el contacto directo del sistema radicular de la
planta con los propgulos del hongo permite una ms rpida colonizacin de la raz. Este factor
puede ser una de las razones por las que Cinchona pubescens present mayor porcentaje de
colonizacin que Cinchona officinalis, ya que cuando se dio inicio a la inoculacin las primeras
tenan mayor tamao y mejor sistema radicular que las Cinchona officinalis, permitiendo un
mayor contacto con el inculo.
As mismo explica que los beneficios de la inoculacin temprana con hongos formadores de
micorriza arbuscular, contribuyen a mejorar la adaptabilidad de las plantas
68
. Tambin se
describe que dentro de estos beneficios esta un incremento de la nutricin y crecimiento de la
planta, aumento de la defensa contra patgenos y capacidad para superar situaciones de estrs
bitico y abitico
53
. Esto se puso en evidencia con los dos tratamientos T1 y T2, en los cuales
la tasa de mortalidad fue menor y la de crecimiento fue mayor en relacin a los otros dos
tratamientos T3 y T4.
Segn Schmidt y Scow (1986)
69
, la invasin exitosa de la quinina (Cinchona pubescens) en las
Islas Galpagos puede haber sido facilitada por micorrizas nativas. Es claro analizar segn los
resultados y en base a como respondieron satisfactoriamente estas plantas a los dos
inculos, que una razn por la que esta especie sea invasiva pueda deberse al
aprovechamiento de la asociacin con los HMA, hacindola una especie extica ms
competitiva que las especies nativas.
Segn el estudio de Garmendia (2005), las Cinchonas tienes condiciones bastante especficas
para crecer, y por eso actualmente slo las encontramos en poblaciones remanentes o
aisladas.
68
SOLIS G., CARDENAS F., (2009). Efecto de los hongos micorrisgenos arbusculares (glomus fasciculatum) en el crecimiento y desarrollo
del cultivo de tomate de mesa (solanum lycopersicum) variedades alambra y fortuna en la zona urcuqu provincia de imbabura. Tesis Doctoral.
69
SCHMIDT S. and SCOW, K., (1986). Mycorrhizal fungi on the Galapagos Islands. Biotropica, 18:236-240.
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+!
En cuanto a la especie Cinchona officinalis, podemos darnos cuenta que esta especie responde
positivamente al ser inoculadas con HMA, independientemente del tipo. Los efectos
beneficiosos de la introduccin artificial de un inculo micorrzico, resultan ms evidentes en
suelos donde las poblaciones de hongos MA nativos no existen, o han sido eliminadas por
empleo de prcticas agrcolas desfavorables para su desarrollo como la fumigacin del suelo y
el cultivo intensivo
64
. Sabemos que se requieren ms investigaciones para poder explicar el
beneficio que le proporciona la inoculacin de las plantas de Cinchona con HMA, los resultados
del presente estudio sugieren que estos hongos podran ser utilizados como una estrategia de
manejo agrcola en planes de reforestacin, a fin de mejorar el crecimiento de esta especie en
peligro de extincin. Con ello se estara promoviendo la agricultura sustentable y se minimizara
la dependencia de insumos agrcolas, especialmente fertilizantes qumicos con su consecuente
reduccin en el dao al ambiente.
3.4 RESULTADOS DE LOS CULTIVOS IN VITRO DE HMA:
3.4.1 Resultados del Cultivo monsporico de HMA:
Aproximadamente 50 esporas de Scutellospora savanicola desinfectadas se pusieron a
germinar sobre medio MSR, de las cuales solo 15 mostraron una germinacin exitosa.
El contacto de las hifas germinativas de las esporas de Scutellospora savanicola en las races
transformadas de Medicago truncatula, se estableci a las dos semanas despus de inocular
las esporas. La evaluacin de la presencia de Scutellospora savanicola en las clulas
epidrmicas de las races se lo realiz con la ayuda de un estereoscopio.
Pasado 42 das desde la inoculacin, no se pudo apreciar una colonizacin tpica intrarradical,
ms si se pudo detectar un marcado y localizado desarrollo de hifas en el medio de cultivo, que
se extendi en un radio de 2-3 cm a partir de la espora inoculada. (Fig.14).
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+)
Fig. 14: Germinacin de Scutellospora savanicola sobre medio MSR.
Pese a los resultados se demuestra la capacidad del hongo para mantener su crecimiento hifal
aun sin establecer exitosamente la simbiosis como tal, lo que indica la habilidad de este hongo
para desarrollarse a partir de sus propias reservas de carbono durante su fase asimbitica
70
.
3.4.2. Resultados del Cultivo de races de HMA in vitro:
El cultivo de segmentos de races infectadas con Glomus sp, no dio ningn resultado tangible,
tras cultivar los segmentos por mas de un mes sobre medio de cultivo MSR, stos no
presentaron ninguna germinacin (Fig. 15).
70
BAGO B., PFEFFER F., SHACHAR Y., (2000).. Carbon metabolism and transport in arbuscular mycorrhizas. Plant. Mundi Prensa. Mxico,
pp78-99.
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+*
Fig.15: Cultivo de races con Glomus sp : a) Cultivo de races colonizadas de HMA en medio MSR b) Segmento de
raz germinacin, ntese como no se presenta germinacin aun transcurrido ya 40 das de incubacin.
En general, estudios previamente publicados apuntan a diferentes estrategias de colonizacin
entre las especies de la HMA. Sin embargo, todava no est claro si las diferencias ms
importantes se producen en los niveles taxonmicos superiores (gnero, suborden).
26
Hasta la
actualidad la literatura menciona que solo el 8% de las especies conocidas son usadas en este
tipo de cultivos in vitro para el resto aun no se conocen las condiciones en las que se
desarrollaran.
59
En particular, parece que para estos tipos de cultivos la hifa podra ser ms efectiva para las
especies de Glomus, mientras que las esporas pueden ser ms importantes en otras especies
como Scutellopora y Gigaspora. Ensayos con cultivo in vitro demostraron que segmentos de
races micorrizadas funcionaban como propgulos eficaces para Glomus y Acaulospora pero no
para aislamientos de Scutellospora.
71
As mismo, estudios han determinado que las esporas son tiles para el establecimiento de la
mayora de las especies de Acaulospora, Gigaspora y Scutellospora, mientras presentan poco
xito con fragmentos de races.
72
El tiempo de germinacin tambin debe ser considerado para este tipo de cultivos ya que
para los fragmentos de races micorrizadas, el re-crecimiento de las hifas en los extremos de
los segmentos se observa generalmente entre 2-15 das,
73
pero en nuestra evaluacin esto no
ocurri. Esto nos hace pensar que el material fngico no era apto para este establecimiento in
vitro, puesto que antes de iniciarlo no se confirm la presencia de HMA en el sistema radicular,
esto servira de consejo para futuros establecimientos.
En cambio la germinacin de las esporas ocurre a menudo en un perodo variable entre 2 y 30
das despus de la desinfeccin, aun as estudios con Scutellospora reticulata demuestran que
71
ABBOTT L., ROBSON A., GAZEY C., (1994) Selection of inoculant vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi. In: NORRIS J., READ D., VARMA
A.,(eds) Techniques for mycorrhizal research. Academic. San Diego, 137ppp
72
BRUNDRETT M., ABBOT L., JASPER D. (1999). Glomalean fungi from tropical Australia.:Comparison of the effectiveness of isolation
procedures. Mycorrhiza 8:305314
73
DECLERCK S., CRANENBROUCK S., LE BOULENG E., (2001) Modeling the sporulation dynamics of arbuscular mycorrhizal fungi in
monoxenic culture. Mycorrhiza 11:225230.
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++
para una exitosa asociacin y produccin de nuevas generaciones de esporas en cultivos
monoxnicos tardara ocho meses.
74
Otro factor clave para poder producir inculo en un sistema in vitro sobre races transformadas,
es conocer los diferentes macro, micronutrientes y suplementos necesarios para el
establecimiento de HMA, como tambin el hecho que algunos azcares como la sacarosa
pueden ser inhibitorios de la colonizacin micorrzica.
59
Lo mencionado anteriormente pudo ser
una de las causas por las que la colonizacin de las esporas en races transformadas de M.
truncatula no se vio favorecida, puesto que nuestro medio MSR contena en su composicin
sacarosa.
Para ambos tipos de inculo, esporas y segmentos de raz colonizada, es importante asociarlos
con una raz husped poco despus de la germinacin para evitar daos de las hifas formadas
durante el proceso de asociacin y el aumento de la colonizacin.
73
Por ltimo creemos que se debe considerar la especie de raz transformada a usarse, ya que
races transformadas de zanahoria son catalogadas como una de las especies ms adecuadas
hasta el momento para el cultivo de HMA; debido a su facilidad de propagacin y
mantenimiento
75
Aunque el cultivo in vitro de los HMA sigue siendo un desafo, ya que slo se han logrado
cultivar algunas especies, se ha convertido en el mtodo mas eficaz y predilecto para
aislamientos de HMA de especies y condiciones conocidas.
74
DE SOUZA F., DECLERCK S., (2003), Mycelium development and architecture, and spore production of Scutellospora reticulata in
monoxenic culture with Ri T-DNA transformed carrot roots, Mycologia, 95(6):10041012.
75
BCARD G., PICH Y., (1992) Establishment of vesicular-arbuscular mycorrhiza in root organ culture: review and proposed methodology.
Method Microbiol 24:89108
CONCLUSIONES
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+,
4. CONCLUSIONES
Se logr la multiplicacin de los HMA sobre plantas micotrficas hospederas de Lolium
perenne, y se revel el efecto que estos tienen sobre el crecimiento y desarrollo de plantas
de C. pubescens y C. officinalis en condiciones de invernadero. Los plantas de C. pubescens y
C. officinalis inoculadas con HMA, (T1, T2), permitieron la obtencin de mejores rendimientos y
un mayor desarrollo de la planta: mayor altura y tamao total, mayor dimetro de tallo, mayor
desarrollo radical, mayor nmero de hojas, mayor produccin de biomasa; en comparacin a los
dos otros tratamientos (T3, T4).
Aunque no altamente significativa, la influencia de estos tratamientos sobre la calidad de la
planta ha sido marcada en C. pubescens, sin embargo los rendimientos obtenidos, como
tambin el desarrollo morfolgico fueron casi similares con C. officinalis.
Aun as, se pudo comprobar el alto predominio que tiene el Inculo de Galpagos, con la
especie de C. pubescens, pues fue la combinacin que mejor resultados dio, conformando la
fuerte relacin que existe entre los HMA y el hecho de que esta planta sea una especie invasiva
en Galpagos.
Con respecto al porcentaje de colonizacin micorrzica, se observ que con el T2 tuvo un mejor
rendimiento con un 80.72% y 92.64% en Cinchona officinalis y pubescens respectivamente,
mientras que con el T1 se logr una porcentaje de colonizacin de 66,76 % y 67,22% en
Cinchona officinalis y pubescens tambin respectivamente. Todo este resultado concuerda con
los obtenidos de las variables respuesta medidas y anteriormente descritas.
Si bien se pudieron observar estructuras micorrzicas como vesculas e hifas, la presencia de
arbsculos fue escasa, esto se debi a que las races de las plantas ya no estaba en un
proceso activo de intercambio de nutrientes en cuyos casos los arbsculos mueren y su
presencia en las placas teidas es nula o casi nula.
CONCLUSIONES
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+-
Por otra parte los mtodos de cultivo in vitro de HMA mostraron resultados poco favorables, en
el caso del cultivo monosprico se pudo observar un crecimiento hifal y localizado de
Scutellospora savanicola pero no se estableci exitosamente la simbiosis como tal con las
races transformadas de Medicago truncatula. El escaso periodo de tiempo puede llegar a ser
un factor de este resultado por lo que se recomienda que los cultivos permanezcan mucho ms
tiempo y evaluar futuros resultados. El cultivo de races con HMA de Glomus sp. in vitro, no
produjo ninguna germinacin si bien una de las causas, es que pudo deberse a que ciertos
tipos de propgulos de hongos no resultan efectivos para este tipo de cultivos, tambin se debe
considerar que antes de realizarlo se debe confirmar la colonizacin de los segmentos a
cultivar.
Hoy en da la utilizacin de micorrizas constituye uno de los componentes mas importantes
dentro de la agroecologa moderna y es una buena opcin para el desarrollo de una agricultura
sostenible, evitando as el uso de productos qumicos (Barea, 2003). Ligndose siempre a
mantener el equilibrio de los ecosistemas terrestres y la fertilidad de los suelos. En este
contexto los HMA juegan un papel importante en la produccin de plantas de Cinchona
officinalis, la cual se encuentra amenazada en la provincia de Loja.
PERSPECTIVAS A FUTURO
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5. PERSPECTIVAS A FUTURO
Continuar con los estudios que permitan conocer la interaccin de los HMA con el medio que
les rodea, mediante experimentos multifactoriales en campo y muestreos, que revelen la
realidad ecolgica de los mismos, de tal forma que se impulse la aplicacin de procesos de
restauracin de ecosistemas degradados, y as se puedan desarrollar especies alimenticias y
medicinales que son usadas por el ser humano.
Crear un banco de germoplasma de HMA que permita conservar la biodiversidad de estos
hongos y sea un aporte cientfico para posteriores investigaciones.
Realizar ms ensayos de cultivos monoxnicos, puesto que representa una forma ms segura y
estril de aislamiento de HMA.
Seleccionar inculos de HMA eficientes (interaccin HMA- microbiota del suelo) para diferentes
cultivos de plantas y condiciones edafoclimticas.
BIBLIOGRAFA
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+;
6. BIBLIOGRAFIA
ABBOTT L., ROBSON A., GAZEY C., (1994) Selection of inoculant vesicular-arbuscular
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ANEXOS
Universidad Tcnica Particular de Loja
,*
7. ANEXOS
DATOS GENERALES DE LA PLANTA HOSPEDERA (Lolium perenne)
ANEXO 1
Clasificacin cientfica
Familia: Poaceae
Nombre cientfico: Lolium perenne
Nombre comn: Ray grass
Distribucin: Cosmopolita
Hbito y forma de vida: Plurianual o anual
Generalidades:
- Destaca por su rpida germinacin y una alta resistencia al pisoteo.
- Crece en todo tipo de suelos, mejor en terrenos hmedos y frtiles, pero tolera los suelos pesados.
- Extraordinaria densidad y excelente comportamiento estival e invernal, con un color oscuro y un
aspecto esttico del mejor nivel.
- No se adapta bien la sequia hay que regar bastante
- Es altamente exigente en agua y Nitrgeno
- La altura de corte aconsejable es de 2 a 4 cm
- Planta que ha demostrado ser apropiada para la multiplicacin de HMA (Molina et al 2006).
ANEXOS
Universidad Tcnica Particular de Loja
,+
1. Desechar el alcohol de las races y enjuagar con agua de grifo.
2. Cortar segmentos de aproximadamente 1cm de longitud y colocarlos en tubos
eppendorf de 1,5ml
3. Adicionar KOH al 10% a las races y poner en el bloque calentador a 45C
durante 15-20 minutos. Enjuagar 3 veces con agua de grifo.
4. Adicionar HCl al 10% durante 1 minuto a temperatura ambiente
5. Desechar el HCl y sin lavar, agregar el azul de metileno al 0,05% a 45C durante
15 minutos.
6. Pasado el tiempo de tincin se sacan las races y se colocan en un portaobjetos
limpio, agregndoles una gota de Polivinyl-lactoglycerol.
7. Evaluar en el microscopio.
MODIFICACIN DEL MTODO DE PHILLIPS Y HAYMAN, (1974)
PARA LA CLARIFICACIN Y TINCIN DE RACES.
ANEXO 2
ANEXOS
Universidad Tcnica Particular de Loja
,,
DISTRIBUCIN DE LAS PLANTAS EN EL INVERNADERO
ANEXO 3
%13BC9
D#4:9E#36C74
F:7G13 *
F:7G13 )
Cinchona pubescens Cinchona officinalis
F:7G13 !
Cada bolita (de las grandes) es una repeticin y representa una de las bolitas de color rojo o
amarillo de arriba.
En cada repeticin estn todos los tratamientos y cada tratamiento tiene tres replicas (es
decir tres plantas). Un total de 12 plantas.
ANEXOS
Universidad Tcnica Particular de Loja
,-
FOTOS DEL ENSAYO
ANEXO 4
MUCL41833 - Cinchona pubescens
Vesculas.
Hifas
Hif.
Arbsculos,
ANEXOS
Universidad Tcnica Particular de Loja
,=
MUCL41833 - Cinchona officinalis
ANEXOS
Universidad Tcnica Particular de Loja
,;
Inculo de Galpagos - Cinchona pubescens
Inculo de Galpagos - Cinchona officinalis
ANEXOS
Universidad Tcnica Particular de Loja
,>
Fertilizante - Cinchona officinalis Fertilizante - Cinchona pubescens
Blanco - Cinchona pubescens Blanco - Cinchona officinalis
ANEXOS
Universidad Tcnica Particular de Loja
-(
ESTIMACIN DE LA MICORRIZACIN
SEGN TROUVELOT et al., 1986
ANEXO 5
ANEXOS
Universidad Tcnica Particular de Loja
-!
MODIFICACIN DEL MTODO DE TAMIZADO HMEDO Y
DECANTACIN PARA LA SEPARACIN DE ESPORAS DEL SUELO
(Gerdeman Y Nicolson, 1963), EN COMBINACIN CON LA TCNICA
DE FLOTACIN EN AZCAR (Walker, 1997)
ANEXO 6
1. Pesar 100 g de suelo seco
2. Colocarlo en un vaso de precipitados, agregar agua y agitar vigorosamente
3. Dejar reposar de 5- 10 segundos y pasar el sobrenadante en un serie de tamices ordenados
del mayor a menor (500,125 y 40 !m ) repetir el proceso hasta que el agua salga clara.
4. Recoger el contenido retenido del tamiz de 125 y 40 !m y colocarlos en tubos para
centrifuga, agregarles sacarosa al 70%.
5. Centrifugar entre 1500 y 2000 rpm, durante 5 minutos
6. Dejar descansar los tubos en esa misma posicin para permitir que las esporas floten en la
solucin.
7. Verter el sobrenadante en el tamiz de 40!m y enjuagar con abundante agua para eliminar
los restos de sacarosa de la muestra.
8. El material retenido en el tamiz ser debidamente etiquetado y analizado bajo el
estereoscopio.
a) Mtodo de tamizado b) Obtencin de esporas c) Espora viable de Scutellospora
savanicola.
. 3