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Introduccin a la Biologa Celular y Molecular

IBCM: turno tarde

Repaso de Soluciones Qumicas


(Cortesa del turno maana) INTRODUCCIN
Cuando una solucin es de uso corriente en un laboratorio, se suele preparar una solucin madre o stock, que se encuentra en una concentracin mayor de la que se utiliza. A partir de sta, se realiza una dilucin para preparar la solucin a la concentracin de uso. * Se dice que una solucin es N X (N por) cuando esta concentrada N veces respecto de la de uso corriente. Ej.: PBS 5X es una solucin stock de PBS 5 veces ms concentrada que el PBS de uso normal ( 1X). Puede prepararse PBS 1X haciendo una dilucin 1/5 de la solucin stock (para 500 ml: 100 ml PBS stock + 400 ml H 2O bidestilada.) * A veces es necesario diluir mucho una solucin concentrada (Ej.: 1/10 4 , 1/106). En estos casos se suelen hacer diluciones sucesivas o diluciones seriadas para disminuir los errores de medicin al pipetear volmenes muy pequeos. Ej.: Preparar 1 ml de una solucin de un anticuerpo que contenga 0.1 g/ml, a partir de una solucin stock de 1 mg/ml. Debera realizarse una dilucin 1/10000 (1/104) es decir pipetear 0.1 l stock + 999.9 l buffer de dilucin. Conviene entonces hacer diluciones sucesivas que, con menor error de pipeteo, permitan alcanzar la concentracin buscada. Ej. 4 diluciones sucesivas: 1/10 . 1/10 . 1/10 . 1/10 = 1/10000. Tener en cuenta: Las soluciones diluidas se expresan a menudo en "mili...", "micro...", "nano...", "pico...", "fento..." . Ej: 10 M, 1 pg/ml, etc. Recordar: 1 mmol = 10-3 moles (aplicable a otras unidades: gramo, etc.) 1 mol = 10-6 moles 1 nmol = 10-9 moles 1 pmol = 10-12 moles 1 fmol = 10-15 moles Formas de expresar concentraciones La masa de sustancia que corresponde a un mol de molculas de esa sustancia es lo que conocemos como masa molar o peso molecular PM y se expresa en gramos. Ej.: la masa molar del oxgeno O 2 es de 32 g/mol y del agua 18 g/mol. Pero OJO! no confundir con la masa molecular relativa Mr, que aunque coincide numricamente con M no lleva unidades de masa, sino que, justamente es relativa y nos dice cuantas veces ms pesada es una molcula de una sustancia respecto de la unidad de masa atmica (u.m.a.), de 1 Dalton (Da), que corresponde al tomo hidrgeno. As, la Mr del agua es 18 u.m.a. o 18 Da, o bien, 18 veces ms pesada que un tomo de hidrgeno.

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Unidades de concentracin % m/m: Por ciento masa en masa, g de soluto por cada 100 g de solucin (SN) (soluto + solvente). % m/v: Porciento masa en volumen, g de soluto por cada 100 cm 3 o 100 ml de SN. % v/v: Porciento volumen en volumen, ml de soluto por cada 100 ml de SN. M: Molaridad, N de moles de soluto por cada 1 litro o 1000 cm 3 de SN. m: Molalidad, N de moles de soluto por cada 1 Kg de solvente. N: Normalidad, N de equivalentes de un cido o de una base por cada 1 litro de SN. De acuerdo a lo que vimos antes: Una solucin 2 M de HCl es lo mismo que una solucin 2 N, mientras que una solucin 4 M de cido sulfrico ser lo mismo que una solucin 8 N para este cido. OBJETIVOS Familiarizarse con las unidades mas utilizadas en biologa molecular y ser capaces de intercambiar gilmente las distintas unidades. Familiarizarse con el material de uso corriente en el laboratorio, la preparacin de soluciones y el empleo de diluciones a partir de soluciones concentradas.

DESARROLLO DEL TP Se partir de una solucin stock de colorante (por ejemplo: azul de toluidina o azul de metileno) de concentracin conocida. a) Desaparicin del color: Cada grupo recibir 1 ml de solucin stock y, realizando diluciones seriadas, deber determinar la dilucin a la cual desaparece el color y la concentracin del colorante (en mg/ml) en dicha dilucin. b) Dilucin incgnita: A cada grupo se le entregar 1 ml de una dilucin incgnita. Deber averiguar a qu dilucin corresponde, por comparacin con una curva de diluciones conocidas preparadas a partir de la solucin stock. Importante: Repasar las diferentes formas de expresar la concentracin de una solucin y cmo interconvertirlas (molaridad, normalidad, % p/v, % p/p). Problemas de Diluciones 1) Cuantos l representan los siguientes volmenes? a. 0,05 l b. 0,234 ml c. 2,5 x10 4ml

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d. 98,5000 l 2) Exprese cada uno de los siguientes valores de concentracin en g/ml, ng/ml, ng/ul, ug/ul: a. 234,20 mg/ml b. 48,56 mg/l c. 6,243 x106 g/ml d. 8,2 x10-8 pg/ml 3) Si se toman 50 ml de una solucin NaCl 0,4M y se llevan a un volumen final de 1l Cul es la concentracin final? 4) Qu volumen de HCl 6M debe usarse para preparar 500 ml de una solucin de HCl 5 mM? 5) Cul sera la concentracin final de una solucin preparada al diluir 45,0 ml de KOH 4,2 M en un volumen final de 300 ml? 6) Si se cuenta con una solucin 2,2 M de NaCl, Cuntas diluciones seriadas 1/10 deben realizarse para llegar a una solucin de concentracin 22 M? Indique que volmenes utilizara si las diluciones se realizan en eppendorfs con Vfinal=1,5ml. 7) Su jefe le entrega 10ml de un cultivo de E. coli (bacterias) con 8.4 x 107 clulas/ml y le pide que prepare una 100 ml de una suspensin que contenga menos de 100 clulas/ml, qu diluciones debe realizar para llegar al resultado deseado si en cada tubo el V final=100ml? 8) Usted posee un eppendorf con 1 ml de una solucin 4.3 x 10 4 clulas y debe producir una solucin que contenga 43 cel/ml. Qu diluciones seriadas hara si en los tubos slo puede llegar a un Vfinal=1ml y tuviese que pasar de cada solucin a la siguiente no menos de 5 l? 9) Usted posee una sustancia coloreada y desea realizar una curva de calibracin con al menos 4 puntos para el rango de concentraciones 0,1 mM a 0,2 M. Si ud. posee una solucin 2,5 M y sabe que la 490 = 50 M1cm-1 a. Indique qu diluciones seriadas hara para obtener esos puntos. b. Cul ser la Absorbancia a 490nm de cada uno de los puntos que ud. eligi? 10) Las -lactamasas son una familia de protenas generadas por algunos microorganismos, que les confieren resistencia a los antibiticos lactmicos. Una de ellas en particular tiene un peso molecular (MW) de 29374 g/mol y 280=24750 M-1cm-1. Al medir absorbancia en una cubeta estndar (1 cm de camino ptico) a 280nm se obtiene un valor de 0,500. a. Calcule la concentracin en g/ml de la solucin de protenas. Ayuda: Para resolver este problema deben recordarse los conceptos de ecuacin de la ecuacin de Lambert-Beer y que la longitud de onda a la que se miden las protenas es 280 nm b. Si cuenta con 1 ml de esta solucin, Cmo preparara 500 l de una solucin 400 g/ml? c. Qu valor de absorbancia presentar dicha solucin?

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