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PracticasPrcticas de Biologa CelularLaboratorio

NATOMA INTERNA BSICA: DISECCIN DE UN PEZ


Textos: ngel Garva y Jess Dorda Fotografas: Jess Dorda y ngel Garva Dibujos: Victoria Ga itan.y Jess Dorda
El estudio de la anatoma interna de peces da para llenar, mucho ms que estas pginas; por otro lado, algunos de los rganos internos sern tratados, de modo individual, en sucesivos captulos de esta serie. Por todo esto, la intencin de estas pginas no es otra que ofrecer al lector un esbozo, un esquema, una "gua anatmica de mano" que permita a un aficionado medio realizar la diseccin de un pez seo, que es sin duda el mejor sistema para comprender la anatoma interna de una especie o tipo de pez.
Diseccin parcial de una hembra de Perca sol ( Lepomis gibbosus (Linnaeus, 1758) ) donde, entre otros, puede verse la situacin del aparato excretor. R: rin, situados sobre la vejiga natatoria tJ: ureter V: vejiga O: orificio genito-urinario, justo detrs del ano. Dibujo: Jess Dorda

Empezaremos hablando de conceptos generales a tener en cuenta en la diseccin de un pez, lo que hemos denominados comentarios anatmicos. En segundo lugar ofrecemos un protocolo para la realizacin de la diseccin y, por ltimo, incluimos un ejemplo prctico con fotografas, realizado por Jess Dorda, sobre la diseccin de un ejemplar de Oncorhynchus mykiis (Walbaum, 1792), conocida por trucha arco-iris. La diseccin de un pez no es en principio un trabajo difcil, sin embargo dos factores pueden complicar la tarea: el tamao del pez y la pericia de la persona que la efecta. Por propia experiencia, dir que la diseccin de un nen, adems de requerir el uso de una lupa binocular de gran aumento, puede sacar de quicio a cualquier. En cuanto a la pericia personal, tan slo comentar que los cortes no deben ser profundos y recordad el conocido dicho: "nadie nace enseado". Un buen campo de pruebas es practicar con pescados grandes destinados a consumo humano, como por ejemplo la trucha que podemos adquirir en cualquier pescadera.

1. COMENTARIOS ANATMICOS
La columna vertebral o espina dorsal est segmentada en vrtebras, que protegen en su interior la mdula espinal. Las de la regin corporal o tronco presentan a ambos lados prolongaciones laterales que sujetan las costillas. El crneo se articula con las primeras v

Nota: cuida la presentacin del trabajo, la ortografa y la redaccin, recuerda que es un entrenamiento para tu carrera profesional y/o cientfica.

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rtebras. El cerebro de los peces puede considerarse, desde un punto de vista anatmico, una prolongacin del extremo anterior de la mdula espinal. Algunas aletas se anclan directamente en la columna vertebral, en las ltimas vrtebras se sujetan los radios de la aleta caudal, y otras, caso de las pectorales, presentan una cintura esqueltica. Algunas especies de peces tienen, entre los paquetes musculares, toda una serie de pequeos huesos. Las branquias de un pez seo tipo estn constituidas por una serie de laminillas branquiales, que irradian de unos soportes seos, los radios y los arcos branquiales. Normalmente toda la estructura branquial esta cubierta por un oprculo. En los peces se diferencian tres clases de msculos: lisos, cardiacos y estriado s. Este ltimo, tambin llamado msculo esqueltico, forma la musculatura dorsal, segmentada en haces musculares, que se aprecia a simple vista de marcado color rojoanaranjado. El tubo digestivo tiene msculo liso, de contraccin involuntaria. El esfago es corto, musculoso y conecta la boca con el estmago. El estmago tiene generalmente forma de saco y el paquete intestinal aparece enrollado y de color rojizo; su longitud depende del rgimen alimenticio. La vejiga natatoria est conectada con el aparato digestivo a nivel del esfago, a travs de un conducto pneumtico. El msculo cardiaco forma un corazn de cuatro cavidades. En la mayora de los peces se localiza debajo de los arcos branquiales, en la zona ventral izquierda y rodeado del pericardio, de color blanquecino (Dorda, 1984). El ventrculo tiene la pared ms gruesa y es tono ms rosado que la aurcula.

PRACTICA 5 AISLAMIENTO DEL ADN INTRODUCCIN El aislamiento del ADN es el principio de muchos mtodos usados en la ingeniera gentica, como la transformacin, secuenciacin, mapeo fsico, mutagnesis sitio dirigidas, etc. El aislamiento de los cidos nucleicos implica la destruccin de la clula por choque osmtico; homogeneizacin, digestin enzimtica o tratamiento mecnico suave. OBJETIVO El alumno aislar y observara al ADN extrado de forma rudimentaria. Materiales de laboratorio por equipo 1 Mortero y pistilo Material del alumno por equipo Muestra vegetal (ajo, cebolla, planta, jitomate)

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4 Tubo de ensayo 1 Pipeta de 10 ml 1 pipeta Pasteur Tubos para centrifuga Sal de mesa Bicarbonato de sodio Detergente lquido o champ palillos

Materiales de laboratorio por grupo Alcohol isoamlico a 0C Centrfuga Agua destilada 1 bandeja de metal hielo ACTIVIDAD DE LA PRACTICA Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un bao de hielo triturado: 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo. 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. 5 g de bicarbonato sdico. 5 ml de detergente lquido o champ. 2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos. 3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas a la accin del detergente. 4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y despus pipetear el sobrenadante. 5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre el tampn. 6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado. Reportar Resultados CUESTIONARIO Qu dificultades se presentaron para la realizacin de la prctica? Qu observaste en las fibras? Cul es la funcin del detergente y agentes quelantes en la purificacin del ADN? Porqu se dice que las protenas contaminan al ADN purificado? Nota: cuida la presentacin del trabajo, la ortografa y la redaccin, recuerda que es un entrenamiento para tu carrera profesional y/o cientfica.

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Porqu es til el estudiar y analizar al ADN de una clula? Si todos los organismos vivos tienen ADN en sus clulas, que es lo que hace a los organismos diferentes de otros?

COLORES QUE HABLAN:


Ensayos de coloracin a la llama para los elementos qumicos
INTRODUCCION 1 : La llama de una vela
Cuando se enciende una vela, se ve como el calor radiado derrite la cera prxima a la mecha, que sube por la misma, y al llegar a la punta sta se evapora. Inmediatamente encima de la mecha se observa un cono oscuro rodeado por una zona amarilla, que es la principal causa de la luminosidad. Al lado de la llama y cerca de la mecha hay una zona azul. La existencia de estas tres zonas, en vez de una sola, es una de las caractersticas de las llamas de difusin. Este tipo de llama se produce cuando el combustible y el comburente no se han mezclado antes que se produzca la ignicin. En este caso, lo que ocurre es la difusin molecular del oxgeno a travs de la superficie del volumen de gas combustible. Las llamas de difusin, por lo general son amarillas debido a la incandescencia del carbn que se forma en el proceso. o un mechero Bunsen.
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INTRODUCCION 2 : Ensayos a la llama
Un tomo es capaz de absorber diferentes tipos de energa, trmica y luminosa especialmente, que le conducen a una serie de estados excitados. Estos estados poseen unas energas determinadas y caractersticas de cada sustancia. Existe una tendencia a recuperar con rapidez el estado fundamental. La consecucin de "volver al equilibrio" se puede realizar a travs de choques moleculares (prdida de energa en forma de calor) o a travs de la emisin de radiacin. Puesto que los estados excitados posibles son peculiares de cada especie, tambin lo sern las radiaciones emitidas en su desactivacin. El tipo de radiacin emitida depender de la diferencia entre los estados excitados y el fundamental, de acuerdo con la ley de Planck, E = hv; donde E = diferencia de energa entre los estados excitado y fundamental, h = Constante de Planck (6,62 10-34 J s) y v= frecuencia. De esta manera, un determinado elemento da lugar a una serie de radiaciones caractersticas que constituyen su espectro de emisin, que puede considerarse como su "huella dactilar" y permite por tanto su identificacin. Uno de los mtodos ms tradicionales de ensayo en un laboratorio qumico (y tal vez uno de los primeros mtodos de anlisis qumicos desarrollados, pues ya se llevaba a cabo en el siglo XVII) es el ensayo a la llama de las sustancias. Se trata de un ensayo de tipo cualitativo, es decir, con l podemos averiguar qu sustancias contiene nuestra muestra problema, pero no en qu proporcin (para esto ltimo hara falta un ensayo cuantitativo). Esto hace que el resultado del anlisis sea un poco subjetivo, es decir, depende de la persona que lo realiza, que debe asignar un elemento qumico al color observado. Dada su importancia, antes de considerar las coloraciones de los distintos ensayos a la llama, debemos tener en cuenta que la llama de un mechero Bunsen puede actuar como fuente trmica y luminosa, pero tambin como reactivo qumico con poder oxidante y reductor. El hecho de que una llama tenga ms capacidad oxidante o ms capacidad reductora, se puede lograr regulando la entrada de aire. As, tenemos: La combustin con exceso de aire produce una llama oxidante (exceso de oxgeno, O2) y los componentes del combustible arden totalmente, por lo que resulta incolora. La combustin con defecto de aire, por su parte, es incompleta y produce una llama reductora. De esta forma queda carbn incandescente muy subdividido y un exceso de monxido de carbono, CO. Esta llama es poco calorfica, brillante, reductora y txica. No toda la llama del mechero es reductora u oxidante, sino que, en verdad, aunque en distinta proporcin, todas las llamas presentan zonas reductoras y oxidantes, es decir, dos partes diferenciadas: el cono interior, brillante y reductor, de combustin incompleta y baja temperatura y el cono exterior, incoloro, oxidante y de gran poder calorfico, donde se produce, como hemos dicho antes, una combustin completa. En los ensayos a la llama, generalmente se usa inicialmente la base de la llama (menos calorfica) y seguidamente se puede utilizar la zona oxidante, ms calorfica, con diferentes propsitos.

Fundamentos del ensayo:

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Objetivos

Reconocer la presencia de determinados metales por el color que aparece al exponer sus compuestos a la llama de un mechero. Conocer de dnde proceden los distintos colores de los fuegos artificiales. Producir fuegos de distintos colores.

Materiales sugeridos

Botellas con pulverizador (Lo ideal es una por cada elemento que queramos identificar). Mechero Bunsen o camping gas Etanol. Esptula Hisopos de algodn Agua destilada HCl 3M Cloruro de sodio (NaCl) Cloruro de calcio (CaCl2) Cloruro de potasio (KCl) Sulfato de magnesio (MgSO4) Sulfato de calcio (CaSO4) Sulfato de sodio (Na2SO4) Carbonato de calcio (CaCO3) Carbonato de sodio (Na2CO3)

Procedimiento sugerido 1
1. Se prepara una disolucin saturada de cada sal (con unos pocos miligramos es suficiente) en unos 10 cm3 de etanol. En general se disuelven mal en alcohol. Por eso debemos filtrar la disolucin, si no, nos podra obstruir el frasco pulverizador. 2. Se guarda cada una de las disoluciones en botellas debidamente etiquetadas para no confundirlas. 3. Ajustamos la boquilla del pulverizador para que proporcione una neblina lo ms fina posible y la dirigimos hacia la llama de un mechero Bunsen. Aparecer una coloracin caracterstica del elemento utilizado.

Procedimiento sugerido 2
4. Encender el mechero Bunsen y ajustar hasta producir una llama azul. 5. Sumergir un hisopo en agua destilada. Colocarlo en la llama por 5 segundos. De qu color es la llama? Hay algn cambio de color? Anotar sus observaciones. 6. Sumergir otro hisopo en agua destilada. Colocarlo en la llama hasta que salga humo y se queme. De qu color es la llama? Hay algn cambio de color? Anotar sus observaciones.
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7. Sumergir un hisopo en HCl 3M. Colocarlo en la llama por 5 segundos. De qu color es la llama? Anotar sus observaciones. 8. Ensayar cada compuesto usando el siguiente procedimiento. Use un nuevo hisopo para cada muestra. Anote sus observaciones. Sumergir el hisopo de algodn en HCl, luego sumergir el hisopo hmedo en la muestra a ensayar. Colocar el hisopo en la llama por 5 segundos y 9. observar el color de la misma

Procedimiento sugerido 3
No vamos a realizarlo por la falta de elementos necesarios, pero es importante conocerlo El ensayo se realiza con un hilo de platino limpio, procurando que el compuesto sea lo ms voltil posible. Para lograr esta volatilizacin, con frecuencia se humedece con cido clorhdrico (frecuentemente se forman haluros voltiles) si bien, dependiendo del contrain del metal correspondiente, se pueden requerir distintos procedimientos de anlisis. Por ejemplo, si tenemos un silicato, se mezcla primero con CaSO4 en proporcin 1:1, ambos muy bien pulverizados, y se empastan con 2 o 3 gotas de clorhdrico concentrado, de los distintos elementos que se pueden ensayar a la

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