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ESTACI ON DE ENSAYOS DE SEMI LLAS Y PLANTAS DE VI VERO

CURSO DE
ANALISTAS DE
LABORATORIO

(De acuerdo a las Normas Internacionales de la Asociacin
Internacional de Ensayos de Semillas ISTA)


Ponente:
Lus Martnez Vassallo
Lima, J ulio de 2007
NDICE



CURSO DE ANALISTAS DE LABORATORIO



CAPTULO A: OBTENCIN DE LA MUESTRA DE TRABAJO

CAPTULO B: ANLISIS DE PUREZA ESPECFICA

CAPTULO C: DETERMINACIN DE OTRAS SEMILLAS EN NMERO
(ANLISIS DE CONTEO)

CAPTULO D: DETERMINACIN DEL CONTENIDO EN AGUA. ANLISIS
DE HUMEDAD

CAPTULO E: ENSAYO DE GERMIINACIN

CAPTULO F: DETERMINACIN DE LA VIABILIDAD POR EL ENSAYO
TOPOGRFICO AL TETRAZOLIO

CAPTULO G: CALIDAD
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CAPTULO A: OBTENCIN DE LA MUESTRA DE
TRABAJO
1 Definiciones.................................................................... 2
1.1. Lote de semilla...................................................................................................... 2
1.2. Muestra elemental.................................................................................................. 2
1.3. Muestra global ....................................................................................................... 2
1.4. Sub-muestra........................................................................................................... 2
1.5. Muestra a enviar.................................................................................................... 2
1.6. Muestra duplicada.................................................................................................. 2
1.7. Muestra de trabajo................................................................................................. 2
1.8. Semillas cubiertas.................................................................................................. 2
2 Procedimiento para obtener la muestra de trabajo... 3
2.1. Tamao mnimo de la muestra de trabajo............................................................. 3
2.2. Mtodos de reduccin de muestras........................................................................ 3
2.2.1. Mtodo de divisin mecnica......................................................................... 4
2.2.2. Mtodo de particiones modificado................................................................. 7
2.2.3. Mtodo de la cuchara...................................................................................... 7
2.2.4. Mtodo de particin manual ........................................................................... 8
3 Almacenamiento de la muestra posterior al ensayo .. 9

APNDICE A.I: TABLA DE PESOS DE MUESTRA A ENVIAR Y DE TRABAJO PARA LA
DETERMINACIN DE PUREZA ESPECFICA Y CONTEO DE OTRAS ESPECIES EN
NMERO...10
APNDICE A.II: TAMAO DE MUESTRA PARA SEMILLAS
CUBIERTAS.34
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1 Definiciones
1.1. Lote de semilla
Un lote de semillas es una cantidad determinada de semillas que se encuentra fsica y
perfectamente identificable.
1.2. Muestra elemental
Una muestra elemental es una porcin del lote de semillas tomada durante una sola
accin de muestreo.
1.3. Muestra global
La muestra global est formada por la combinacin y mezcla de todas las muestras
elementales tomadas del lote.
1.4. Sub-muestra
Una sub-muestra es una porcin de una muestra obtenida por reduccin de la muestra
1.5. Muestra a enviar
La muestra a enviar es la que se remite al laboratorio de anlisis (estacin de ensayos) y
debe comprender bien la totalidad de la muestra global, o una sub-muestra de la misma
en su caso; siempre que tenga, al menos, el tamao especificado en la Regla 2.6.3.
Puede estar dividida en sub-muestras, envasadas en diferentes materiales que reunan las
condiciones para ensayos especficos (ej. humedad o sanidad).
1.6. Muestra duplicada
Una muestra duplicada es otra muestra obtenida para su envo, a partir de la muestra
global y sealada como Muestra duplicada.
1.7. Muestra de trabajo
La muestra de trabajo es la totalidad de la muestra enviada al laboratorio o una sub-
muestra de la misma, sobre la que se lleva a cabo uno de los ensayos descritos en las
Normas de la ISTA y debe tener, al menos, el peso prescrito por las mencionadas
Normas para el citado ensayo.
1.8. Semillas cubiertas
Las semillas cubiertas son aquellas que estn ocultas con algn material que puede
contener pesticidas, fungicidas, colorantes u otros aditivos. Se definen los siguientes
tipos de semilla cubierta:
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- Semilla pildorada: Unidades ms o menos esfricas, normalmente incorpora una
sola semilla cuya forma y tamao no resulta muy evidente.
- Semilla incrustada: Unidades que mantienen, ms o menos, la forma original de
la semilla, pero con el tamao y el peso modificados a una cantidad medible.
- Grnulos de semilla: Unidades ms o menos cilndricas, incluyendo aquellos
tipos con ms de una semilla por grnulo.
- Semilla en cintas: Estrechas bandas de material como papel u otro material
degradable, con las semillas colocadas aleatoriamente, en grupos o en una sola
lnea.
- Semilla en estera: Anchas lminas de material como papel u otro material
degradable, con las semillas colocadas en lneas, grupos o aleatoriamente sobre
toda la lmina
- Semilla tratada: Semillas con tratamientos, los cuales no confieren un cambio
significativo en el tamao, la forma o aumento de peso de la semilla original.
2 Procedimiento para obtener la muestra de trabajo
2.1. Tamao mnimo de la muestra de trabajo
El tamao mnimo de la muestra de trabajo para un ensayo, est prescrito en el
correspondiente captulo para cada ensayo. Los pesos descritos en el Apndice A.1
sobre la muestra de trabajo para el ensayo de pureza, estn calculados para que la
muestra contenga, al menos, 2.500 semillas. Estos pesos son los recomendados para el
uso normal en ensayos de pureza.
Los pesos de la muestra de trabajo expresados en la columna 5 de la Tabla, para conteo
de otras especies, son 10 veces los pesos de la columna 4, siempre que no se supere un
mximo de 1.000 g.
Las muestras de trabajo para las semillas cubiertas, excepto aquellas definidas como
semilla tratada, deben contener, al menos, el nmero de pldoras, semillas o grnulos
indicados en la columna 3 de la Tabla 2B, partes 1 y 2. Si se usa una muestra ms
pequea deber indicarse, el nmero real de pldoras, semillas o grnulos contenidos en
la muestra.
2.2. Mtodos de reduccin de muestras
Si la muestra tiene que ser reducida a un tamao igual o superior al prescrito, lo primero
que hay que hacer es mezclar cuidadosamente la muestra. Entonces, se obtendr la
muestra a enviar o muestra de trabajo por divisiones sucesivas o por extraccin y
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posterior combinacin al azar de pequeas porciones. Los equipos y mtodos utilizados
para la reduccin de muestras se describen ms adelante. Pueden utilizarse uno, dos o
ms de estos mtodos en un procedimiento de reduccin de semilla. Cuando se usa
alguno de los divisores descritos, para semillas pildoradas, la distancia de cada no debe
exceder los 250 mm.
Excepto en el caso de ensayos de sanidad de semillas, el mtodo de la cuchara y el de
particin manual, slo deben ser utilizados para los gneros descritos en la lista que se
cita y slo puede utilizarse el mtodo de la cuchara y el de particin manual en el
laboratorio, en la obtencin de muestras de trabajo para ensayos de sanidad de semillas,
donde otras muestras o equipos puedan ser contaminados por esporas u otro material de
propagacin.
Para semilla en cintas o esteras, tomar partes al azar de las cintas o esteras hasta
proveerse de suficiente semilla para el ensayo.
Tras la obtencin de una muestra de trabajo o media muestra de trabajo, el resto debe
ser mezclado de nuevo antes de obtener una nueva muestra de trabajo o media muestra
de trabajo.
Las sub-muestras para la determinacin del contenido de humedad se deben tomar de la
siguiente manera: antes de tomar la sub-muestra, mezclar la muestra, bien agitndola
dentro de su envase con una cuchara, o bien situando la apertura del envase original
enfrente de la apertura de un envase de similares caractersticas y verter el contenido
varias veces de uno a otro. Tomar con una cuchara, al menos, tres sub-muestras de
diferentes partes y mezclarlas para obtener una sub-muestra del tamao requerido.
Durante la reduccin de la muestra, la semilla no debe estar expuesta al aire por ms de
30 segundos.
2.2.1. Mtodo de divisin mecnica
Este mtodo es adecuado para cualquier tipo de semillas exceptuando aquellas que
presenten muchas cubiertas seminales. El equipo divide la muestra hacindola pasar a
travs de dos o ms partes aproximadamente iguales. La muestra a enviar puede ser
mezclada pasndola a travs del divisor, combinndola de nuevo y pasando toda la
muestra una segunda vez por el divisor y de igual modo, una tercera vez si fuera
necesario. La muestra se reduce hacindola pasar a travs del divisor varias veces y
eliminando partes en cada una de las ocasiones. Este proceso de reduccin se contina
hasta que se obtiene, aproximadamente, una muestra del tamao requerido, pero nunca
menor de este.
Los divisores que se describen a continuacin son ejemplos de equipos adecuados:
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a) Divisor cnico: El divisor cnico (tipo Boerner) consiste en una tolva, un cono y
una serie de deflectores que dirigen la semilla hacia dos tubos de salida. Los deflectores
estn formados alternativamente por canales e intervalos de igual
anchura. Estos, se colocan
radialmente y dirigidos
hacia dentro y hacia abajo,
los canales son conducidos
hacia un tubo y los
intervalos hacia el tubo
opuesto. Una vlvula o
compuerta retiene la semilla en la base de la
tolva. Cuando se abre la vlvula, las semillas
caen por gravedad sobre el cono donde son
uniformemente distribuidas hacia los canales y
los intervalos, entonces, pasan a travs de los
tubos y caen en los recipientes de las semillas.
Se consideran adecuadas las siguientes
dimensiones: Alrededor de 35 canales, cada
uno de aproximadamente 25 mm de ancho, para semillas grandes y alrededor de 44
canales, de aproximadamente 8 mm cada uno, para semillas pequeas que circulen bien.
b) Divisor de tierra: El divisor de tierras consiste en una tolva con aproximadamente
18 canales o conductos adosados, que vierten alternativamente a lados opuestos.
Alrededor de 13 mm es la anchura de canal adecuada.
Para usar el divisor de tierras,
situar la semillas uniformemente
en un envase y verterla desde este
a la tolva con un flujo constante a
lo largo de la totalidad de la
longitud de la tolva. La semilla
atraviesa los canales y es recogida
en dos envases.
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c) Divisor centrfugo: En el divisor centrfugo (tipo Gamet) la semilla desciende a
travs de una tolva hasta un cangiln giratorio. Un motor
elctrico hace rotar el cangiln y las semillas son
lanzadas por la fuerza centrfuga y caen. EL crculo o
rea donde caen las semillas est dividido en dos partes
iguales por un deflector esttico, de modo que la mitad de
la semilla cae en un tubo y la otra mitad en otro.
El divisor centrfugo tiende a dar resultados variables a
no ser que se viertan las semillas por el centro de la tolva.
d) Divisor rotatorio: El divisor rotatorio comprende una
corona rotatoria que lleva adjunta de 6 a 10 envases para
sub-muestras, una rampa vibratoria y una tolva. Para el
uso del divisor, se vierte la semilla en la tolva y se
conecta el equipo de modo que la corona rotatoria con los
envases comienza a girar a 100 rpm aproximadamente y
la rampa vibratoria comienza a alimentar de semilla al
cilindro interior de la corona rotatoria. La velocidad de
alimentacin y por tanto la duracin de la operacin de
divisin, puede ser ajustada a travs de dos parmetros, la
distancia entre el embudo de la tolva y la rampa y la
intensidad de vibracin de la rampa. Hay dos principios:
(i) El cilindro interior introduce la semilla en el centro de
un distribuidor desde el que la corona rotatoria distribuye
la semilla a todos los envases simultneamente. (ii) Desde el centro del cilindro interior
se distribuye la semilla hacia fuera, hasta el interior de los envases que se encuentran
rotando por debajo del cilindro interior, de este modo, el flujo de semillas se subdivide
en varias sub-muestras.
e) Divisor variable de muestras: El divisor variable de muestras consta de una tolva de
recepcin y un tubo por debajo de la tolva, los cuales
giran a una velocidad de 40 rpm. El tubo distribuye el
flujo de semilla proveniente de la tolva de recepcin en la
cara interna de una nueva tolva, que a su vez, est bien
ajustada concntricamente con una tercera tolva. En la
segunda y tercera tolvas, existen ranuras que comprenden
el 50% del permetro de cada tolva. El 50% de la semilla,
pasar a travs de ambas tolvas y ser recogida en un
envase. El otro 50% permanecer entre las tolvas y
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posteriormente se recoger en otro envase. Las dos tolvas pueden ser giradas sobre si
mismas, dando como resultado ranuras ms estrechas. De este modo, un menor
porcentaje de semilla pasar a travs de las ranuras. Se puede usar como muestra, bien
la muestra ms pequea que queda en el exterior de las tolvas, o bien, la muestra ms
grande que queda dentro de las tolvas. La posicin entre las dos tolvas puede ser
ajustada de manera muy precisa, consiguindose tamaos de sub-muestras
predeterminados.
2.2.2. Mtodo de particiones modificado
El equipo consiste en una bandeja a la que
se adapta una rejilla de celdas cbicas de
igual tamao, todas ellas abiertas por su
parte superior, pero solo una de cada dos por
su parte inferior. Tras el mezclado
preliminar, la semilla se vierte
uniformemente sobre la rejilla. Cuando se
levanta la rejilla, aproximadamente la mitad
de la semilla queda en la bandeja. La
muestra enviada se divide en sucesivas
ocasiones hasta que se obtiene el tamao
requerido para la muestra de trabajo o aproximadamente este tamao, y no menos.
2.2.3. Mtodo de la cuchara
El mtodo de la cuchara es el recomendado en la
reduccin de muestras para ensayos de sanidad. Para
otros ensayos, se restringir este mtodo a aquellas
especies cuya semilla sea ms pequea que la de
Triticum spp. Se necesita una bandeja, una esptula y
una cuchara con el borde liso. Tras el mezclado
preliminar, verter la semilla uniformemente sobre la
bandeja; a partir de este momento, no agitar la bandeja.
Con la cuchara en una mano, la esptula en la otra y
usando ambas herramientas, separar pequeas
porciones de semilla de, al menos, cinco puntos a azar.
Se tomarn tantas porciones como sea necesario hasta
constituir una sub-muestra del tamao deseado.
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2.2.4. Mtodo de particin manual
El mtodo se restringe a los siguientes gneros de semilla vestida:
Agrimonia Andropogon Anthoxanthum
Arrhenatherum Astrebla Beckmannia
Bouteloua Brachiaria Briza
Cenchrus Chloris Dichanthium
Digitaria Echinochloa Ehrarta
Elymus Eragrostis Gomphrena
Melinis Oryza Pennisetum (no glaucum)
Psathyrostachys Scabiosa Sorghastrum
Stylosanthes (no
guianensis)
Taeniatherum Trisetum
Para el resto de especies, solo puede utilizarse en laboratorio para obtener muestras de
trabajo para ensayos de sanidad de semillas.
Para la aplicacin del mtodo de particin
manual, verter la muestra uniformemente
sobre una superficie lisa y limpia, con una
esptula de borde plano mezclar
completamente la semilla formando un
montn, dividir el montn en dos partes
iguales y a su vez cada una de las partes
dividirla por la mitad resultando cuatro
porciones y de nuevo, dividir por la mitad
cada una de las porciones resultando ocho
porciones -, distribuir las porciones en dos
filas y combinarlas alternanativamente: ej.
combinar la primera y tercera porciones de
una de las filas con la segunda y cuarta
porciones de la otra fila, eliminar las cuatro
porciones restantes. Repetir el procedimiento
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con las porciones que se han conservado hasta que se obtenga el tamao requerido para
la muestra.
3 Almacenamiento de la muestra posterior al ensayo
El principal propsito del almacenamiento de muestras tras la realizacin del ensayo, es
poder repetir el ensayo realizado originalmente a la muestra enviada. Por tanto, las
condiciones de almacenamiento deben ser tales, que los cambios en los parmetros de
calidad de la semilla sean mnimos. Por ejemplo, en el caso del ensayo de pureza
especfica o conteo de semillas, la muestra se debe almacenar de tal manera que se
mantenga la identidad fsica de la misma. En caso de ensayos germinacin, viabilidad o
sanidad de semillas ortodoxas, el almacenamiento debe ser a baja temperatura y
humedad. Para dichos ensayos en semilla recalcitrante, intermedia o de especies
tropicales y subtropicales, no son posibles largos periodos de almacenaje. Para estas
semillas de especies de climas templados, la posibilidad y condiciones de almacenaje
dependen del estado fngico y en cierta medida, si presentan latencia o no. Los
parmetros relacionados con el almacenaje de semillas deben ser determinados en base
a la especie a la que pertenezcan dichas semillas. Puede ser necesario proteger contra
insectos y roedores.
Cuando se requiera una repeticin de un ensayo, se extraer una porcin de la muestra
almacenada de acuerdo con el procedimiento expuesto y se enviar al laboratorio
designado para el ensayo. El sobrante se mantendr almacenado.
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APNDICE A.I: TABLA DE PESOS DE MUESTRA A ENVIAR Y
DE TRABAJO PARA LA DETERMINACIN DE PUREZA
ESPECFICA Y CONTEO DE OTRAS ESPECIES EN NMERO
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3.1. Tablas para el tamao del lote y tamao de muestra
Tabla 2A
Esta tabla se cita en varios captulos de las Reglas de la ISTA e indica los pesos de los
lotes y muestras para las diferentes especies, as como los nombres especficos que se
usarn al reflejar los resultados de los ensayos.
El tamao de cada muestra se deriva, para cada especie del peso de 1000 semillas, en la
prctica se ha considerado adecuado para la mayora de las muestras analizadas.
Cuando se solicite un conteo de otras especies y el peso no aparezca en la tabla, la
muestra de trabajo deber contener un mnimo de 25.000 semillas.
NOTA: Los nombres sealados con un asterisco no estn comprendidos en la lista de
nombres cientficos de plantas estabilizados por la ISTA. Los nombres sin asterisco
estn incluidos en dicha lista (pero no los sinnimos que se citan a continuacin de los
mismos) o en el caso de nombres genricos (por ejemplo Pyrus spp) conservados por el
Congreso Internacional de Botnica e incluidos en el Cdigo Internacional de
Nomenclatura. Esta versin de la Tabla 2A recoge los cambios en la lista estabilizada
aprobados en el Congreso de la ISTA de 2001 y las correcciones realizadas en el
Congreso Extraordinario de 2002. Cuando se han cambiado los nombres de las plantas,
el nombre antiguo se incluye con una indicacin al nuevo nombre. Esto aplica
solamente para los cambios del Congreso del 2001, y las referencias cruzadas previas
han sido retiradas.
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Tabla 2A Parte 1 Semillas Agrcolas y Hortcolas

Peso mnimo de las muestras
Peso mximo
del lote
Muestra a
enviar
Muestra de
trabajo para
anlisis de
pureza
Muestra de
trabajo para
conteo de
otras especies
Captulo 2 Captulo 2 Captulo 3 Captulo 4
Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Abelmoschus esculentus (L.) Moench 20000 1 000 140 1 000
Achillea millefollium L. 10000 25 0.5 5
Aeschynomene americana L. 10000 120 12 I20
Agropyron cristatum (L.) Gaertn. 10000 40 4 40
Agropyron desertorum (Fisch. ex Link) Schult. 10000 60 6 60
Agrostis canina L. 10000 25 0.25 2.5
Agrostis capillaris L. 10000 25 0.25 2.5
Agrostis gigantea Roth 10000 25 0.25 2.5
Agrostis stolonifera L. (incluye A. palustris
Hudson)
10000 25 0.25 2.5
Allium cepa L. 10000 80 8 80
Allium fistulosum L. 10000 50 5 50
Allium porrum L. 10000 70 7 70
Allium schoenoprasum L. 10000 30 3 30
Allium tuberosurn Rottler ex Spreng. 10000 100 10 100
Alopecurus pratensis L. 10000 30 3 30
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Peso mnimo de las muestras
Peso mximo
del lote
Muestra a
enviar
Muestra de
trabajo para
anlisis de
pureza
Muestra de
trabajo para
conteo de
otras especies
Captulo 2 Captulo 2 Captulo 3 Captulo 4
Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Alysicarpus vaginalis (L.) DC. 10000 40 4 40
Andropogon gayanus Kunth 10000 80 8 80
Andropogon gerardii Vitman 10000 70 7 70
Andropogon hallii Hack.
(Andropogon scoparius Michx. ver
Schizachyrium scoparium (Michx.) Nash)
10000 100 10 100
Anethum graveolens L. 10000 40 4 40
Anthoxanthum odoratum L. 10000 25 2 20
Anthriscus cerefolium (L.) Hoffm. 10000 60 6 60
Anthyllis vulneraria L. 10000 60 6 60
Apium graveolens L. 10000 25 1 10
Arachis hypogaea L. 25000 1000 1000 1000
Arctium lappa L. 10000 50 5 50
Arrhenatherum elatius (L.) P. Beauv. Ex J .
Presl & C. Presl
10000 80 8 80
Asparagus officinalis L. 20000 1000 100 1000
Astragalus ricer L. 10000 90 9 90
Astrebla lappacea (Lindl.) Domin 10000 200 20 200
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Peso mnimo de las muestras
Peso mximo
del lote
Muestra a
enviar
Muestra de
trabajo para
anlisis de
pureza
Muestra de
trabajo para
conteo de
otras especies
Captulo 2 Captulo 2 Captulo 3 Captulo 4
Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Atriplex hortensis L. 5000 10 2.5 -
Atropa belladonna L. 10000 30 3 30
Avena saliva L. 30000 1000 120 1000
Avena strigosa Schreb.
(Axonopus affinis Chase ver
Axonopusissifolius (Raddi) Kuhlm.)
30000 500 50 500
Axonopus compresses (Sw.) P. Beauv. 10000 25 1 10
Axonopus fissifolius (Raddi) Kuhlm. (antes
Axonopus affinis Chase)
10000 25 1 10

Beckmannia eruciformis (L.) Host 10000 25 2 20
Beta vulgaris L. (todas las variedades) 20000 500 50 500
Borago officinalis L. 10000 450 45 450
Bothriochloa insculpta (Hochst. Ex A. Rich.)
A. Camus
10000 25 2 20
Bothriochloa pertusa (L.) A. Camus 10000 25 1 10
Bouteloua oligostachya (Nutt.) Torr. ex A.
Gray
10000 60 6 60
Brachiaria decumbens Stapf 10000 100 10 100
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Peso mnimo de las muestras
Peso mximo
del lote
Muestra a
enviar
Muestra de
trabajo para
anlisis de
pureza
Muestra de
trabajo para
conteo de
otras especies
Captulo 2 Captulo 2 Captulo 3 Captulo 4
Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Brachiaria humidicola (Rendle) Schweick. 10000 100 10 100
Brachiaria mutica (Forssk.) Stapf 10000 30 3 30
Brachiaria ruziziensis R. Germ. & C.M.
Evrard
20000 150 15 150
Brassica juncea (L.) Czern. 10000 40 4 40
Brassica napus L. 10000 100 10 100
Brassica napus L. var. napobrassica (L.)
Rchb.*
10000 100 10 100
Brassica nigra (L.) W.D.J. Koch 10000 40 4 40
Brassica oleracea L. (todas las variedades)
(Brassica perviridis (L.H. Bailey) L.H. Bailey
ver Brassica rapa L.)
10000 100 10 100
Brassica rapa L.
(incluye B. campestris L. y especies antes
conocidas como Brassica chinensis, B.
pekinensis y B. perviridis)
10000 70 7 70
Bromus arvensis L. 10000 60 6 60
Bromus carinatus Hook. & Am. 10000 200 20 200
Bromus catharticus Vahl 10000 200 20 200
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Peso mnimo de las muestras
Peso mximo
del lote
Muestra a
enviar
Muestra de
trabajo para
anlisis de
pureza
Muestra de
trabajo para
conteo de
otras especies
Captulo 2 Captulo 2 Captulo 3 Captulo 4
Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Bromus erectus Huds. 10000 100 10 100
Bromus hordeaceus L 10000 50 5 50
Bromus inermis Leyss. 10000 90 9 90
Bromus marginatus Nees ex Stcud. 10000 200 20 200
Bromus riparius Rchmann 10000 90 9 90
Bromus sitchensis Trin. 10000 200 20 200

Cajanus cajan (L.) Millsp. 20000 1000 300 1 000
Calopogonium mucunoides Dcsv. 20000 400 40 400
Camelina sativa (L.) Crantz 10000 40 4 40
Cannabis sativa L. 10000 600 60 600
Capsicum spp. 10000 150 15 150
Carthamus tinctorius L. 25000 900 90 900
Carom carvi L. 10000 80 8 80
Cenchrus ciliaris L. (fascculos) 10000 60 6 60
Cenchrus setiger Vahl 20000 150 15 150
Centrosema pascuorum Mart. ex Benth. 20000 550 55 550
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Centrosema pubescens Benth. 20000 600 60 600
Chamaecrista rotundifolia (Pers.) Greene 10000 100 10 100
Chloris gayana Kunth 10000 25 1 10
Cicer arietinum L. 20000 1000 1000 1 000
Cichorium endivia L. 10000 40 4 40
Cichorium intybus L. 10000 50 5 50
Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum. & Nakai 20000 1000 250 1000
Claytonia perfoliata Donn ex Willd. 10000 25 2 20
Corchorus capsularis L. 10000 150 15 150
Corchorus olitorius L. 10000 150 15 150
Coriandrum sativum L. 10000 400 40 400
Coronilla varia L. 10000 100 10 100
Crotalaria brevidens Benth. (incluye
Crotalaria intermedia Kotschy)
10000 150 15 150
Crotalaria juncea L. 10000 700 70 700
Crotalaria lanceolata E. Mey. 10000 70 7 70
Crotalaria pallida Aiton 10000 150 15 150
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
(antes Crotalaria mucronata Desv.)
Crotalaria spectabilis Roth 10000 350 35 350
Cucumis melo L. 10000 150 70 -
Cucumis sativus L. 10000 150 70 -
Cucurbita maxima Duchesne 20000 1000 700 1000
Cucurbita moschata Duchesne 10000 350 180
Cucurbita pepo L. 20000 1000 700 1000
Cuminum cyminum L. 10000 60 6 60
Cyamopsis tetragonoloba (L.) Taub. 20000 1000 100 1000
Cynara cardunculus L. 10000 900 90 900
Cynodon dactylon (L.) Pers. 10000 25 1 10
Cynosurus cristatus L. 10000 25 2 20
Dactylis glomerate L. 10000 30 3 30
Daucus carota L. 10000 30 3 30
Deschampsia cespitosa (L.) P. Bcauv. 10000 25 1 10
Deschampsia flexuosa (L.) Trin. 10000 25 1 10
Desmodium intortum (Mill.) Urb. 10000 40 4 40
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otras especies
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Desmodium uncinatum (J acq.) DC. 20000 120 12 120
Dichanthium aristatum (Poir.) C.E. Hubb. 10000 30 3 30
Dichondra repens J .R. Forst. & G. Forst. 10000 50 5 50
Digitaria eriantha Steud.
(antes Digitaria smutsii Stent tambin incluye
Digitaria decumbens)
10000 25 1.2 12

Echinochloa crus-galli (L.) P. Bcauv. 10000 80 8 80
Ehrharta calycina Sm. 10000 40 4 40
Eleusine coracana (L.) Gaertn. (Elymus
junceus Fisch. ver Psathyrostachys juncea
(Fisch.) Nevski)
10000 60 6 60
Elymus lanceolatus (Scribn. & J .G. Sm.) Gould 10000 80 8 80
Elymus trachycaulus (Link) Gould ex Shinners 10000 80 8 80
Elytrigia elongata (Host) Nevski 10000 200 20 200
Elytrigia intermedia (Host) Nevski 10000 150 15 150
Elytrigia repens (L.) Dcsv. ex Nevski 10000 100 10 100
Eragrostis curvula (Schrad.) Nees 10000 25 1 10
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Eragroslis tef (Zuccagni) Trotter 10000 25 1 10
Eruca sativa Mill. 10000 40 4 40

Fagopyrum esculentum Moench 10000 600 60 600
Festuca arundinacea Schreb. 10000 50 5 50
Festucafiliformis Pourr. 10000 25 2.5 25
Festuca heterophylla Lam. 10000 60 6 60
Festuca ovina L. (todas las variedades) 10000 25 2.5 25
Festuca pratensis Huds. 10000 50 5 50
Festuca rubra L. s.l. (todas las variedades) 10000 30 3 30
xFestulolium braunii (K. Richt.) A. Camus 10000 60 6 60
Foeniculum vulgare Mill. 10000 180 18 I80
Fragaria spp. 10000 25 1 10

Galega orientalis Lam.
(Glycine javanica auct., non L. ver Neonotonia
wightii (Wight & Am.) J . A. Lackey)
10000 250 20 200
Glycine max (L.) Merr. 25000 1000 500 1000
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otras especies
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Gossypium spp. 25000 1000 350 1000

Hedysarum coronarium L. (fruit) 10000 300 30 300
Hedysarum coronarium L. (seed) 10000 120 12 120
Helianthus annuus L. 25000 1000 200 1000
Hibiscus cannabinus L. 10000 700 70 700
Holcus lanatus L. 10000 25 1 10
Hordeum vulgare L. 30000 1000 120 1000

Ipomoea aquatica Forssk. 20000 1000 100 1000

Koeleria macrantha (Ledeb.) Schult. 10000 100 1 10

Lablab purpureus (L.) Sweet 20000 1000 600 1000
Lactuca sativa L. 10000 30 3 30
Lagenaria siceraria (Molina) Standl. 20000 1000 500 1000
Lathyrus cicera L. 20000 1000 140 1000
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otras especies
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Lathyrus hirsutus L. 10000 700 70 700
Lathyrus sativus L. 20000 1000 450 1000
Lens culinaris Medik. 10000 600 60 600
Lepidium sativum L. 10000 60 6 60
Lespedeza juncea (L.f.) Pers. 10000 30 3 30
Lespedeza stipulacea Maxim. 10000 50 5 50
Lespedeza striata (Thunb.) Hook. & Am. 10000 40 4 40
Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit 20000 1000 100 1000
Linum usitatissimum L. 10000 150 15 150
Lolium x boucheanum Kunth 10000 60 6 60
Lolium multiflorum Lam. 10000 60 6 60
Lolium perenne L. 10000 60 6 60
Lolium rigidum Gaudin 10000 60 6 60
Lotononis bainesii Baker 10000 25 1 10
Lotus corniculatus L. 10000 30 3 30
Lotus glaber Mill. (antes Lotus tenuis Waldst.
& Kit. ex Willd.)
10000 30 3 30
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otras especies
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Lotus uliginosus Schkuhr 10000 25 2 20
Luffa acutangula (L.) Roxb. 20000 1000 400 1000
Luffa aegyptiaca Mill. 20000 1000 250 1000
Lupinus albus L. 25000 1000 450 1000
Lupinus angustifolius L. 25000 1000 450 1000
Lupinus luteus L. 25000 1000 450 1000
Lycopersicon esculentum Mill. 10000 15 7 -

Macroptilium atropurpureum (DC.) Urb. 20000 350 35 350
Macroptilium lathyroides (L.) Urb. 20000 200 20 200
Macrotyloma axillare (E. Mey.) Verde. 20000 250 25 250
Macrotyloma uniflorum (Lam.) Verdc. 20000 800 80 800
Medicago arabica (L.) Huds. (con vaina) 10000 600 60 600
Medicago arabica (L.) Huds. (sin vaina) 10000 50 5 50
Medicago italica (Mill.) Fiori (incluye
Medicago tornata (L.) Mill.)
10000 100 10 100
Medicago littorails Rohde ex Loisel. 10000 70 7 70
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pureza
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otras especies
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Medicago lupulina L. 10000 50 5 50
Medicago orbicularis (L.) Banal. 10000 80 8 80
Medicago polymorpha L. 10000 70 7 70
Medicago rugosa Desr. 10000 180 18 180
Medicago saliva L. 10000 50 5 50
Medicago scutellata (L.) Mill. (Medicago
tornata (L.) Mill. ver Medicago italica (Mill.)
Fiori)
10000 400 40 400
Medicago truncatula Gaertn. 10000 100 10 100
Melilotus albus Medik. 10000 50 5 50
Melilotus indicus (L.) All. 10000 50 5 50
Melilotus officinalis Lam. 10000 50 5 50
Melinis minutiflora P. Bcauv. 10000 25 0.5 5
Momordica charantia L. 20000 1 000 450 1000
Mucuna pruriens (L.) DC. antes Mucuna
deeringiana (Sort) Merr, tambin incluye
especies antes conocidas como Mucuna
aterrima (Piper & Tracy) Holland, Mucuna
cochinchinensis (Lour.) A. Chev., y
Stizolobium deeringianum Bolt)
20000 1 000 1 000 1000
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otras especies
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)

Nasturtium officinale R. Br. 10000 25 0.5 5
Neonolonia wightii (Wight & Am.) J .A.
Lackey (antes Glycine javanica L.)
10000 150 15 150
Nicotiana tabacum L. 10000 25 0.5 5

Ocimum basilicum L. 10000 40 4 40
Oenothera biennis L. 10000 25 1 10
Onobrychis viciifolia Scop. (fruto) 10000 600 60 600
Onobrychis viciifolia Scop. (semilla) 10000 400 40 400
Origanum majorana L. 10000 25 0.5 5
Origanum vulgare L. 10000 25 0.5 5
Ornithopus compressus L. 10000 120 12 120
Ornithopus sativus Brot. 10000 90 9 90
Oryza sativa L. 30000 700 70 700

Panicum antidotale Retz. 10000 25 2 20
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otras especies
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Panicum coloratum L. 10000 25 2 20
Panicum maximum J acq. 10000 25 2 20
Panicum miliaceum L. 10000 150 15 150
Panicum ramosum L. 10000 90 9 90
Panicum virgatum L. 10000 30 3 30
Papaver somniferum L. 10000 25 1 10
Pascopyrum smithii (Rydb.) A. Love 10000 150 15 150
Paspalum dilatatum Poir. 10000 50 5 50
Paspalum notatum Fliiggc 10000 70 7 70
Paspalum plicatulum Michx. 10000 40 4 40
Paspalum scrobiculatum L. 10000 80 8 80
Paspalum urvillei Steud. 10000 30 3 30
Paspalum wettsteinii Hack. 10000 30 3 30
Pastinaca sativa L. 10000 100 10 100
Pennisetum clandestinum Hochst. ex Chiov. 10000 70 7 70
Pennisetum glaucum (L.) R. Br. 10000 150 15 150
Petroselinum crispum (Mill.) Nyman ex A.W. 10000 40 4 40
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otras especies
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Hill
Phacelia tanacetifolia Benth. 10000 50 5 50
Phalaris aquatica L. 10000 40 4 40
Phalaris arundinacea L. 10000 30 3 30
Phalaris canariensis L. 10000 200 20 200
Phaseolus coccineus L. 20000 1000 1000 1000
Phaseolus lunatus L.
(Phaseolus radiatus L. ver Vigna radiata (L.)
R. Wilczek)
20000 1000 1000 1000
Phaseolus vulgaris L. 25000 1000 700 1000
Phleum bertolonii DC. 10000 25 1 10
Phleum pratense L. 10000 25 1 10
Physalis pubescens L. 10000 25 2 20
Pimpinella anisum L. 10000 70 7 70
Piptatherum miliaceum (L.) Coss. 10000 25 2 20
Pisum sativum L. s.l. (Poa ampla Merr ver Poa
secunda J . Presl)
25000 1000 900 1000
Poa annua L. 10000 25 1 10
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conteo de
otras especies
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Poa bulbosa L. 10000 30 3 30
Poa compressa L. 10000 25 0.5 5
Poa nemoralis L. 10000 25 0.5 5
Poa palustris L. 10000 25 0.5 5
Poa pratensis L. 10000 25 1 5
Poa secunda J . Presl (incluye Poa ampla Men) 10000 25 1.5 15
Poa trivialis L. 10000 25 1 5
Portulaca oleracea L. 10000 25 0.5 5
Psathyrostachys juncea (Fisch.) Nevski (antes
Elymus junceus Fisch.)
10000 60 6 60
Pseudoroegneria spicata (Pursh) A. Love 10000 125 8 80
Psophocarpus tetragonolobus (L) DC. 20000 1000 1000 1000
Pueraria lobata (Willd.) Ohwi 10000 350 35 350
Pueraria phaseoloides (Roxb.) Benth. 20000 300 30 300

Raphanus sativus L. 10000 300 30 300
Rheum rhaponticum L. 10000 450 45 450
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Ricinus communis L. 20000 1000 500 1000
Rosmarinus officinalis L. 10000 30 3 30
Rumex acetosa L. 10000 30 3 30

Sanguisorba minor Scop. 10000 250 25 250
Satureja hortensis L. 10000 20 2 20
Schizachyrium scoparium (Michx.) Nash (antes
Andropogon scoparius Michx.)
10000 100 5 50
Scorzonera hispanica L. 10000 300 30 300
Secale cereale L. 30000 1000 120 1000
Sesamum indicum L. 10000 70 7 70
Setaria italica (L.) P. Bcauv. 10000 90 9 90
Setaria sphacelata (Schumach.) Stapf & C.E.
Hubb.
10000 30 3 30
Sinapis alba L. 10000 200 20 200
Solanum melongena L. 10000 150 15 150
Solanum tuberosum L. 10000 25 10 -
Sorghastrum nutans (L.) Nash 10000 70 7 70
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otras especies
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Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Sorghum x almum Parodi 10000 200 20 200
Sorghum bicolor (L.) Mocnch 10000 900 90 900
Sorghum bicolor (L.) Mocnch x S. sudanense
(Piper) Stapf
10000 500 30 300
Sorghum halepense (L.) Pers. 10000 90 9 90
Sorghum sudanense (Piper) Stapf 10000 250 25 250
Spergula arvensis L. 10000 40 4 40
Spinacia oleracea L. (Stizolobium
deeringianum Bort. ver Mucuna pruriens (L.)
DC.)
10000 250 25 250
Stylosanthes guianensis (Aubl.) Sw. 10000 70 7 70
Stylosanthes hamata (L.) Taub. 10000 70 7 70
Stylosanthes humilis Kunth 10000 70 7 70
Stylosanthes scabra Vogel 10000 80 8 80

Taraxacum officinale F.H. Wigg., s.l. 10000 30 3 30
Tetragonia tetragonoides (Pall.) Kuntze 20000 1000 200 1000
Thymus vulgaris L. 10000 25 0.5 5
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Peso mnimo de las muestras
Peso mximo
del lote
Muestra a
enviar
Muestra de
trabajo para
anlisis de
pureza
Muestra de
trabajo para
conteo de
otras especies
Captulo 2 Captulo 2 Captulo 3 Captulo 4
Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Tragopogon porrifolius L. 10000 400 40 400
Trifolium alexandrinum L. 10000 60 6 60
Trifolium balansae Boiss. 10000 25 2 20
Trifolium campestre Schreb. 10000 25 0.5 5
Trifolium dubium Sibth. 10000 25 2 20
Trifolium fragiferum L. 10000 40 4 40
Trifolium glomeratum L. 10000 25 1 10
Trifolium hirtum All. 10000 70 7 70
Trifolium hybridum L. 10000 25 2 20
Trifolium incarnatum L. 10000 80 8 80
Trifolium lappaceum L. 10000 25 2 20
Trifolium pratense L. 10000 50 5 50
Trifolium repens L. 10000 25 2 20
Trifolium resupinatum L. 10000 25 2 20
Trifolium semipilosum Fresen. 10000 20 2 20
Trifolium squarrosum L. 10000 150 15 150
Trifolium subterraneum L. 10000 250 25 250
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Peso mnimo de las muestras
Peso mximo
del lote
Muestra a
enviar
Muestra de
trabajo para
anlisis de
pureza
Muestra de
trabajo para
conteo de
otras especies
Captulo 2 Captulo 2 Captulo 3 Captulo 4
Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Trifolium vesiculosum Savi 10000 100 3 30
Trigonella foenum-graecum L. 10000 450 45 450
Trisetum fiavescens (L.) P. Bcauv. 10000 25 0.5 5
xTriticosecale Wittm. ex. A. Camus 30000 1000 120 1000
Triticum aestivum L. 30000 1000 120 1000
Triticum durum Dcsf. 30000 1000 120 1000
Triticum spelta L. 30000 1000 270 1000

Urochloa mosambicensis (Hack.) Dandy 10000 30 3 30

Valerianella locusta (L.) Laterr. 10000 70 7 70
Vicia benghalensis L. 20000 1000 120 1000
Vicia ervilia (L.) Willd. 20000 1000 120 1000
Vicia faba L. 25000 1000 1000 1000
Vicia narbonensis L. 20000 1000 600 1000
Vicia pannonica Crantz 20000 1000 120 1000
Vicia sativa L. (incluye V. angustifolia L.) 25000 1000 140 1000
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Peso mnimo de las muestras
Peso mximo
del lote
Muestra a
enviar
Muestra de
trabajo para
anlisis de
pureza
Muestra de
trabajo para
conteo de
otras especies
Captulo 2 Captulo 2 Captulo 3 Captulo 4
Especies
(Kg.) (g) (g) (g)
Vicia villosa Roth (incluye V. dasycarpa Ten.) 20000 1000 100 1000
Vigna angularis (Willd.) Ohwi & H. Ohashi 20000 1000 250 1000
Vigna marina (Burm.) Merr. 20000 800 80 800
Vigna mungo (L.) Hcpper 20000 1000 700 1000
Vigna radiata (L.) R. Wilczek antes conocida
como Phaseolus radiatus L.)
20000 1000 120 1000
Vigna subterranea (L.) Vcrdc. 20000 1000 500 1000
Vigna unguiculata (L.) Walp. 20000 1000 400 1000

Zea mays L. 40000 1000 900 1000
Zoysia japonica Stcud. 10000 25 1 10

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APNDICE A.II:
TAMAO DE MUESTRA PARA SEMILLAS CUBIERTAS
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Tabla 2B Parte 1 Tamao de muestra para semillas pildoradas, incrustadas y
semillas granuladas en nmero
Determinaciones Muestra enviar
no menor de
Muestra de trabajo no
menor de
Anlisis de pureza (incluyendo verificacin de especies) 7500 2500
Determinacin del peso 7500 Fraccin pildorada pura
Germinacin 7500 400
Determinacin de otras semillas 10000 7500
Determinacin de otras semillas (semillas incrustadas y
granuladas)
25000 25000
Gradacin del tamao 10000 2000


Tabla 2B Parte 2 Tamao de muestra para semillas en cintas y esteras
Determinaciones Muestra enviar
no menor de
Muestra de trabajo no
menor de
(Semillas) (Semillas)
Verificacin de especies 2500 100
Germinacin 2500 400
Anlisis de Pureza (si es solicitado) 2500 2500
Determinacin de otras semillas 10000 7500



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CAPTULO B: ANLISIS DE PUREZA ESPECFICA
1. MTODO DE ANLISIS DE PUREZA ESPECFICA.
GENERALIDADES 2
2. DESCRIPCIN DE MATERIALES Y EQUIPOS 4
3. MTODO DE TRABAJO 4
4. CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS 5
4.1. Una muestra de trabajo completa 5
4.2. Dos medias muestras de trabajo 5
4.3. Dos muestras de trabajo completas o ms 7
4.4. Tratamiento de los resultados 7

APNDICE B.I: PROCESOS EPECIALES DE SEPARACIN 9
APNDICE B.II: GLOSARIO 13
APNDICE B.III: NMERO DE DEFINICIN DE SEMILLA PURA 16
APNDICE B.IV: DEFINICIONES DE SEMILLA PURA 28
APNDICE B.V: TABLAS DE TOLERANCIA 39


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1. MTODO DE ANLISIS DE PUREZA ESPECFICA. GENERALIDADES
El objeto del anlisis de Pureza Especfica es determinar:
a) la composicin, porcentaje en peso, de la muestra ensayada y por inferencia la
composicin del lote de semillas, y
b) la identidad de las distintas especies de semillas y materia inerte que constituyen la
muestra.
La muestra de trabajo que se indica ms adelante, se clasifica en los siguientes componentes:
1) Semilla pura
2) Otras semillas
3) Materia inerte
expresando el porcentaje en peso para cada uno de los mismos.
Hasta donde sea posible, se identificarn en la muestra todas las especies de semilla (semilla
pura y otras semillas) y cada tipo de materia inerte presente.
La separacin de la muestra se basa en un examen de cada partcula de la muestra de
semillas. Esta separacin se realiza visualmente por el Analista de manera que no se dae la
capacidad germinativa de la semilla.
Semilla pura
La semilla pura debe referirse a las especies indicadas por el solicitante o a la que se
encuentre en mayor proporcin en el ensayo, debe incluir todas las especies
botnicas (varietas) y cultivares de esas especies, as como:
1. Las siguientes estructuras (incluso si estn inmaduras, pequeas,
arrugadas, enfermas o germinadas, siempre que puedan ser
identificadas como pertenecientes a dicha especie), a menos que
presenten hongos en esclerocios visibles, tejidos recubiertos por
hongos del carbn del grano o agallas de nemtodos:
a. flores que contengan manifiestamente una caripside con
endospermo
b. caripsides libres
2. Trozos de unidades de semilla mayores de la mitad de su tamao
original
2. Para gneros o especies particulares se hacen ciertas excepciones de
los principios generales arriba descritos (ver Anexo II):
1. Las unidades de semilla de las familias Fabaceae (Leguminosae),
Brassicaceae (Cruciferae), Cupressaceae y Taxodiaceae con las
cubiertas seminales totalmente desprendidas, se consideran
materia inerte
Se consideran como materia inerte los cotiledones separados de
Fabaceae (Leguminosae), independientemente de que estn
unidos o no al eje de la radcula-plmula y/o ms de la mitad de la
testa.

2. En ciertos gneros de Poaceae (Gramineae),
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a. Se requiere un tamao mnimo de caripside (ver
Apndice B.I)
b. No se eliminan las flores estriles insertas (ver Apndice
B.I)
c. Para determinados gneros, los apndices se dejan en la
semilla pero se indicarn de acuerdo a lo descrito en el
Apndice B.I
Otras semillas
En otras semillas se debe incluir las unidades de semilla de cualquier especie distinta
a la de semilla pura. Con respecto a la clasificacin de estas unidades como otras
semillas o como materia inerte, se podrn utilizar los caracteres diferenciadores
descritos en las Definiciones de Semilla Pura (ver Apndice B.IV) de cada una de las
especies distintas de la de semilla pura, exceptuando:
1. Las Unidades de Semilla Mltiple (USM) que puedan separarse y
clasificar cada unidad simple de acuerdo al principio general
descrito en este mtodo.
2. Las semillas de Cuscuta spp. que sean frgiles o cuyo color oscile
entre gris ceniza y blanco cremoso se clasificaran como materia
inerte.
Para gneros y especies sin definicin de semilla pura en Anexo III, se utilizarn las
definiciones anteriormente citadas. Se abrirn las estructuras mltiples, cpsulas y
vainas y una vez extrada la semilla, el material que no sea semilla se clasificar
como materia inerte, excepto para determinados gneros y especies descritos en las
Definiciones de Semilla Pura (DSP, Apndice B.IV).
Materia inerte
En materia inerte se deben incluir las unidades de semilla y cualquier otra materia o
estructura no definidas como semilla pura u otras semillas, tal y como se detalla a
continuacin:
- Las unidades de semilla en las que es evidente que no existe
semilla verdadera.
- Las flores de las especies enumeradas en el Apndice B.I con la
caripside de menor tamao al descrito.
- Los fragmentos de unidades de semilla rotos o daados con la
mitad o menos del tamao original.
- Los apndices que no estn clasificados como parte de la semilla
pura en las definiciones de semilla pura para las distintas especies
(Apndice B.IV). Los apndices de los que no se haga mencin en
las definiciones de semilla pura sern separados e incluidos en la
materia inerte.
- Las semillas de Fabaceae (Leguminosae), Brasicaceae
(Cruciferae), Cupressaceae y Taxodiaceae cuyos tegumentos
estn completamente separados.
- En Fabaceae (Leguminosae): los cotiledones separados se
consideran como materia inerte, independientemente de si
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presentan o no el eje radcula-plmula y/o ms de la mitad de la
testa unida.
- Las semillas de Cuscuta spp. que sean frgiles o cuyo color oscile
entre gris ceniza y blanco cremoso.
- Las flores estriles no insertas, glumas vacas, lemmas, paleas,
otras cubiertas, tallos, hojas, escamas de conos, alas, cortezas,
flores, agallas de nemtodos, cuerpos de origen fngico tales
como cornezuelos, esclerocios, tizn, tierra, arena, piedras y toda
aquella materia que no sea semilla.
2. DESCRIPCIN DE MATERIALES Y EQUIPOS
Se pueden utilizar como ayuda luz reflejada, lentes de aumento, cribas o aventadores para
separar las partes que componen la muestra de trabajo.
Frecuentemente, para identificar y separar con precisin unidades de semilla y fragmentos
pequeos suelen ser necesarias lupas de mano y lupas binoculares. La luz reflejada es muy
til para separar las flores frtiles de gramneas de las estriles y tambin se usa para la
deteccin de agallas de nemtodos y cuerpos de origen fngico.
Las cribas pueden usarse como ayuda en el ensayo de pureza, para separar basura, suelo, y
otras partculas pequeas, de la muestra de trabajo.
3. MTODO DE TRABAJO
Muestra de trabajo
El anlisis de pureza se realizar sobre una muestra de trabajo obtenida a partir de la
muestra enviada, el tamao de la muestra de trabajo debe ser de:
bien, un peso estimado que contenga al menos 2500 unidades de
semilla
bien, no menos del peso indicado en la columna 4 de la Tabla 2A del
Manual para la Toma de Muestras.
El anlisis se realizar sobre una muestra de trabajo del citado peso o dos submuestras de al
menos la mitad del citado peso, obtenidas independientemente.
La muestra de trabajo (o cada una de las submuestras) debe ser pesada en gramos con un
nmero mnimo de cifras decimales que sean suficientes para calcular el porcentaje de ese
componente con una cifra decimal.
Se indica a continuacin el nmero mnimo de posiciones decimales necesarias para el
pesado, con objeto de calcular los porcentajes con una cifra decimal:
Peso de la muestra de trabajo o
media muestra de trabajo en
gramos
Pesar la muestra de trabajo o media muestra de
trabajo y sus componentes con el siguiente nmero
de posiciones decimales
Menos de 1.000 4
1.000 a 9.999 3
10.00 a 99.99 2
100.0 a 999.9 1
1000 o ms 0
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Separacin
1. La muestra de trabajo (o submuestra) tras su pesado, debe ser clasificada en
sus componentes. En general, la clasificacin se basa en el examen de cada
una de las partculas de la muestra.
2. La separacin de la semilla pura se debe poder realizar en base a
caractersticas visuales de la semilla, con ayudas mecnicas o con presin
siempre que no afecte a la capacidad germinativa.
3. Tras la separacin, cada componente y cualquiera de las especies de semilla
o cualquier otro tipo de materia cuyo porcentaje vaya a ser indicado, ser
pesado en gramos, con el nmero de posiciones decimales mnimo necesario
para calcular el porcentaje del componente con una cifra decimal de
precisin.
4. CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS
4.1. Una muestra de trabajo completa
4.1.a. Ensayo de ganancia o de prdida de peso durante el anlisis
Sumar los pesos de todos los componentes de la muestra de trabajo. Esta
suma se debe comparar con el peso original de la muestra como control de
ganancia o prdida. Si existe una diferencia superior al 5% del peso inicial, se
repetir el ensayo. Se indicar el resultado del nuevo ensayo.
4.1.b. Clculo del porcentaje de los componentes
El porcentaje en peso de cada uno de los componentes que se van a indicar en
el certificado del anlisis, se debe reflejar con una cifra decimal. Los
porcentajes se deben basar en los pesos de los componentes, no en el peso
original de la muestra de trabajo.
No es necesario calcular el porcentaje en peso de semilla de cualquier especie
distinta de la de la semilla pura u otro tipo particular de materia inerte, a no
ser que se solicite.
4.1.c. Procedimiento de redondeo
Sumar los porcentajes de todas las fracciones. Las fracciones que tengan que
ser indicadas como trazas (menores del 0,05%) se excluirn de este
clculo; entonces, el resto de fracciones debern sumar el 100%. Si la suma
no es igual al 100% (99,9% 100.1%) sumar o restar 0,1% al valor ms
grande (generalmente la fraccin de semilla pura).
Nota: Si se necesita una correccin mayor del 0,1%, comprobar si hay error
de clculo.
4.2. Dos medias muestras de trabajo
4.2.a. Ensayo de la ganancia o prdida de peso durante el ensayo
Sumar los pesos de todos los componentes independientemente para cada
media muestra de trabajo. Cada una de estas sumas se compara con el peso
original para comprobar la ganancia o prdida. Si existe una diferencia de
ms del 5% del peso inicial, se realizar un nuevo ensayo con dos medias
muestras. Se indicar el resultado de este nuevo ensayo.
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4.2.b. Clculo del porcentaje de los componentes
Para cada muestra de trabajo, calcular el porcentaje en peso de cada uno de
los componentes con al menos dos cifras decimales. Los porcentajes se
calcularan en base a la suma de los pesos de los componentes en cada una de
las muestras, no sobre el peso original de las muestras de trabajo. Sumar los
porcentajes correspondientes de cada media muestra de trabajo y calcular el
porcentaje medio en peso de cada uno de los componentes (si se desea, en
este momento, los porcentajes se pueden redondear a un mnimo de dos
posiciones decimales, pero no corregir al 100% en este momento).
Comprobar las tolerancias (ver Apndice B.V, Tabla 3.1) y redondear de
acuerdo con 4.1.c y 4.2.d, respectivamente. A no ser que se requiera, no es
necesario calcular el porcentaje de semilla de otra cualquier especie distinta
de la perteneciente a la fraccin de semilla pura o cualquier otro tipo de
materia inerte. Para determinar los porcentajes finalmente indicados, sumar
los pesos de semilla pura, materia inerte y otras semillas en cada repeticin y
recalcular los porcentajes en base al peso total de cada una de las fracciones
en el ensayo de pureza.
4.2.c. Ensayo de variacin entre las dos medias muestras de trabajo
La diferencia en cada componente para las dos muestras de trabajo no debe
exceder de la tolerancia (ver Apndice B.V, Tabla 3.1). Usar la media de un
componente para encontrar el rango relevante de porcentajes en las columnas
1 2 de la tabla; entonces las columnas 3 4 darn la diferencia mxima
permitida entre los valores de dicho componente.
Repetir esto para cada uno de los componentes. Si todos los componentes
estn dentro de la tolerancia, calcular la media para cada componente.
Si alguno de los componentes queda fuera de la tolerancia, utilizar el
siguiente procedimiento:
a) Analizar otros pares de muestras (pero no ms de cuatro pares
en total) hasta encontrar un par cuyos componentes estn
dentro de la tolerancia.
b) Descartar cualquier par en el que la diferencia entre sus
miembros exceda del doble de la tolerancia.
c) El porcentaje finalmente indicado de este componente debe ser
calculado a partir del peso medio de todos los pares no
eliminados.
Es recomendable intentar encontrar la causa de la variacin encontrada,
especialmente si los anlisis adicionales tambin han mostrado mucha
diferencia entre componentes. En esos casos se utiliza el proceso tal y como
se resume en el Apndice B.I.
4.2.d. Procedimiento de redondeo
Si todas las repeticiones de todas las fracciones estn dentro de la tolerancia,
sumar los pesos de las correspondientes fracciones, calcular los porcentajes y
redondear a una cifra decimal. Para el procedimiento de correccin ver 4.1.c.
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4.3. Dos muestras de trabajo completas o ms
Hay ocasiones en las que es necesario analizar una segunda muestra de trabajo
completa. Cuando se lleva a cabo un segundo ensayo, se debe seguir el siguiente
procedimiento.
4.3.a. Procedimiento
Llevar a cabo el anlisis de acuerdo con 3 y los clculos como se describe en
4.1.
4.3.b. Ensayo de variacin entre muestras
Cuando se han llevado a cabo dos ensayos completos, se proceder del
mismo modo que con anlisis duplicados en medias muestras de trabajo, pero
utilizando las columnas 5 y 6 de la tabla 3.1 del Apndice B.V de tolerancias
para determinar la diferencia mxima permitida entre los dos valores de cada
uno de los componentes y encontrar la tolerancia adecuada.
Si la diferencia entre los resultados excede la tolerancia, analizar una o dos
muestras ms hasta que se obtenga un par de muestras cuyos componentes se
encuentren dentro de la tolerancia (no ms de cuatro muestras en total).
Indicar el peso medio de las muestras para las que los resultados mayor y
menor no difieran ms del doble de la tolerancia, a no ser que sea evidente
que el valor de uno o ms de estos resultados se deba a un error y no a la
variacin aleatoria de la muestra. En este caso, descartar el/los anlisis con
errores. Si ningn par de resultados est dentro de la tolerancia, es
aconsejable encontrar la causa de la variacin.
4.3.c. Clculo y procedimiento de redondeo
Para cada una de las muestras que se vayan a incluir en el resultado final,
sumar los pesos de cada una de las fracciones y llevar a cabo los clculos de
acuerdo con 4.1.b y redondear de acuerdo con 4.1.c. Hacer la media de los
resultados y redondear de nuevo de acuerdo con 4.1.c.
4.4. Tratamiento de los resultados
Cuando el peso de la muestra de trabajo utilizada para el anlisis de pureza se desva
del prescrito en la columna 4 del Apndice A.I, el peso real examinado se indicar en
el certificado.
El resultado de un anlisis de pureza se da con una cifra decimal y la suma del
porcentaje de todos sus componentes debe ser de 100. Aquellos componentes que
supongan menos del 0,05% se indicarn como Trazas.
Los porcentajes de semilla pura, otras semillas y materia inerte se indican en los
espacios previstos para tal efecto en el Boletn de Anlisis. Si el resultado de uno de
los componentes es nulo, se debe indicar como 0,0 en el espacio apropiado.
El nombre cientfico de las especies de semilla pura se debe expresar en el Boletn de
Anlisis. Se debe indicar el tipo de materia inerte y el nombre cientfico de cada una
de las especies de otras semillas, los nombres cientficos se indicaran de acuerdo con
la citada tabla, en su caso, con la Lista Estabilizada de Nombres de Plantas de la
ISTA que est en vigor.
Cuando el expedidor de la muestra solicite la determinacin del contenido de algn
tipo particular de materia inerte, especies de otras semillas, Unidades de Semilla
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Mltiple (USM) o semillas con apndices unidos, el porcentaje de dicho material ha
de ser indicado en el Boletn de Anlisis.

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APNDICE I:
PROCESOS ESPECIALES DE SEPARACIN
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1. Separacin
1.1. Poaceae (Graminae)
Caripsides En Lolium, Festuca y Festulolium y en Elitrigia repens una flor con la caripside
ms grande de un tercio de la palea medido desde la base de la raquilla, se considera como semilla
pura u otra semilla. Sin embargo, una flor con la caripside inferior de un tercio de la plea, se
considera como materia inerte. En el resto de gneros y especies una flor con cualquier endospermo
en la caripside, se considera como semilla pura.
Flores estriles En los siguientes gneros, no se separan las flores estriles adheridas a flores
frtiles, sino que se mantienen adheridas y se incluyen en la fraccin de semilla pura
Arrhenanterum, Avena, Bromus, Chloris, Dactylis, Festuca, Festulolium, Holcus, Koeleria,
Lolium, Poa, Sorghum y Triticum spelta.
1.2. Semillas daadas
Si las unidades de semilla pura no muestran daos evidentes en la testa o el pericarpo, son
consideradas como semilla pura u otra semilla, independientemente de si estn llenas o vacas, pero
cuando existe una abertura en la testa o en el pericarpo, difcilmente germinar. Si es posible, el
analista debe decidir si la parte slida remanente de la unidad de semilla es mayor de de la mitad de
su tamao original y consecuentemente, aplicar esta regla. Si esta determinacin no puede ser
fcilmente realizada, la unidad de semilla se clasificar como semilla pura u otra semilla. Para
unidades de semilla individuales, no es necesario dar la vuelta a la unidad para determinar la
presencia o ausencia de agujeros u otras reas daadas en la parte inferior.
Las flores y caripsides rotas se clasifican como semilla pura u otras semillas si los fragmentos son
mayores de la mitad de su tamao original.
1.3. Especies indistinguibles
Cuando es difcil o imposible distinguir entre especies, se debe seguir uno de los siguientes
procedimientos:
(a) En el Certificado de anlisis se indica solo el gnero, clasificndose todas las semillas de
ese gnero como semilla pura (ej. semillas de Lolium con y sin aristas); la informacin
adicional puede reflejarse en Otras Determinaciones.
o
(b) Las semillas similares se separan del resto y se pesan conjuntamente. De esta mezcla, se
toman aleatoriamente, al menos 400 semillas y preferiblemente 1000. Se realiza una
separacin final de esta porcin y se determina en peso la proporcin de cada una de las
especies. A partir de esta porcin, se puede calcular (epgrafe A.2.2.1) el porcentaje de
cada especie en la muestra global.
Si se sigue este procedimineto, se deben incluir los detalles, incluido el nmero de semillas
examinadas.
1.4. Unidades de Semilla Mltiple (USM)
Siempre que lo requiera el solicitante, para Triticum spelta y los siguientes gneros, (Avena,
Bromus, Dactylis, Festuca, xFestulolium, Koeleria, Lolium), las unidades de semilla mltiple (tal y
como se describe en la DSP 33, ver anexo III) se pesan por separado y se anotan de acuerdo con
4.4.
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1.5. Procedimiento para cuando impurezas individuales tienen efecto
significativo sobre el resultado
Las impurezas cuyo tamao o peso se desva considerablemente del tamao y peso de la semilla
pueden afectar demasiado a los resultados del anlisis. Tales casos se presentan cuando hay piedras,
granos de cereales grandes, etc. en un cultivo de semilla pequea. Si se pueden eliminar fcilmente,
por ejemplo por tamizado, separar estas impurezas de la totalidad de la muestra enviada (o de una
muestra de, al menos, 10 veces el peso usado para el anlisis de pureza) y realizar un anlisis
normal en la muestra limpia, con muestras de trabajo del peso habitual. Dichas impurezas se
indicarn y el clculo de los resultados se har de acuerdo con A.2.2.2.
1.6. Apndices unidos
En ciertos gneros (aquellos incluidos en las DSP 15, 38, 46 y 62), las semillas/frutos tienen unidos
varios apndices (aristas, pednculos, etc). Dichos apndices se mantendrn unidos a la semilla,
pero, siempre que lo pida el solicitante, el contenido de semillas con apndices mayores que la
dimensin ms grande, se debe indicar en el Boletn de Anlisis de acuerdo con 1.7.
2. Clculo de los resultados
2.1. Clculo para especies difciles de separar
Cuando en la muestra analizada se presentan dos o ms especies difciles de separar, y la separacin
final se realiza sobre 400 1000 semillas, tal y como se describe en A.2.1.4; para calcular el
porcentaje en peso de una de las especies contaminantes, se realizan los siguientes clculos.
Calcular el porcentaje de semillas de esa especie (A) en base a la relacin de su peso con el peso
total de las 400-1000 semillas y el porcentaje inicial de semilla pura (P
1
):
A% =(peso de semillas de la especie A/peso total de 400-100 semillas) P
1

Entonces, este porcentaje se aade al porcentaje de otras semillas (tal y como se determin en el
anlisis de pureza despreciando las dificultades para separar especies); el porcentaje de semilla pura
se disminuye en la misma cuanta para devolver el resultado total del anlisis de pureza al 100%.
2.2. Clculo para cuando impurezas individuales tienen un efecto
significativo sobre el resultado
Si en el procedimiento descrito en A.2.1.7, m (g) se han separado de una muestra de M (g) y el
anlisis de pureza posterior sobre el material limpio da como resultado P
1
(%) semilla pura, I
1
(%)
materia inerte y OS
1
(%) otras semillas; entonces, el resultado final de anlisis de pureza se
calcular de la siguiente manera:
semilla pura:
M
m M
P P

=
1 2

donde, M =peso inicial del que se han tomado las semilla en las que las impurezas tienen un
efecto significativo y m =peso de las impurezas que tienen un efecto significativo sobre el
resultado
materia inerte:
1 1 2
D
M
m M
I I +

= y donde 100
1
1
M
m
D =
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y m
1
=peso de las impurezas que tienen efecto significativo, separadas y clasificadas como
materia inerte
otras semillas:
2 1 2
D
M
m M
OS OS +

= y donde 100
2
2
M
m
D =
y m
2
= peso de las impurezas que tienen efecto significativo, separadas y clasificadas como
otras semillas.
(Comprobar que P
2
+I
2
+OS
2
=100%).
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APNDICE B.II:
GLOSARIO
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Aquenio,
aquenium
Fruto seco indehiscente de una sola semilla, formado por un carpelo libre (ej.
Ranunculaceae, Geum) con la cubierta seminal diferenciada de la cubierta del
fruto; ocasionalmente, consta de ms de un carpelo (Asteraceae [Conpositae]).
Ala Excrecencia plana y membranosa de un fruto o semilla
Antera La parte productora de polen del estambre, situada en la parte superior del
filamento o tallo
Arilo, arilus,
(pl. arili)
Cubierta o apndice carnoso, y en ocasiones coloreado, de la semilla, que nace
del funculo o de la base del vulo (ver tambin carnculo, estrofiolo).
Arista, arista Pelo fino, recto o combado. Normalmente, en gramneas pratenses es una
continuacin del nervio central de lemmas o glumas.
Brctea Hoja de pequeas dimensiones o estructura con forma de hoja que se sita en
la parte inferior de la axila de una flor o de una espiga de gramnea.
Bulbilo Bulbo pequeo, generalmente axilar o que aparece en lugar de flores, como en
Poa bulbosa.
Cliz Envoltura externa de la flor compuesta por los spalos.
Captulo Inflorescencia densa, habitualmente compuesta por flores ssiles.
Carncula Pequea excrecencia de la regin micropilar (ver tambin arilo, estrofiolo).
Drupa Fruto indehiscente de una sola semilla con endocarpo leoso y capas externas
carnosas
Embrin Planta joven encerrada en una semilla
Espiguilla Unidad de la inflorescencia de gramneas, que posee una o ms flores
sostenidas por un par de glumas.
Esquizocarpo Fruto seco que, cuando madura, se separa en dos o ms unidades
(mericarpos).
Estaminada Flor unisexual, que solo presenta estambres.
Estril que carecen de rganos sexuales funcionales (para flores de gramneas: sin
caripside)
Estrofiolo Arilo pequeo, formado por una excrecencia con forma de verruga (ver tambin
arilo o carnculo)
Fascculo Conjunto de ramas que aparecen todas de ms o menos el mismo punto.
Frtil Con rganos sexuales funcionales; (para espiguillas de gramneas: las que
tengan caripside).
Flor Palea y lemma que encierran a un pistilo y estambres o la caripside madura
en Poaceae (Gramineae); en lo que respecta a las Reglas, el termino flor se
refiere a la flor frtil con o sin lemmas estriles adicionales.
Glomrulo Inflorescencia densamente poblada, o bien en Beta: parte de una
inflorescencia.
Gluma Cualquiera de las dos brcteas estriles de la base de las espiguillas de
gramneas.
Hipanto Estructura anular, tubular o con forma de copa, que rodea al ovario y en el que
se insertan los ptalos, spalos y estambres.
Indehiscente Que no se abre. Frutos que no se abren cuando alcanzan la madurez.
Integumento Envolturas del vulo que posteriormente se convierten en las cubiertas de la
semilla o la testa (generalmente se presentan dos integumentos)
Involucelo Grupo secundario de brcteas; en ocasiones, rodea al racimo o a las flores.
Involucro Anillo de brcteas o pelos que rodea la base de la inflorescencia.
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Lemma Brctea exterior (la situada ms abajo) de la espiguilla de gramneas.
Lbulo,
loculus, (pl.
loculi)
Compartimento del ovario que contiene las semillas.
Mericarpo Parte de un esquizocarpo.
Nuececilla Nuez pequea.
Palea Brctea superior (la ms interna) de la espiguilla de gramneas, en ocasiones
llamada palea interna o palea superior. Brctea que rodea a la caripside por
su cara ventral.
Pedicelo El tallo de cada una de las flores simples de una inflorescencia.
Pelo Excrecencia uni- o multicelular de la epidermis
Perianto Las dos envueltas florales (cliz y corola) o cualquiera de las dos.
Pericarpo
(cubierta del
fruto)
Pared del ovario o fruto maduros.
Pico (picudo) Prolongacin del fruto larga y puntiaguda
Pireno o hueso Semilla encerrada en el endospermo leoso de una drupa (u otra estructura
similar de frutos con semilla mltiple)
Raquilla,
rhachilla
Raquis secundario. En particular en gramneas, el eje que soporta a la flor.
Raquis,
rhachis (pl.
rhachides)
Eje principal de una inflorescencia
Ssil Sin tallo o pedicelo
Silicua Fruto seco dehiscente en dos valvas, que procede de dos carpelos, ej.
Brassicaceae (Cruciferae).
Testa Cubierta de la semilla.
Unidad de
semilla
Unidades de dispersin comnmente encontradas, ej. aquenios y frutos
similares, esquizocarpos, flores, etc., tal y como se define para cada gnero y
especie en las Definiciones de Semilla Pura.
Vaina Fruto seco indehiscente, especialmente de Fabaceae (Leguminosae)
Vilano Conjunto de pelos finos y, en ocasiones, plumosos o escamosos, que coronan
a un aquenio.
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APNDICE B.III:
NMERO DE DEFINICIN DE SEMILLA PURA POR GNERO Y ESPECIE
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La primera columna indica el gnero (Genus) de la semilla, en la segunda la familia (Family) a la
que pertenece, en la tercera columna el nmero de definicin de semilla pura (Pure seed definition
number [PSD]) que le corresponde y en la cuarta nos indica se la semilla es vestida (Chaffiness
[C]) o no vestida.



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APNDICE B.IV:
DEFINICIONES DE SEMILLA PURA
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Nmero de Definicin de Semilla Pura (DSP)
1. Aquenio, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de aquenio mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla, con el pericarpo/testa parcial o completamente separado.
Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
2. Aquenio, con o sin perianto, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de aquenio mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla, con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayores que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
(Gomphrena: Aquenio con o sin perianto piloso, a no ser que sea obvio que no contiene
semilla)
3. Aquenio, con o sin hipanto , a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de aquenio mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla, con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayores que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
4. Aquenio, con o sin pico, vilano o brcteas, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de aquenio mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla, con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayores que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
5. Aquenio, con o sin alas y/o vilano o pelo, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de aquenio mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla, con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayores que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
6. Aquenio, con o sin involucelo, cliz o pico, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de aquenio mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla, con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayores que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
7. Aquenio, con o sin cliz plumoso, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de aquenio mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
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Semilla, con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayores que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
8. Aquenio, con o sin alas, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de aquenio mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla, con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayores que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
9. Aquenio, con o sin pelos, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de aquenio mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla, con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayores que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
10. Semilla, con o sin testa.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, con o sin testa.
Fabaceae (Leguminosae), Brassicaceae (Cruciferae), Cupressaceae, Taxodiaceae: las
semillas y trozos de semilla sin testa se consideran como materia inerte.
Para Fabaceae (Leguminosae): cotiledones separados se consideran como materia inerte
independientemente de si a ellos se encuentran o no unidos el eje radcula-plmula y/o
ms de la mitad de la testa.
11. (Eliminada. Ver DSP 10)
12. Semilla, con o sin testa.
Nota: Testa con o sin pelos
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, con o sin testa.
13. Semilla, con o sin testa, con o sin carnculo o estrofiolo.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, con o sin testa.
14. Semilla, con o sin testa, con o sin ala.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, con o sin testa.
15. Esquizocarpo/mericarpo, con o sin pedicelo (de cualquier longitud), a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Fragmento de mericarpo mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla, con el pericarpo parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, con el pericarpo
parcialmente o totalmente separado.
Nota: Los frutos con fragmentos de pedicelo mayores que la longitud del
esquizocarpo/mericarpo se indican a de acuerdo a 5.4.
16. Mericarpo, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
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Fragmento de mericarpo mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
17. Mericarpo, con o sin pico, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de mericarpo mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
18. Nuececilla, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de nuececilla mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
19. Fruto similar a una nuez, rodeado por el periantio, o no ser que sea obvio que no contiene
semilla.
Fragmento de fruto mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio que no
contiene semilla.
Semilla con el pericarpo/testa parcial o totalmente separado.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente separado.
20. Vaina, o porcin de vaina con una semilla.
Semilla, siempre que permanezca adherida parte de la testa.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, siempre que permanezca
adherida parte de la testa.
Solo para Fabaceae (Leguminosae): las semillas y fragmentos de semilla se consideran
como materia inerte. Los cotiledones separados se consideran como materia inerte,
independientemente de si el eje radcula-plmula y/o ms de la mitad de la testa, se
encuentran unidos a ellos o no.
21. Vaina, con o sin cliz, con semilla(s).
Semilla, siempre que permanezca adherida parte de la testa.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, siempre que permanezca
adherida parte de la testa.
Las semillas y fragmentos de semilla se consideran como materia inerte. Los cotiledones
separados se consideran como materia inerte, independientemente de si el eje radcula-
plmula y/o ms de la mitad de la testa, se encuentran unidos a ellos o no.
22. Vaina, con o sin cliz o brcteas, con una semilla.
Semilla, siempre que permanezca adherida parte de la testa.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, siempre que permanezca
adherida parte de la testa.
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Solo para Fabaceae (Leguminosae): las semillas y fragmentos de semilla se consideran
como materia inerte. Los cotiledones separados se consideran como materia inerte,
independientemente de si el eje radcula-plmula y/o ms de la mitad de la testa, se
encuentran unidos a ellos o no.
23. Segmento de vaina o silicua provisto de una semilla, con o sin tallo o pico Terminal, a no
ser que se sea obvio que no contiene semilla.
Semilla, siempre que permanezca adherida parte de la testa.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, siempre que permanezca
adherida parte de la testa.
Solo para Ornithopus compresus, segmento de vaina provisto de una semilla, con o sin
segmentos vacos de vaina o parte de segmentos unidos.
Fabaceae (Leguminosae) y Brassicaceae (Cruciferae): Semillas y fragmentos de semilla
con testa se consideran como materia inerte. Solo para Fabaceae (Leguminosae): Los
cotiledones separados se consideran como materia inerte, independientemente de si el eje
radcula-plmula y/o ms de la mitad de la testa, se encuentran unidos a ellos o no.
24. Vaina, con o sin pico, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Semilla, siempre que permanezca adherida parte de la testa.
Semilla mayor de la mitad de su tamao original, siempre que permanezca adherida parte
de la testa.
Solo para Fabaceae (Leguminosae): las semillas y fragmentos de semilla se consideran
como materia inerte. Los cotiledones separados se consideran como materia inerte,
independientemente de si el eje radcula-plmula y/o ms de la mitad de la testa, se
encuentran unidos a ellos o no.
25. Fruto seco indehiscente, mono-trilocular, con o sin cliz o pedicelo o fragmento de
pednculo, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Semilla, con o sin testa.
Fragmento de semilla de la mitad o ms de su tamao original, con o sin testa.
26. Captulo de una sola flor, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Aquenio, con o sin vilano, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de aquenio mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla, con el pericarpo/testa total o parcialmente separado.
Fragmento de semilla mayos de la mitad de su tamao original, con el pericarpo o testa
total o parcialmente separado.
27. Captulo, con o sin pedicelo, a no ser que sea obvio que no contiene aquenio.
Aquenio, con o sin perianto, a no ser que sea obvio que no contiene semilla.
Fragmento de aquenio mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio
que no contiene semilla.
Semilla, con el pericarpo/testa total o parcialmente saparado.
Fragmento de semilla mayos de la mitad de su tamao original, con el pericarpo o testa
total o parcialmente separado.
28. Flor, con palea y lemma que encierran una caripside, con o sin arista.
Caripside.
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Fragmento de caripside mayor de la mitad de su tamao original.
(Elytrigia repens: flor con palea y lemma que encierran una caripside de, al menos, un
tercio de la longitud de la palea medida desde la base de la raquilla, con o sin arista).
29. Flor, con palea y lemma que encierran una cariopsode, ms las lemmas estriles unidas,
con o sin arista.
Caripside.
Fragmento de caripside mayor de la mitad de su tamao original.
(Phalaris: incluidas las anteras prominentes en caso de que estn presentes).
30. Flor, con palea y lemma que encierran una caripside, excluyendo la arista completa
cuando la longitud de la arista es mayor que la longitud de la flor.
Caripside.
Fragmento de caripside mayor de la mitad de su tamao original.
31. Flor, con palea y lemma que encierran una caripside, con o sin arista.
Fragmento de flor que contiene una caripside mayor de la mitad de su tamao original.
Caripside.
Fragmento de caripside mayor de la mitad de su tamao original.
32. (Eliminada, ver DSP 33).
33. Flor, con palea y lemma que encierran una caripside, con o sin arista.
(Festuca, Lolium, xFestulolium: tamao se la caripside, al menos, un tercio de la longitud
de la palea, medida desde la base de la raquilla).
Caripside.
Fragmento de caripside mayor de la mitad de su tamao original.
N.B. La flor puede estar, o no, unida a una flor simple frtil o estril, siempre que la flor
unida no alcance el extremo de la flor frtil, excluyendo la arista (Figura 1,
estructuras 1-4).
N.B. Cuando se utiliza el mtodo de aventado uniforme, ver Anexo III.
Las unidades de semilla consisten en espigas o partes de espigas con ms de una flor.
Dichas estructuras, con o sin glumas, se denominan Unidades de Semilla Mltiple (USM)
cuando estn formadas por las siguientes estructuras:
- Una flor frtil con unida a otra flor, frtil o estril, que alcanza o supera el extremo
de de la flor frtil, excluyendo la arista (estructuras 8-12).
- Una flor frtil unida a ms de una flor frtil y/o estril de cualquier longitud
(estructuras 5-7)
- Una flor frtil con flores estriles o glumas de cualquier longitud unidas basalmente
(estructuras 13, 14 y 15)
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N.B. Las Unidades de Semilla Mltiple se dejan intactas y se incluyen en la fraccin de
semilla pura.
N.B. Solo para Triticum spelta, con o sin segmento del raquis unido.
N.B. En Triticum suelta, se pueden encontrar combinaciones de unidades de semilla
mltiple. Estas no se deben separar en el anlisis de pureza.
N.B. Las unidades de semilla mltiple de Avena, para el tipo de estructura 13, donde la
lemma de la flor basal envuelve a una flor estril, no han de ser clasificadas como
USM. El resto de la estructuras (5-12 y 14-15) se consideran como USM.
34. Espiga, con glumas, lemma y palea que encierran una caripside, con o sin arista.
Flor, con palea y lemma que encierran una caripside, con o sin arista.
Caripside.
Fragmento de caripside mayor de la mitad de su tamao original.
(Alopecurus: palea ausente)
35. Espiga, con palea y lemma que encierran una caripside, ms los estambres florales
unidos, con o sin arista.
Flor, con palea y lemma que encierran una caripside, con o sin arista.
Caripside.
Fragmento de caripside mayor de la mitad de su tamao original.
(Holcus: espiga con glumes, lemma y palea que encierran una cariopsode, ms los
estambres florales unidos, con o sin arista).
36. Espiga, con glumas, lemma y palea que encierran una caripside, ms lemma estril
unida.
Flor, con palea y lemma que encierran una caripside.
Caripside.
Fragmento de caripside mayor de la mitad de su tamao original.
(Axonopus: espiga, con gluma simple, lemma y palea que encierran una caripside, ms
lemma esteril unida).
(Panicum y Digitaria: no es necesario comprobar la presencia de caripside)
37. Espiguillas (una frtil*, dos estriles) encerradas en un involucro a modo de rosario.
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*N.B. La espiguilla frtil consta de glumas, lemma y palea que encierran una caripside,
adems de llevar unida una lemma estril.
38. Espiguilla, con glumas, lemma y palea encerrando una caripside, incluyendo la arista
independientemente del tamao de la misma.
Flor, con o sin lemmas estriles, con la palea y la lemma encerrando una caripside,
incluyendo la arista independientemente del tamao de la misma.
Flor con palea y lemma encerrando una caripside, incluyendo la arista
independientemente del tamao de la misma.
Caripside
N.B. Semillas con aristas mayores que la longitud de la flor
39. Espiguilla, con una gluma*, lemma y palea encerrando una caripside.
N.B. La primera gluma ausente, la segunda gluma rodea completamente a las finas lemma
y palea.
Caripside.
Fragmento de caripside mayor que la mitad de su tamao original.
40. Caripside.
Fragmento de caripside mayor que la mitad de su tamao original.
41. Espiguilla, con la lemma y la palea encerrando una caripside, con o sin arista, ms una
flor estril unida.
Flor, con la lemma y la palea que encierran una caripside, con o sin arista.
Caripside.
Fragmento de caripside mayor que la mitad de su tamao original.
N.B. Cuando se utiliza un mtodo de aventado uniforme (Poa pratensis, Poa trivialis).
(Astrebla: espiguilla y flor con o sin caripside)
42. Espiguilla, con glumas encerrando una carioside con o sin palea o lemma hialinas,
segmento(s) del raquis, pedicelo(s), arista(s), unidos a una(s) flor(es) estriles.
Flor, con lemma y palea, con o sin arista
Caripside.
Fragmento de caripside mayor que la mitad de su tamao original.
(Bouteioua, Cholris: no es necesario revisar la presencia de caripside)
43. Fascculo o erizo de 1-5 espiguillas* con un involucro piloso
*N.B. Espiguilla con glumas, lemma y palea encerando una caripside, y adems una
lemma estril unida.
Flor con lemma y palea encerrando una caripside.
Caripside.
Fragmento de caripside mayor que la mitad de su tamao original.
(Cenchrus: erizo o fascculo, con o sin cariopside)
44. (Eliminada ver DSP 42)
45. (Eliminada ver DSP 42)
46. Racimo, o fragmento de un racimo, con o sin pednculo, con o sin trozos de hoja, a no ser
que sea obvio que no contiene semilla.
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Semilla, con el pericarpo/testa parcial o totalmente desprendido.
Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original con el pericarpo/testa
parcial o totalmente desprendido.
N.B. Los racimos con fragmentos con tallos o hojas que sobresalen ms que la dimensin
mayor del racimo.
47. Semilla, sin ala o integumento, a no ser que se encuentre unido un fragmento de la testa.
Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original, sin ala o integumento, a
no ser que se encuentre unido un fragmento de la testa.
N.B. Integumento se refiere al tejido que une el ala con la semilla. En Pinaceae con esta
definicin, el integumento no se encuentra ntimamente asociado a la semilla y
normalmente se elimina cuando se procesa, conjuntamente cuando se elimina el ala.
Sin embargo, si un integumento (con o sin ala) permanece unido a alguna semilla
durante el anlisis de pureza, esas semillas se considerarn como semillas aladas y
deben permanecer intactas ni el integumento ni tampoco el ala deben ser
eliminados deliberadamente. Las semillas aladas (ej. semilla con un integumento
unido con o sin ala de cualquier tamao) se debe pesar e indicarlo como porcentaje
distinto al de semilla pura. Tras el pesado, se mezclan las semillas aladas y la
fraccin de semilla pura y se usan para conseguir las repeticiones de germinacin en
la proporcin representativa.
48. Semillas, con o sin ala(s), a no ser que sea obvio que no est presente el embrin, con o
sin testa.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio que
no est presente el embrin, con o sin testa.
49. Semilla, siempre que est unido un fragmento de la testa.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, siempre que est unido un
fragmento de la testa.
50. Semilla, siempre que est unido un fragmento de la testa, con o sin arilo.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, siempre que est unido un
fragmento de la testa
51. Semilla, sin ala, con (aunque ocasionalmente sin) integumento, siempre que una parte de
la testa se encuentre unida.
Fragmento de semilla mayor de la mitad de su tamao original, sin ala, con (aunque
ocasionalmente sin) integumento, siempre que una parte de la testa se encuentre unida.
N.B. Integumento se refiere al tejido que une el ala con la semilla. En Pinaceae con esta
definicin, el integumento est fusionado a la semilla y raramente se elimina cuando
se procesa, y es imposible de eliminar sin generar daos. Por tanto, las semillas con
el integumento unido se consideran cono semillas pura. Las semillas aladas - ej.
semilla con un integumento con ala unido se debe pesar e indicarlo como porcentaje
distinto al de semilla pura. Tras el pesado, se mezclan las semillas aladas y la
fraccin de semilla pura y se usan para conseguir las repeticiones de germinacin en
la proporcin representativa.
52. Samara (fruto alado), con o sin ala(s).
Fragmento de samara mayor que la mitad de su tamao original.
Semilla con el pericarpo/testa parcial o totalmente eliminado.
Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente eliminado.
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53. Samara (fruto alado), con o sin ala(s), con o sin estilos unidos.
Fragmento de samara mayor que la mitad de su tamao original.
Semilla con el pericarpo/testa parcial o totalmente eliminado.
Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa
parcial o totalmente eliminado.
54. Fruto con o sin cliz.
Fragmento de semilla, a no ser que sea obvio que no presenta semilla.
Semilla, cono o sin testa
Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original.
55. Drupa, que contiene un pireno (grano, hueso)
Pireno, a no ser que sea obvio que no presenta semilla.
Fragmento de pireno mayor que la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio que
no presenta semilla
Semilla, con el pericarpo/testa total o parcialmente eliminado.
Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa total
o parcialmente eliminado.
56. Pireno (grano, hueso), a no ser que sea obvio que no presenta semilla.
Fragmento de pireno mayor que la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio que
no presenta semilla
Semilla, con el pericarpo/testa total o parcialmente eliminado.
Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa total
o parcialmente eliminado.
57. Nuez, a no ser que sea obvio que no presenta semilla.
Fragmento de nuez mayor que la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio que
no presenta semilla
Semilla, con el pericarpo/testa total o parcialmente eliminado.
Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa total
o parcialmente eliminado.
58. Nuez, con o sin pelos, a no ser que sea obvio que no presenta semilla.
Fragmento de nuez mayor que la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio que
no presenta semilla
Semilla, con el pericarpo/testa total o parcialmente eliminado.
Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa total
o parcialmente eliminado.
59. Nuez, con o sin perianto, a no ser que sea obvio que no presenta semilla.
Fragmento de nuez mayor que la mitad de su tamao original, a no ser que sea obvio que
no presenta semilla
Semilla, con el pericarpo/testa total o parcialmente eliminado.
Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original, con el pericarpo/testa total
o parcialmente eliminado.
60. Semilla, con o sin testa.
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Fragmento de semilla mayor que la mitad de su tamao original, con o sin testa.
Nota: en muchas especies de Eucalyptus es imposible diferenciar con certeza entre
semillas y ovuloides (=vulos no fecundados o inhibidos que no se han desarrollado en
una semilla madura). En estos casos, siempre bajo solicitud y para las especies en las que
se pueda hacer distincin, se puede seguir un procedimiento simplificado de Repeticiones
Pesadas
61. Flor, con lemma y palea encerrando una cariopdide.
Caripside, con o sin pericarpo
Fragmento de caripside mayor que la mitad de su tamao original, con o sin paricarpo.
62. Flor, con lemma y palea encerrando una caripside, con o sin arista o con o sin segmento
del raquis, independientemente de su longitud.
Fragmento de flor mayor que la mitad de su tamao original.
Caripside
N.B. Flores con arista o segmento del raquis mayores que la longitud de la flor
63. Bulbilo
Fragmento de bulbilo mayor que la mitad de su tamao original.

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APNDICE B.V:
TABLAS DE TOLERANCIAS
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Tabla B.V.1. Tolerancias para ensayos de pureza sobre la muestra a enviar en el mismo laboratorio (test de dos colas a un
ni vel de significacin del 5%)
Esta tabla de las tolerancias para comparar resultados de pureza en muestras duplicadas de la misma muestra a enviar analizada en el
mismo laboratorio. Puede usarse para cualquier componente de un ensayo de pureza. La tabla se usa entrando con la media de los
dos resultados de ensayo (columnas 1 o 2). La tolerancia apropiada se encuentra en las columnas 3 a 6, dependiendo si las semillas
son cubiertas o no cubiertas y media muestra de trabajo o entera ha sido analizada.
Las tolerancias en la columnas 5 y 6 se extrajeron de Miles (1963), Tabla P11, columnas C y F respectivamente, y redondeadas a un
decimal. Para media muestra de trabajo, columnas 3 y 4, se calcularon a partir de la Tabla P11, columnas C y F de Miles (1963) por
multiplicacin con la raz cuadrada de dos.
Media de los dos resultados de
ensayo

Tolerancias para diferencias entre
Medias muestras de trabajo Muestras de trabajo enteras

Semillas no
vestidas
(non- chaffy)
Semillas
vestidas (chaffy)

Semillas no
vestidas
(non- chaffy)
Semillas
vestidas
(chaffy)
1 2 3 4 5 6
99.95-100.00 0.00- 0.04 0.20 0.23 0.1 0.2
99.90- 99.94 0.05- 0.09 0.33 0.34 0.2 0.2
99.85- 99.89 0.10- 0.14 0.40 0.42 0.3 0.3
99.80- 99.84 0.15- 0.19 0.47 0.49 0.3 0.4
99.75- 99.79 0.20- 0.24 0.51 0.55 0.4 0.4
99.70- 99.74 0.25- 0.29 0.55 0.59 0.4 0.4
99.65- 99.69 0.30- 0.34 0.61 0.65 0.4 0.5
99.60- 99.64 0.35- 0.39 0.65 0.69 0.5 0.5
99.55- 99.59 0.40- 0.44 0.68 0.74 0.5 0.5
99.50- 99.54 0.45- 0.49 0.72 0.76 0.5 0.5
99.40- 99.49 0.50- 0.59 0.76 0.82 0.5 0.6
99.30- 99.39 0.60- 0.69 0.83 0.89 0.6 0.6
99.20- 99.29 0.70- 0.79 0.89 0.95 0.6 0.7
99.10- 99.19 0.80- 0.89 0.95 1.00 0.7 0.7
99.00- 99.09 0.90- 0.99 1.00 1.06 0.7 0.8
98.75- 98.99 1.00- 1.24 1.07 1.15 0.8 0.8
98.50- 98.74 1.25- 1.49 1.19 1.26 0.8 0.9
98.25- 98.49 1.50- 1.74 1.29 1.37 0.9 1.0
98.00- 98.24 1.75- 1.99 1.37 1.47 1.0 1.0
97.75- 97.99 2.00- 2.24 1.44 1.54 1.0 1.1
97.50- 97.74 2.25- 2.49 1.53 1.63 1.1 1.2
97.25- 97.49 2.50- 2.74 1.60 1.70 1.1 1.2
97.00- 97.24 2.75- 2.99 1.67 1.78 1.2 1.3
96.50- 96.99 3.00- 3.49 1.77 1.88 1.3 1.3
96.00- 96.49 3.50- 3.99 1.88 1.99 1.3 1.4
95.50- 95.99 4.00- 4.49 1.99 2.12 1.4 1.5
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Media de los dos resultados de
ensayo

Tolerancias para diferencias entre
Medias muestras de trabajo Muestras de trabajo enteras

Semillas no
vestidas
(non- chaffy)
Semillas
vestidas (chaffy)

Semillas no
vestidas
(non- chaffy)
Semillas
vestidas
(chaffy)
1 2 3 4 5 6
95.00- 95.49 4.50- 4.99 2.09 2.22 1.5 1.6
94.00- 94.99 5.00- 5.99 2.25 2.38 1.6 1.7
93.00- 93.99 6.00- 6.99 2.43 2.56 1.7 1.8
92.00- 92.99 7.00- 7.99 2.59 2.73 1.8 1.9
91.00- 91.99 8.00- 8.99 2.74 2.90 1.9 2.1
90.00- 90.99 9.00- 9.99 2.88 3.04 2.0 2.2
88.00- 89.99 10.00-11.99 3.08 3.25 2.2 2.3
86.00- 87.99 12.00-13.99 3.31 3.49 2.3 2.5
84.00- 85.99 14.00-15.99 3.52 3.71 2.5 2.6
82.00- 83.99 16.00-17.99 3.69 3.90 2.6 2.8
80.00- 81.99 18.00-19.99 3.86 4.07 2.7 2.9
78.00- 79.99 20.00-21.99 4.00 4.23 2.8 3.0
76.00- 77.99 22.00-23.99 4.14 4.37 2.9 3.1
74.00- 75.99 24.00-25.99 4.26 4.50 3.0 3.2
72.00- 73.99 26.00-27.99 4.37 4.61 3.1 3.3
70.00- 71.99 28.00-29.99 4.47 4.71 3.2 3.3
65.00- 69.99 30.00-34.99 4.61 4.86 3.3 3.4
60.00- 64.99 35.00-39.99 4.77 5.02 3.4 3.6
50.0- 59.99 40.00-49.99 4.89 5.16 3.5 3.7

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Tabla B.V.2. Tolerancias para ensayos de pureza sobre dos muestras a enviar diferentes del mismo lote cuando el Segundo
ensayo lo realice el mismo o diferente laboratorio (test de dos colas a un ni vel de significacin del 1%)
Esta tabla da las tolerancias para resultados de pureza realizados sobre dos muestras a enviar tomadas del mismo lote y analizadas en
el mismo o en diferente laboratorio. Se puede usar para cualquier componente del ensayo de pureza para decidir si los dos
estimadores son compatibles. La tabla se usa entrando con la media de los dos resultados de ensayo (columnas 1 o 2). La tolerancia
apropiada se encuentra en las columnas 3 o 4, dependiendo si las semillas son o no cubiertas. Las tolerancias de las columnas 3 y 4
estn extradas de las columnas D y G respectivamente de la Tabla P7 de Miles (1963).
Media de los dos ensayos Tolerancia
50-100% Menor del 50%
Semillas no vestidas
(non- chaffy)
Semillas vestidas
(chaffy)
1 2 3 4
99.95-100.00 0.00- 0.04 0.2 0.2
99.90- 99.94 0.05- 0.09 0.3 0.4
99.85- 99.89 0.10- 0.14 0.4 0.5
99.80- 99.84 0.15- 0.19 0.4 0.5
99.75- 99.79 0.20- 0.24 0.5 0.6
99.70- 99.74 0.25- 0.29 0.5 0.6
99.65- 99.69 0.30- 0.34 0.6 0.7
99.60- 99.64 0.35- 0.39 0.6 0.7
99.55- 99.59 0.40- 0.44 0.6 0.8
99.50- 99.54 0.45- 0.49 0.7 0.8
99.40- 99.49 0.50- 0.59 0.7 0.9
99.30- 99.39 0.60- 0.69 0.8 1.0
99.20- 99.29 0.70- 0.79 0.8 1.0
99.10- 99.19 0.80- 0.89 0.9 1.1
99.00- 99.09 0.90- 0.99 0.9 1.1
98.75- 98.99 1.00- 1.24 1.0 1.2
98.50- 98.74 1.25- 1.49 1.1 1.3
98.25- 98.49 1.50- 1.74 1.2 1.5
98.00- 98.24 1.75- 1.99 1.3 1.6
97.75- 97.99 2.00- 2.24 1.4 1.7
97.50- 97.74 2.25- 2.49 1.5 1.7
97.25- 97.49 2.50- 2.74 1.5 1.8
97.00- 97.24 2.75- 2.99 1.6 1.9
96.50- 96.99 3.00- 3.49 1.7 2.0
96.00- 96.49 3.50- 3.99 1.8 2.1
95.50- 95.99 4.00- 4.49 1.9 2.3
95.00- 95.49 4.50- 4.99 2.0 2.4
94.00- 94.99 5.00- 5.99 2.1 2.5
93.00- 93.99 6.00- 6.99 2.3 2.7
92.00- 92.99 7.00- 7.99 2.5 2.9
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Media de los dos ensayos Tolerancia
50-100% Menor del 50%
Semillas no vestidas
(non- chaffy)
Semillas vestidas
(chaffy)
1 2 3 4
91.00- 91.99 8.00- 8.99 2.6 3.1
90.00- 90.99 9.00- 9.99 2.8 3.2
88.00- 89.99 10.00-11.99 2.9 3.5
86.00- 87.99 12.00-13.99 3.2 3.7
84.00- 85.99 14.00-15.99 3.4 3.9
82.00- 83.99 16.00-17.99 3.5 4.1
80.00- 81.99 18.00-19.99 3.7 4.3
78.00- 79.99 20.00-21.99 3.8 4.5
76.00- 77.99 22.00-23.99 3.9 4.6
74.00- 75.99 24.00-25.99 4.1 4.8
72.00- 73.99 26.00-27.99 4.2 4.9
70.00- 71.99 28.00-29.99 4.3 5.0
65.00- 69.99 30.00-34.99 4.4 5.2
60.00- 64.99 35.00-39.99 4.5 5.3
50.00- 59.99 40.00-49.99 4.7 5.5
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Tabla B.V.3. Tolerancias para ensayos de pureza sobre dos muestras a enviar diferentes del mismo lote cuando el Segundo
ensayo lo realice el mismo o diferente laboratorio (test de una cola a un ni vel de significacin del 1%)
Esta tabla da las tolerancias para resultados de pureza realizados sobre dos muestras a enviar tomadas del mismo lote y analizadas en
el mismo o en diferente laboratorio. Se puede usar para cualquier componente del ensayo de pureza cuando el resultado del segundo
ensayo es peor que el primero. La tabla se usa entrando con la media de los dos resultados de ensayo (columnas 1 o 2). La tolerancia
apropiada se encuentra en las columnas 3 o 4, dependiendo si las semillas son o no cubiertas. Las tolerancias de las columnas 3 y 4
estn extradas de las columnas D y G respectivamente de la Tabla P1 de Miles (1963).
Media de los dos ensayos Tolerancia
50-100% Menor del 50%
Semillas no vestidas
(non- chaffy)
Semillas vestidas (chaffy)
1 2 3 4
99.95-100.00 0.00- 0.04 0.2 0.2
99.90- 99.94 0.05- 0.09 0.3 0.3
99.85- 99.89 0.10- 0.14 0.3 0.4
99.80- 99.84 0.15- 0.19 0.4 0.5
99.75- 99.79 0.20- 0.24 0.4 0.5
99.70- 99.74 0.25- 0.29 0.5 0.6
99.65- 99.69 0.30- 0.34 0.5 0.6
99.60- 99.64 0.35- 0.39 0.6 0.7
99.55- 99.59 0.40- 0.44 0.6 0.7
99.50- 99.54 0.45- 0.49 0.6 0.7
99.40- 99.49 0.50- 0.59 0.7 0,8
99.30- 99.39 0.60- 0.69 0.7 0.9
99.20- 99.29 0.70- 0.79 0.8 0.9
99.10- 99.19 0.80- 0.89 0.8 1.0
99.00- 99.09 0.90- 0.99 0.9 1.0
98.75- 98.99 1.00- 1.24 0.9 1.1
98.50- 98.74 1.25- 1.49 1.0 1.2
98.25- 98.49 1.50- 1.74 1.1 1.3
98.00- 98.24 1.75- 1.99 1.2 1.4
97.75- 97.99 2.00- 2.24 1.3 1.5
97.50- 97.74 2.25- 2.49 1.3 1.6
97.25- 97.49 2.50- 2.74 1.4 1.6
97.00- 97.24 2.75- 2.99 1.5 1.7
96.50- 96.99 3.00- 3.49 1.5 1.8
96.00- 96.49 3.50- 3.99 1.6 1.9
95.50- 95.99 4.00- 4.49 1.7 2.0
95.00- 95.49 4.50- 4.99 1.8 2.2
94.00- 94.99 5.00- 5.99 2.0 2.3
93.00- 93.99 6.00- 6.99 2.1 2.5
92.00- 92.99 7.00- 7.99 2.2 2.6
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Media de los dos ensayos Tolerancia
50-100% Menor del 50%
Semillas no vestidas
(non- chaffy)
Semillas vestidas (chaffy)
1 2 3 4
91.00- 91.99 8.00- 8.99 2.4 2.8
90.00- 90.99 9.00- 9.99 2.5 2.9
88.00- 89.99 10.00-11.99 2.7 3.1
86.00- 87.99 12.00-13.99 2.9 3.4
84.00- 85.99 14.00-15.99 3.0 3.6
82.00- 83.99 16.00-17.99 3.2 3.7
80.00- 81.99 18.00-19.99 3.3 3.9
78.00- 79.99 20.00-21.99 3.5 4.1
76.00- 77.99 22.00-23.99 3.6 4.2
74.00- 75.99 24.00-25.99 3.7 4.3
72.00- 73.99 26.00-27.99 3.8 4.4
70.00- 71.99 28.00-29.99 3.8 4.5
65.00- 69.99 30.00-34.99 4.0 4.7
60.00- 64.99 35.00-39.99 4.1 4.8
50.00- 59.99 40.00-49.99 4.2 5.0




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CAPTULO C: DETERMINACIN DE OTRAS SEMILLAS EN NMERO
(ANLISIS DE CONTEO)


1. GENERALIDADES 2
2. PROCEDIMIENTO 2
1.1. Muestra de trabajo 2
1.2. Determinacin 2
3. CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS 3
APNDICE C.I: TOLERANCIAS 4

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1. GENERALIDADES
El objeto de la determinacin de otras semillas en nmero es estimar el nmero de semillas de otras
especies indicado por el solicitante, bien de forma general (ej. todas las otras especies) o haciendo
referencia a una categora de semillas (ej. especies definidas como nocivas en determinados pases) o
de forma especfica.
En el comercio internacional de semillas, este anlisis se utiliza principalmente para determinar la
presencia de semillas de especies nocivas o indeseables.
La determinacin se lleva a cabo por conteo y se expresa como el nmero de semillas encontradas en
el peso examinado. Cuando en las semillas encontradas no se puedan identificar con certeza la
especie, se permite indicar nicamente el gnero.
El trmino otras semillas se refiere a especies distintas de las que se est realizando el anlisis.
Para la determinacin del nmero de otras semillas, se tendrn en cuenta las definiciones descritas en
el Anlisis de Pureza Especfica. El alcance de la determinacin de otras semillas se indicar como
anlisis completo, limitado o reducido, de la siguiente manera:
Un anlisis completo, es aquel en el que se analizan todas las otras semillas
presentes en la totalidad de la muestra de trabajo.
Un anlisis limitado, es aquel en el que el anlisis se restringe solo a las especies
indicadas por el solicitante, en la totalidad de la muestra de trabajo.
Un anlisis reducido, es aquel en el que se analiza solo parte de la muestra de
trabajo
Un anlisis reducido-limitado, es aquel en el anlisis se restringe solo a las
especies indicadas por el solicitante, analizadas en parte de la muestra de trabajo
prescrita.
Se pueden usar tamices, aventadores y otros aparatos mecnicos para facilitar al analista el examen
de la muestra y reduciendo as el trabajo.
2. PROCEDIMIENTO
1.1. Muestra de trabajo
a) El tamao de la muestra de trabajo debe ser, bien el peso que se estime contenga 25.000
unidades de semilla, o bien, no menos del peso prescrito en la Tabla 2A del Manual para
la Toma de Muestras (ver Anexo I).
b) Si alguna especie de las indicadas por el solicitante es difcil de identificar, solo se
analizar la quinta parte de del peso de la muestra de trabajo prescrito, para esa
determinada especie.
1.2. Determinacin
Se examinar la muestra de trabajo en busca de semillas de otras especies o solo semillas de
ciertas especies indicadas por el solicitante. Se cuenta el nmero de semillas encontradas
para cada especie.
Cuando la bsqueda se limita a ciertas especies, el examen se puede terminar cuando se
encuentren una o ms semillas de una o todas las especies indicadas (conforme a la peticin
del solicitante).
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3. CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS
El resultado se expresar como el nmero de semillas encontradas de cada una de las especies o
categoras indicadas, en la cantidad examinada. Adems, se puede calcular el nmero por unidad de
peso (ej. por kilogramo).
Si se lleva a cabo un segundo anlisis sobre la misma muestra, el resultado final se expresar como el
nmero total de semillas encontradas en el peso total examinado.
En la Boletn de Anlisis se indicar:
el peso real de la muestra examinada
el nombre cientfico
y el nmero de las semillas encontradas de cada especie
Se reflejar tambin si se ha realizado un anlisis completo, limitado, reducido o reducido limitado.
Para decidir si dos muestras son significativamente distintas, se usar la Tabla 4.1 del Anexo V, las
dos muestras sern, aproximadamente, del mismo peso.
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APNDICE C.I:
TOLERANCIAS
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Tabla 4.1. Tolerancias para la determinacin de otras semillas cuando los ensayos son realizados en la misma o diferente
muestra a enviar por el mismo o diferente laboratorio (test de dos colas a un ni vel de significacin del 5%)
Esta tabla da la mxima diferencia en el nmero de otras semillas, usada para decidir si los resultados de dos ensayos son
compatibles. Los ensayos son realizados sobre la misma o diferente muestra a enviar en el mismo o diferente laboratorio. Ambas
muestra tienen aproximadamente el mismo peso. La tabla se usa entrando en la media de los dos resultados de ensayo (columna 1) y
la diferencia mxima tolerada se encuentra en la columna 2.
La tolerancias estn sacadas de la Tabla F1b (semillas extraas) de Miles (1963)
Media de los
dos resultados
Tolerancia
Media de los
dos resultados
Tolerancia
Media de los
dos resultados
Tolerancia
1 2 1 2 1 2
3 5 76-81 25 253-264 45
4 6 82-88 26 265-276 46
5-6 7 89-95 27 277-288 47
7-8 8 96-102 28 289-300 48
9-10 9 103-110 29 301-313 49
11-13 10 111-117 30 314-326 50
14-15 11 118-125 31 327-339 51
16-18 12 126-133 32 340-353 52
19-22 13 134-142 33 354-366 53
23-25 14 143-151 34 367-380 54
26-29 15 152-160 35 381-394 55
30-33 16 161-169 36 395-409 56
34-37 17 170-178 37 410-424 57
38-42 18 179-188 38 425-439 58
43-47 19 189-198 39 440-454 59
48-52 20 199-209 40 455-469 60
53-57 21 210-219 41 470-485 61
58-63 22 220-230 42 486-501 62
64-69 23 231-241 43 502-518 63
70-75 24 242-252 44 519-534 64

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CAPTULO D: DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE AGUA.
ANLISIS DE HUMEDAD GENERALIDADES



1. GENERALIDADES 2
2. EQUIPO Y MATERIALES 2
2.1. Molino 2
2.2. Balanza analtica 3
2.3. Tamices 3
3. MTODO DE ANLISIS 3
3.1. La muestra de trabajo 3
3.2. Molienda 3
3.3. Pre-secado 4
3.4. Mtodo de la Estufa de Baja Temperatura Constante 4
3.5. Mtodo de la Estufa a Alta Temperatura Constante 5
4. CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS 5
APNDICE D.I 6
D.I.a: ESPECIES DE MOLIDO OBLIGATORIO
D.I.b: ESPECIES PARA LAS CUALES DEBE UTILIZARSE EL
MTODO DE BAJA TEMPERATURA CONSTANTE
D.I.c: ESPECIES PARA LAS CUALES DEBE UTILIZARSE EL
MTODO DE ALTA TEMPERATURA CONSTANTE

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1. GENERALIDADES
El objeto es la determinacin del contenido de humedad en la semilla, por mtodos
adecuados para su uso rutinario.
Los mtodos descritos estn diseados para reducir la oxidacin, descomposicin o prdida
de otras sustancias voltiles mientras que se asegura la eliminacin de la mayor cantidad de
agua posible.
2. EQUIPO Y MATERIALES
Dependiendo del mtodo utilizado, son necesarios los siguientes aparatos:
Un molino con ajuste del tipo de molienda
Una estufa de temperatura constante y accesorios entre los que deben estar
incluidos envases y un desecador
Una balanza de precisin
Tamices
2.1. Molino
Para la molienda se debe utilizar un molino con las siguientes caractersticas:
(a) Estar fabricado de material no absorbente
(b) Estar construido de tal manera que, durante la molienda, las semillas y el
material molturado estn protegidos del aire en la medida de lo posible.
(c) Que muela a una velocidad uniforme que no provoque el calentamiento
del material molturado y minimice las corrientes de aire que pudieran
causar prdidas de humedad.
(d) Que sea ajustable, de tal forma que se puedan obtener las dimensiones de
partcula indicadas en 3.2.
a) Estufa de temperatura constante y accesorios
La estufa puede ser de conveccin gravitatoria o de conveccin mecnica
(circulacin forzada). Se calentar elctricamente y se controlar por un termostato,
estar bien aislada y se podr mantener una temperatura razonablemente uniforme
en el interior de la cabina y la temperatura especificada a nivel de las bandejas.
Debe estar equipada con bandejas perforadas o de rejilla, con un termmetro de
precisin 0,5 C, el cual, estar situado cerca de la bandeja superior prximo a las
muestras. La capacidad calorfica debe ser tal que, tras alcanzar la temperatura
requerida, una vez abierta, cargada con los recipientes y cerrada de nuevo, la estufa
alcance de nuevo la temperatura requerida en no ms de 15 minutos.
Los recipientes sern de material no corrosible o de cristal de aproximadamente 0,5
mm de espesor y estarn provistos de una tapa ajustada para minimizar las prdidas
o ganancias de humedad. Deben tener los lados redondeados en la base y el fondo y
los bordes planos. Tanto el recipiente como su tapa deben estar numerados con el
mismo nmero. Antes de usarlo, secar el recipiente a 130 C, o por otro mtodo
equivalente y enfriarlo en un desecador.
La muestra de trabajo se distribuir por la superficie efectiva del recipiente, de
modo que no se superen los 0,3 g/cm2.
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El desecador estar provisto de un plato metlico ajustado, para provocar el rpido
enfriamiento de los recipientes, y contendr un desecante adecuado tal como
silicagel, pentxido de fsforo, almina activada, tamices moleculares tipo 4A,
pellets de 1,5 mm.
2.2. Balanza analtica
La balanza analtica debe ser de pesada rpida y de una precisin de 0,001g.
2.3. Tamices
Se requieren tamices de luz de malla de 0,5 mm, 1,00 mm y 4,00 mm.
3. MTODO DE ANLISIS
La muestra enviada slo se debe aceptar para la determinacin del contenido de
humedad si est en un envase intacto, protegido contra la humedad, y del que se ha
extrado la mayor cantidad de aire posible. Tras la recepcin, la determinacin se debe
comenzar tan pronto como sea posible. Durante la determinacin, la exposicin de la
muestra a la atmsfera del laboratorio se reducir al mnimo posible y, para especies
que no requieren molienda, no transcurrirn ms de dos minutos desde la extraccin de
la muestra del envase en el que se recibe, hasta que la muestra de trabajo se encuentre
en el envase de secado cerrado.
El pesado se realizar en gramos con tres cifras decimales.
3.1. La muestra de trabajo
La determinacin se llevar a cabo por duplicado en dos muestras que hayan
sido extradas independientemente, cuyo peso ser el siguiente, dependiendo del
dimetro del envase empleado:
Menos de 8 cm de dimetro - 4 a 5 g
8 cm de dimetro o ms - 10 g
Antes de tomar la muestra de trabajo, la muestra enviada debe ser mezclada
concienzudamente por uno de estos mtodos:
Remover la muestra en su envase con una cuchara
Situar la apertura del envase original enfrente de la apertura de un envase
de similares caractersticas y verter el contenido varias veces de uno a
otro de los envases
Cada una de las muestras de trabajo se debe obtener por uno de las mtodos
prescritos en el Manual de Muestreo (Anexo I), de manera que la muestra no se
exponga al aire ms de 30 segundos.
3.2. Molienda
Previamente a su desecacin, las semillas grandes deben ser molidas, a no ser
que, por su gran contenido en aceite, la molienda sea complicada.
La molienda es obligatoria en semillas de las especies de los gneros Triticum,
Hordeum, Avena y Zea
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Se debe realizar la molienda en una submuestra antes de extraer la muestra de
trabajo. Los tipos de molienda (fina o gruesa) y las caractersticas de cada una
de ellas se indican a continuacin:
Para cereales es necesaria la molienda fina; al menos el 50% del material
molturado debe pasar a travs de un tamiz de malla 0,50 cm y no ms del
10% debe permanecer en un tamiz de malla 1,00 mm.
Para leguminosas es necesaria la molienda gruesa; al menos el 50% del
material de molturacin debe pasar a travs de un tamiz de malla 4,00
mm.
Primero ajustar el molino para obtener partculas de las dimensiones requeridas,
moliendo una pequea cantidad de muestra y desechndola. Despus, moler una
cantidad de muestra ligeramente superior a la requerida para el ensayo.
3.3. Pre-secado
Si el contenido en humedad es mayor del 17% y necesitan molienda, es
obligatorio el pre-secado. Se sitan en envases tarados dos submuestras, cada
una de las cuales de 251 g. Las dos submuestras, con sus envases, se secan
hasta reducir el contenido de humedad por debajo del 17%. Los mtodos de pre-
secado se indican a continuacin:
En caso de semilla muy hmeda de Zea mays (contenido de humedad
superior al 25%) las semilla se esparce en una capa que no tenga ms de
20 mm de profundidad y se seca a 70 C durante 2-5 horas, dependiendo
del contenido inicial de agua.
En el caso de otras especies con un contenido de humedad superior al
30%, las muestras se pondrn a secar el da anterior en un sitio templado,
como por ejemplo, encima de una estufa en funcionamiento.
En otros casos, las muestras han de ser pre-secadas en una estufa de
temperatura constante a 130 durante 5-10 minutos, dependiendo de su
contenido en humedad. Entonces, el material parcialmente secado se
mantendr expuesto a la atmsfera del laboratorio durante dos horas.
Tras el pre-secado, las submuestras se vuelven a pesar con sus envases para
determinar la prdida de peso. A partir de este momento, las dos submuestras
pre-secadas, son inmediatamente molidas por separado, y el material resultante
de la molienda sometido al procedimiento adecuado de desecacin.
3.4. Mtodo de la Estufa de Baja Temperatura Constante
La muestra de trabajo se distribuir uniformemente sobre la superficie del
envase. Pesar el envase con su tapa antes y despus de llenarlo. Rpidamente,
situar el envase, dispuesto sobre su tapa, en una estufa a temperatura de 1032
C y secar por un periodo de 171 horas. El periodo de secado comienza cuando
la estufa alcanzar la temperatura deseada. Al final del periodo recomendado,
tapar el envase y situarlo en un desecador durante 30-45 minutos para enfriarlo.
Tras enfriarlo, pesar el envase con su contenido y tapa. Cuando se lleva a cabo
esta determinacin, la humedad ambiente en el laboratorio debe estar por debajo
del 70%.

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3.5. Mtodo de la Estufa a Alta Temperatura Constante
La muestra de trabajo se distribuir uniformemente sobre la superficie del
envase. Pesar el envase con su tapa antes y despus de llenarlo. Rpidamente,
situar el envase, dispuesto sobre su tapa, en una estufa a temperatura de 130
133 C y secar por un periodo de cuatro horas para Zea Mays, dos horas para
otros cereales y una hora para otras especies. El periodo de secado comienza
cuando la estufa alcanza la temperatura deseada. Al final del periodo
recomendado, tapar el envase y situarlo en un desecador durante 30-45 minutos
para enfriarlo.
Tras enfriarlo, pesar el envase con su contenido y tapa. Cuando se lleva a cabo
esta determinacin, la humedad ambiente en el laboratorio debe estar por debajo
del 70%.
4. CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS
El contenido de humedad como porcentaje en peso con una sola cifra decimal,
se calcular mediante la siguiente frmula:
( )
( )
1 2
3 2
100
M M
M M



Donde,
M1 es el peso en gramos del envase con su tapa,
M2 es el peso en gramos del envase, su tapa y su contenido antes del secado,
y
M3 es el peso en gramos del envase, su tapa y su contenido tras el secado
Si el material es pre-secado, el contenido de humedad se calcula a partir de los
resultados obtenidos en la primera (pre-secado) y segunda etapa del proceso. Si
S1 es la humedad perdida en la primera fase, y S2 es la humedad perdida en la
segunda fase, cada una de las cuales calculada tal y como se describe ms arriba
y expresadas en porcentaje, entonces el contenido de humedad de la muestra
original en porcentaje ser:
( )
( )
100
2 1
2 1
S S
S S

+

A continuacin, se realiza la media de la humedad obtenida para las 2
determinaciones y se anota en la casilla Media de las dos Determinaciones del
boletn de anlisis.
El resultado del ensayo de humedad se indica en la casilla superior Resultado
del boletn de anlisis y se indicar el dato resultante de la media de las dos
determinaciones con una cifra decimal.
La diferencia de humedad entre las dos determinaciones obtenidas no puede ser
superior a 0,2%.
Si los resultados calculados difieren en ms de 0,2%, el ensayo debe repetirse.
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APNDICE D.I


D.I.a: especies de molido obligatorio

D.I.b: especies para las cuales debe utilizarse el mtodo de
baja temperatura constante

D.I.c: especies para las cuales debe utilizarse el mtodo de alta
temperatura constante
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Tabla D.I.a. Especies para las cuales el molido es obligatorio

Amorpha fruticosa Gossypium spp. Pisum sativum (todas las
variedades)
Arachis hypogea Hordeum vulgare Ricinus communis
Avena spp. Lathyrus spp. Secale cereale
Cicer arietinum Lupinus spp. Sorghum spp.
Citrullus lanatus Macroptilum
atropurpureum
Triticum spp.
Fagopyrum
esculentum
Oryza sativa Vicia spp.
Glycine max Phaseolus spp Vigna spp.
Zea mays


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Tabla D.I.b:
ESPECIES PARA LAS CUALES DEBE UTILIZARSE EL MTODO DE
BAJA TEMPERATURA CONSTANTE










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Tabla D.I.c:
ESPECIES PARA LAS CUALES DEBE UTILIZARSE EL MTODO DE
ALTA TEMPERATURA CONSTANTE


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CAPTULO E: GERMINACIN


1. GENERALIDADES. 2
Plntulas normales .........................................................................................2
Plntulas anormales .......................................................................................5
Semillas no germinadas .................................................................................9
2. DESCRIPCIN DE MATERIALES Y EQUIPOS 10
2.1. Materiales 10
2.1.a. Sustratos ....................................................................................10
2.1.b. Agua...........................................................................................11
2.2. Equipos 11
2.2.a. Equipos de conteo......................................................................11
2.2.b. Equipos de germinacin.............................................................12
3. Mtodo de anlisis 12
3.1.a. Muestra de trabajo.....................................................................12
3.1.b. Condiciones de ensayo..............................................................12
3.1.c. Eleccin del mtodo...................................................................15
3.1.d. Mtodos para promover la germinacin.....................................15
3.1.e. Mtodos para romper la latencia fisiolgica...............................15
3.1.f. Mtodos para eliminar la dureza de las semillas .......................16
3.1.g. Duracin del ensayo...................................................................17
3.1.h. Evaluacin..................................................................................17
3.1.i. Semillas no germinadas.............................................................17
3.1.j. Repeticin del ensayo................................................................18
4. CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS 18
4.1. Procedimiento de redondeo 18
4.2. Registro de resultados en el Boletn de Anlisis 19
APNDICES:
APNDICE E.I: SUSTRATOS Y MTODOS 20
APNDICE E.II: GLOSARIO 26
APNDICE E.III: PLNTULAS TIPO 33
APNDICE E.V: TOLERANCIAS 40

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1. GENERALIDADES.
El objeto del ensayo de germinacin es determinar el potencial mximo de germinacin de un lote de
semillas, el cual, puede ser usado para comparar la calidad de los diferentes lotes, as como, estimar
su desarrollo en campo.
El objeto de los mtodos de laboratorio, en lo que a ensayos de germinacin se refiere, consiste en el
control de las condiciones externas para dar una germinacin ms regular, rpida y completa para la
mayora de las muestras de una especie en particular. Las condiciones han sido normalizadas en base
a los criterios establecidos por las Reglas Internacionales de Ensayo de Semillas de la ISTA.
Los ensayos de germinacin se realizarn con semilla pura. Para cada especie, se aplicar la
definicin de semilla pura correspondiente. Esta semilla pura puede tomarse bien de la fraccin de
semilla pura de los ensayos de pureza llevados a cabo, o de una fraccin representativa de la muestra
enviada.
Las semillas no recibirn pre-tratamientos excepto aquellos recomendados en el punto 3.c. Estn
permitidos los ensayos paralelos o duplicados, las reglas para registrar los segundos ensayos estn
definidas ms adelante.
Las semillas, distribuidas en repeticiones, se ensayarn en condiciones favorables de humedad y
segn los mtodos descritos por la en los mtodos especficos de cada especie descritos en el
Apndice I. Tras la finalizacin del ensayo, se examinarn y se contarn las plntulas y las semillas
clasificndolas en las distintas categoras requeridas para su registro.
La germinacin de una semilla en un laboratorio de ensayo es la emergencia y desarrollo de la
plntula a un estado donde el aspecto de sus estructuras esenciales indica si es o no posible
desarrollarse en una planta normal en condiciones favorables en el suelo.
El porcentaje de germinacin de un ensayo, indica la proporcin de semillas que han producido
plntulas clasificadas como normales bajo las condiciones y periodos de ensayo definidos en la
Mtodos especficos para cada especie (apndice I).
Una plntula, dependiendo de la especie ensayada, consta de una combinacin especfica de alguna
de las siguientes estructuras esenciales para su desarrollo posterior:
Sistema radicular (races primarias; en ciertos casos races seminales).
Eje del brote (hipocotilo; epicotilo; en ciertos casos Poaceae [Gramineae]
mesocotilo; yema Terminal).
Cotiledones (uno o varios).
Coleoptilo (en todas las Poaceae [Gramineae]).
Plntulas normales
Las plntulas normales son aquellas que muestran potencial para su desarrollo en plantas
normales, cuando crecen en suelos de buena calidad y bajo condiciones favorables de
humedad, temperatura y luz. Para ser clasificada como normal una plntula debe pertenecer a
alguna de las siguientes categoras:
1. Plntulas intactas: Plntulas con todas sus estructuras esenciales bien
desarrolladas, completas, proporcionadas y sanas.
Una plntula intacta, dependiendo de la especie ensayada, presenta una
combinacin especfica de alguna de las siguientes estructuras esenciales:
Un sistema radicular bien desarrollado consta de:
o Una raz primaria larga y delgada, generalmente cubierta con
numerosos pelos radicales, y acabada en una punta delgada.
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o Races secundarias desarrolladas dentro del periodo prescrito para el
ensayo.
o Varias races seminales en vez de una raz primaria en ciertos
gneros, incluyendo Avena, Hordeum, Secale, Triticum,
xTriticosecale.

Un tallo bien desarrollado consta de:
o Un hipocotilo recto y generalmente delgado y alargado en plntulas
que muestran germinacin epigea.
o Un epicotilo bien desarrollado en plntulas que muestran
germinacin hipogea
o Un epicotilo e hipocotilo alargado en algunos gneros con
germinacin epigea.
o Un mesocotilo alargado en ciertos gneros de Poaceae (Gramineae).
Un nmero especfico de cotiledones, p.e:
o Un cotiledn en monocotiledneas o excepcionalmente en
dicotiledneas (puede ser verde y con forma de hoja o modificado y
permanece total o parcialmente dentro de la semilla).
o Dos cotiledones en dicotiledneas (en especies con germinacin
epigea son verdes y con forma de hoja, el tamao y la forma varan
con la especie ensayada y en plntulas que presentan germinacin
hipogea son hemisfricos y carnosos y permanecen dentro de la
cubierta de la semilla).
Hojas primarias verdes y extendidas
o Una hoja primaria, algunas veces precedida por hojas rudimentarias
en plantas que presentan hojas alternas o
o Dos hojas primarias en plntulas con hojas opuestas.
Una yema terminal o eje apical con desarrollo variable segn la especie
ensayada.
Un coleoptilo bien desarrollado y recto en Poaceae (Gramineae),
conteniendo una hoja verde que se extiende hasta la punta y finalmente
saliendo a travs del mismo.
2. Plntulas con ligeros defectos: Plntulas que muestran ciertos defectos en sus
estructuras esenciales, que presentan un desarrollo satisfactorio y equilibrado
semejante al de las plntulas intactas del mismo ensayo.
Se consideran ligeros los siguientes defectos:
Raz primaria con daos limitados o ligero retraso en el crecimiento.
Raz primaria defectuosa pero con suficiente buen desarrollo.
Races secundarias en gneros especficos como Poaceae (Gramineae) (p.e.
Zea).
Slo una raz seminal fuerte en: Avena, Hordeum, Secale, Triticum,
xTriticosecale.
Hipocotilo, epicotilo o mesocotilo con daos limitados.
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Cotiledones con daos limitados (si la mitad o ms del total del rea del
tejido funciona normalmente [regla del 50%] y si no hay evidencia de dao o
podredumbre en el sistema apical o en los tejidos circundantes).
Hojas primarias con daos limitados (si la mitad o ms del rea total del
tejido funciona normalmente [regla del 50%]).
Coleptilo con daos limitados.
Coleptilos con una hendidura desde el extremo superior hacia abajo no ms
de un tercio de la longitud (para Zea mays; plntulas con coleptilos
defectuosos descritos en la Figura 1a pueden ser clasificadas como normales
si la primera hoja est intacta o slo ligeramente daada como se define en
la figura 1b).
Coleptilo ligeramente retorcido o formando un lazo (porque est atrapado
por la lemma y la palea o cubierta del fruto.
Coleptilo con hoja verde que no llega hasta el extremo pero que al menos
alcanza la mitad de la longitud del coleptilo.
3. Plntulas con infeccin secundaria: Plntulas en las que es evidente que se
encuadran dentro de los puntos anteriores pero que han sido afectadas por hongos
o bacterias cuyo foco es distinto al de la semilla de la que proceden.
Plntulas que estn seriamente podridas por hongos o bacterias se clasifican como
normales, si es evidente que la semilla de la que proceden no es la fuente de la
infeccin, y si se puede determinar que todas las estructuras esenciales estaban
presentes.
Figura 1a y 1b. Evaluacin de coleptilo en maz.
Figura 1a: Defectos en el coleptilo. Para definir si las plntulas son normales (con ligeros
daos) o anormales hay que evaluar la primera hoja.
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Figura 1b: Si la primera hoja est intacta o ligeramente daada se clasifican como plntula
normal.

Plntulas anormales
Las plntulas anormales son aquellas que no muestran potencial para desarrollarse en
plantas normales, cuando crecen en un suelo de buena calidad y bajo condiciones favorables
de humedad, temperatura y luz. Se clasifican como anormales las siguientes plntulas:
Plntulas daadas: Plntulas que carecen de cualquiera de las estructuras esenciales o
estn muy daadas o tan irreparablemente daadas que no se puede esperar un
desarrollo equilibrado.
Plntulas deformadas o desequilibradas: Plntulas con desarrollo dbil o alteraciones
fisiolgicas, o bien en las que las estructuras esenciales estn deformadas o
desproporcionadas.
Plntulas podridas: Plntulas con cualquiera de sus estructuras esenciales tan
enfermas o podridas como resultado de una infeccin primaria (la que tiene el foco
infeccioso en la propia semilla de la que procede la plntula) que impide su
desarrollo normal.
Una o una combinacin de los siguientes defectos en la plntula la convierten en anormal.
I. Raz primaria:
1. Atrofiada
2. Mazuda
3. Raqutica
4. Ausente
5. Rota
6. Hendida desde el extremo
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7. Con constriccin
8. Ahilada
9. Atrapada en la cubierta de la semilla
10. Con geotropismo negativo.
11. Vtrea
12. Podrida como resultado de una infeccin primaria.
Races seminales:
1. Slo una raz seminal dbil o ninguna
Nota:
Las races secundarias o seminales que presentan uno o ms de los siguientes
defectos definidos anteriormente y que no pueden sustituir a una raz
primaria anormal, en los casos donde la presencia de varias races
secundarias o al menos una raz seminal fuerte es indispensable (p.e.
Triticum).
II. Hipocotilo, epicotilo y mesocotilo:
1. Corto y grueso
2. Sin formar un tubrculo
3. Profundamente agrietado o roto
4. Hendidura longitudinal
5. Ausente
6. Con constriccin
7. Estrechamente retorcido
8. Curvado
9. Formando un lazo o espiral
10. Ahilada
11. Vtreo
12. Podrido como resultado de una infeccin primaria.
III. Cotiledones (aplicar la regla del 50%)
1. Hinchados u ondulados
2. Deforme
3. Roto u otros daos similares
4. Separado o ausente
5. Decolorado
6. Necrtico
7. Vtreo
8. Podrido como resultado de una infeccin primaria
Nota: dao o podredumbre de los cotiledones en el punto de unin del eje de
la plntula o adyacente al brote apical dan lugar una plntula anormal, con
independencia de la regla del 50%.
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IV. Hojas primarias (aplicar la regla del 50%)
1. Deformes
2. Daadas
3. Ausentes
4. Decoloradas
5. Necrticas
6. Podridas como resultado de una infeccin primaria
7. Forma normal pero menor de del tamao normal
V. Yema terminal y tejidos circundantes:
1. Deformes
2. Daadas
3. Ausentes
4. Podridas como resultado de una infeccin primaria
VI. Coleptilo y primera hoja (Poaceae [Gramineae])
El coleptilo para todas las especies excepto Zea mays:
1. Deforme
2. Daado
3. Ausente
4. Con el extremo daado o ausente
5. Fuertemente curvado
6. Formando un lazo o espiral
7. Estrechamente retorcido
8. Hendido ms de 1/3 de la longitud desde el borde
9. Hendidura en la base
10. Ahilado
11. Podrido como resultado de una infeccin primaria
Primera hoja:
1. Extendida menos de la mitad del coleptilo
2. Ausente
3. Fragmentada u otra deformidad similar
Coleptilo y primera hoja en Zea mays:
1. Si al efectuar la evaluacin, la primera hoja ha emergido, la plntula
se considera anormal si el coleoptilo tiene alguno de los siguientes
defectos con dao en la primera hoja tal y como se define en la
Figura 2:
a) Coleptilo hendido ms de 1/3 de la longitud desde el borde
b) Coleptilo torcido
c) Coleptilo con el extremo daado o ausente
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d) Coleptilo hendido en cualquier posicin debajo del extremo

Figura 2. Coleptilo slo para Zea mays:
Figura 2a: Defectos en el coleptilo. Para definir si las plntulas son normales (con ligeros
daos) o anormales hay que evaluar la primera hoja.

Figura 2b: Si la primera hoja est daada se clasifican como plntula anormal.

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2. Si la primera hoja no ha emergido a la vez de la evaluacin:
a) El extremo del coleptilo daado o ausente
b) Coleptilo hendido ms de 1/3 de la longitud desde el
extremo
3. Si la hoja sobresale debajo del extremo del coleptilo
VII. Plntulas en conjunto
1. Deforme
2. Fracturada
3. Cotiledones emergiendo antes que la raz
4. Dos fusionadas
5. Persistencia del collar endosprmico
6. Amarilla o blanca
7. Ahilada
8. Vtrea
9. Podrida como resultado de una infeccin primaria
Semillas no germinadas
Las semillas que no han germinado al final del ensayo cuando han sido ensayadas bajo las
condiciones dadas en los mtodos especficos para cada especie (ver Apndice I), se
clasifican como:
1. Semillas duras: Semillas que permanecen duras al final del periodo de ensayo,
porque no han absorbido agua. La dureza es una forma de latencia. Es comn en
muchas especies de Fabaceae (Leguminosae) pero tambin puede ocurrir en otras
familias. Estas semillas no pueden embeberse de agua bajo las condiciones
establecidas y permanecen duras.
2. Semillas frescas: Semillas, distintas de las semillas duras, que no han germinado
bajo las condiciones del ensayo de germinacin, pero que permanecen sanas y
firmes y tienen el potencial para desarrollarse en una plntula normal. Las semillas
frescas pueden embeberse de agua cuando se las proporciona las condiciones
establecidas pero el proceso de germinacin est bloqueado.
3. Semillas muertas: Semillas que al final del periodo del ensayo no estn ni duras ni
frescas ni han producido ninguna estructura de la plntula. Las semillas muertas
normalmente estn blandas, decoloradas, frecuentemente enmohecidas.
4. Otras categoras: en algunas circunstancias o para determinados grupos de
especies, semillas vacas y no germinadas podran clasificarse en otras categoras,
como son:
Semillas vacas (semillas que estn completamente vacas o
contienen solamente tejido residual).
Semillas sin embrin (semillas que contienen endospermo fresco o
tejido gametoftico en el cul no hay, aparentemente, cavidad
embrional ni embrin.
Semillas daadas por insectos (semillas que contienen larvas, restos
o excrementos de insectos, o bien, presentan otras evidencias de
ataques que afectan la capacidad de las semillas para germinar).
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2. DESCRIPCIN DE MATERIALES Y EQUIPOS
Los sustratos que se utilizan para los ensayos de germinacin son papel, arena y medio de
crecimiento orgnico.
2.1. Materiales
2.1.a. Sustratos
Productos que tienen el suficiente espacio de poro para el aire y el agua, as como sujecin
del sistema radicular y para contacto con las soluciones (agua) necesarias para el crecimiento
de la planta.
Las siguientes especificaciones se aplican para todos los sustratos: papel, arena y medio de
crecimiento orgnico.
Composicin: el sustrato puede ser papel, tierra o mezclas de compuestos
orgnicos con partculas minerales.
Caractersticas de retencin de agua: cuando se aade la cantidad adecuada de
agua, las partculas del sustrato deberan tener la capacidad suficiente como para
proporcionar un movimiento continuo del agua a las semillas y las plntulas, as
como, proporcionar un espacio suficiente de poro para, la aireacin necesaria, una
ptima germinacin y crecimiento de la raz. A priori, el contenido de agua del
sustrato se ajustar a la capacidad mxima de agua que pueda retener. Cuando sea
necesario, para ciertas especies, se puede ajustar a las especies particulares que
corresponda. La retencin de agua se expresar en porcentaje de la retencin
mxima.
pH: El sustrato deber tener un valor entre 6.0-7.5 medido a nivel de sustrato.
Conductividad: La salinidad deber ser tan baja como sea posible y no mayor de
40 miliSiemens por metro (mS/m).
Limpieza y toxicidad: el sustrato debe estar libre de semillas, hongos, bacterias o
sustancias txicas, que puedan interferir en la germinacin de las semillas, el
crecimiento de las plntulas o su evaluacin.
Re-utilizacin de los sustratos: es altamente recomendable que el sustrato se use
solo una vez.
Alternativa. A veces es difcil comprobar todas las especificaciones o conseguir
un sustrato de los proveedores con las especificaciones requeridas. No obstante,
se permite cambiar la medida de la conductividad con ensayos biolgicos para
detectar fitotoxicidad. En caso contrario, deben verificarse todos los requisitos
expuestos anteriormente.

Sustrato en papel:
El papel deber proceder de madera, algodn u otra celulosa vegetal purificada. Formato de
papel de filtro, papel secante o toallas. El papel deber ser de tal que:
Las races de las plntulas crezcan sobre y no dentro del papel.
y posean la suficiente consistencia para resistir la rotura cuando se manipule
durante el ensayo.
Sustrato en arena:
La arena ser razonablemente uniforme y libre de partculas muy grandes o muy pequeas.
Es preferible que las partculas sean redondas y se recomienda que se evite la arena con
partculas afiladas que puedan daar el desarrollo de las plntulas. Se recomienda que el 90%
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de las partculas debern pasar a travs de un tamiz de luz de malla de 0.8 mm y sea retenida
por un tamiz de luz de malla de 0.05 mm.
Medio de crecimiento orgnico:
El medio se define como el conjunto de los siguientes elementos en proporciones conocidas
y cumpliendo con los requisitos anteriormente descritos:
Compuestos orgnicos: fibras como la turba, fibras de coco y/o fibras de
madera, con un tamao menor de 5 mm.
Partculas minerales: por ejemplo arena, perlita y/o vermiculita. La
proporcin deber estar alrededor del 20% en volumen. Se recomienda que
el 90% de las partculas pasen a travs de un tamiz de luz de malla de 2 mm
y sea retenido en un tamiz de luz de malla de 0.05 mm.
2.1.b. Agua
Se usa normalmente agua desmineralizada, desionizada, del grifo y corriente. El
agua utilizada tienen que cumplir las siguientes especificaciones:
Limpieza: el agua usada para humedecer el sustrato deber estar
razonablemente libre de impurezas orgnicas e inorgnicas.
pH: el pH deber estar entre 6.0-7.5 a nivel de sustrato o se deber
comprobar estadsticamente que no hay influencia del pH, fuera de
este rango, en los resultados de los ensayos de germinacin.
2.2. Equipos
2.2.a. Equipos de conteo
Se usan frecuentemente dos tipos de contadores de semillas: tablas para contar y
contadores de vaco.
1. Tablas para contar
Las tablas para contar generalmente se usan para semillas grandes tales como Zea
mays. La tabla para contar es aproximadamente del tamao del sustrato en el que se
van a colocar las semillas. La parte superior consta de una tabla de 50 o 100 agujeros
del tamao de las semillas a contar. En la parte de abajo de la tabla hay otra tabla que
sirve como falso fondo; puede deslizarse hacia delante y hacia atrs. En la operacin
las semillas se esparcen sobre la tabla con los agujeros cerrados. Se retira el exceso
de semillas despus de comprobar que todos los agujeros estn llenos y que
solamente hay una semilla en cada agujero. Los agujeros se abren deslizando la tabla
mvil, y las semillas caen colocadas sobre el sustrato.
2. Contadores de vaco
Los contadores de vaco son los ms usados para especies con una forma regular y
relativamente lisas, tales como los cereales. Un contador de vaco consta de tres
partes esenciales: un sistema de vaco incluyendo tuberas que no restrinjan el flujo
de aire, un conjunto de platos o cabezas contadoras adecuadas al tipo de semillas
ensayadas y al tamao del sustrato de germinacin, y una vlvula de descarga de
vaco. Se puede usar como sistema de vaco un aspirador domstico. Las cabezas,
con 50 o 100 agujeros, debern ser ligeramente ms pequeas que el sustrato y
debern tener una pestaa para prevenir que las semillas rueden hacia el exterior. El
dimetro de de los agujeros deber corresponderse con el tamao de la semilla y el
vaco aplicado.
En la operacin las semillas son vertidas uniformemente sobre la cabeza contadora
con el vaco desconectado. Posteriormente, el excedente de semilla se retira
comprobando que todos los agujeros estn llenos y solamente haya una semilla en
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cada agujero. La cabeza se coloca sobre el sustrato de germinacin y se interrumpe
el vaco para que las semillas caigan colocadas sobre el sustrato.
2.2.b. Equipos de germinacin
1. Aparato de campanas o J acobsen (tabla Copenhague)
Este equipo normalmente consta de una placa de germinacin sobre la cul se coloca
un sustrato de papel de filtro con las semillas. El sustrato se mantiene continuamente
hmedo por medio de mechas, que se extienden hacia abajo por las hendiduras o
agujeros de las placas de germinacin hasta un bao de agua situado debajo. Para
evitar que se seque el sustrato, se cubre con una campana provista con un agujero
para permitir la ventilacin sin exceso de evaporacin. La temperatura est
condicionada indirectamente por el calentamiento/refrigeracin del agua del bao o
directamente por las condiciones de la placa de germinacin que normalmente estn
reguladas automticamente. Los equipos pueden usarse para todas las temperaturas
constantes o alternas prescritas, aunque el rango de temperaturas puede ser posible
alcanzarlo sobre un equipo J acobsen concreto, este puede estar limitado por su
diseo.
2. Cabinas de germinacin
Otro tipo de equipos son las cabinas cerradas para germinacin de semillas con o sin
luz. Las cabinas modernas estn bien aisladas y tienen sistemas de calefaccin y
refrigeracin.. Los modelos adecuados estn disponibles para temperaturas
constantes o variables, cubriendo todo el rango requerido. La temperatura en la
cabina se puede mantener por circulacin de agua, de aire o ambos. Si el equipo
disponible es solamente capaz de proporcionar temperatura constante, se debern
cambiar los ensayos, de una cabina a otra con diferente temperatura, para conseguir
el ciclo alternativo deseado. Las cabinas con control de humedad permiten que los
ensayos se puedan realizar al descubierto sin que se sequen (cabinas hmedas). Sin
embargo, no todas las llamadas cabinas hmedas mantienen la suficiente humedad y
en caso de duda sobre el nivel de humedad, es preferible cubrir los ensayos con
envases hermticos. Los ensayos en cabinas secas debern realizarse cubiertos.
3. Cmaras de germinacin
Las cmaras de germinacin son una modificacin de las cabinas. Estn construidas
bajo los mismos principios, pero son lo suficientemente grandes como para permitir
que el personal entre y coloque los ensayos en los laterales de un pasillo central. Por
otra parte, en algunas cmaras, los ensayos pueden colocarse en carritos que se
conduzcan al interior de la cmara durante el periodo de ensayo. A no ser que los
ensayos estn cubiertos con envases hermticos, las cmaras debern tener instalados
humidificadores para mantener un nivel alto de humedad.
3. Mtodo de anlisis
3.1.a. Muestra de trabajo
Se toman al azar 400 semillas de la fraccin de semilla pura en repeticiones de 100 y
se colocan uniformemente, con la adecuada separacin sobre el sustrato humedecido.
Las repeticiones pueden dividirse en sub-repeticiones de 50 o 25 semillas
dependiendo del tamao de las semillas y del espacio entre ellas.
Las unidades de semillas multigermen no se separan para el ensayo de germinacin y
se ensayan como si fueran semillas individuales.
3.1.b. Condiciones de ensayo
Los sustratos permitidos, temperaturas, duracin y directrices adicionales,
incluyendo los tratamientos adicionales recomendados para semillas latentes se
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indican en los mtodos especficos para cada esepecie. Solo podrn utilizarse los
sustratos, temperaturas y duracin de los ensayos indicados prescritos.
3.1.b.1. Sustrato
Mtodos en los que se usa papel
1. TP ( del ingles top of paper, sobre papel)
Las semillas se ponen a germinar sobre una o ms capas de papel y se
colocan:
Sobre un equipo de los anteriormente descritos
En cajas trasparentes o placas Petri. Se aade la cantidad adecuada
de agua al comenzar el ensayo y se puede minimizar la evaporacin
con una tapa adecuada que cierre hermticamente o tapando las
cajas con bolsas de plstico.
Directamente sobre las bandejas en las cabinas de germinacin. La
humedad relativa en la cabina debe mantenerse lo ms cercana
posible a saturacin para evitar la deshidratacin. Pueden usarse
como base los sustratos de papel poroso o algodn absorbente
hmedos.
2. BP (del ingles between paper, entre papel)
Las semillas se ponen a germinar entre dos capas de papel. Esto se puede
conseguir:
Cubriendo sin apretar las semillas con una capa de papel de filtro
Colocando las semillas en pliegos doblados que se pueden colocar
en horizontal o en vertical.
Colocando las semillas en pliegos enrollados (los rollos debern ser
colocados en posicin vertical).
El sustrato se mantendr en cajas cerradas, envuelto en bolsas de plstico o
colocado directamente sobre las bandejas en una cabina de germinacin, la
humedad relativa en el germinador se tiene que mantener cerca de la
saturacin.
3. PP (del ingles pleated paper, papel acorden o plisado)
Las semillas se colocan en uno de los pliegues de un papel plegado en
acorden con 50 pliegues, normalmente 2 semillas por pliegue. Los papeles
plegados se colocan en cajas o directamente en una cabina hmeda,
envueltos con otra capa de papel para asegurar condiciones de humedad
uniformes. Este mtodo puede usarse como alternativa cuando se prescribe
TP o BP.
Mtodos en los que se usa como substrato arena o medio de crecimiento
orgnico
La arena y el medio de crecimiento orgnico se utilizan como se detalla a
continuacin:
4. TS (del ingles top of sand, sobre arena) o TO (del ingles top of organic
growing medium, sobre medio de crecimiento orgnico)
Las semillas se presionan sobre la superficie de la arena o del medio de
crecimiento orgnico
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5. S (del ingles in sand, en arena) u O (del ingles organic growing mdium,
en medio de crecimiento orgnico)
Las semillas se siembran sobre una capa de arena hmeda o bien sobre el
medio de crecimiento orgnico y cubiertas con 10-20 mm de sustrato sin
comprimir. Para asegurar una buena aireacin se recomienda que la capa
inferior se suelte rastrillndola antes de sembrarla.
La arena o el medio de crecimiento orgnico pueden usarse en vez del papel,
incluso si no estn prescitos en los mtodos especficos para cada especie
(Apndice I), en los siguientes casos:
Cuando la evaluacin de una muestra enferma resulta impracticable
porque la infeccin se ha extendido entre las semillas y las plntulas
sobre el sustrato papel;
Con el propsito de investigar y confirmar la evaluacin de las
plntulas en casos dudosos;
Cuando las plntulas presenten sntomas de fitotxicidad.
Mtodos en los que se utiliza tierra
La tierra, generalmente, no se recomienda como medio de crecimiento
primario. No obstante, se puede usar como alternativa al medio de
crecimiento orgnico cuando las plntulas presentan sntomas de
fitotxicidad o si la evaluacin de las plntulas es dudosa sobre papel o
arena.
3.1.b.2. Humedad y aireacin
Se deben tomar precauciones para asegurarse que el medio no se seque y que
se suministre la cantidad de agua suficiente de manera contnua, durante el
periodo del ensayo. Se evitarn riegos siempre que sea posible ya que
pueden incrementar la variabilidad entre repeticiones y ensayos.
Normalmente, las medidas especiales de aireacin no son necesarias, para
ensayo TP y PP realizados en cajas o placas Petri. Sin embargo, para BP se
tendr cuidado de que el papel doblado y los rollos estn lo suficientemente
flojos para permitir una aireacin suficiente alrededor de las semillas. Por la
misma razn el material que cubre las semillas en los ensayos en arena y en
medio de crecimiento orgnico no se deben comprimir.
3.1.b.3. Temperatura
Las temperaturas prescritas en los mtodos especficos para cada especie son
aquellas a las que se expondrn las semillas a nivel de sustrato. Ser tan
uniforme como sea posible en todo el equipo de germinacin, cabina o
cmara de germinacin. Se recomienda que los ensayos, ya sea en oscuridad
o bajo una luz artificial o luz diurna indirecta, la variacin de la temperatura
prescrita debida la aparato no sea mayor de 2C.
Cuando se indica alternancia de temperatura, la temperatura ms baja deber
normalmente mantenerse durante 16 horas y la mayor durante 8 horas. Un
cambio gradual durante tres horas puede ser suficiente, pero para semillas
que presentan latencia puede ser necesario un cambio brusco durante una
hora o menos o cambiar el ensayo a otro germinador a menor temperatura.
3.1.b.4. Luz
Las semillas de la mayora de las especies pueden germinar tanto con luz
como en oscuridad. No obstante, se recomienda la iluminacin del sustrato
con una fuente artificial o por luz diurna indirecta, ya que produce un mejor
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desarrollo de las plntulas, que facilita la evaluacin. Las plntulas que se
desarrollan en completa oscuridad suelen aparecer etioladas y blancas y son
ms sensibles al ataque de microorganismos. Adems, ciertos defectos,
como la deficiencia de clorofila, no se pueden detectar.
3.1.c. Eleccin del mtodo
Cuando se dan mtodos alternativos, se usar uno de ellos (cualquier combinacin de
sustrato y temperatura). La eleccin del mtodo depender principalmente de los
medios y experiencia del laboratorio de ensayos y por extensin de la procedencia y
condiciones de la muestra. Si ocasionalmente una muestra no responde
satisfactoriamente al mtodo seleccionado, ser necesario hacer un segundo ensayo
por uno o ms mtodos alternativos.
3.1.d. Mtodos para promover la germinacin
Cuando aparecen semillas duras o frescas al finalizar del periodo de ensayo, se
puede llevar a cabo un nuevo ensayo bien despus de un periodo de almacenamiento
en seco o por aplicacin de uno de los tratamientos indicados en los mtodos
especficos para cada especie y descritos ms adelante. Estos tratamientos especiales
pueden tambin aplicarse al ensayo original cuando se sospeche la presencia de
latencia.
Para algunas semillas de rboles y arbustos donde se sabe por experiencia que una
proporcin de semillas no germinar debido a la latencia, se prescribe un segundo
ensayo incorporando un tratamiento especial, el cul preferiblemente se har al
mismo tiempo que el ensayo normal.
Por disrintas razones (p.e. latencia fisiolgica, dureza, sustancias inhibidoras) un
considerable nmero de semillas pueden permanecer duras o frescas al final del
ensayo de germinacin. En estos casos, se puede obtener una germinacin ms
completa haciendo un segundo ensayo despus de un o una combinacin de los
tratamientos indicados a continuacin. Esto se puede aplicar al ensayo original, si se
sospecha que hay latencia. El periodo de pretratamiento no est incluido en el
periodo de ensayo de germinacin. El pretratamiento y duracin de este se registrar
en el Boletn de Anlisis.
3.1.e. Mtodos para romper la latencia fisiolgica.
1. Almacenamiento en seco: para especies con latencia de corta duracin, puede
ser suficiente almacenar la muestra en un lugar seco durante un corto periodo de
tiempo.
2. Pre-refrigeracin: Las repeticiones para germinacin se colocan en contacto con
el sustrato hmedo y se mantienen a baja temperatura durante un periodo inicial
antes de cambiarlas a la temperatura de germinacin. Las semillas agrcolas y
medicinales se mantienen normalmente a una temperatura de entre 5C y 10C
durante un periodo inicial de hasta 7 das. En algunos casos, puede ser necesario
ampliar el periodo de pre-refrigeracin o hacer una segunda refrigeracin.
3. Pre-calentado: las repeticiones para germinacin se someten a una temperatura
que no exceda de 30-35C, con aire libre circulando, durante un periodo de hasta
7 das antes de colocarlas bajo las condiciones prescritas para el ensayo de
germinacin. En algunos casos puede ser necesario ampliar el periodo de pre-
calentado.
Para ciertas especies tropicales y subtropicales, se pueden utilizar temperaturas de
precalentado de 40-50C.
4. Luz: Los ensayos, en caso de estar prescrito temperaturas alternas, debern estar
iluminados durante al menos 8 horas en cada ciclo de 24 horas y durante el
periodo de temperatura alta. La intensidad de la luz deber ser aproximadamente
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de 750-1250 lux con luz blanca fra. La iluminacin se recomienda especialmente
para ciertas gramneas tropicales y subtropicales.
5. Nitrato potsico (KNO
3
): En vez de agua se usar una solucin de KNO
3
al
0,2%, preparada por disolucin de 2 g de KNO
3
en un litro de agua, para saturar
el sustrato de germinacin al comienzo del ensayo. Posteriormente para
humedecerlo se utiliza agua.
6. cido giberlico (GA
3
): El mtodo del GA
3
se recomienda principalmente para
Avena sativa, Hordeum vulgare, Secale cereale, xTriticosecale, y Triticum
aestivum. El sustrato de germinacin se humedece con una solucin al 0,05% de
GA
3
, preparada por disolucin de 500 mg de GA
3
en un litro de agua. Cuando la
latencia sea ms dbil puede ser suficiente con una disolucin al 0,02%; cuando
es muy fuerte se usa una disolucin de hasta el 0,1%. Cuando se requiera una
concentracin mayor del 0,08%, se recomienda disolver el GA
3
en una disolucin
tampn de fosfato. La disolucin tampn se prepara disolviendo 1,7799 g de
Na
2
HPO
4
x 2 H
2
O y 1,3799 g de NAH
2
PO
4
x H
2
O en un litro de agua destilada.
7. Bolsas de polietileno cerradas: Cuando hay una alta proporcin de semillas
frescas no germinadas al finalizar el ensayo (p.e. Trifolium spp.) se las inducir a
germinar, para lo cul, se hace un segundo ensayo en bolsas de polietileno
cerradas del tamao suficiente para llevar a cabo el ensayo satisfactoriamente.
3.1.f. Mtodos para eliminar la dureza de las semillas
En las especies donde aparecen numerosas semillas duras, sin intentar provocar su
germinacin, se registra el porcentaje encontrado. En el caso de que, se solicite una
valoracin ms completa es esencial realizar algn tratamiento especial. Este
tratamiento puede aplicarse antes de comenzar el ensayo de germinacin o, si se
sospecha que el tratamiento puede afectar negativamente a las semillas no duras, se
podra llevar a cabo sobre las semillas que queden duras despus del periodo
prescrito para el ensayo.
1. Remojo: Las semillas con cubiertas duras pueden germinar ms fcilmente
despus de remojarlas de 24-48 horas en agua. El ensayo de germinacin
comienza inmediatamente despus del remojo.
2. Escarificacin mecnica: Perforar, picar, limar o recubrir cuidadosamente
con arena las cubiertas seminales puede ser suficiente para romper el estado
de latencia. Se debe tener cuidado de escarificar la cubierta de la semilla por
una parte adecuada, con el fin de evitar daos al embrin y a la plntula
resultante. El mejor sitio para la escarificacin mecnica es la parte de la
cubierta seminal que protege el extremos de los cotiledones.
Mtodos para eliminar sustancias inhibidoras
1. Pre-lavado: Las sustancias, que estn presentes naturalmente en el
pericarpio o en la cubierta de la semilla, y que actan como inhibidoras de la
germinacin pueden eliminarse lavando las semillas en una corriente de
agua a una temperatura de 25C antes del ensayo de germinacin. Despus
del lavado, las semillas deben secarse a una temperatura mxima de 25C.


2. Eliminacin de estructuras alrededor de las semillas: En algunas especies
se puede provocar la germinacin eliminando estructuras externas tales
como el involucro de cerdas o lemma y palea de ciertas Poaceae
(Gramineae).
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3.1.g. Duracin del ensayo
Se indica la duracin del ensayo para cada especie en los mtodos especficos para
cada especie (Apndice I). En caso necesario, se puede prolongar. El periodo de
tratamiento requerido para romper la latencia antes o durante el ensayo no se incluye
en este periodo de ensayo.
Si se estima conveniente, cuando por ejemplo algunas semillas han empezado a
germinar, aumentar en 7 das el periodo del ensayo o hasta la mitad del periodo
prescrito en el caso de ensayos de mayor duracin.
El tiempo del primer conteo es aproximado pero deber ser suficiente para que las
plntulas alcancen un nivel de desarrollo que permita una evaluacin precisa. Los
tiempos indicados en mtodos especficos para cada especie (Apndice I) se refieren
a las temperaturas ms elevadas. Si se elige una temperatura inferior, el primer
conteo deber posponerse. En el caso de ensayos en arena que no duren ms de 7-10
das deber omitirse el primer conteo. Es recomendable eliminar las plntulas que
estn suficientemente desarrolladas en los conteos intermedios con el fin de hacer el
conteo ms fcil y prevenir que afecten al desarrollo de otras plntulas. El nmero y
das de los conteos intermedios puede dejarse a discrecin del analista, pero
minimizndolos para reducir el riesgo de dao a cualquier plntula que no est
suficientemente desarrollada.
3.1.h. Evaluacin
Cada plntula se evaluar de acuerdo con los principios generales establecidos
anteriormente. Para evaluar las estructuras esenciales, estas deben estar lo
suficientemente desarrolladas para permitir la deteccin de cualquier anormalidad.
Cuando las muestras analizadas sobre papel producen plntulas que no pueden
evaluarse fcilmente, se realizar un segundo ensayo en arena o en medio de
crecimiento orgnico a la temperatura indicada en mtodos especficos para cada
especie (Apndice I) y bajo condiciones favorables de humedad y luz.
Previa solicitud, al finalizar el ensayo de germinacin, se determinar la clasificacin
de las semillas no germinadas tales como las frescas y otras.
Las plntulas que han alcanzado un estado en el cul todas sus estructuras se puedan
evaluar con precisin, se retirarn del ensayo en el primer o cualquier otro conteo
intermedio. Las plntulas muy podridas se retirarn, con el fin de reducir el riesgo de
infeccin secundaria, pero las plntulas anormales o con otros defectos, debern
dejarse sobre el sustrato hasta el conteo final.
Generalmente la plntulas pueden ser evaluadas fcilmente sobre el sustrato
inicialmente utilizado. Pero cuando las plntulas no puedan evaluarse fcilmente o
presenten sntomas de fitotxicidad, se deber hacer un segundo ensayo en arena o
tierra a la temperatura prescrita en los mtodos especficos para cada especie (ver
Apndice I) Puede ser una gua til para la evaluacin de este segundo ensayo
plantar junto a l otra muestra de la misma variedad que sepamos que germina
correctamente.
3.1.i. Semillas no germinadas
1. Semillas duras: Al finalizar de un ensayo de germinacin las semillas duras se
contabilizaran y se registraran como tales en el Boletn de Anlisis. Sin
embargo, cuando sea necesario eliminar la dureza de las semillas antes del
ensayo de germinacin se tomar alguna de las medidas descritas anteriormente
para promover la germinacin.
2. Semillas frescas: Cuando se presenten un 5% o ms de semillas frescas, su
potencial de germinacin deber determinarse por diseccin, tetrazolio o
escisin del embrin. Las que se determinen que tienen potencial germinativo
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se registrarn como frescas. Las que se determine que no tienen poder
germinativo se registrarn como muertas. Si despus de esta determinacin hay
alguna duda de si la semilla est fresca o muerta entonces se clasificar como
muerta. Si todava no se ha aplicado, se toman las medidas descritas
anteriormente, para romper la latencia si hay un 5% o ms de semillas frescas
no germinadas.
3. Semillas muertas: Las semillas muertas (blandas, mohosas) se contabilizarn y
registraran como tales en el Boletn de Anlisis. Si se observa que una semilla
ha producido cualquier parte de la plntula (p.e. el extremo de la raz primaria)
aunque est podrida en el momento de la evaluacin, se contabilizarn como
plntula anormal y no como semilla muerta.
4. Otras categoras de semillas vacas y no germinadas: A peticin del
remitente se puede determinar el nmero de semillas vacas, sin embrin o
daados por insectos y se registraran bajo Otras determinaciones en el Boletn
de Anlisis.
Para identificar ests categoras de semillas, se utilizan: antes del ensayo de
germinacin, rayos X, que se lleva a cabo con las repeticiones usadas para el
ensayo de germinacin; y despus del ensayo de germinacin, ensayo de corte
de semillas frescas no germinadas.
3.1.j. Repeticin del ensayo
Los ensayos de germinacin se repetirn en los siguientes casos:
1. Cuando se sospeche latencia.
2. Cuando los resultados de un ensayo de germinacin no sean fiables por fitotxicidad
o propagacin de hongos y bacterias.
3. Cuando hay un nmero considerable de plntulas que son difciles de evaluar.
4. Cuando existe evidencia de errores en las condiciones del ensayo.
Cuando las diferencias entre las repeticiones de 100 semillas exceda del rango de las
tablas de Tolerancias permitidas.
4. CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS
4.1. Procedimiento de redondeo
Los resultados del ensayo se expresaran como un porcentaje en nmero de plntulas
normales. Las sub-repeticiones de 50 25 semillas se agruparn en repeticiones de
100 y cuando las 4 repeticiones de 100 semillas de un ensayo estn dentro la
Tolerancia, la media representa el porcentaje de germinacin que se registrar en el
Boletn de Anlisis. El porcentaje medio se calcula redondeando al nmero entero
ms cercano.
El porcentaje de semillas normales se redondear al nmero entero ms cercano,
redondeando como sigue: xx.0 y xx.25 se redondean a xx; xx.50 y xx.75, se
redondean a xx +1.
Una vez calculado el nmero entero para el resto de porcentajes en el siguiente
orden: plntulas anormales, semillas duras, frescas y muertas; se suman el porcentaje
de plntulas normales, anormales y semillas no germinadas y el resultado deber ser
100, en caso contrario, continuar como se describe a continuacin y en el orden en
que se indica:
Para el porcentaje de plntulas anormales, semillas frescas, duras y muertas:
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1. Buscar el valor ms alto de los decimales que faltan y redondear este valor al
nmero entero superior, tomar este valor como resultado final y calcular el
nmero entero para el resto de porcentajes.
2. Sumar los resultados obtenidos
3. Si la suma es 100, el proceso de redondeo ha terminado, sino continuar
repitiendo los pasos 1 a 3.
En caso de partes decimales iguales, el orden de prioridad para redondear ser el
siguiente:
1. plntulas anormales
2. semillas duras
3. semillas frescas
4. semillas muertas
4.2. Registro de resultados en el Boletn de Anlisis
En el Boletn de Anlisis del ensayo de germinacin se registrarn en el lugar
adecuado para ello los siguientes datos:
Fecha de inicio y fin del anlisis
Duracin del ensayo
Porcentaje de plntulas normales, plntulas anormales, semillas duras,
semillas frescas y semillas muertas, total y de cada una de las repeticiones
del ensayo
Sustrato y temperatura empleados
Equipos empleados para la germinacin
Cualquier tratamiento o mtodo especial usado para facilitar la germinacin
Anormalidades encontradas en las diferentes repeticiones: segn los cdigos
de anormalidades que se relacionan en 4.1.5.
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APNDICE E.I:
SUSTRATOS Y MTODOS
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MTODO SOBRE PAPEL (del ingls TP)


SIEMBRA DE SEMILLAS (cabezas contadoras y aspirador)


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MTODO SOBRE PAPEL (del ingls TP)

MTODO SOBRE PAPEL (del ingls TP)



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MTODO ENTRE PAPEL (del ingls BP)

MTODO ENTRE PAPEL (del ingls BP)

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MTODO ENTRE PAPEL (del ingls BP)

MTODO PAPEL PLISADO (del ingls PP)

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MTODO EN ARENA (del ingls TS)


CABINA DE GERMINACIN

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APNDICE E.II:
GLOSARIO
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Brote apical Parte terminal del brote, que contiene el punto de crecimiento
principal.
Brote axilar Brote que se desarrolla a partir de una yema axilar.
Caripside Fruto o grano de las Gramneae; la pared del fruto (pericarpo)
est unida con la cubierta seminal.
Coleptilo La cubierta que encierra y protege el pice del eje del
embrin y la plntula joven en ciertas monocotiledneas (p.e.
Poaceae [Gramineae]). Es la parte basal del cotiledn y
protege la plmula cuando emerge del suelo. El coleoptilo es
fotosensible e para de crecer cuando se expone a la luz,
permitiendo a la plmula romper y continuar creciendo.
Coleorriza Envoltura que rodea el extremo(s) de la raz en el primer
estado de desarrollo de las Gramneae (ya presente en el
estado embrionario)
Cotiledn La primera hoja o par de hojas de un embrin y plntula (ver
hoja primaria).
Decoloracin Alteracin o prdida de color.
Dicotiledneas Un grupo de plantas as denominadas porque el embrin
generalmente tiene dos cotiledones (ver monocotiledneas).
Embrin Planta rudimentaria contenida en una semilla, generalmente
consta de un eje ms o menos diferenciado y cotiledn(es)
unidos.
Endospermo Tejido nutritivo que se origina en la fertilizacin y retenido
hasta la maduracin en algunas semillas como un tejido para
almacenar las sustancias de reservas.
Enfermo Presenta el efecto de la presencia y actividad de
microorganismos o de deficiencia qumica.
Epicotilo La parte del eje de la plntula situado encima de los
cotiledones y debajo de la hoja primaria o par de hojas.
Escutelo Estructura en forma de escudo que forma parte del cotiledon
en algunas Poaceae (Gramineae) y a travs del cul se
absorben los nutrientes del endospermo al embrin.
Estructura en
espiral
Estructura de la plntula (p.e. hipocotilo, coleptilo) enrollada
con un extremo fijo- alrededor de un eje externo.
Estructura en
forma de lazo
Estructura de la plntula (p.e hipocotilo, coleptilo) que hace
un lazo o crculo en vez de ser ms o menos recto.
Estructura
retorcida
Estructura de la plntula (p.e. hipocotilo, coleptilo) que se
retuerce sobre el eje principal de alargamiento.
Estructuras Las siguientes estructuras son esenciales para un desarrollo
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esenciales de
plntulas
continuado de las plntulas en una planta normal: sistema
radicular; eje apical; cotiledones; yemas terminales; coleptilo
(Poaceae [Gramineae]).
Fitotxico Txico para las plantas.
Fuertemente
retorcida
Giro completo sobre una pequea seccin de la estructura.
Geotropismo La planta crece en respuesta a la gravedad
Geotropismo
negativo
Crecimiento hacia arriba (p.e. brote normal)
Geotropismo
positivo
Crecen hacia abajo (p.e. raz primaria normal)
Germinacin La germinacin de una semilla en un laboratorio de ensayo es
la emergencia y desarrollo de la plntula a un estado donde el
aspecto de sus estructuras esenciales indica si es o no
posible desarrollarse en una planta normal en condiciones
favorables en el suelo.
Germinacin
epigea
Un tipo de geminacin en la cul los cotiledones y el brote
son llevados por encima del nivel del suelo por alargamiento
del epicotilo (ver germinacin hipogea).
Germinacin
hipogea
Un tipo de germinacin en la cual el cotiledn(es) o estructura
comparable (p.e. escutelo) permanece en el suelo y dentro de
la semilla (el brote es llevado sobre el nivel del suelo por
alargamiento del epicotilo en dicotiledneas o por el
mesocotilo en algunas monocotiledneas: ver germinacin
epigea.
Hipocotilo La parte del eje de la plntula inmediatamente encima de la
raz primaria y debajo de los cotiledones
Hoja primaria La primera hoja o par de hojas que se encuentran despus de
los cotiledones (ver cotiledones).
Hojuela Hoja reducida, generalmente plegada al tallo (p.e. en
Aspargarus, Pisum).
Infeccin Entrada y propagacin de organismos patgenos en material
vivo (p.e. estructuras de la plntula), no necesariamente, pero
a menudo, causan sntomas de enfermedad y podredumbre.
Infeccin primaria Organismo patgeno presente y activo en la propia semilla.
Infeccin
secundaria
Organismo patgeno propagado desde otras semillas o
plntulas.
Lemma La inferior (ms externa) de las dos brcteas que encierran
generalmente el fruto de las Gramineae.
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Ligeramente
retorcida
Giro completo sobre una gran seccin de la estructura.
Meristemo Regin localizada de clulas de la planta capaces de divisin
celular en contraste al tejido permanente con funciones
especiales, clulas que han perdido su capacidad para
dividirse; en las plntulas se encuentra principalmente en la
punta de las races y en la yema terminal.
Mesocotilo En algunas monocotiledneas altamente especializadas (p.e.
en ciertas Poaceae [Gramineae]) la parte del eje de la
plntula entre el punto de unin del escutelo y el coleptilo; se
reconoce por ser una estructura compuesta, formada por la
suma de parte del cotiledn al hipocotilo.
Monocotiledneas Un grupo de plantas as clasificadas porque el embrin
generalmente tiene un cotiledn (ver dicotiledneas).
Nucela Masa de la clula principal incluida en el integumento y
llenando el vulo antes de la fertilizacin.
Ovario rgano floral que se desarrolla dentro del fruto y contiene el
vulo.
vulo Estructura dentro del ovario de la flor que llegar a ser la
semilla despus de la fertilizacin y desarrollo.
Peciolo Pednculo de la hoja.
Pelo radical Una fina protuberancia tubular que sale de una clula
superficial de la raz, absorbe agua y sales minerales del
suelo y del medio de crecimiento.
Perispermo Tejido nutritivo en las semillas maduras que se desarrolla de
la nucela de la planta paterna. Beta es el ejemplo de especie
con tejido nutritivo en forma de perispermo bien desarrollado.
Plntula Una planta joven desarrollada a partir del embrin de una
semilla.
Plntulas
anormales
Plntulas anormales son las que no presentan el potencial
para desarrollarse en plantas normales cuando crecen en
suelo de buena calidad y bajo condiciones favorables de
humedad, temperatura y luz. Se clasifican como anormales
las siguientes plntulas:
Plntulas
daada:
Plntulas que carecen de cualquiera de las
estructuras esenciales o estn muy
daadas o tan irreparablemente daadas
que no se puede esperar un desarrollo
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equilibrado.
Plntulas
deformadas o
desequilibradas:
Plntulas con desarrollo dbil o
alteraciones fisiolgicas o en las cuales las
estructuras esenciales estn deformadas o
desproporcionadas.

Plntulas
podridas:
Plntulas con cualquiera de sus
estructuras esenciales tan enfermas o
podridas como resultado de una infeccin
primaria que impide el desarrollo normal.
Plntulas
normales
Las plntulas normales muestran el potencial para un
continuo desarrollo en plantas normales, cuando crecen en
suelos de buena calidad y bajo condiciones favorables de
humedad, temperatura y luz. Para ser clasificada como
normal una plntula debe pertenecer a alguna de las
siguientes categoras:
Plntulas
intactas:
Plntulas con todas sus estructuras
esenciales bien desarrolladas, completas,
proporcionadas y sanas.
Plntulas con
ligeros defectos:
Plntulas que muestran ciertos defectos en
sus estructuras esenciales, que presentan
un desarrollo satisfactorio y equilibrado
semejante al de plntulas intactas del
mismo ensayo.
Plntulas con
infeccin
secundaria:
Plntulas en las que es evidente que se
encuadran dentro de los dos puntos
anteriores pero que han sido afectadas
por hongos o bacterias cuyo foco es
distinto al de la semilla de la que
proceden.
Plmula Yema Terminal del embrin. La mayor yema de la hoja de la
semilla o plntula. La parte del eje de la planta embrionaria
sobre el punto de unin de los cotiledones.
Podredumbre Descomposicin del tejido orgnico, generalmente asociada
con la presencia de microorganismos.
Porcentaje de
germinacin
El porcentaje de germinacin registrado en el Certificado
Internacional ISTA de Anlisis de Semillas indica la
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proporcin en nmero de semillas que han producido
plntulas clasificadas como normales bajo las condiciones y
dentro del periodo especificado para cada especie.
Radcula Raz rudimentaria del embrin, que se transforma en la raz
primaria despus de emerger a travs de la cubierta de la
semilla durante la germinacin (ver raz primaria)
Races seminales La raz primaria y un nmero de races secundarias que
surgen del eje del embrin y forman el sistema radicular de la
plntula en los cereales.
Raz adventicia Raz secundaria que no procede de otra raz pero si de otra
parte de la plntula (p.e. hipocotilo).
Raz atrofiada Raz con el extremo ausente o defectuoso, con
independencia de la longitud de la raz (ver raz mazuda).
Raz lateral Raz que procede de la raz primaria o de otra raz.
Raz mazuda Clase de raz caracterstica de plntulas con sntomas de
fitotxicidad (generalmente es corta y con forma de maza,
aunque a menudo tienen el extremo de la raz intacto: ver
raz atrofiada).
Raz primaria Raz principal de la plntula, que se desarrolla a partir de la
radcula (ver radcula) del embrin.
Raz raqutica Una raz generalmente con un extremo intacto pero mucho
ms pequea y dbil en comparacin con el resto de
estructuras de la plntula.
Raz secundaria Usada en los ensayos de semillas para definir cualquier raz
distinta de la primaria.
Semillas
multigermen
Unidades de semillas que son capaces de producir ms de
una plntula.
Semillas no
germinadas
Semillas que no han germinado al final del ensayo cuando
han sido ensayadas bajo las condiciones dadas o
especificadas para cada especie, se clasifican como:
Semillas duras: Semillas que permanecen duras al
finalizar del periodo de ensayo, porque no
han absorbido agua.
Semillas frescas: Semillas, distintas de las semillas duras,
que no han germinado bajo las
condiciones del ensayo de germinacin,
pero que permanecen sanas y firmes y
tienen el potencial para desarrollarse en
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una plntula normal.
Semillas
muertas:
Semillas que al finalizar del periodo del
ensayo no estn ni duras ni frescas ni han
producido ninguna parte de la plntula.
Tejido conductor Tejidos que transportan las sustancias necesarias para el
mantenimiento y desarrollo de la plntula. Trmino usado
para xilema y floema.
Tejido
gametoftico
Tejido nutritivo que se presenta en semillas de conferas
(tiene una funcin similar al endospermo).
Yema axilar Yema en la axila de una hoja.
Yema terminal El brote apical envuelto por varias hojas ms o menos
diferenciadas.
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APNDICE E.III:
PLNTULAS TIPO
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Estructuras esenciales de las plntulas monocotilidneas





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Estructuras esenciales de las plntulas dicotiledneas

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Grupo A.1.2.3.2. Plntula tipo y desarrollo de la misma
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Grupo A.1.2.3.3. Plntula tipo y desarrollo de la misma

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Grupo A.2.1.2.2. Plntula tipo y desarrollo de la misma
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Grupo A.2.2.2.2. Plntula tipo y desarrollo de la misma


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APNDICE E.V:
TOLERANCIAS
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Tabla E.V.1. Rango mximo tolerado entre cuatro repeticiones de 100 semillas en un ensayo de germinacin (test de dos colas
a un ni vel de significacin del 2.5%)
Esta tabla indica el rango mximo (p.e. diferencia entre el ms alto y el ms bajo) en porcentaje de germinacin tolerado entre
repeticiones, teniendo en cuenta la variacin del muestreo al azar para una probabilidad del 0.025. Para encontrar el rango tolerado en
cualquier caso calcular el porcentaje medio, el ms cercano al nmero entero, de las cuatro repeticiones: si es necesario las
repeticiones de 100 semillas se pueden combinar en sub-replicas de 50 o 25 semillas que estaban ms cerca en el germinador.
Localizar la media en la columna 1 o 2 de la tabla y leer el rango mximo tolerado en la columna 3.
Las tolerancias estn extradas de la Tabla G1, columna D, en Miles (1963)
Porcentaje medio de
germinacin

Rango
mximo

Porcentaje medio de
germinacin

Rango
mximo
1 2 3 1 2 3
99 2

5

87 a 88 13 a 14

13
98 3 6 84 a 86 15 a 17 14
97 4 7 81 a 83 18 a 20 15
96 5 8 78 a 80 21 a 23 16
95 6 9 73 a 77 24 a 28 17
93 a 94 7 a 8 10 67 a 72 29 a 34 18
91 a 92 9 a 10 11 56 a 66 35 a 45 19
89 a 90 11 a 12 12 51 a 55 46 a 50 20

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Tabla E.V.2. Tolerancias para ensayos de germinacin sobre la misma o diferentes muestras a enviar cuando los ensayos son
realizados en el mismo o en diferente laboratorio sobre 400 semillas (test de dos colas para un ni vel de significacin del 2.5%)
Esta tabla da las tolerancias para porcentajes de plntulas normales, anormales, semillas muertas, duras o cualquier combinacin de
estas cuando los ensayos son realizados sobre la misma o en diferente muestra a enviar en el mismo o en diferente laboratorio. Para
determinar si los dos ensayos son compatibles se calcula el porcentaje medio de los dos resultados al nmero entero ms cercano y
localizarlo en la columna 1 o 2 de la tabla. Los ensayos son compatibles entre los porcentajes de los dos ensayos si no excede la
tolerancia dada en la columna 3.
Las tolerancias estn extradas de la Tabla G2, columna L, en Miles (1963).
Porcentaje medio de
germinacin
Rango
mximo
Porcentaje medio de
germinacin
Rango
mximo
1 2 3 1 2 3
98 a 99 2 a 3 2 77 a 84 17 a 24 6
95 a 97 4 a 6 3 60 a 76 25 a 41 7
91 a 94 7 a 10 4 51 a 59 42 a 50 8
85 a 90 11 a 16 5

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Tabla E.V.3. Tolerancias para ensayos de germinacin sobre dos diferentes muestras a enviar en el mismo o en diferente
laboratorio sobre 400 semillas (test de una cola para un ni vel de significacin del 5%)
Esta tabla da las tolerancias para porcentajes de plntulas normales, anormales, semillas muertas, duras o cualquier combinacin de
estas cuando los ensayos son realizados en el mismo o en diferente laboratorio sobre muestras tomadas del mismo lote. La tabla
puede usarse cuando los resultados del segundo ensayo son peores que los del primer ensayo. La tabla se usa entrando en la media
(nmero entero ms cercano) de los dos resultados en la columna 1 y 2 y la diferencia mxima tolerada se encuentra en la columna 3.
Las tolerancias estn extradas de la Tabla G3, columna C, en Miles (1963)
Porcentaje medio Tolerancia Porcentaje medio Tolerancia
Ms del 50%
50% o
menos
Ms del 50% 50% o menos
1 2 3 1 2 3
99 2 2 82 a 86 15 a 19 7
97 a 98 3 a 4 3 76 a 81 20 a 25 8
94 a 96 5 a 7 4 70 a 75 26 a 31 9
91 a 93 8 a 10 5 60 a 69 32 a 41 10
87 a 90 11 a 14 6 51 a 59 42 a 50 11


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CAPTULO F: DETERMINACIN DE LA VIABILIDAD POR EL
ENSAYO TOPOGRFICO AL TETRAZOLIO

1. GENERALIDADES 2
2. DESCRIPCIN DE MATERIALES Y EQUIPOS 2
2.1. Solucin de Tetrazolio 2
2.2. Solucin tampn 3
3. MTODO DE ANLISIS 3
3.1. Muestra de trabajo 3
3.2. Preparacin y tratamiento de la semilla 3
3.2.a. Humidificacin de la semilla........................................3
3.2.b. Exposicin de los tejidos previa a la tincin..............................4
3.3. Tincin 5
3.4. Evaluacin 5
4. CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS 6
APNDICES:
APNDICE F.I: PATRONES DE TINCIN 7
APNDICE F.II: TOLERANCIAS 16

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1. GENERALIDADES
El objetivo de este ensayo es:
hacer una rpida estimacin de la viabilidad en muestras de semillas en general, y en
aquellas que muestren latencia, en particular.
determinar la viabilidad individual de las semillas o de una muestra de trabajo, en el caso
de que, al final del ensayo de germinacin, las muestras presenten un alto porcentaje de
semillas latentes.
El Ensayo Topogrfico al Tetrazolio est basado en un test bioqumico que puede ser
utilizado para realizar un clculo rpido de la viabilidad de semillas: cuando estas han de ser
sembradas poco despus de ser cosechadas, en semillas con latencia profunda, en semillas
que muestran una baja germinacin o en casos en los que sea necesaria una rpida
estimacin del potencial germinativo de la semilla. Tambin se puede usar: para determinar
la viabilidad de semillas al finalizar el ensayo de germinacin, especialmente en los casos en
los que se sospeche latencia, para detectar comienzo de la germinacin y otros daos de
cosecha y/o procesado (daos por calor, mecnicos, insectos) y para resolver problemas
encontrados en el ensayo de germinacin, ej. cuando las causas de las plntulas anormales
no estn claras, cuando se sospecha de tratamientos pesticidas, etc.
En una semilla viable se deben teir todos aquellos tejidos cuya viabilidad sea necesaria
para el desarrollo de una plntula normal. Se permiten pequeas reas no teidas en algunas
partes de estos tejidos, dependiendo de las especies. El propsito del ensayo es que una
semilla muestre su potencial para producir una plntula normal en base a su actividad
bioqumica. Una semilla no viable muestra deficiencias y/o anormalidades de tal naturaleza,
que impiden el desarrollo de la misma en una plntula normal.
En el Ensayo Topogrfico al Tetrazolio, una solucin incolora de cloruro o bromuro de
2,3,5-trifenil tetrazolio se usa como indicador para revelar los procesos de reduccin que
tienen lugar en las clulas vivas. La semilla se embebe en el indicador. En los tejidos de la
semilla, el indicador interacta con los procesos de reduccin de las clulas vivas y capta
hidrgeno de las deshidrogenasas. Por hidrogenacin del cloruro de 2,3,5-trifenil tetrazolio
se genera en las clulas vivas una sustancia roja, estable y no difusible, el trifenil formazan.
Esto hace posible diferenciar entre las partes vivas de la semilla coloreadas de rojo y las
partes muertas no coloreadas.
Adems de las semillas viables completamente teidas y semillas no viables completamente
sin teir, pueden aparecer semillas parcialmente teidas. En diferentes zonas de estas
semillas parcialmente teidas se encuentran proporciones variables de tejido necrtico. La
posicin y tamao de estas reas necrticas, y no necesariamente la intensidad de color,
determinan cuando la semilla es clasificada como viable o como no viable. Sin embargo, las
diferencias de color conjuntamente con la firmeza del tejido, se consideran decisivas en la
medida en que permiten reconocer y localizar tejidos sanos, dbiles o muertos.


2. DESCRIPCIN DE MATERIALES Y EQUIPOS
2.1. Solucin de Tetrazolio
Se usa una solucin acuosa del 0,1 al 1% de cloruro de tetrazolio. Si el pH del agua
destilada disponible no permite una solucin en el rango de 6,5-7,5, la solucin debe
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ser tamponada. Normalmente, se usa una concentracin del 1%. En algunos casos
resultan apropiadas concentraciones mayores o menores.

2.2. Solucin tampn
Una solucin tampn se prepara, usando agua destilada, de la siguiente forma:
Preparar dos soluciones:
Solucin 1- disolver 9,087 g de KH
2
PO
4
en 1.000 mL de agua
Solucin 2 - disolver 9,472 g de Na
2
HPO
4
en 1.000 mL de agua
disolver 11,786 g de Na
2
HPO
4
2H
2
O en 1.000 mL de agua
Mezclar dos partes de la solucin 1 con tres partes de la solucin 2 y comprobar el
pH, debe estar entre 6,5 y 7,5.
Disolver la cantidad adecuada de sal de tetrazolio (bien cloruro o bromuro) en este
tampn hasta obtener la concentracin adecuada, ej. 1g de sal en 100 mL de tampn
resulta una solucin de concentracin 1%.
3. MTODO DE ANLISIS
3.1. Muestra de trabajo
Se debe llevar a cabo un ensayo completo en 4 repeticiones de 100 semillas tomadas al azar,
bien de la fraccin de semilla pura de un anlisis de pureza, o bien de una fraccin
representativa de la muestra enviada. El ensayo tambin se puede realizar con semillas
individuales que permanecen latentes al finalizar del ensayo de germinacin.
3.2. Preparacin y tratamiento de la semilla
Las semillas se prepararn de manera que se facilite la penetracin de la solucin de
tetrazolio. Entonces, las semillas o embriones preparados se sumergen completamente en la
solucin de tetrazolio a la temperatura y durante el periodo descrito en los mtodos
especficos para cada especie (ver Apndice I). Al final de este periodo la solucin se
decanta y la semilla se enjuaga con agua y se examina.
En el examen, las semillas se clasifican como viables o no viables en base a los patrones de
tincin y a la firmeza del tejido.
En los mtodos especficos para cada especie (ver Apndice I), se muestran esquemas
grficos de los mtodos habituales para la preparacin de la de la semilla, los cuales se
describen a continuacin y tambin esquemas de los patrones de tincin para cada especie.


3.2.a. Humidificacin de la semilla
Como paso previo a la tincin, la humidificacin es necesaria en muchas
especies y en otras, es altamente recomendable. Generalmente, las semillas
embebidas son ms frgiles que las semillas secas y resulta ms sencillo
cortarlas o perforarlas. Adems, el teido es ms exacto en los colores y esto
facilita la evaluacin. El periodo mnimo de humidificacin a 20C se indica
en los mtodos especficos para cada especie (ver Apndice I). Si durante la
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humidificacin se utiliza una temperatura mayor o menor, ha de ser ajustada
adecuadamente, y el tiempo y temperatura indicados en el Boletn de
Anlisis.
3.2.a.1. Humidificacin lenta
Se puede embeber la semilla sobre o entre papel, de acuerdo con el
mtodo descrito para el ensayo de germinacin. Esta tcnica se
utilizar en aquellas especies que tengan tendencia a romperse si se
sumergen en agua directamente. En muchas especies, las semillas
viejas y secas pueden beneficiarse de la humidificacin lenta.
En muchas especies, la humidificacin lenta no produce la completa
imbibicin de la semilla y se necesita un periodo posterior de remojo
en agua
3.2.a.2. Remojo en agua
Las semillas deben sumergirse completamente en agua hasta que estn
completamente embebidas. Si el periodo de imbibicin es mayor de 24
horas se cambiar el agua.
3.2.b. Exposicin de los tejidos previa a la tincin
En ocasiones, previamente a la tincin, es necesaria la exposicin de los
tejidos para permitir una penetracin ms sencilla de la solucin de tetrazolio
y para facilitar la evaluacin. Se consideran como tejidos esenciales,
aquellos que deben ser minuciosamente examinados para establecer la
viabilidad de la semilla; mientras que aquellos que son menos esenciales para
este diagnstico se consideran no-esenciales. Se han estandarizado los
procedimientos para la exposicin de tejidos internos, de modo que, los daos
inevitables que se producen en la preparacin, se reconocen fcilmente
durante la evaluacin.
Se pueden abrir o eliminar las cubiertas seminales utilizando una serie de
tcnicas de preparacin que se describen ms adelante. Una vez que se ha
preparado, la semilla debe permanecer humedecida hasta que se haya
terminado de preparar toda la repeticin. Solo en este momento, la repeticin
se puede sumergir en la solucin de tetrazolio.
3.2.b.1. Corte longitudinal
En las semillas de cereales, se realizar un corte longitudinal
por el medio del eje embrionario y de aproximadamente las
tres cuartas partes de la longitud del embrin.
En semillas en las que el embrin est rodeado por tejido vivo,
se realiza un corte longitudinal junto al embrin.
3.2.b.2. Escisin del embrin
La escisin del embrin se puede usar en Hordeum, Secale y Triticum
El embrin se escinde con una lanceta que se introduce a travs del
endospermo, justo encima del escutelo y un poco descentrada, despus
se tuerce ligeramente para que el embrin salga longitudinalmente. El
embrin (con escutelo), separado del endospermo, se introduce en la
solucin de tetrazolio.
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3.2.b.3. Eliminacin de las cubiertas seminales
Cuando las tcnicas de corte no son apropiadas, se debe eliminar la
totalidad de las cubiertas seminales (y cualquier otra cubierta).
3.3. Tincin
Es importante que las semillas estn completamente cubiertas de sal de tetrazolio y
que la solucin no se exponga directamente a la luz ya que se produce una reduccin
de la sal de tetrazolio.
En los los mtodos especficos para cada especie (ver Apndice I) se indican los
tiempos a utilizar en la tincin para las diferentes especies. Experimentalmente, estos
se consideran los tiempos de tincin ptimos, pero no hay que tomarlos como
absolutos porque pueden variar en funcin de las condiciones de la semilla. A
medida que se va cogiendo experiencia es posible evaluar semillas en momentos de
tincin ms tempranos o ms tardos.
El tiempo de tincin se aumentar en el caso de que las semillas no estn
completamente teidas, con objeto de comprobar, que la falta de tincin se debe a
una ms lenta penetracin de la sal de tetrazolio y no a defectos intrnsecos a la
semilla. Sin embargo, se debe evitar la sobretincin, ya que esta puede esconder
diferentes patrones de tincin que son indicativos de daos por heladas, semillas
dbiles, etc.
3.4. Evaluacin
El objeto principal del ensayo de tetrazolio es distinguir entre semillas viables y no
viables.
Si una semilla es viable o no viable deriva directamente de la importancia de
diferentes tejidos responsables de la emergencia y desarrollo de una plntula normal
para la especie en cuestin. Las semillas viables son aquellas que presentan potencial
para producir plntulas normales. Estas semillas, se tien por completo, o si solo se
han teido parcialmente, el patrn de tincin indica que las estructuras esenciales son
viables.
Las semillas no viables son aquellas que no renen los requisitos anteriores, adems,
se incluyen las semillas que presentan una coloracin no caracterstica o estructuras
esenciales flcidas. Las semillas que muestren desarrollos anormales en el embrin o
cualquier otra estructura esencial, se consideran como no viables
independientemente de si estn teidas o no.
Con objeto de evaluar las semillas correctamente, es precisa la exposicin del
embrin y otras estructuras esenciales. Una luz apropiada y aumento son
indispensables para un correcto examen. La mayora de las semillas tienen tejidos
esenciales y no esenciales. Las estructuras esenciales son los meristemos y todas
aquellas necesarias para el desarrollo de una plntula normal. Las semillas bien
desarrolladas y diferenciadas, tienen la capacidad de recuperara pequeas necrosis.
En este caso, las necrosis superficiales, de tamao limitado, se toleran incluso
cuando estn en tejidos esenciales. Una evaluacin cuidadosa permite, incluso,
distinguir diferentes categoras de semillas viables y no viables. En los mtodos
especficos para cada especie (ver Apndice I) se muestran los patrones de tincin
ms habituales segn las especies.
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La viabilidad, estimada por el ensayo al tetrazolio, es una caracterstica distinta y
nica de cada una de las semillas. La viabilidad es claramente independiente de la
realizacin de un ensayo de germinacin. Sin embargo, no debe haber diferencias
significativas entre los porcentajes de viabilidad y germinacin, en el caso que la
semilla:
no sea latente o dura o haya sido pre-tratada adecuadamente para romper
la latencia y la dureza,
no est infectada o haya sido correctamente desinfectada,
no haya sido rociada en campo, adicionada durante el procesamiento o
fumigada en el almacenamiento con productos qumicos nocivos,
no est germinada,
no se haya deteriorado durante el ensayo de germinacin de duracin
normal o ampliada o haya germinado en condiciones que no sean las
ptimas.
4. CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS
En el ensayo de una muestra, se calcula el nmero de semillas consideradas como
viables en cada repeticin. Los rangos de tolerancia mximos para diferencias entre
repeticiones son los indicados en el Apndice II del presente Procedimiento de
Trabajo. El porcentaje medio se indica redondeando al nmero entero ms prximo y
en caso de igualdad, a favor del nmero de semillas viables.

Los resultados se indican en el Boletn de Anlisis de la siguiente manera:
Contar el nmero de semillas viables y no viables en cada una de las
repeticiones
Sumar el nmero total de semillas viables y no viables de las cuatro
repeticiones de 100 semillas
Calcular en nmero medio de semilla viables y no viables por cada 100
semillas
Expresar el resultado en porcentaje, con un nmero entero, sin cifras
decimales, redondeando tal y como se ha descrito anteriormente.
Se pueden dar ms detalles, segn el criterio de la Estacin de Ensayos, ej.
porcentaje de semillas vacas, con larvas, rotas o podridas, expresndolos en el
apartado de observaciones del Boletn de Anlisis.
Cuando se ensayan semillas al final del ensayo de germinacin, los resultados se
deben reflejar de acuerdo con lo dispuesto para el ensayo de germinacin:
Cuando se presenten un 5% o ms de semillas frescas, su potencial de
germinacin deber determinarse por diseccin, tetrazolio o escisin del
embrin. Las que se determinen que tienen potencial germinativo se registrarn
como frescas. Las que se determine que no tienen poder germinativo se
registrarn como muertas.

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APNDICE F.I:
PATRONES DE TINCIN
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Patrn de tincin en semillas de maz (segn Handbook Tetrazolium Testing ISTA 2003)
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Figura 1.1. Esquema de la preparacin para la tincin y patrn de tincin (ejemplos de semillas no
viables) en Trigo (segn Handbook Tetrazolium Testing ISTA 2003)








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Figura 1.1. Esquema de la preparacin para la tincin y patrn de tincin (ejemplos de semillas no
viables) en Cebada (segn Handbook Tetrazolium Testing ISTA 2003)



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Patrn de tincin para leguminosas

Semillas viables
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Semillas no viables


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APNDICE F.II:
TOLERANCIAS
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Tabla F.II.1. Tolerancias para ensayos de viabilidad al tetrazolio sobre la misma o diferentes muestras a enviar cuando los
ensayos son realizados en el mismo laboratorio en 400 semillas (test de dos colas a un ni vel de significacin al 2.5%).
Las tolerancias tienen en cuenta en error experimental dentro de un laboratorio como describe el Informe del Comit de TEZ del 2000 y
no estn extradas de Miles (1963).
Porcentaje medio de viabilidad Rango mximo Porcentaje medio de viabilidad Rango mximo
1 2 3 1 2 3
98 a 99 2 a 3 2 83 a 88 13 a 18 6
96 a 97 4 a 5 3 75 a 82 19 a 26 7
93 a 95 6 a 8 4 58 a 74 27 a 43 8
89 a 92 9 a 12 5 51 a 57 44 a 50 9

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Tabla F.II.2. Tolerancias para ensayos de viabilidad al titrazolio en dos muestras a enviar diferentes en diferentes laboratorios
sobre 400 semillas 8test de una cola a un ni vel de significacin del 5%)
Las tolerancias tienen en cuenta el error experimental entre laboratorios como se describe en el Informe del Comit de TEZ del 2000 y
no estn extradas de Miles (1963).
Porcentaje medio de viabilidad Rango mximo Porcentaje medio de viabilidad Rango mximo
1 2 3 1 2 3
99 2 4 86 a 88 13 a 15 11
98 3 5 82 a 85 16 a 19 12
97 4 6 78 a 81 20 a 23 13
95 a 96 5 a 6 7 73 a 77 24 a 28 14
93 a 94 7 a 8 8 65 a 72 29 a 36 15
91 a 92 9 a 10 9 51 a 64 37 a 50 16
89 a 90 11 a 12 10

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Tabla F.II.3. Rango mximo tolerado entre cuatro repeticiones de 100 semillas en un ensayo de Tetrazolio (test de dos colas para un
nivel de significacin del 2,5%)
Esta tabla indica el rango mximo tolerable (diferencia entre el mayor y el menor) en porcentaje de semillas viables entre repeticiones,
permitiendo solamente una variacin de muestreo aleatoria para una probabilidad 0,025. Para encontrar el rango mximo tolerado,
calcular el porcentaje medio de las cuatro repeticiones al nmero entero ms cercano (si fuese necesario, formar repeticiones de 100
semillas, por combinacin de las sub-repeticiones de 50 o 25 que se encuentren ms prximas en la estufa). Localizar la media en la
columna 1 2 de la Tabla y leer el rango mximo tolerable en la columna 3.






Porcentaje medio de viabilidad Porcentaje medio de viabilidad Rango mximo Rango mximo
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CAPITULO G: CONTROL DE CALIDAD

1. Introduccin a la calidad en los laboratorios .................. 2
2. Necesidad de un sistema de calidad.................................. 2
3. Requisitos del sistema........................................................ 3
4. Modelos aplicables a calidad en los laboratorios ............ 3
5. Elementos del sistema de calidad...................................... 4
6. Control de calidad de los principales equipos utilizados
para el anlisis y ensayo de semillas ................................. 9
6.1 Control de la calidad de trabajo de los divisores de muestras.......................... 9
6.2 Control de calidad de las balanzas.................................................................. 11
6.3 Coleccin de semillas y materiales de referencia para calibrar sopladores.... 13
6.4 Control de la temperatura en las cmaras de germinacin............................. 13
6.5 Control de calidad en sustratos....................................................................... 13
6.6 Control de calidad en ensayos de humedad.................................................... 14
6.7 Normas de seguridad en el laboratorio........................................................... 15
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El control de calidad en los laboratorios de calidad agroalimentaria se establecieron
como una medida obligatoria en los Acuerdos del GATT (General Agreement of Tariffs
and Trade) que se discutieron en la Ronda de Uruguay entre los aos 1986 y 1993. Se
acord que se deba de disponer de un sistema de calidad como confianza en el
laboratorio con el fin de eliminar las barreras comerciales entre pases. Para ello en
Europa se estableci como norma la EN 45001 que ms tarde se unific con las normas
existentes en EE.UU. y Asia para crear la ISO 17025. Estas normas fueron las que
adapt la ISTA para el ensayo de semillas como Organismo Internacional que unifica
los protocolos de ensayos en semillas.
1. Introduccin a la calidad en los laboratorios
La necesidad de mejora dentro de la calidad de nuestras medidas en el laboratorio,
adems de nuestra necesidad, como tcnicos, de obtener resultados precisos, es
demandada recientemente por el mercado, la realizacin de anlisis es imprescindible
para los de intercambios comerciales.
Estos ensayos o anlisis deben ser comparables y dar resultados semejantes
independientemente del laboratorio que los realice.
Estos requerimientos se agudizan con la globalizacin de la economa y la inclusin de
Espaa en la Unin Europa.
Por ello, se empez realizando esfuerzos de normalizacin de los mtodos de ensayo
como una primera aproximacin que permitiese la obtencin de resultados semejantes.
Esta accin que sin duda mejora la situacin inicial, se ha demostrado insuficiente,
debido a que en un resultado de anlisis influyen ms elementos que slo el mtodo.
Por ello, se ha sentido la necesidad de establecer tambin en el laboratorio como en
otras empresas de productos y servicios un Sistema de Calidad que asegure la Calidad
de nuestros resultados. Esta necesidad en muchos casos ha venido impuesta
legislativamente desde el exterior.
En general, el cliente espera, que a travs de una serie de determinaciones, obtengamos
los valores de unos parmetros que permitan la toma de decisiones.
2. Necesidad de un sistema de calidad
Un sistema de calidad es necesario para realizar las actividades propias del laboratorio
de una manera sistemtica. Adems se produce:
Confianza para el cliente
Al comprobar que los resultados del laboratorio son coherentes, repetibles
independientemente del personal del laboratorio que realice el anlisis y del
momento en que se realice, se acompaan de un valor de incertidumbre
conocida, que ayuda al cliente a tomar decisiones y son comparables con los de
los otros laboratorios.
Reduccin de costes intralaboratrorios
Mediante la aplicacin de sistemas de control, intercambiabilidad del personal,
etc. Se producir una menor repeticin de anlisis al utilizar procedimientos
controlados, eliminacin de errores y las consecuencias por demandas
interpuestas, etc.
Confianza del laboratorio en sus resultados
Esto incluye una garanta de gestin ms transparente, segura y fiable dentro del
laboratorio.
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Cumplimento de requisitos legales
Diversas autoridades, tanto regionales, estatales o comunitarias, pueden requerir
la necesidad de que el laboratorio implante un sistema como demostracin de la
capacidad del mismo para realizar sus trabajos con un nivel de confianza
suficiente.
3. Requisitos del sistema
Vista la necesidad de asegurar la calidad de nuestras actuaciones para conseguir que
nuestra organizacin se oriente a su consecucin, es necesario que la direccin tenga en
cuenta este aspecto en su definicin de polticas, estableciendo objetivos y aplicando
recursos, el conjunto de los cuales, referidos a la calidad constituyen el llamado Sistema
de Calidad.
Para todo ello debemos saber que es un sistema, modelos existentes y los elementos a
tener en cuenta dentro de un laboratorio.
Sistema de calidad
Conjunto de la estructura de la organizacin, de responsabilidades, de
procedimientos, de procesos y de recursos que se establecen para llevar a cabo la
gestin de la Calidad
Gestin de la Calidad
Aspecto de la funcin general de la gestin que determina y aplica la poltica de
calidad
Poltica de calidad
Directrices y objetivos generales de una empresa relativos a la calidad
expresados formalmente por la Direccin del Laboratorio.
4. Modelos aplicables a calidad en los laboratorios
Para favorecer el trabajo de los laboratorios, identificar los elementos esenciales y
conseguir una uniformidad de criterios, se hjan establecido diversos modelos que
cubren objetivos diversos y se aplican a tipos de trabajos diferentes. Estos modelos han
sido recogidos en normas internacionales entre las que cabe citar:
ISO 9001
Son sistemas de calidad que proporcionan un modelo de aseguramiento de la
calidad para el diseo/desarrollo, produccin, instalacin y servicio post-venta
de un determinado producto o servicio. Se aplican al conjunto de toda la
empresa e incluye actividades particulares en el campo de la inspeccin de
ensayos, as como en el control de equipos y medidas.
El sistema se basa en la mejora continua, la satisfaccin de los clientes y la
gestin por procesos.
ISO 17025
Esta norma aprobada en 1999 y revisada en J ulio de 2005 define los requisitos
de un sistema de aseguramiento de la calidad para un laboratorio de ensayo o
calibracin.
Esta norma sustituyo a la norma EN 45001 y a la Gua ISO 25 unificando los
diferentes sistemas.
Esta norma se divide en captulos destinados a organizacin y gestin y
captulos que definen los requisitos de competencia tcnica.
Sirve de referencia para los Organismos de Acreditacin en sus evaluaciones de
la competencia tcnica.
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UNE 15.189
Esta norma aprobada en 2003 adapta los criterios de las normas ISO 17025 e
ISO 9000 para su aplicacin a laboratorios clnicos, incluyendo la toma de
muestras y la interpretacin de resultados.
BPL (Buenas Prcticas de Laboratorio)
Sistema establecido por la OCDE en 1981 con el objetivo de garantiza la calidad
en la obtencin de datos analticos generados a travs de estudios de valoracin
del riesgo de nuevas molculas.
Diseado para evaluar la competencia de laboratorios en la realizacin de
estudios no repetitivos y que requieren toma de decisiones y juicio profesional
en fase intermedias.
PNE 166.002
Proyecto de norma espaola desarrollada para su aplicacin en proyecto de I+D.
ISTA Standard Acreditation
Norma desarrollada por la ISTA, basada en ISO 17025, anteriormente 45001, e
incluyendo requisitos especficos para el anlisis de semillas
La estacin de Ensayos de Semillas y Plantas de Vivero est acreditada por la
ISTA Standard desde el ao 2001. Estando acreditados en estos momentos 100
laboratorios acreditados de 76 pases.
5. Elementos del sistema de calidad
Los elementos del Sistema de Calidad deberan ser tales que permitiesen evitar la
improvisacin, definir responsabilidad, evitar errores, aumentar la repetibilidad,
asegurar que nuestras medidas son comparables, etc.
A continuacin trataremos de definir algunos elementos fundamentales que debera
tener en cuenta cualquier sistema para asegurar sus resultados independientemente del
tipo de trabajo a realizar.
Solicitud
Es necesario que la solicitud sea formulada claramente, que se comprendan los
objetivos y el uso que va a hacer de los resultados el cliente, y se verifica que el
laboratorio tiene capacidad tcnica, humana y de recursos para satisfacerla.
As mismo el sistema de registro y las actividades previas al comienzo del
tratamiento de la muestra podrn ser muy diferentes.
Manejo de muestras
Nos hace definir sistemas para evitar su alteracin o deterioro, el modo de
obtencin si es necesario, as como su modo de identificacin, para evitar
cambios o confusiones, durante todo el periodo de estancia de la muestra en el
laboratorio.
Sistema de calidad
Nos permite definir una organizacin en la realizacin de de las actividades,
comn a todas las personal, con una documentacin de referencia que sirva de
recordatorio en caso de duda en la realizacin.
Esta organizacin deber establecer funciones y responsabilidades adecuadas,
tanto de tcnicas como de calidad, teniendo en cuenta el tipo de trabajo
repetitivo.
Las responsabilidades seran:
Fijacin de criterios de actuacin
Supervisin del cumplimiento de criterio
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Evaluacin muestral de la marcha del proceso
Formacin adecuada
Todo este sistema debe ir acompaado de un sistema de edicin, archivo,
conservacin y recuperacin de la documentacin, eficaz para que cada persona
pueda trabajar con la documentacin necesaria cuando la necesite, apoyado en
lista que indiquen los formatos y documentos en vigor, listas de distribucin, etc.
Procedimientos de trabajo
Nos hace definir por escrito lo que hacemos de modo que sirva para la
formacin de personal nuevo, mayor repetibilidad de los ensayos y reflexin
sobre nuestro sistema de hacer las cosas.
Es una forma de normalizacin de nuestras actividades que es muy til para que
sean independientes de la persona que las realice y se utilicen los mismos
criterios en la toma de decisiones. Definen tambin los formatos de toma de
datos para que la informacin sea completa y clara.
Deberan asegurarse que contienen la informacin suficiente para asegurar la
correcta realizacin de la actividad y que son aptos para el uso previsto.
Personal
Dependiendo del tipo de actividad realizada, los criterios de titulacin,
formacin y experiencia debern ser diferentes.
En un caso lo fundamental es la cualificacin que nos obliga a describir un
sistema para definir qu anlisis pueden ser desarrollados por cada persona, y
como la vamos a mantener actualizada en esas tcnicas. Evitando la situacin de
encontrarnos con un anlisis para el que no tenemos disponible personal
especializado.
En otros casos lo fundamental sern los requisitos de experiencia para
determinados estudios, as como la cualificacin para uso de equipos o tcnicas.
Adems, se deben definir las autorizaciones requeridas para determinadas
actividades, diseo de la validacin, etc.
Locales
Definir las condiciones ambientales requeridas para el desarrollo correcto de
nuestros ensayos, as como las separaciones necesarias para evitar errores en el
resultado.
Equipos
Nos fija un sistema de control, calibracin y mantenimiento de equipos de modo
que estos se encuentren en perfectas condiciones, nos garanticen que sus
medidas son correctas o que conocemos las correcciones a realizar y pueden ser
usados cuando sea requerido.
Nos da informacin sobre sus capacidades tcnicas, toda la informacin sobre
ellos debe estar reunida en algn lugar y disponible para su consulta, etc.
Hay que definir un plan de calibracin y verificacin que nos asegure que
nuestras medidas son comparables con las de otros laboratorios mediante el uso
de patrones, materiales de referencia u otros sistemas.
Nos plantea el sistema de compra, uso, manejo, etiquetado y almacenamiento de
los reactivos, sustratos, etc., que no invaliden los estudios.
Informes de ensayo
Nos exige una informacin mnima, para evitar errores o prdidas de
informacin lo que nos obligue a bsquedas innecesarias. Hay que definir un
sistema de identificacin que ayude a su archivo, recuperacin y conexin con
los registros obtenidos durante la realizacin de los anlisis, que nos permita
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agilizar nuestras consultas y poder dar un mejor servicio al cliente en caso de
que ste nos solicite aclaraciones.
El lmite de confianza de nuestro anlisis es lo que nos permite evaluar nuestro
sistema de medida, comprobar si es apto para dar los resultados que requiere el
cliente, utilizando otro, si fuese necesario, viendo cuales son las componentes
que afectan ms a nuestra incertidumbre.
Debe ser suficientemente claro para ser interpretado por terceros.
Registros
Nos define que datos vamos a conservar de manera que podamos repetir los
pasos seguidos en un anlisis y sacar conclusiones en el caso de desviaciones,
as como el sistema de almacenamiento, de modo que sea eficaz para su
recuperacin.
Control del sistema
Se deben establecer actividades para asegurar:
Que cumplimos lo que nos hemos propuesto.
Que disponemos de los mecanismos para detectar oportunidades de
mejora o posibles fallos, evitando la emisin de resultados incorrectos.
Estas actividades pueden ser de muy diversos tipos dependiendo de los objetivos
perseguidos por el laboratorio y entre ellas cabra citar:
Actividades peridicas de evaluacin del cumplimiento de los requisitos
acordados (auditorias).
Actividades de inspeccin de cumplimiento de los requisitos para la
continuacin del proceso.
Actividades de control de calidad muestral sobre los resultados de
nuestros procedimientos y equipos.
Uso de materiales de referencia
Ensayos de intercomparacin
Repeticin de muestras
Control de reclamaciones de clientes
Sistemas de resolucin de desviaciones, que permita realizar acciones
correctoras y preventivas sobre las actividades previstas.


Para mayor informacin ver la pgina web de la ISTA (www.seedtest.org) en la que se
describen los criterios de acreditacin de los laboratorios ISTA.
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6. Control de calidad de los principales equipos
utilizados para el anlisis y ensayo de semillas
A continuacin se describen algunos mtodos de control de los equipos ms usuales que
se pueden encontrar en un laboratorio de semillas. Debemos tener en cuenta que tal y
como exige la norma se debe de disponer de todo el material y equipo necesario para
poder realizar el ensayo, adems dicho equipo debe estar controlado, tener un plan de
mantenimiento, verificaciones peridicas de su uso y funcionamiento, as como un plan
de calibracin de todos aquellos que afecten a la calidad del ensayo. Evidentemente, de
todas las actividades que se lleven a cabo en el laboratorio hay que dejar constancia en
los registros apropiados a cada caso.
6.1 Control de la calidad de trabajo de los divisores de
muestras
El siguiente mtodo (Kruse, 1996) es til para controlar la calidad de los divisores de
muestras:
Modo de empleo:
1. Preparar una muestra estndar mezclando fracciones de dos tipos de semilla en
base al porcentaje en peso (p.p.),
Ej. 80% de una especie de semilla grande (trigo)
20% de una especie de semilla pequea (colza)
Se debe conocer el peso de mil semillas (pms) de las dos fracciones. El tamao de
la muestra estndar debe ser de acuerdo a lo prescrito para la Determinacin de
otras semillas por nmero en especies de semilla grande. Preparar la muestra
estndar al menos 1da antes de usarla para que se equilibre con las condiciones de
la sala en la que vaya a ser utilizada
2. Con el divisor en cuestin, reducir la muestra estndar a 1/8 por el procedimiento
habitual
3. Coger nicamente uno de los 1/8 y separar las dos especies con un tamiz, pesar las
fracciones y anotar los resultados
4. Volver a combinar las sub-muestras hasta la formar la muestra estndar
5. Hacer al menos 10 repeticiones de este proceso (pasos 2 a 4)
6. Calcular el porcentaje de cada una de las fracciones en cada repeticin
Evaluacin:
1. Calcular la madia observada y la desviacin tpica de los porcentajes de las dos
especies.
2. Calcular la desviacin tpica terica de la proporcin verdadera, de acuerdo con
una distribucin binomial.
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3. Calcular los rangos tolerados en base a las proporciones verdaderas y la desviacin
tpica terica para la media observada y la desviacin tpica observada.
4. Comprobar que tanto la media como la desviacin tpica observadas estn dentro
de los rangos tolerados.
Intervalos de control:
Llevar a cabo este control al menos una vez al ao, incluyendo en el control a todos los
miembros del personal que realicen divisin de muestras.
Ejemplo:
A continuacin se describe un ejemplo sobre como calcular los rangos tolerados:
Muestra estndar: 20% (p.p.) semilla de colza, pms =4 g
80% (p.p.) semilla de trigo, pms =45 g
Tamao de la muestra 1000 g (200 g de semilla de colza y 800 g de
semilla de trigo)
Nmero de semillas: Semilla de colza: 200 g 1000 / 4 g = 50.000 semillas
Semilla de trigo: 800 g 1000/ 45 g =17.778 semillas
En total 67.778 semillas
Muestra de 1/8 =0.125 =125 g =~8500 semillas
Desviacin tpica por nmero:
( ) 379 0 875 0 188 0 125 0 1
8500
80 20
. . . . = =

=
Desviacin tpica en peso:
( ) { } ( ) 346 0 875 0 156 0 125 0 1 045 0 2 0 004 0 2 0 1
125
80 20
. . . . . . . . = = +

=
Tolerancia cuando se realiza el control con 10 repeticiones:
- tolerancia mxima de la desviacin tpica:
% 475 . 0 88 . 1 346 . 0 ) (
, 9 ,
= = =

F sd T
- tolerancia mxima de la media:
( ) % .
.
.
.
.
180 0 20
16 3
346 0
645 1 20
10
20
95 0
= = + =

u x T
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6.2 Control de calidad de las balanzas
En el control de las balanzas hay que distinguir entre tres conceptos distintos:
Pesas
Medida materializada de masa, regulada de acuerdo a sus caractersticas fsicas y
metrolgicas: forma, dimensiones, material, calidad superficial, valor nominal,
error permitido.
Clases de exactitud de las pesas
Clasificacin de las pesas de acuerdo a ciertos requisitos metrolgicos y lmites
de tolerancia expuestos en recomendaciones internacionales (OIML R 111). Las
pesas se clasifican en: E1 , E2 , F1 , F2 , M1 , M2, M3. (Ver TABLAS)
Procedimiento de medida
conjunto de operaciones, descritas de forma especfica, utilizadas en la
ejecucin de mediciones particulares segn un mtodo dado.
Calibracin
Determinar la relacin entre la indicacin y el valor verdadero de la magnitud
medida utilizando pesas de referencia certificadas y trazables.
Ajuste
Regular un aparato de medida de modo que la indicacin se desve lo menos
posible del valor verdadero, o que la desviacin est dentro de los lmites de
error.
Verificacin
Control petrolgico oficial cuyo objeto es declarar que el equipo satisface las
normas de verificacin y que se atiene a los errores mximos permisibles.
A continuacin se describe un mtodo no exhaustivo de control de balanzas:
1. Las pesas de control han de adaptarse a la temperatura ambiente de la balanza.
2. La balanza ha de estar nivelada.
3. La balanza ha de estar activada antes del control al menos durante 30 minutos.
4. limpiar el platillo con pincel, si es necesario con alcohol. Dejar que el disolvente
se evapore.
5. Calibrar (ajustar la sensibilidad) de acuerdo con el manual de usuario (cuando
sea posible pasar al punto 6).
6. La indicacin debe ser cero 0 (cero), en caso necesario tarar.
7. Cargar la(s) pesa(s) de control. Precaucin: Las pesas de clase E y F slo se
deben manipular con guantes de cuero o algodn, o por medio de pinzas.
8. Comprobar que el valor mostrado atiende a la exactitud de indicacin. Si se
sobrepasan los valores lmite (por +o por -) hay que repetir elproceso. Si se
vuelven a sobrepasar los valores lmite permisibles, es preciso desactivar la
balanza (desenchufar la balanza de la red), designarla defectuosa y repararla.
9. Informe del control realizado.
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Lmites de error de verificacin segn OIML Rl 11. Los lmites de error estn tambin
referidos al valor de peso convencional, densidad del material 8 g/cm3, densidad del
aire 1,2 kg/m3, temperatura 20 C.

CLASES DE EXACTITUD (EXPRESADO EN mg)
VALOR NOMINAL
E1 E2 F1 F2 M1 M2 M3
2000 kg 10 g 30 g 100 g 300 g 1000 g
1000 kg 5 g 15 g 50 g 150 g 500 g
500 kg 2.5 g 7.5 g 25 g 75 g 250 g
200 kg 1.0 g 3.0 g 10 g 30 g 100 g
100 kg 0.5 g 1.5 g 5 g 15 g 50 g
50 kg 25 75 250 750 2500 7500 25000
20 kg 10 30 100 300 1000 300 10000
10 kg 5 15 50 150 500 1500 5000
5 kg 2.5 7.5 25 75 250 750 2500
2 kg 1.0 3.0 10 30 100 300 1000
1 kg 0.50 1.5 5 15 50 150 500
500 g 0.25 0.75 2.5 7.5 25 75 250
200 g 0.10 0.30 1.0 3.0 10 30 100
100 g 0.05 0.15 0.5 1.5 5 15 50
50 g 0.030 0.10 0.30 1.0 3.0 10 30
20 g 0.025 0.080 0.25 0.8 2.5 8 25
10 g 0.020 0.060 0.20 0.6 2.0 6 20
5 g 0.015 0.050 0.15 0.4 1.5 5 15
2 g 0.012 0.040 0.12 0.3 1.2 4 12
1 g 0.010 0.0030 0.10 0.25 1.0 3 10
500 mg 0.008 0.025 0.08 0.2 0.8 2.5
200 mg 0.006 0.020 0.06 0.15 0.6 2.0
100 mg 0.005 0.015 0.05 0.12 0.5 1.5
50 mg 0.004 0.012 0.04 0.10 0.4
20 mg 0.003 0.010 0.03 0.008 0.3
10 mg 0.002 0.008 0.025 0.06 0.25
5 mg 0.002 0.006 0.020 0.06 0.20
2 mg 0.002 0.006 0.020 0.06 0.20
1 mg 0.002 0.006 0.020 0.06 0.20

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CARGA (APROX.)
DENOMINACIN
Mn Mx.
VALOR DEL
ESCALN
Ultra-microbalanza 3 g
Microbalanza 1 mg 30 g 1/10 g
Semimicrobalanza 5 mg 100 g 0.01 mg
Analtica 50 mg 200/500 g 0.1 mg
Fina (capacidad normal) 1 g >1 kg 1 mg
Gran capacidad 5/50 kg
Alta capacidad >50kg
Condiciones ambientales durante la calibracin.
PESAS
MXIMO CAMBIO DE
TEMPERATURA
DURANTE LA
CALIBRACIN
RANGO DONDE
DEBIERA ESTAR LA
HUMEDAD RELATIVA
DEL AIRE
E
1
0.5 C / h 35 - 70
E
2
1 C / h 35 - 70
F
1
Y F
2
2 C / h 35 - 70
M
1
, M
2
,Y M
3
. 3 C / h No-condensacin
6.3 Coleccin de semillas y materiales de referencia para
calibrar sopladores
La ISTA en los puntos 5.3.4 y 5.3.5 de la norma de calidad de la ISTA (ISTA Standard)
establece que estos materiales de referencia deben ser verificados por una autoridad
nominada por la Secretara de la ISTA.
6.4 Control de la temperatura en las cmaras de germinacin
Las cabinas de germinacin deben tener una variacin mxima de temperatura de 2C.
En la Estacin de Ensayos la temperatura se mide con data logres y en la tabla
Copenhague se mide con un data logger de cuatro sondas para medir la temperatura por
contacto. Los data loggers monitorizan en continuo la temperatura de las cmaras.
6.5 Control de calidad en sustratos
pH
El pH de los sustratos debe estar entre 6.0-7.5, para lo cual el pH-metro debe ser
calibrado diariamente o cada vez que se utilice con disoluciones tampn
certificadas.
Para medir el pH en arena o en el medio crecimiento orgnico se cogen 5 ml de
medio orgnico de crecimiento o arena y se mezclan con 5 volmenes de agua
de la que se va a utilizar en el ensayo de germinacin. La mezcla es agitada
durante 5 minutos y se deja reposar durante un mnimo de 2 horas y un mximo
de 24 horas. Despus se vuelve a agitar y se mide el valor pH de la suspensin
de la disolucin.
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En papel el pH se mide sobre la superficie del papel una vez que este est
humedecido con el agua que se va a utilizar posteriormente en el ensayo. Para
medirlo se puede utilizar papel pH con un rango de medida adecuado o con pH-
metro de contacto. Se debe medir el pH al menos en tres puntos aleatorios de la
hoja de papel. Estas medidas no deben diferir en ms de 0.5 unidades de pH. Se
hace la media de las medidas y se comprueba con las especificaciones.
Calibre de la arena
La arena debe tener una granulometra especial, para lo cul la ISTA establece
que el 90% de la arena debe pasar un tamiz con una luz de 08 mm y quedar
retenida en un tamiz de 0.05 mm. Para ello los tamices deben estar calibrados
adecuadamente.
Limpieza e inocuidad del medio de crecimiento
El medio de crecimiento debe estar libre de semillas, hongos bacterias o
sustancias txicas que puedan interferir en l germinacin de las semillas, el
crecimiento de las plntulas o su evaluacin.
Para lo cual se llevarn a cabo ensayos de fitotxicidad para comprobarlo. Se
llevar a cabo un ensayo de germinacin en el sustrato que se quiere comprobar
y otro en el sustrato de referencia, comprobando mediante un test de aceptacin
si los ensayos son comparables.
Las especies utilizadas para estos ensayos son aquellas que son muy sensibles a
las sustancias txicas tales como: Agrostis gigantea, Eragostis cuvula, Festuca
rubra, Hordeum vulgare, Lepidium sativum, Petunia sp. y Plheum pratense.
6.6 Control de calidad en ensayos de humedad
En los ensayos de humedad hay que realizar un control de calidad de la estufa. Se debe
realizar un control de la temperatura cada vez que se usa y registrar la Temperatura. Dos
veces al ao hay que controlar la temperatura de cada estante de la estufa (4 horas a
130C) y dos veces al ao todos los estantes durante 17 horas a 103C dos veces al ao
se realizar un ensayo sobre trigo blando (soft wheat). El ensayo de trigo blando es un
requisito de la UE (D.O.C.E. [Diario Oficial de la Comunidad Europea] 127 de
30/09/66 pag. 3025-66 y 139 de 28/09/68 pag. 2 anexo 1).
Este reglamento establece unos requisitos de capacidad trmica y de ventilacin del
horno.
Requisitos de capacidad trmica
Para el secado de cereales y avenas y debe tener una capacidad trmica tal que,
cuando se selecciona una temperatura de 131C el horno se alcanza en menos de
45 minutos con el horno lleno de muestras (la ISTA requiere 15 minutos).
Requisitos de ventilacin
Con el horno lleno de muestras de trigo, los resultados de secado a las 2 horas
deben diferir en menos de un 15% del secado a las 4 horas.
Para realizar este ensayo se sigue el siguiente procedimiento:
1. Calentar 4 platos con 8 platillos cada uno durante 1 hora a 130C.
2. Enfriar durante 45 minutos en desecador.
3. Moler el trigo blando para los 32 platillos.
4. Pesar cada platillo y anotar su peso.
5. colocar 505 grs de trigo en cada platillo.
6. Colocar los platillos en el desecador.
7. Anotar el nmero de cada platillo.
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8. colocar los platos en el horno a 130C.
9. Secar durante dos horas.
10. Colocar los platillos en el desecador durante 45 minutos.
11. Pesar cada platillo.
12. Poner los platillos sobre el plato en el desecador.
13. Volver a poner los platillos en el horno.
14. Secar de nuevo durante 2 horas a 130C.
15. Enfriar en el desecador durante minutos.
16. Pesar de nuevo.
17. Calcular para cada platillo la diferencia entre la 1 y la 2 pesada.
18. Si la diferencia es mayor del 0.15% regular la ventilacin, la temperatura o la
vlvula de la estufa.
19. Repetir el proceso completo.
Requisitos para el molido
El molino utilizado en ensayos de humedad debe cumplir los siguientes
requisitos:
Estar construido en material no absorbente.
Estar construido de tal manera que el resultado del molido est aislado
del ambiente para evitar que el polvo resultante de la molienda no
intercambie agua con el ambiente.
Que la velocidad de molido no caliente el material molido y minimizar
las corrientes de aire para evitar la perdida de humedad.
Que sea ajustable para obtener un tamao de partcula tal que para
cereales al menos el 50% del material molido pase a travs de un tamiz
con una luz de 0.50 mm y no se quede ms de un 10% en un tamiz de
1.00 mm.
6.7 Normas de seguridad en el laboratorio
A continuacin se enumeran algunas de las medidas de seguridad bsicas a tomar en el
laboratorio:
Se debe sealizar apropiadamente las reas de almacenamiento, refrigeradores,
armarios, etc., y mantener todos los productos qumicos en contenedores
adecuadamente etiquetados (anotando la fecha de recepcin o preparacin y la
fecha en que se empez el contenedor).
Se debe estar alerta ante condiciones y acciones inseguras, y prestarles atencin
para que se corrijan lo antes posible.
Utilizar los dispositivos de extraccin de humos y gases siempre que sea
necesario.
Cuando deba utilizarse gafas de seguridad sern con protectores laterales. S se
usan, lentillas es conveniente usar gafas, pues es mas fcil el lavado de ojos as
como cualquier otra actuacin que requiera aplicar el personal mdico.
Se debe llevar Bata en el laboratorio.
Si fuera necesario, se llevarn Guantes y Mascarilla.
Disponer las fichas de seguridad en sitios bien visibles
Leer etiquetado de productos.
Antes de salir del laboratorio, lavarse las manos SIEMPRE.
NO USAR J AMS la boca para pipetear.
Si se tiene el pelo largo, procurar llevarlo recogido.
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Evitar que las mangas/puos, pulseras, etc. estn cerca de las llamas o de
maquinaria elctrica en funcionamiento.
Cubrirse la piel que pudiera resultar expuesta a salpicaduras, roces u objetos.
Los reactivos inflamables deben comprarse y almacenarse en cantidades lo ms
pequeas posible.
No se debe almacenar sustancias inflamables en frigorficos corrientes
Los lquidos inflamables se deben almacenar en armarios de seguridad
No se debe almacenar juntas sustancias reactivas incompatibles
Hay que asegurarse de que el cableado elctrico est en buenas condiciones.
Los riesgos para la seguridad se deben eliminar manteniendo las reas de trabajo
del laboratorio en perfecto orden.
Se deben inspeccionar todos los equipos antes de su utilizacin.
Todos los aparatos que estn en reparacin o en fase de ajuste deben estar
guardados bajo llave y etiquetados antes de sacarse para su uso.
Todos los trabajos de puesta a punto deben realizarse por personal autorizado.
Familiarizarse con la localizacin y uso de los siguientes aparatos de seguridad:
Dispositivos de Extraccin de gases, humos, partculas, etc.
Lavaojos
Maletn de Primeros Auxilios
Duchas de Seguridad
Equipo de Limpieza de Derrames
Extintores
Mantas Ignfugas
Alarmas de Fuego
Equipos de Proteccin Respiratoria
Se debe minimizar la cantidad de residuos desde el origen, limitando la cantidad
de materiales que se compran y que se usan.
Se debe separar y preparar los residuos qumicos para su recogida de acuerdo
con los procedimientos especificados en cada laboratorio.
Los residuos se deben depositar en los contenedores designados para ello.
Nunca hay que verter residuos peligrosos por el desage.
En el caso de derrame de un residuo liquido, este se deber absorber con un
material qumicamente inerte.
Siempre hay que evitar recoger residuos derramados con material reutilizable,
fregonas, bayetas, trapos, etc.
Nunca hay que realizar ningn tipo de actuacin si no se conoce exactamente el
procedimiento a seguir.
Las personas no autorizadas no deben entrar en los laboratorios. Los nios de
cualquier edad y por razones evidentes de riesgo no deben permanecer en los
laboratorios.
Si se va a realizar experiencias fuera de horario, hazlo saber a otras personas del
laboratorio y al personal de Seguridad.
Evitar realizar experiencias de laboratorio en un edificio vaco porque no podrs
pedir auxilio ni te ver nadie en caso de accidente.
RECUERDA QUE EL ORDEN Y LA LIMPIEZA
SON FUNDAMENTALES EN UN LABORATORIO.