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XIV VERANO DE LA INV ESTIGA CIÓN CIENT ÍFICA (2009)

Dámaris Aleyda Rodríguez Jiménez Unidad de Medicina


Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autónoma de Nayarit,
MANEJO DE TÉCNICAS PARA EL
Asesor Dra. Elizabeth Morales Salinas Coordinadora de
investigación Departamento de La transmisión
Patología transplacentaria
Universidad Nacional de Hay tres fases infecciosas
DIAGNÓSTICO DE NEOSPOROSIS EN
En fetos de bovino congénitamente Los ooquistes de N. caninum se
Autónoma de México una vaca infectada a su progenie ha reconocidas del parásito: infectados, los quistes encontrados en ANIMALES
excretan en formaDOMÉSTICOS
no esporulada en
sido identificada como la principal ruta taquizoitos, bradizoitos presentes en cerebro y medula espinal son las heces de los hospederos
los quistes y esporozoitos. Los raramente mayores a 50 µm de definitivos. Subsecuentemente se lleva
de infección, aunque se ha observado
La Neosporosis taquizoitos y bradizoitos se diámetro. (Dubey et al., 1989; Barr et a cabo la esporulación, de modo que
que algunas crías infectadas de encuentran en los hospederos al., 1991). cada ooquiste contiene dos
bovina ha adquirido manera congénita, pueden sobrevivir, intermedios y definitivos, mientras esporoquistes, cada uno de los cuales
gran importancia a nacer y desarrollarse normalmente, que los esporozoitos solamente Los bradizoitos son delgados de 6.5 x cuenta con cuatro esporozoitos
nivel mundial, perpetuando de esta manera la están presentes en los ooquistes 1.5 μm (Dubey et al., 2004) y (Lindsay et al., 1999).
siendo actualmente que se excretan en la las heces de contienen gránulos de amilopectina. Experimentalmente, se han infectado
enfermedad en el hato a través de la
una de las los huéspedes definitivos (perros y El núcleo es terminal o subterminal y perros alimentándolos con tejidos de
transmisión vertical del parasito. coyotes). (McAllister et al., 1998; los micronemas se arreglan con ganado bovino, búfalo de agua y
principales causas (Anderson et al., 1995; Dubey y Gondim et al., 2004). frecuencia en forma perpendicular con venado cola blanca infectados de Quiste de N. caninum
de aborto en Lindsay, 1996; Schares et al., 1999). respecto al citoplasma. Entre los manera natural con N. Elizabeth
caninum Morales Salinas
diversos países. En ocasiones se produce la muerte Los taquizoitos son de forma lunar, bradizoitos existen estructuras (Dijkstra et al., 2001; Rodrigues et al.,
miden aproximadamente 2 x 6 µm y tubulares vesiculares. Los bradizoitos 2004; Gondim et al., 2005), los cuales
fetal (Barr y col., 1994; Pare et al.,
tienen un núcleo central, pero y los taquizoitos se pueden identificar han arrojado ooquistes en las heces.
1996), pero los mecanismos que mediante Sin embargo solo en unos pocos
conllevan a esta no se han
carecen de gránulos de de manera definitiva Neosporosis
amilopectina inmunohistoquimica, utilizando un perros infectados de manera natural
esclarecido en su totalidad. (a diferencia de los bradizoitos).Se anticuerpo específico (McAllisterLaet al., se han bovina
Neosporosis observado ooquistes
es una en las
estadio de la gestación, aunque
Algunos posibles factores que influyen dividen rápidamente y pueden 1996). heces fecales. (Basso et al., 2001a;
infectar a muchos tipos de células enfermedad parasitaria
Slapeta causada
et al., 2002). generalmente sucede entre el
en la transmisión vertical y sus
incluyendo células neuronales, por Neospora caninum, un quinto y sexto mes, pudiendo
consecuencias son el momento de la endoteliales vasculares, miocitos, parasito protozoario del phylum presentarse más de una vez en la
infección primaria, el momento de hepatocitos, células renales,
recrudecimiento de la infección macrófagos alveolares, y Apicomplexa que fue aislado e vida reproductiva de la vaca
persistente en hospederos infectados, trofoblásticas (Barr y col., 1991a, b; identificado por primera vez en (Morales et al, 1997; Dyer et al,
Dubey et al., 2002). Estados Unidos en 1988 por
(A) Un et
2000; Morales grupo de taquizoitos
al, 2001; Dubey,
los efectos de la gestación en la
en el cerebro de un feto.
inmunidad materna, susceptibilidad Los taquizoitos de Neospora Dubey et al. Sin embargo, en 2003). Nótese taquizoitos en división
del huésped, diversidad de la cepa caninum tienen una membrana Noruega en el año de 1984 ya (flechas). (B) Formas de
del parásito y la fase de desarrollo citoplasmática con 3 capas, 22 El primer aislamiento delextracelular
crecimiento parásito
había sido notificado por Bjerkas
fetal en la que se adquiere lainfección microtúbulos, 2 anillos apicales, 1 de tejidos fetalesraramente
(flechas), de bovinovistas.
se
conoide, 1 anillo polar, de 1 a 3 et al un parasito protozoario
(Conrad et al., 1993; Barr et al. 1994, (C) Un numeroso
realizó por Conrand et al en grupo de
mitocondrias, hasta 150 causante de miositis y encefalitis
Williams et al., 2000; Buxton et al., micronemas, de 8 a 18 rhoptrias, un Estadostaquizoitos
Unidos en 1991.intracelulares
en seis cachorros de perros de la (flecha). (D-G) Quistes
2002; Innes et al., 2002). El perro y el aparato de Golgi, retículo
raza bóxer, los cuales resultaron (flechas), con diferentes
coyote han sido reconocidos como endoplásmico rugoso y liso un La Neosporosis bovina es
grosores de la pared
huéspedes definitivos de N. caninum núcleo y un nucleolo. serológicamente negativos a actualmente reconocida como
encontrados en el cerebro de
los cuales eliminan ooquistes en las Toxoplasma gondii. una defetos
las principales causas
abortados. (H) Un quistede
Los quistes con bradizoitos pueden
heces. En este caso, la transmisión al variar considerablemente en Hasta 1988 la enfermedad había aborto con
y pérdidas económicas
pared gruesa (flecha)en en
ganado será por la ingestión de tamaño, dependiendo del número el tejido neuronal
el ganado lechero. de Sela médula
ha
sido diagnosticada como
ooquistes esporulados presentes en de bradizoitos que contengan. En espinal de un ternero
informado en Europa, Australia, de tres
toxoplasmosis debido a las
pastos o agua contaminados. perros se han encontrado quistes de nueva días de edad.
Zelanda, HE. X 600.
algunos países
hasta 107 µm de diámetro y con una similitudes estructurales y
(McAllister et al., 1998; Lindsay et al., asiáticos como Japón, Tailandia y
pared de 4µm de grosor. (Dubey et biológicas entre N. caninum y
1999). Los perros se pueden infectar al., 2002). Corea, y en varios países del
por la ingestión de placentas Toxoplasma gondii. continente americano, incluyendo
contaminadas con quistes del México (Morales et al, 1997;
parásito. (Dijkstra et al., 2001). Esta enfermedad se caracteriza Dyer et al, 2000; Morales et al,
C 2001; Dubey, 2003).
por provocar aborto en cualquier
i
c
l
o

b
i En México, la Neosporosis fue
detectada en 1997, en un feto
o
abortado de la raza Holstein,
l macho, de cinco meses de
óLesiones características gestación, que presento lesiones
gen los fetos bovinos histológicas características,
i asociadas a la infección confirmándose presencia del
por N. caninumen los
ctejidos teñidos con H y parasito a través de
oE. (A) Necrosis focal e inmunohistoquimica (IHQ) (Morales
infiltración de células et al, 1997). Por otro lado, en otros
mononucleares en el estudios,se encontró evidencia
dcerebro de un feto. (B)
serológica contra la Neosporosis
eGliosis, infiltración
en ganado lechero en ciertas
perivascular de células
mononucleares, y regiones de México (Morales et al,
Nneovascularización en 2001; García et al, 2002). Existen
eun ternero de tres días estudios serológicos realizados de
ode edad
epimiocarditis difusa en
(C) México, donde se encontró
sel corazón de un feto seroprevalencia de 72% en hatos
pabortado. (D) Hepatitis con tasas de abortos entre 13% y
ocaracterizada por la
infiltración de células
30% yde 36% en hatos con tasas
de abortos hasta de 12% anual,
r mononucleares del por lo que se consideró que la
aparénquima, sobre todo enfermedad podría estar
en las zonas
periportales. ampliamente difundida en los
c principales hatos lecheros
a mexicanos (Morales et al, 2001).
n
i
n
u
m
Diagnóstico de
Neosporosis
Diagnóstico de la infección postnatal por N. caninum
Las vacas que han abortado no muestran manifestaciones clínicas y éstas Las lesiones graves son raras, pero se pueden presentar en corazón,
solo se han observado en terneros menores de dos meses de edad. Los musculo esquelético y cerebro. Se pueden presentar focos blancos en
terneros infectados por N. caninum pueden nacer con menos peso del musculo esquelético y corazón los que corresponden a necrosis. También
esperado, ser incapaces de levantarse y presentar manifestaciones nerviosas puede ocurrir hidrocefalia y presentarse focos de necrosis en cerebro (Dubey
(casos revisados en Dubey y Lindsay 1996). Las extremidades (con más et al; 1998). A menudo los fetos están autolíticos y momificados. Hay áreas
frecuencia las posteriores) pueden estar flexionadas o hiperextendidas y el focales de decoloración en los cotiledones placentarios (Fioretti et al; 2003).
examen neurológico puede revelar ataxia, disminución del reflejo patelar y
pérdida de la consciencia propioceptiva. También pueden presentar Hay lesiones microscópicas presentes en varios órganos, pero son más
exoftalmia y la apariencia asimétrica de los ojos. Sin embargo, debe comunes en SNC, hígado y corazón.Las lesiones en cerebro y medula
destacarse que estos casos son muy infrecuentes y que la gran mayoría de espinal consisten en encefalomielitis no supurativa, caracterizada por
los terneros infectados congénitamente nacen clínicamente normales. infiltración leucocitaria en el parénquima y las meninges desde multifocal a
difusa, sin embargo la lesión característica de Neosporosis en SNC consiste
Diagnóstico del aborto causado por N. Caninum en focos de infiltración de células mononucleares alrededor de un área
La historia clínica y los datos epidemiológicos pueden ser orientativos, pero el central de necrosis.
diagnóstico definitivo de la neosporosis precisa del examen del feto en un La proliferación de la glía (microgliosis) es más común en fetos abortados en
laboratorio de diagnóstico equipado adecuadamente. Las muestras el tercer trimestre (Dubey et al; 2006). Ocasionalmente hay calcificación
diagnósticas incluyen el feto abortado que debe ser enviado con la placenta y (Boulton et al; 1995).
suero de la madre. Si esto no es posible, entonces deben enviarse muestras
de cerebro, corazón e hígado fetales. Las muestras de suero pueden
obtenerse del fluido serosanguinolento acumulado en las cavidades Las lesiones en miocardio pueden ser severas, pero a menudo son
corporales fetales. El diagnóstico laboratorial se realiza mediante el examen enmascaradas por la autolisis, comúnmente consisten en infiltración focal de
histopatológico del feto, técnicas de PCR y serología de la madre y del feto. células mononucleares con necrosis mínima.

Las lesiones hepáticas consisten en infiltración periportal de células


mononucleares y focos variables de necrosis asociados a trombos de fibrina
Histopatológico:
en los sinusoides (Barr et al., 1990; Wouda et al., 1997b).

La patología es un procedimiento diagnostico importante, Terneros neonatos: La lesión predominante es encefalomielitis. (O’Toole and
normalmente se encuentran lesiones en varios tejidos (Dubey Jeffrey, 1987; Parish et al., 1987; Dubey et al., 1989, 1992; Barr et al., 1991b,
et al; 2006), a continuación se destacan las lesiones más 1993; Dubey and Lindsay, 1996; Anderson et al., 1997; Magnino et al., 1999;
importantes: Peters et al., 2001a; De Meerschman et al., 2005;).

Fetos y terneros muertos: se pueden encontrar lesiones


degenerativas, inflamatorias y necróticas en todos los tejidos,
pero son más comunes en SNC, corazón e hígado (Barr et al.,
1990, 1991a; Anderson et al., 1991; Nietfeld et al., 1992;
Wouda et al., 1997b; Dubey et al., 1998a, 1990b; Hattel et al.,
1998; Helman et al., 1998; Boger and Hattel, 2003; Dubey et
al., 2006).
Diagnóstico de
Neosporosis
Diagnostico de
Técnicas serológicas

eosina:
Hay
Neosporosis
Identificación de N. caninum en tejidos teñidos con hematoxilina y
varias técnicas disponibles para la detección de anticuerpos frente a N.
Diagnóstico serológico
Mediante inmunoblot se han identificado antígenos inmunodominantes de 17,
caninum en el ganado. Todas estas técnicas se basan en antígenos de Las
29/30,pruebas
37 y 46serológicas
kDa y proteínas tienenconlaunventaja
peso molecular
de que de pueden
25, 65ser y 116 aplicadas
kDa en
El numero de parásitos que se encuentran en tejidos de bovino es antemortem
el suero de bovinos
y proporcionan
infectados información
naturalmente sobre(Baszler
la etapaetdeal.la1996,infección.
Atkinson
En los
et
taquizoitos.
usualmente Es importante
bajo, aun cuando señalar
losque la están
fetos detección
biendepreservados
anticuerposes pordifícil
IFI terneros
al. 2000a,o 2000b,
ganadoSöndgen vacuno adulto,et al. 2001, pocosÁlvarez-García
días despuésetdeal.la2002). infección
Sin
(Inmunofluorescencia
observar taquizoitos en indirecta)
tejidos o por ELISA
teñidos pueden
con H&E. dar resultados
La respuesta falsos
inflamatoria primaria
embargo,aparecen
el inmunoblotanticuerpos
no se IgM ha utilizado
e IgG específicos.
como un método Los niveles corriente
de IgM
de
negativos
iniciada por en caso de sueros
el parasito provenientes
matando de fetos
a las células menores de
huéspedes, 5 meses
también de
puede específico
diagnóstico,alcanzan
sino como su técnica
pico despuésconfirmatoriade 2 de semanas
otras pruebas
de la infección
serológicas y
matar al parasito, por lo tanto es muy raro encontrar taquizoitos bien
gestación. disminuyen
(Atkinson et poral. 2000a,
debajo2000b, de losSöndgen
límites de et al.
detección
2001). Así, (prueba
el reconocimiento
de aglutinación de
conservados en fetos muertos (Dubey and Lindsay, 1996; Dubey et al., 2006). Neospora,
tres o cuatro NAT)antígenos
a las 4 semanas
inmunodominantes
de la infección de 17, (MAREZ
29/30, De 37 et y 46
al., kDa
1999),
porlos
el
Las técnicas
En los tejidosserológicas
teñidos con -que
H&E detectan anticuerpos
los taquizoitos son séricos
generalmenteespecíficos frenteo
redondos niveles
suero de IgG vacas aumentan
infectadas durante naturalmente
las primerassesemanas ha considerado
hasta 3-6 meses como
aunN.poco
caninum- se utilizan habitualmente para demostrar la infección
alargados, es importante observar el núcleo vesicular y diferenciarlos en los después
confirmaciónde la de
infección
la infección
experimental
(Schares primaria
et al. (Conrad
1998).etAdemás,
al., 1993b;cuandoDubey et el
bovinos adultos yhuésped
de las células en el rebaño, permiten conocer
en degeneración (Dubeysi et
la neosporosis
al., 2006). En es causa
tejidos al.,
inmunoblot
1996; Ugglase utiliza
et al., para
1998,analizar
MAREZfluidos De et fetales,
al., 1999; seSchares
ha comprobado
et al., 1999c,que
del
bovinos, los quistes miden de 5-50µm de diámetro y el grosor de la vacas
fallo reproductivo comparando la prevalencia de la infección en las pared 2000;
incrementa
Williams
significativamente
et al., 2000;laTrees sensibilidad
et al. de2002).la serología
Después fetal (Söndgen
de que los et
que abortan y en aquellas que no lo hacen. Sin embargo,
varia. Los bradizoitos dentro del quiste cuentan con núcleos terminales que aunque un taquizoitos
al. 2001). o los ooquistes inducen la infección primaria, un aumento inicial
resultado
se colorean serológico
de rojo conpositivo ayuda de
la reacción a identificar un animal
acido periódico adulto
de Schiff infectado,
(Dubey et al; en la IgG1 específica es seguido por un ligero aumento de IgG2 (De MAREZ
un resultado negativo no descarta definitivamente la infección porque los Validación
2002). et al., 1999, de las pruebas
Williams serológicas
et al., 2000; Andrianarivo et al., 2001).
anticuerpos séricos frente a N. caninum pueden fluctuar con la edad y el
estado de gestación. Es frecuente que las pruebas serológicas mencionadas se utilicen tanto para
Inmunohistoquimica No se abortos
evaluar observaron niveles de
sospechosos elevados
neosporosis de IgA comoenpara terneros
identificar infectados
bovinos
La IFI fue la primera técnica serológica aplicada a la neosporosis y experimentalmente con ooquistes (MAREZ De
infectados de diferente edad y sexo. Sin embargo, se han realizado pocos et al., 1999). Los niveles de
frecuentemente
La inmunohistoquímicaha sido es
utilizada como prueba
más sensible que lade referencia.
tinción Las pruebas
convencional de H y anticuerpos
estudios queespecíficos
comparen pueden y evalúen persistir durante las
críticamente la vida, pero atécnicas
diferentes veces
ELISA,
E parausando muestras
demostrar de sueroeno leche,
N. caninum carecenydetodos
las lesiones, la subjetividad
los tejidosdequela fluctúan y están por debajo de los límites
serológicas utilizadas en el diagnóstico de la neosporosis bovina. Dos de detección de las pruebas
IFI y al poder automatizarse permiten un análisis más rápido
presenten lesiones deben ser examinados por medio de inmunohistoquímica de las muestras serológicas.
aspectos queDespuésdeberíande la primera en
considerarse infección por N.decaninum
la validación la avidez
estas pruebas sondela
y(Boger
las hace muy útiles
y Hattel, 2003).enTanto
el caso de estudios monoclonales
los anticuerpos epidemiológicos a gran
como escala.
policlonales anticuerpos específicos
selección apropiada deaumenta
la poblacióncon el de tiempo (Bjorkman
referencia y laset al., 1999, 2005)
estrategias de
Para mejorarcontra
específicos la especificidad
N. caninum deselaspueden
pruebasutilizar
ELISA(Cole
tradicionales,
et al., 1994;basadas
Dubeyeny ymuestreo.
esto puede proporcionar en cierta medida, información sobre la duración de
elLindsay,
uso de1989) antígeno completo o extractos solubles de taquizoítos,
y ambos son comercialmente disponibles. Los anticuerpos se han una infección primaria. Se han desarrollado varias técnicas para diferenciar
utilizado taquizoítos enteros, complejos estimulantes Pararespuestas
las establecerbajas la población de referencia
de IgG (indicativo de unase han considerado
reciente infeccióndiferentes
primaria,
policlonales derivados de conejos parecen ser másdefiables la inmunidad
que los
(iscoms), antígenos recombinantes y antígenos purificados pordiagnóstico.
afinidad. Por aspectos como la de
aproximadamente presencia
2 meses dede anticuerpos
duración) específicos
de las respuestas precalostrales
altas deenIgG el
anticuerpos monoclonales derivados del ratón, para fines de La
otra parte, se han desarrollado varias pruebas ELISA de avidez que permiten ternero recién nacido (como indicador de la infección
(indicativo de una infección crónica). Por lo general, las respuestas altas de de la madre asumiendo
reactividad cruzada de anticuerpos de N. caninumfrente a otros protozoarios
distinguir entre las fases aguda la gran
IgG se eficacia de la transmisión
han observado en bovinos congénita),
infectados la utilización
naturalmente simultánea
por másdededos 6
del phylum Apicomplexa, comoylocrónica
son T.degondii
la Neosporosis.
y Sarcocystis spp puede ser
pruebas(Bjorkman
meses serológicas para
et al., confirmar
1999, 2003). la infección
Después de yla el uso de ladelIFIganado
vacunación como
mínima sin embargo, estos protozoarios raramente
También se han normalizado las pruebas de aglutinación se asociandirecta,
con el cuyas
aborto
prueba
con de referencia.
vacunas inactivadas Aunque,
de N. el uso de la
caninum, la interpretación
IFI como prueba de ladeinformación
referencia
en el ganado
ventajas son bovino (Anderson etyal.,no
su simplicidad 1991; Canadáanticuerpos
requerir et al., 2002; secundarios
Van Maanen
parece no ser suficientemente seguro en un estudio
serológica podría ser difícil. Una vacuna consistente en taquizoitos derivados de validación porque
et al., 2004).
específicos. El diagnóstico de la neosporosis bovina se ha facilitado con la todavía
de cultivonodehay consenso
células muertas en los puntos deestá
y adyuvante cortecomercialmente
respecto a la serología
disponiblede y
Usualmente, utilizando
comercialización inmunohistoquimica
de diferentes pruebas ELISA no que se puedenla detección
permiten distinguir de
los
adultos y fetos entre los distintos laboratorios
es utilizada en varios países (por ejemplo, en los EE.UU. (Estill, 2004),de diagnóstico y porque la en
IFI
grupos de taquizoitos
anticuerpos dealos
séricos frente quistes, a menos que se utilicen anticuerpos
N. caninum. no puede
Costa Ricaresolver
( Romero reacciones
et al., 2004)positivas
y en Nuevapoco claras
Zelanda o poco
(Heuerespecíficas.
et al., 2003)).En
específicos para bradizoitos (McAllister et al., 1996b). Los tejidos con alta
Actualmente, estosvacuna
casos, de la carácter
utilización no del inmunoblot -más específico- permitiría un
concentraciónlos deantígenos utilizados
peroxidasa, en laslapruebas
en especial placenta, serológicas
deben serproceden de
tratados con Otra comercial que también consiste en taquizoitos
taquizoítos obtenidos en cultivos celulares de aislados bovinos y caninos de diagnóstico inequívoco (Söndgen et al. 2001).
derivados de cultivos celulares y adyuvante ha sido recientemente utilizada
tripsina o pepsina.
N. caninum. La manera
de sensibilidad y la especificidad
experimental de una prueba
para la vacunación de ganadodiagnóstica
bovinopueden variar
en Argentina
Por inmunohistoquímica N. caninum es, en la mayoría de los casos, por diversos
(Moore et factores,
al., 2005). comoLos la edad del animal
animales o la fase con
inoculados de la infección.
estas vacunas
identificado en el cerebro, el corazón y el hígado y rara vez en otros órganos, desarrollaron respuestas de anticuerpos similares a los de ganado
incluyendo la placenta. En el estudio de Wouda et al. (1997b), N. caninum se naturalmente infectado con N. caninum (Choromanski y Block, 2000,
encontró en el cerebro de 71 (89%), en el corazón de 11 (14%) y en el hígado Andrianarivo et al., 2001; Moore et al., 2005).
de 21 (26%) de 80 fetos.
Diagnostico de
Neosporosis
Aunque la Neosporosis bovina se ha reconocido en México, los estudios Las vacas que abortan fetos infectados por N. caninum generalmente tienen
seroepidemiológicos a la fecha han sido escasos. La detección de títulos de anticuerpos elevados (Otter et al. 1997, Wouda et al. 1998b), pero
anticuerpos anti-Neospora caninum específicos en el suero de bovinos ha los anticuerpos pueden fluctuar y disminuir rápidamente después del aborto
sido muy útil y satisfactoria para el diagnostico de la infección y ha (Conrad et al. 1993, Schares et al. 1999b). Sin embargo, dos trabajos
demostrado ser adecuada para investigaciones seroepidemiológicas (Wouda muestran que la cinética de la respuesta de anticuerpos frente a Neospora
et al, 1992; Pare et al, 1994, 1996; Schares et al, 1997; Morales et al, 2001). durante la gestación puede ser una herramienta muy útil para predecir el
aborto o la transmisión vertical de N. caninum a la descendencia en vacas
Se ha reconocido que la técnica de ELISA es consistente, objetiva, rápida y infectadas crónicamente (Paré et al. 1997, Quintanilla-Gozalo et al. 2000). La
precisa (Bjorkman et al, 1994; Williams, 1999); proporciona alta sensibilidad y determinación del título de anticuerpos específicos en una sola muestra
especificidad, siendo más practica respecto al número de muestras que se recogida de cada una de las vacas del rebaño en el momento de la
pueden analizar en comparación con la IFI (Pare et al, 1995; Barr et al, 1995 inseminación y/o diagnóstico de gestación podría ayudar a predecir hasta 61-
Dubey et al, 1996). 68% de futuros posibles abortos (Quintanilla-Gozalo et al. 2000).
Paré et al, en 1995 notificaron, 89% de sensibilidad y 97% de especificidad Diagnóstico por reacción en cadena de polimerasa (PCR)
en el caso de ELISA. Otros laboratorios describieron sensibilidad y
especificidad de 92%-98% y 87%-100%, respectivamente. No se han descrito La PCR desempeña un papel importante en el diagnóstico de la infección por
reacciones cruzadas con otros protozoarios, incluyendo Toxoplasma gondii. N. caninum. En la mayoría de las PCR se utilizan los protocolos para detectar
ADN de N. caninum en los tejidos de fetos abortados o de otros huéspedes
Serología maternal y fetal intermediarios. Sin embargo, también otras muestras, como de líquido
La detección de anticuerpos frente a N. caninum en el suero o líquidos fetales amniótico (Ho et al., 1997), líquido cefalorraquídeo (Peters et al., 2000;
mediante IFI (Conrad et al. 1993, Paré et al. 1995, Otter et al. 1997, Slotved Buxton et al., 2001; Schatzberg et al., 2003), y heces de perro o coyote
et al. 1999) o ELISA (Paré et al. 1995, Slotved et al. 1999) indica infección contaminados con ooquistes (Basso et al., 2001; Hill et al., 2001; Slapeta et
fetal porque no existe transmisión transplacentaria de anticuerpos de la al., 2002b; McGarry et al., 2003; Gondim et al., 2004a; Schares et al., 2005)
madre al feto. Sin embargo, varios trabajos han demostrado la baja han sido examinados por PCR para identificar la presencia de ADN de N.
sensibilidad de la serología fetal (Barr et al. 1995, Reichel y Drake 1996, caninum. Los primeros intentos para la detección de DNA de N. caninum en
Wouda et al. 1997a, Gottstein et al. 1998, Slotved et al. 1999), a pesar que sangre de bovinos infectados naturalmente fallaron (Guy et al., 2001).
puede ser mejorada utilizando el inmunoblot (Söndgen et al. 2001), porque un Recientemente, se informó que es posible identificar a N. caninum en el ADN
resultado negativo no asegura la inexistencia de infección por N. caninum. de la sangre de bovinos infectados crónicamente (Ferré et al., 2005; Okeoma
Esto puede ser debido a la falta de inmunocompetencia fetal (fetos de menos et al., 2004). Recientemente, se han desarrollado protocolos de PCR no sólo
de cuatro meses), al transcurso de un intervalo de tiempo corto entre la para detectar sino también cuantificar ADN de N. caninum en muestras. La
infección y la muerte fetal o a la autolisis fetal que puede degradar las PCR cuantitativa se ha convertido en uno de los métodos clave para el
inmunoglobulinas y de esta manera disminuir la cantidad de anticuerpos estudio de la patogénesis de Neosporosis en la especie bovina y evaluar la
específicos. Por otra parte, la detección de anticuerpos de Neospora en los actividad de las vacunas y fármacos terapéuticos o profilácticos (Cannas et
fluidos fetales no demuestra que la infección haya causado la muerte fetal, al., 2003a, 2003b; Collantes-Fernandez et al., 2004, 2005; Esposito et al.,
porque la mayoría de terneros con anticuerpos precalostrales son 2005).
clínicamente normales. Por ello, la serología fetal no puede usarse como La PCR cuantitativa se utilizó también en estudios epidemiológicos para
única prueba diagnóstica para confirmar el aborto por N. caninum en fetos estimar la carga de parásito N. caninum en el semen de toros seropositivos
aislados. infectados experimentalmente (Ortega-Mora et al. 2003; Caetano da Silva et
La presencia de anticuerpos específicos en el suero de vacas abortadas es al., 2004; Ferré et al., 2005). Las ventajas de esta técnica son su elevada
solo indicativa de la exposición a Neospora y, por ello, un resultado negativo especificidad y sensibilidad y la capacidad de amplificar pequeñas cantidades
no puede excluir a la neosporosis como causa del aborto. de ADN de N. caninum en una gran variedad de tejidos. Además, la PCR
funciona bien cuando los fetos se encuentran autolíticos, lo que es frecuente
en el caso del aborto por Neospora.
TECNICA VENTAJAS INCONVENIENTES

Histopatología Se pueden observar las lesiones características en los A menudo los fetos están autolíticos y momificados.
fetos, como son: Necrosis focal e infiltración de células
mononucleares en el cerebro, gliosis, infiltración Con la tinción de rutina (H y E) es difícil observar taquizoitos
perivascular de células mononucleares, y al microscopio.
neovascularización, epimiocarditis linfoplasmocitaria
multifocal o difusa y hepatitis caracterizada por la Se requiere que el patólogo revise varios cortes histológicos
infiltración de células mononucleares del parénquima, con el propósito de incrementar la posibilidad de observar
sobre todo en las zonas periportales. parásito.

Inmunohistoquimica La inmunohistoquímica es más sensible que la tinción Hay problemas con los fetos autolíticos.
convencional de H y E para demostrar N. caninum en
los tejidos, principalmente en SNC, corazón e hígado.

Inmunofluorescencia indirecta Se utiliza como técnica de referencia y es útil para el Es tardada y subjetiva, ya que no puede resolver reacciones
diagnostico de Neosporosis principalmente en estudios positivas poco claras o poco específicas.
experimentales.

ELISA Se ha reconocido que la técnica de ELISA es


consistente, objetiva, rápida y precisa, proporciona alta Puede proporcionar resultados falsos negativos en caso de
sensibilidad y especificidad, siendo más practica fetos de menos de 5 meses de edad.
respecto al número de muestras que se pueden analizar
en comparación con la Inmunofluorescencia indirecta. Hay una mínima reactividad cruzada en relación a otros
protozoarios del filum Apicomplexa.

PCR Elevada especificidad y sensibilidad y la capacidad de Se requiere analizar numerosas muestras en casos clínicos
amplificar pequeñas cantidades de ADN de N. caninum para incrementar la sensibilidad.
en una gran variedad de tejidos. Además, la PCR
funciona bien cuando los fetos se encuentran La polimerización puede tener errores al sintetizar el ADN
autolíticos, lo que es frecuente en el caso del aborto por Puede contaminarse con otro ADN (puede ser del mismo
Neospora.
investigador o de cualquier otro)
Barr, B.C., Conrad, P.A., Dubey, J.P., Anderson, M.L. Neospora-like encephalomyelitis in a calf: Pathology,
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que presenta el ganado bovino es el aborto y no se encuentran lesiones
macroscópicas en los fetos. Se pueden utilizar herramientas diagnosticas Barr, B. C., P. A. Conrad, K. W. Sverlow, A. F. Tarantal, and A. G. Hendrickx. 1994. Experimental fetal and
transplacental Neospora infection in the nonhuman primate. Lab. Investig. 71:236–242.
como la histopatología, ya que los fetos presentan lesiones características
principalmente en SNC, corazón e hígado. Para obtener resultados más Barr, B. C., Anderson, M.L., Sverlow K. W. and Conrad, P. A.: Diagnosis of bovine fetal Neospora infection whit
and indirect fluorescent antibody test. Vet Rec, 1995; 137:611-613
confiables se puede utilizar la inmunohistoquimica; la reactividad cruzada de Basso, W., L. Venturini, M. C. Venturini, D. E. Hill, O. C. H. Kwok, S. K. Shen, and J. P. Dubey. 2001. First
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Apicomplexa como lo son T. gondii y Sarcocystis spp es mínima y son Basso, W., L. Venturini, M. C. Venturini, P. Moore, M. Rambeau, J. M. Unzaga, C. Campero, D. Bacigalupe,
raramente asociados con el aborto en el ganado bovino. También se pueden and J. P. Dubey. 2001. Prevalence of Neospora caninum infection in dogs from beef-cattle farms, dairy farms, and
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aplicar técnicas serológicas que proporcionan la ventaja de que se pueden
emplear antemortem y brindan información sobre la etapa de la infección. Se Bjerkas, I., S. F. Mohn, and J. Presthus. 1984. Unidentified cyst-forming sporozoon causing encephalomyelitis
and myositis in dogs. Z. Parasitenkd. 70:271–274.
ha reconocido que la técnica de ELISA es consistente, objetiva, rápida y
precisa; así mismo el reciente uso de PCR desempeña un papel muy Bjorkman, C., A. Lunden, and A. Uggla. 1994. Prevalence of antibodies to Neospora caninum and Toxoplasma
gondii in Swedish dogs. Acta Vet. Scand. 35:445–447.
importante como herramienta diagnostica, ya que no solo se detecta el ADN
de N. caninum sino que también se puede cuantificar. Aunque la Neosporosis Bjorkman, C., Nslund, K., Stenlund, S., Maley, S.W., Buxton, D. and Uggla A. (1999).An IgG avidity ELISA to
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bovina se ha reconocido en México, los estudios seroepidemiológicos a la Investigation, 11, 41-44.
fecha han sido escasos. La detección de anticuerpos anti-Neospora caninum
Bjorkman, C., McAllister, M., Frossling, J., Nslund, K., Leung, F. and Uggla, A. (2003). Application of the
específicos en el suero de bovinos ha sido muy útil y satisfactoria para el Neospora caninum IgG avidity ELISA in assessment of chronic reproductive losses after an outbreak of
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