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PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION DE PROTEINAS

INDICE

PREPARACION DE REACTIVOS/SOLUCIONES 2 MATERIALES 3 SECADO DE LA MUESTRA 4 1

A B C D E F G H I J K L

5 6 7

Reactivos Acido sulfrico concentrado Tabletas kjeldahl Solucin de acido brico al 4% pH 4.65 Solucin de hidrxido de sodio al 32% Agua destilada Solucin para el lavado de gases de carbonato de calcio Solucin de tincin de rojo de metilo y verde de bromocresol pH de 4.5 Solucin de acido sulfrico al 0.5 N.

PREPARACION DE SOLUCIONES Solucin de acido borico al 4%: agregar a 700 ml de agua destilada a 60C 40 g de acido borico mezclar y aforar a 1000ml con agua destilada. Solucin de hidrxido de sodio al 32%: agregar a 700 ml de agua (temperatura ambiente) 320 g de hidrxido de sodio mezclar y aforar a 1000 ml con agua destilada. Solucin para el lavado de gases de carbonato de calcio: disolver en 3000 ml de agua destilada

Solucin para el lavado de gases de carbonato de calcio: disolver en 3000 ml de agua destilada y calentada a 60C, 600 gr de carbonato de calcio y mezclar hasta que desaparezcan los grumos. Solucin de tincin: disolver 0.5 g de verde de bromocresol y 1 g de rojo de metilo en 100 ml de alcohol etlico al 99%. PARTE 1: SECADO DE LA MUESTRA 1. Moler la muestra hasta llevarla al menor tamao de partcula posible buscando el mayor grado de homogeneidad. Se puede moler con el mortero usando el molino de bolas (ver el manual).

1. Pesar la caja petri y la muestra (ver manuales de las balanzas), registrando los pesos. Es importante que la muestra quede distribuida en la caja petri para facilitar el posterior secado.

1. Poner la muestra a secar en un horno (ver manual) de 100 - 110 C durante 24 horas, las temperaturas y los tiempos pueden variar.

1. Sacar la muestra del horno y enfriarla a temperatura ambiente en un desecador.

1. Sacar del desecador y pesar la muestra, determinando la humedad por la diferencia de pesos antes y despus de meter al horno.

PARTE 2: 2. Pesar 1 gr de muestra molida (en mortero molino de bolas) y secar.

2. Colocar la muestra en el tubo Buchi, agregar 2 tabletas catalizadoras Kjendhal y 20 ml de cido sulfrico concentrado.

2. Colocar el portatubos en el equipo de calentamiento (en la parte de enfriamient). Nota 1: Antes de colocar los tubos dejar precalentando el equipo (ver manual) a nivel 6 por 10 minutos antes de meter la muestra. Nota 2: El equipo de calentamiento requiere 120 V y el lavador de gases 220 V. Nota 3: Tener especial cuidado en el armado del equipo para evitar la fuga de lquidos y gases corrosivos. Nota 4: Al momento de la digestin tanto el equipo de calentamiento como el de extraccin de gases deben estar conectados. 2. Armar el equipo. Nota 1: Tener cuidado al momento de desmontar la manguera que va del calentador al lavador de gases, pues esta contiene residuos de cido. Nota 2: El tubo de vidrio que conduce los gases de los tubos a la manguera debe ser desmontado y lavado con cuidado para evitar daos y quemaduras.

2. Pasar los tubos a calentamiento y dejar digerir la muestra hasta que todas tomen un color verde esmeralda y dejar 20 minutos ms para su total digestin.

2. Desmontar el equipo y proceder al enjuague de las piezas.

2. Dejar enfriar el tubo a temperatura ambiente.

2. Conectar el destilador (ver manual). Nota 1: Purgar las dos vlvulas de la manguera de suministro de agua. Nota 2: El equipo requiere de precalentamiento antes de usarse. Nota 3: El equipo requiere de soluciones de cido brico, hidrxido de sodio y agua destilada, adems de un bote de recepcin de residuos.

2. Destilar la muestra usando el mtodo estndar preprogramado (ver manual). Nota 1: Por cada muestra se requiere un matraz erlenmeyer de 500 ml para recibir la solucin a titular.

2. Sostener el tubo con pinzas (pues est caliente) y proceder a zafar el seguro para poder retirar el tubo.

2. Una vez concluida la destilacin seleccionar la opcin lavar, terminado el proceso apagar el equipo y desconectar las mangueras.

2. Agregar 5 gotas de solucin de tincin (ver preparacin) y titular con cido sulfrico al 0.5 N (viraje de color de verde al rojo), registrando la cantidad de mililitros gastados.

2. Calcular la cantidad de nitrgeno total en la muestra.

Donde V2=Volumen del acido sulfrico gastados en la muestra. V1=Volumen del acido sulfrico gastados en el blanco. N=Normalidad de la solucin de acido sulfrico. M=Masa de la muestra en gramos.

2. Determinar la cantidad de protena multiplicando el nitrgeno total por el factor indicado en la tabla de correlacin producto-factor.

Tabla de correlacin productor-factor proteico.