META-ANLISIS DE LOS EFECTOS AMBIENTALES EN SEMILLAS DE SOJA COMPOSICIN ABSTRACT El valor de los productos bsicos de soja depende de la concentracin

de protena y aceite en las semillas. Mientras composicin de la semilla est principalmente determinada genticamente, las condiciones ambientales durante el desarrollo de la semilla tambin afectan a la acumulacin de componente de semilla, y pueden resultar en protenas y/o aceite de dficit para el procesamiento. Para comprender los efectos ambientales generales sobre la composicin de la soja, se realiz un meta-anlisis de los datos publicados cuantificar el efecto de la escasez de agua, la temperatura y/o suministro de nitrgeno en protena de la semilla y la acumulacin de aceite y sus concentraciones finales. El meta-anlisis mostr que el estrs hdrico redujo el contenido (mg por semilla) de las fracciones de protena de semilla, aceite y residual. Acumulacin de la protena, sin embargo, fue menos afectado que eran de aceite y la acumulacin residual, lo que resulta en un aumento en la concentracin final de protena (% peso en seco). Crecimiento a alta temperatura tambin aument la concentracin de protena de una manera similar a la observada para el estrs hdrico. Sin embargo, en ninguno de los casos fue el aumento de la concentracin de protenas debido a un aumento en la sntesis de protenas per se. El aumento de suministro de nitrgeno a las semillas cultivadas in vitro y plantas hidropnicas cultivadas aument tanto la concentracin de protena de la semilla y el contenido final. Sin embargo, la magnitud de la respuesta componente semilla para la manipulacin experimental en condiciones de campo fue mucho menor que la observada en las Pruebas de campo de soja regionales uniformes. Un mayor conocimiento de los procesos fisiolgicos que regulan estas respuestas es esencial para predecir cundo y dnde pueden ocurrir los futuros dficits de protenas. Se discuten las limitaciones del enfoque meta-anlisis y las implicaciones para la investigacin futura sobre la composicin de las semillas de soja. 1. INTRODUCCIN El valor econmico de la semilla de soja depende de su protena y la concentracin de aceite (Brumm y Hurburgh, 1990; Hurburgh, 1994). La composicin final de la semilla se sabe que varan por el genotipo y, en respuesta a las condiciones ambientales durante el desarrollo de la semilla (Brummer et al, 1997; Westgate et al, 1999; Vollmann et al, 2000; Yaklich et al, 2002; Fehr et al, 2003; Wilson, 2004; Nichols et al, 2006). Aunque la gentica es generalmente considerada como el principal determinante de la composicin, la variacin ambiental en protenas o la concentracin de aceite puede determinar aos o

lugares donde se producen dficits en el aceite de soja crudo o rendimiento harina proteica (Brumm y Hurburgh, 1990). Un gran desafo para la industria de transformacin ha sido el desarrollo de un modelo general de los efectos ambientales sobre la composicin de la semilla para predecir las regiones y/o condiciones ambientales que producen soja de calidad consistentemente alta. Componentes de la semilla de soja se cuantifican por lo general en trminos de su concentracin ([mg de componente /mg de peso seco] x 100). Esto tiene un valor prctico para fines de marketing, pero ofrece poca informacin sobre las bases genticas o fisiolgicas de la variacin regional o ambiental. La concentracin es una construccin matemtica que relaciona el contenido de un componente en particular al peso total de la semilla (es decir, la suma de todos los componentes). Por lo tanto, la concentracin de protena de la semilla depende no slo en el contenido de protena (mg por semilla), sino tambin en el contenido de aceite y las fracciones residuales (principalmente paredes celulares, hidratos de carbono solubles, y minerales). Como tal, las dos variedades que producen semillas con el mismo contenido de protena (mg por semilla) podran ser categorizados como genotipos de alto o bajo de protenas, dependiendo del contenido de otros componentes de la semilla. Es la acumulacin en lugar de la concentracin final de los componentes principales de semillas que se refleja directamente en los procesos fisiolgicos activos durante el desarrollo de la semilla, tales como el suministro de nutrientes de la madre a la semilla o la capacidad metablica para sintetizar la protena. La concentracin final de cada componente es simplemente la culminacin de estos procesos. Para predecir cmo las condiciones ambientales afectan en ltima instancia la protena final y concentraciones de aceite, por lo tanto, es necesario primero entender cmo la acumulacin de cada componente semilla individual responde a las condiciones ambientales durante el llenado de la semilla. Existen numerosas estimaciones de la variacin regional en la composicin de la semilla de soja (Hurburgh et al, 1990; Hurburgh, 1994; Piper y Boote, 1999; Yaklich et al, 2002; Dardanelli et al, 2006 ; Brumm y Hurburgh, 2006). Estas estimaciones, sin embargo, confunden tanto los efectos genotpicos y ambientales, lo que hace imposible la separacin de la importancia relativa de estos dos factores. La magnitud de los efectos ambientales sobre la composicin de la semilla de soja a travs de aos y ubicaciones an no se ha aislado de una manera sistemtica. Un enfoque clsico para comprender los efectos de los factores ambientales sobre la composicin de la semilla ha sido a travs de experimentos de manipulacin (por ejemplo, Gibson y Mullen, 1996; Purcell et al, 2004; Pipolo et al, 2004) . Westgate y col. (1999) presenta una revisin cualitativa general sobre los efectos

ambientales sobre la composicin de la soja. Pero una evaluacin cuantitativa completa de los efectos ambientales sobre la composicin de la soja es insuficiente. A pesar de una gran cantidad de estudios llevados a cabo bajo una variedad de condiciones en diversas bases genticas se han publicado, los datos generados no se han sintetizado en un modelo general de los efectos ambientales sobre la composicin de la semilla. Meta -anlisis estn diseados para integrar la informacin de diversos estudios y las condiciones para evaluar los efectos del tratamiento sobre un conjunto de variables independientes (Curtis y Wang, 1998). Este enfoque ha sido ampliamente utilizado en la medicina y las ciencias sociales y en algunos estudios biolgicos (Rosenberg et al, 2000), Pero se ha utilizado con moderacin en el cultivo de la investigacin fisiologa (por ejemplo, Ainsworth et al , 2002; Morgan et al , 2003) . Las meta anlisis pueden ser particularmente informativa, ya que proporcionan una estimacin cuantitativa de los tamaos del efecto. El tamao del efecto se calcula como la respuesta a un tratamiento especfico (por ejemplo, riego) respecto a un control (por ejemplo, no riego). Aunque este enfoque evala tratamientos cuantitativos como cualitativos (control frente subray), la particin de datos adecuada captura la naturaleza cuantitativa de los efectos del tratamiento y puede dar cuenta de las diferencias en el tiempo de tratamiento y la intensidad. Los tamaos del efecto de la respuesta a la fertilizacin nitrogenada, por ejemplo, se pueden dividir en intervalos de dosis. En algunos casos, sin embargo, no es posible analizar tratamientos porque su magnitud y la intensidad no estn documentadas en unidades comparables. No obstante, los datos juiciosos anlisis sintctico antes de la meta -anlisis permite a los investigadores aislar posibles influencias experimentales o biolgicas en el tamao del efecto. El objetivo principal de este estudio fue utilizar un enfoque meta- analtico para sintetizar los datos publicados a partir de estudios sobre el efecto de las principales condiciones ambientales sobre la composicin de las semillas de soja. El meta- anlisis de los estudios se centraron en los efectos de la escasez de agua, la temperatura y el suministro de N en soja contenidos y concentraciones de componentes de semilla incorporada. 2. MATERIAL Y MTODOS 2.1. Magnitud de la variacin ambiental en la composicin de la semilla en las pruebas de campo uniforme. La soja Prueba Norte Regin Uniforme (USDA-ARS) evala el rendimiento y la composicin de las variedades de soja y el germoplasma con potencial para su lanzamiento comercial. Los datos obtenidos en estas pruebas son particularmente valiosos para la evaluacin de los efectos ambientales, ya todas las ubicaciones

utilizan protocolos de gestin uniformes y las parcelas se replican en los diseos estndar de campo estadstico. Semilla cosechada de las pruebas uniformes son analizados en el Centro de USDA-ARS Nacional para la Investigacin de Utilizacin Agrcola, Peoria, Illinois para la protena y la concentracin de aceite y estos datos son reportados sobre una base libre de humedad. Nos volvieron a analizar los 10 aos (1989-1998) de los datos de composicin de la Prueba de soja Uniforme Regin Norte (USDA-ARS) para evaluar la magnitud de la variacin inducida por el medio ambiente en la composicin de las semillas dentro de la principal zona de cultivo de soja en los Estados Unidos tres variedades dentro de la madurez grupos de 00 a IV que obtenga el mayor nmero de repeticiones ao por ubicacin fueron seleccionados para el anlisis. Estadsticas descriptivas estndares se utilizaron para evaluar la variacin en la composicin a travs de entornos. 2.2 . La construccin de base de datos y evaluacin .

Una base de datos de artculos publicados se construy mediante la bsqueda en el ISI Web of Knowledge Database 1, que incluye la base de datos Web of Science 1 cita ( 1945 -presente) , el contenido actual Conectar 1 ( 1998 -presente) , el ISI Proceedings1 ( 1991 -presente) y la Bios es previsualizaciones 1 ( 1980 present) (Apndice A). La bsqueda se destina a identificar todos los artculos de investigacin publicados que evaluaron el efecto del estrs dficit , aumento de la temperatura del agua y la disponibilidad de nitrgeno en la concentracin de semillas componente ( componente mg por mg de peso seco de semillas ) y / o el contenido ( componente mg por semilla ) . Lo ideal sera que cada estudio cuantifica tanto la concentracin de los componentes y contenido de componentes , o proporcionada peso de la semilla de la que se calcul el contenido de los componentes. La mayora de los estudios , sin embargo , evaluaron los efectos del tratamiento sobre la concentracin de slo componente . Si la base de datos incluy slo los estudios que evalan ambas variables , no habra habido datos suficientes para resolver los efectos del tratamiento . Los estudios que la lluvia simplemente correlacionadas o la temperatura durante el desarrollo con la variacin en la composicin de las semillas no fueron incluidos en la base de datos . Si bien este enfoque correlativo podra sugerir un efecto causal , que se confunde a menudo por otros factores . Por ejemplo , una disminucin en el contenido de protena de semilla asociado con el estrs dficit de agua al final de la temporada puede haber sido causado por un aumento simultneo de la temperatura o disminucin en el suministro de nitrgeno .

Por lo tanto , slo se incluyeron los estudios en los que el diseo experimental en comparacin un tratamiento manipulado para un tratamiento de control . Desde meta- anlisis considera cada observacin sea independiente ( Curtis y Wang , 1998 ) , los datos de diferentes aos o condiciones experimentales (es decir, cultivares o otros factores experimentales ) dentro de cada publicacin fueron tratados como observaciones independientes . Este enfoque es coherente con otros meta- anlisis publicados (Curtis y Wang, 1998 ; Ainsworth et al, 2002 ; . Jablonski et al, 2002 ; . Morgan et al, 2003 . ) . Los datos se obtienen directamente de las tablas o mediante la digitalizacin de los datos en cifras que utilizan DigitizeIt Software ( Versin 1.5.7 , 2003 Bormann , Braunschweig , Alemania). Una descripcin de los datos experimentales y los tratamientos incluidos en el meta -anlisis est disponible en Internet como informacin complementaria para este artculo. Los estudios que evaluaron el efecto del estrs hdrico en la composicin de la semilla requiere un tratamiento de control bien regado , y un tratamiento de dficit de agua y se dividen en experimentos en macetas o en el campo . Adems, se analizan por etapa fenolgica en que se impuso la escasez de agua : ciclo completo ( V1- R8) , perodo reproductivo temprano ( R1- R5) o perodo reproductivo tardo ( R5- R8) . Los estudios que abordan el efecto de la temperatura sobre la composicin de la soja se incluyeron si comparaban un tratamiento de control a uno a una temperatura ms alta . Artculos que los efectos de temperatura evaluados fueron clasificados como en los experimentos in vitro o en una olla . En experimentos in vitro semillas cultivadas o embriones en solucin nutritiva artificial para aislarlos de la influencia de tejido materno ( por ejemplo , Obendorf et al . , 1984 ) . Experimentos en macetas tambin fueron analizados por etapa fenolgica , cuando el aumento de la temperatura se impuso : ciclo completo ( V1- R8) , periodo de reproduccin completa ( R1- R8) , perodo reproductivo temprano ( R1R5) o el perodo reproductivo tardo ( R5- R8) . Piper y Boote ( 1999 ) observaron que la concentracin de protena de semilla respondi de manera diferente a temperaturas por encima o por debajo de 26 C. Por lo tanto , los estudios de temperatura se clasificaron en lo posible segn el rango de temperaturas exploradas : Rango Bajo < 26 C y de gama alta > 26 C. Los estudios que evaluaron el efecto del suministro de nitrgeno tuvieron un tratamiento de control y un tratamiento con una mayor disponibilidad de nitrgeno . Estos experimentos se clasificaron como llevado a cabo in vitro, en cultivos hidropnicos , o en el campo . En experimentos in vitro incluyen semillas o cultivos de embriones en varios niveles de suministro de nitrgeno amino . Experimentos hidropnicos involucrados plantas intactas cultivadas con solucin de nutrientes en

la ausencia de suelo . Los experimentos de campo incluyeron diversas formas de fertilizante N y fueron analizadas por etapa fenolgica en que los fertilizantes se increment N: vegetativo ( siembra -V6 ) , a principios de la reproduccin ( R1- R5) , y fines de reproduccin ( R5- R8) . El tamao del efecto para la respuesta a los fertilizantes N tambin se analiz de acuerdo al nivel de N aplicado con dosis que van de < 55 kg N ha- 1 a > 200 kg N ha- 1 .

2.3 . El anlisis estadstico Meta- anlisis evala los efectos del tratamiento de diferentes estudios en una escala comn del tamao del efecto . El logaritmo natural de la relacin de respuesta r ( r = valor en el tratamiento / valor en el control ) se utiliz para este propsito (Hedges et al . , 1999 ) . Esta medida del tamao del efecto fue seleccionado debido a la transformacin linealiza la respuesta y genera una distribucin ms normal para r (Hedges et al . , 1999 ) . Para mayor claridad , sin embargo , los datos se presentan grficamente como respuestas relativas ( [ (tratamiento - control) / Control ] x 100 ) . Software Meta -Win se utiliz para realizar el metanlisis (Rosenberg et al. , 2000 ) . Si las estimaciones de la variacin de tratamiento ( por ejemplo, desviacin estndar ) estn disponibles , es posible llevar a cabo un meta - anlisis ponderado en el que los tamaos del efecto son ponderados por el inverso de la varianza del muestreo ( Gurevitch y Hedges, 1999 ) . Este procedimiento aumenta la precisin de las estimaciones y aumenta el poder de resolucin para los efectos del tratamiento ya que se da ms peso a los experimentos con errores ms pequeos ( Gurevitch y Hedges, 1999 ) . Como la mayora de los artculos relativos a la composicin de soja , que podran incluirse en el meta -anlisis no inform un error estndar o desviacin estndar de los medios de tratamiento , los tamaos del efecto de los estudios se da el mismo peso . Los intervalos de confianza para cada tamao del efecto se calcularon utilizando la tcnica de remuestreo ( bootstrapping ) desarrollado por Adams et al . ( 1997 ) para los metanlisis . En resumen, esta tcnica consiste en calcular el tamao del efecto medio para un conjunto seleccionado al azar de los estudios n . El proceso se repite 4999 veces y la salida se ordena secuencialmente ; los valores ms bajos y ms 2,5 % a continuacin, se utilizan como los intervalos de confianza (Adams et al , 1997 . ) Inferior y superior . Un tamao del efecto se consider significativa cuando el intervalo de confianza del 95 % no se solapa con cero . Asimismo , se consideraron significativas las diferencias entre las categoras de

tratamiento si sus intervalos de confianza del 95% no se superponan ( Gurevitch y Hedges, 1999 ) . 3 . RESULTADOS

3.1 . Efecto general del medio ambiente en la composicin de la semilla de soja .

Para describir la variacin inducida por el medio ambiente en la composicin de las semillas por lo general se observa en el campo , se analizaron 10 aos de datos de la regin uniformes Pruebas de soja del Norte. El subconjunto de las variedades con el mayor nmero de aos de datos y localizaciones en ensayos replicados fueron seleccionados para su evaluacin. . figura 1 muestra que la variacin en la composicin de la semilla debido a factores ambientales era bastante grande. Por ejemplo , la variedad Lambert ( Mg0 ) vari de 33 % a 40 % de protena a travs de entornos ( Fig. 1a ) . Cada uno de los puntos de datos en la figura . 1 corresponde a la media de 3-4 repeticiones , por lo que los puntos fuera de los bigotes no se pueden considerar los valores atpicos . Como promedio entre todos los genotipos , la diferencia relativa entre los valores mximo y mnimo fue del 18% para la protena y 23 % de aceite .

3.2 . El meta -anlisis

Los resultados del metanlisis se presentan en dos secciones. En primer lugar , se presenta el efecto del estrs por dficit de agua , aumento de la temperatura y la disponibilidad de nitrgeno en el contenido de los componentes de semillas (mg por semilla ) . Entonces , integramos el efecto relativo de los factores ambientales del contenido de cada componente de semillas para cuantificar su impacto en la concentracin final (% ) . Este enfoque expone claramente la base para la variacin en la concentracin final debido al impacto del agua , la temperatura , y la provisin de N en la acumulacin de componente de semilla individual .

3.2.1 . Efecto ambiental sobre el contenido de los componentes de semillas

3.2.1.1 . El contenido de protena ( mg por semilla ) . En general , el estrs hdrico disminuy contenido de protenas (Fig. 2a). En todos los estudios , la reduccin relativa fue del 16 % ( categora general ) . En los pocos estudios en los que el estrs hdrico se impuso temprano en el desarrollo reproductivo ( R1 - R5 ) , sin embargo , el contenido de protena de la semilla aument alrededor de 6 % . Este incremento es probablemente una respuesta a una disminucin en el nmero de semillas por lo general causada por el estrs de agua en esta etapa . Semillas ms grandes se desarrollan en estas plantas que tienen una fuente de mayor a hundirse durante relacin de llenado de las semillas ( Borrs et al . , 2004 ) . Un aumento de temperatura tambin reduce el contenido de protena (Fig. 2b ) . La reduccin relativa en todos los estudios fue del 9% . El tamao del efecto vara con el enfoque experimental y el rango de temperaturas exploradas . El contenido de protena in vitro se redujo en un aumento de las temperaturas mucho ms en el rango alto ( 14 %) que en la gama baja ( 2 %). En experimentos en macetas , el aumento de temperatura en el rango alto durante el llenado del grano rpido (R5 R8 ) no afect significativamente el contenido de protena . Sin embargo, un aumento de la temperatura en el rango bajo reduce el contenido de protena por 15 % . Esta diferencia en el tamao del efecto probablemente refleja el menor contenido de protena de las semillas cultivadas en el rango de temperatura ms alta . Proporcionar nitrgeno suplementario aument el contenido de protena de alrededor del 27 %, en promedio en todos los estudios (Fig. 2c ) . La magnitud de este tamao del efecto fue determinada principalmente por la respuesta de los embriones cultivados in vitro ( 60 % ) . Las plantas enteras cultivadas en hidropona tambin respondieron favorablemente a un incremento en el suministro de nitrgeno , y a un grado mucho mayor que lo hicieron las plantas cultivadas en el campo . En promedio , el contenido de protena de semilla de una respuesta positiva ( 8 % ) a la fertilizacin de nitrgeno suplementario en todos los estudios de campo . Un tamao del efecto similar se observ para el suplemento N aplicado durante el crecimiento vegetativo ( siembra -V6 ) y el desarrollo reproductivo temprano ( R1- R5) . Dosis de nitrgeno tambin tuvo un impacto significativo en el tamao del efecto . Durante la etapa vegetativa , el fertilizante N aplicada a < 100 kg de N ha - 1 aumento de la semilla de contenido de protena de aproximadamente 2 % , con respecto al control , mientras que la aplicacin en > 200 kg ha- 1 protena de semilla de aumento de alrededor del 14 % en promedio ( datos no presentados ) . Se observaron respuestas dependientes de dosificacin similares para las aplicaciones de nitrgeno suplementario a las etapas reproductivas tempranas y tardas ( datos no mostrados ) .

3.2.1.2 . Contenido de aceite ( mg por semilla ) . El estrs hdrico se redujo el contenido de aceite por semilla drsticamente (Fig. 3a). En todos los estudios , la reduccin fue del 25 % , en relacin con los tratamientos de control de buen riego . El momento en que el estrs tambin fue muy importante. Cuando el estrs agua se impuso temprano en el perodo reproductivo ( R1 - R5 ) , el tamao del efecto no fue diferente de cero . El estrs hdrico impuesto durante el llenado de semillas (R5 -R8 ) se redujo el contenido de aceite alrededor del 35 %. Consistente con la disminucin en el contenido de protena de la semilla , el aumento de temperatura tambin reduce el contenido de aceite 15 % en todos los experimentos (Fig. 3b ) . Temporizacin de nuevo era importante ya que no haba respuesta significativa a un aumento de temperatura durante R1 - R5 , mientras que el aumento de temperatura en R5 - R8 disminuy el contenido de aceite en un 20 % , con respecto al control . El aumento de suministro de nitrgeno no afect el contenido de aceite de semilla de manera significativa, en promedio en todos los estudios (Fig. 3c ) . Se observ un aumento en algunos estudios in vitro , pero el tamao del efecto fue muy variable . Contenido de aceite de semillas no respondi a una mayor cantidad de nitrgeno en el campo. Tampoco hubo una respuesta significativa a la dosis de nitrgeno ( datos no mostrados ) . 3.2.1.3 . Contenido residual ( mg por semilla ) . Contenido residual ( mg por semilla de hidratos de carbono estructurales y no estructurales ) se redujo por el estrs hdrico 20 % en todos los experimentos ( Fig. 4a ) . El efecto de la etapa de desarrollo en el tamao del efecto refleja la observada para la protena y contenido de aceite . El estrs hdrico impuesto entre la floracin y comenzando de llenado de semilla ( R1 - R5 ) aument el contenido residual de 4 % , mientras que el estrs durante el llenado de semilla disminuy contenido residual casi el 30 % con respecto al control . Como promedio entre todos los estudios , el contenido residual se redujo 15 % por un aumento de la temperatura (figura 4b ) . In vitro, el contenido residual disminuy en respuesta a un aumento de la temperatura en el intervalo alto , pero aument en el rango bajo . Contenido residual en los estudios de plantas en maceta se redujo significativamente en respuesta a la temperatura ms alta ( 15 % ) ; esta respuesta fue similar en los rangos de alta y baja temperatura . Haba una pequea disminucin en el contenido residual en respuesta a un incremento en el suministro de nitrgeno , en promedio en todos los estudios ( fig. 4c ) . El valor residual inferior refleja la gran disminucin reportada en los estudios in vitro ( 11 % ) . El aumento de la disponibilidad de nitrgeno no afect contenido

residual en cualquiera de los estudios de campo , y no hubo diferencias entre las dosis de nitrgeno ( datos no mostrados ) .

3.2.2 . Efectos combinados de contenido de componentes de semilla de protena final y la concentracin de aceite El meta -anlisis sobre el contenido de componente de semilla revel que los componentes principales de semillas ( protena , aceite , residual ) no lo hicieron necesario responder al suministro de agua , la temperatura , y de suministro de nitrgeno en la misma direccin o en la misma medida . Como tal , el metaanlisis de la concentracin de componente de semilla ( % ) que sigue se presenta con especial nfasis en las relaciones entre los contenidos de los componentes individuales (mg por semilla ) ya que determinan composicin final de la semilla.

3.2.2.1 . El estrs hdrico . El estrs hdrico redujo protena de la semilla , el aceite y el contenido residual. En promedio , el impacto negativo fue ms pronunciado en el petrleo residual y que en el contenido de protena ( Figs. 2a , 3a y 4a ) . Aunque la direccin de la respuesta entre los componentes principales de semillas fue similar , la diferencia en la magnitud de la respuesta result en un aumento significativo en la concentracin de protena ( 3 % ) y disminucin similar en la concentracin de aceite ( 3 % ) . El tamao del efecto dependa de la sincronizacin de la tensin ( Figs. 2a , 3a y 4a ) . El estrs hdrico impuesto en todo el ciclo de vida de las plantas ( V1 - R8 ) redujo el contenido de todos los componentes de la semilla en el mismo grado ( 25 % ) . Como consecuencia , las concentraciones finales de protena y aceite en la semilla no se vieron afectados significativamente . El estrs hdrico impuesto durante el desarrollo reproductivo tardo ( R5 -R8 ) se redujo el contenido de protena menos que el petrleo y el contenido residual , en promedio. Esta diferencia en la respuesta result en un aumento significativo en la concentracin final de protena en las semillas estresados (Fig. 2a ) . En contraste con este patrn general , la tensin impuesta antes de relleno de semillas rpida ( R1 - R5 ) dio lugar a un aumento en el contenido de protena y la concentracin . Esto probablemente refleja un aumento en la relacin de fuente / sumidero causada por una disminucin en el nmero de semillas por planta cuando el estrs se impone en esta etapa del desarrollo ( Borrs et al . , 2004 ) .

3.2.2.2 . Temperatura . El aumento de temperatura disminuy protena de la semilla , y el contenido de aceite residual en la mayora de los casos , aunque los tamaos del efecto general fue menor que la observada para el estrs agua ( Figs. 2b , 3 bandas 4b ) . En promedio , la disminucin en el contenido fue menos pronunciado para protenas ( 7 % ) que para el petrleo o contenidos residuales ( 15 % ) , lo que result en un incremento neto en la concentracin de protena en respuesta a un aumento de temperatura . La respuesta de los componentes de la semilla al aumento de la temperatura in vitro , es decir, en ausencia de los tejidos maternos , dependa de la gama de temperaturas explorado (figuras 2b , 3b , y 4b ) . A altas temperaturas (> 26 8C ) se redujeron en todos los contenidos de los componentes de la semilla. Contenido residual , sin embargo , se ve afectada en mayor medida , lo que resulta en un aumento de la protena y la concentracin de aceite a medida que aumentaba la temperatura . A temperaturas ms bajas ( < 26 8C ) de protena y contenido de aceite disminuy slo ligeramente , pero aument contenido residual causando una modesta disminucin de la protena y la concentracin de aceite . El aumento de temperatura alrededor de las plantas cultivadas en macetas disminuy contenido de protena de semilla de aproximadamente el 9% , y la disminucin de petrleo y contenidos residuales 18-15 % , en promedio (Figuras 2b , 3b , 4b ) . La respuesta ms pequea de acumulacin de la protena result en un aumento significativo en la concentracin de protena final , sin cambios en la concentracin de aceite y de la concentracin residual . La gama de temperaturas tambin afect a la direccin y la magnitud de los efectos del tratamiento . Tratamientos impuestas en el rango de alta temperatura (> 26 8C ) tiene efectos opuestos sobre la protena y la concentracin de aceite ( Figs. 2b y 3b ) . Cambios en el contenido de componentes eran relativamente grandes y en la misma direccin , pero la disminucin en el contenido de protena de menos pronunciado en promedio ( 12 % ) que la de contenido de aceite ( 28 % ) y el contenido residual ( 20 % ) . El resultado neto fue una disminucin de la concentracin de aceite y el incremento en la concentracin de protena . Un aumento de la temperatura en el rango de baja temperatura ( < 26 8C ) aparentemente no tuvo ningn efecto significativo sobre la concentracin de protena y el aumento de la concentracin de aceite (figuras 2b y 3b ) . Este resultado , sin embargo , no es consistente con los datos de contenido de componentes que muestra que el contenido de aceite se redujo ms de contenido de protena . Esto debera haber conducido a un aumento en la concentracin de protena . La falta de coherencia en este caso en particular es debido a los datos incompletos sobre el contenido de componentes de semilla y la concentracin en los estudios llevados a cabo en el intervalo de baja temperatura probable.

3.2.2.3 . Nitrgeno . Como promedio entre todos los experimentos , un incremento en el suministro de nitrgeno increment el contenido de protena de semilla de 20 % , con poco cambio en el contenido de aceite y una reduccin del 5 % en el contenido residual ( figs. 2c , 3c y 4c ) . La respuesta dramtica de contenido de protena , sin embargo , corresponde a slo un modesto aumento ( 5 % ) en la concentracin de protena (Fig. 2c ) . El tamao del efecto para el aceite no era diferente de cero, mientras que la concentracin residual disminuy ms de 5 % (figuras 3c y 4c ) . La magnitud del tamao del efecto de la concentracin de componente vara dramticamente con enfoque experimental . Tratamientos de nitrgeno in vitro aumento del contenido de protena de 60 % , tena slo una pequea ( no significativa ) impacto sobre el contenido de aceite de 7 % , y la disminucin del contenido residual de aproximadamente el 12 % ( Figs. 2c - 4c ) . El resultado neto de estas respuestas de componentes era un aumento medio en la concentracin de protena de ms de 50 % con respecto a los tratamientos de control . En contraste , la respuesta de la concentracin de protena de la semilla de aumento de suministro de nitrgeno en el campo fue slo alrededor de 1 % para todos los estudios evaluados . Hubo, sin embargo , una tendencia a un aumento en respuesta a mayores tasas de nitrgeno . En los estudios que aplican fertilizantes nitrogenados nitrgeno a > 100 kg ha- 1 entre la siembra -V6 , la concentracin de protena se increment 2 %. Del mismo modo , para las aplicaciones de nitrgeno > 100 kg h - 1 en R1 - R4 , concentracin de protena respondi 3 % ( datos no mostrados ) . Concentracin de protena de semilla no respondi a las tasas de < 100 kg N ha- 1 , y en ningn caso fueron el petrleo y las concentraciones residuales afectadas por fertilizantes nitrogenados aplicaciones. Cuando slo se consideraron los experimentos de campo que informaron tanto el contenido de protena y la concentracin , la respuesta de la concentracin de protena a la fertilizacin nitrogenada era tan grande como 7 % a tipos de > 200 kg de N ha - 1 aplicado a la siembra ( datos no mostrados ) . 4 . DISCUSIN Hasta donde sabemos, este meta -anlisis es el primer intento de distinguir las respuestas de los componentes de la semilla de soja a las condiciones ambientales especficas a travs de las bases genticas , los enfoques experimentales, y etapas de desarrollo . El anlisis de los efectos ambientales sobre el contenido de componente ( mg por semilla ) , as como la evaluacin de los efectos sobre la concentracin de componente ( mg g - 1 ) revel que un aumento en la concentracin no se traduce necesariamente a partir de una

estimulacin de la sntesis de los componentes. Durante el estrs agua o la sntesis de todos los componentes principales de semillas de alta temperatura fue inhibida . Las diferencias en la concentracin resultado principalmente debido a la acumulacin de los componentes individuales no se inhibi en la misma medida .

4.1 . El estrs hdrico El estrs hdrico impuesto durante legumbre disminucin del petrleo y el contenido residual ms que a contenido de protena . En general, esto dio lugar a un aumento en la concentracin de protena final . Est bien establecido que el estrs hdrico se acorta la duracin de llenado de semilla y aparentemente tiene poco impacto en la tasa de llenado ( Meckel et al , 1984 ; . Westgate et al , 1989 ; . Egli y Bruening , 2004 ) . Tambin est bien documentado que el estrs hdrico en soja acelera removilizacin de nitrgeno de las hojas ( Brevedan y Egli , 2003 ; . DeSouza et al , 1997 ) . Desde 50-100 % de nitrgeno semilla se removilizado de las hojas (por ejemplo, Egli et al , 1983 ; . Chapin et al , 1990 ; . . Turner et al , 2005 ) , el estrs de agua durante el llenado de semillas puede aumentar la tasa de N a la removilizacin semillas , lo que resulta en un aumento temporal de la disponibilidad amino - N . Mientras que una cantidad significativa de nitrgeno semilla se deriva de la absorcin del suelo y la fijacin de N2 durante el llenado de semillas , removilizacin de nitrgeno reducido de las hojas se amortiguar una escasez inducida por el estrs debido a la inhibicin de la absorcin y fijacin ( Triboi y Triboi - Blondel , 2002 ) . Sntesis de petrleo y de hidratos de carbono por la semilla , por otra parte , depende principalmente de la fijacin de carbono concurrente durante el llenado de semilla ( Yamagata et al . , 1987 ) . Por lo tanto , una reduccin de la asimilacin de suministro causada por el estrs hdrico probablemente tendra un impacto ms directo sobre el petrleo y la sntesis componente residual. Aparentemente , el aumento en la nueva movilizacin de nitrgeno de las hojas y las paredes de la vaina es suficiente para compensar la reduccin del tipo de aceite y la sntesis residual resultante en una tasa de crecimiento de la semilla bastante constante , al menos temporalmente ( Meckel et al , 1984 ; . Westgate y col . , 1989 ) . Dado que el estrs agua acorta la duracin de llenado de semillas , todos los contenidos de los componentes se reducen , pero la sntesis de protenas es aparentemente menos afectado debido al aumento de la removilizacin amino - N , lo que resulta en un aumento neto en la concentracin de protena en la semilla madura . Una posibilidad alternativa es que las tasas de acumulacin de la protena , aceite y residual no se ven afectados por el estrs hdrico , pero duraciones de acumulacin de componente de semilla individual son , de hecho afectada

diferencialmente . Es decir, la removilizacin de estrs hdrico las plantas pueden permitir la acumulacin de protenas para continuar ya que el aceite y la acumulacin residual. Nuestros estudios actuales estn dirigidos a la determinacin de cmo los efectos ambientales sobre la velocidad y duracin de la acumulacin de componente de semilla individual afectan a su concentracin final en la semilla .

4.2 . temperatura De acuerdo con nuestro meta -anlisis , la acumulacin de aceite residual y se ven afectados negativamente por el aumento de temperatura en el rango de alta temperatura durante el llenado de semillas , pero la acumulacin de protena no se vio afectada significativamente . Esta respuesta a la temperatura tambin se ha observado en la colza ( Brassica napus ) y girasol ( Helianthus annuus ) ( Triboi y Triboi - Blondel , 2002 ) . Las temperaturas ms altas son conocidos para aumentar la tasa de crecimiento de la semilla y reduceseed duracin de llenado ( Egli y Wardlaw , 1980 ; . Chimenti et al , 2001 ) . Del mismo modo , las temperaturas ms altas aumentan la tasa de acumulacin componente de semillas hasta un grado ptimo , mientras que se redujo la duracin de la acumulacin ( Bhullar y Jenner , 1985 ; . Jenner et al , 1991 ) . En soja , un aumento en la tasa de removilizacin de nitrgeno debido a la acelerada senescencia de las hojas puede soportar un aumento de la tasa de acumulacin de protena de la semilla a temperatura ms alta ( Triboiand y Triboi - Blondel , 2002 ; Egli y Wardlaw , 1980 ) , incluso si la absorcin total de nitrgeno o fijacin se reducen debido a un perodo de llenado de semilla reducido o inhibido ( Triboi y Triboi - Blondel , 2002 ) . Aparentemente , la capacidad de mantener la tasa de acumulacin de la protena parcialmente compensado por la duracin de llenado de semilla ms corto , lo que resulta en un efecto menos nocivo sobre el contenido final de protena . De aceite residual y el contenido, en el otro lado , son ms dependientes de la produccin de fotoasimilados actual y se ven afectados negativamente por el aumento de temperatura , particularmente en el intervalo de alta temperatura , principalmente debido a una menor duracin de llenado de semilla ( Triboi y Triboi - Blondel , 2002 ; Yamagata et al . , 1987 ) . En este caso , no hay ninguna memoria intermedia ( es decir, nitrgeno en las hojas ) para compensar una menor duracin de llenado , por lo que el estrs temperatura slo causa concentraciones de aceite residual o a disminuir. Respuesta de embriones aislados a un aumento de temperatura en in vitro fue notablemente diferente de la observada en los estudios llevados a cabo en plantas enteras o en el campo . El meta -anlisis de los experimentos in vitro indican que el aumento de temperatura en el Alto

Rango ( > 26 8C ) redujo notablemente el contenido residual de la semilla , que aument tanto la protena y concentraciones de aceite . Los embriones expuestos a un aumento de temperatura en el rango bajo ( < 26 8C ) mostraron un aumento modesto en sacarosa al aceite de particin ( Iyer et al . , 2008 ) . Estas respuestas variaron de aquellos en planta en la que temperatura elevada provoc un aumento en la concentracin y la reduccin de aceite de protena final . Los resultados indican que los efectos de la temperatura sobre la acumulacin de componente de semilla se moderan en gran medida por la respuesta de los tejidos maternos . 4.3 . nitrgeno Contenido de protena de semilla fue mucho ms sensible a un incremento en el suministro de nitrgeno in vitro que en los estudios llevados a cabo de toda la planta en el cultivo hidropnico o en el campo . En estudios in vitro los embriones expuestos a concentraciones crecientes ( y cantidades ilimitadas ) de nitrgeno del grupo amino en el medio ( Saravitz y Raper , 1995 ; Hayati et al , 1996 ; . Pipolo et al , 2004 . ) . Dado que la absorcin de amino - N est parcialmente mediada por la difusin facilitada no saturable ( Zhang et al . , 2007 ) , la absorcin de aminocidos puede continuar en concentraciones muy por encima de los niveles fisiolgicos que puedan ocurrir en planta . Por consiguiente , muy altos contenidos de protena y concentraciones pueden ser alcanzados por los embriones cultivados in vitro en condiciones no limitantes . Estos altos valores presumiblemente reflejan un potencial gentico para la acumulacin de la protena que no se expresa en la planta . Estudios de plantas enteras confirman que la fertilizacin con nitrgeno inorgnico inhibe la formacin de ndulos y la actividad de la nitrogenasa ( Streeter , 1988 ) . En la presencia de abundante suelo NO3 - o NH4 + plantas , soja disminuyen amino - N transportado a disparar el derivado de N - atmosfrica fijacin . Como tal , la aplicacin de fertilizantes de nitrgeno para el suelo no puede conducir a un aumento en la disponibilidad de nitrgeno a la semilla . Hay cierta evidencia , sin embargo , que la aplicacin de fertilizantes de nitrgeno a tasas muy altas ( > 200 kg ha - 1 ) en el desarrollo temprano puede resultar en aumentos medibles en la concentracin de protena y el contenido .

4.4 . Variacin en la composicin de las semillas de campo vs variacin inducida experimentalmente analiz mediante el metanlisis La variacin relativa (entre el percentil 90 y 10 ) en la protena de la semilla y la concentracin de aceite durante 10 aos de la Regin uniformes Pruebas soja Norte en promedio en todas las variedades fue de 10 % de protenas y 11 % de

concentracin de aceite (Fig. 1 ) . Si la variacin relativa se calcula con la mxima media y mnima se eleva a 18 % de protenas y 23 % de aceite . Dado que cada punto de datos presentada en la fig. 1 corresponde a un experimento entero con 34 repeticiones , ninguna puede considerarse un caso atpico . Independientemente del tipo de estimacin considerado, esta variacin inducida por el ambiente dentro de las pruebas de campo uniforme era , en general , mayor que la variacin observada para el campo y estudios de invernadero en el que las variables ambientales fueron manipulados intencionadamente . Por qu es la magnitud de la variacin componente semilla informado en estudios experimentales de manipulacin en el campo inferior a la observada en los ensayos de campo uniforme ? Es posible que el estrs bitico indocumentado de plagas y enfermedades aadi a la variacin entre aos y la ubicacin en estos ensayos . Ninguno de los ensayos de campo , sin embargo , inform de las infestaciones de plagas o enfermedades. Una explicacin ms probable es que los cultivares probados en ensayos de campo fueron expuestas a mltiples estreses abiticos simultneamente o secuencialmente durante la temporada . El estrs hdrico durante el llenado de semillas a menudo se asocia con altas temperaturas y la baja disponibilidad de N ( Sinclair et al. , 1987 ) . La aparicin de mltiples tensiones ( dficit de agua , alta temperatura, baja disponibilidad de N ) que actan al mismo tiempo se ha demostrado que activa una serie de genes diferentes de los inducidos por un solo tensin ( Mittler , 2006 ) . Tambin es posible que algunos de los lugares de ensayo uniformes encuentran condiciones ambientales breves pero extrema no incluidos en el ensayo ( por ejemplo, Wardlaw et al , 2002 ; . . Rondanini et al , 2006 ) . La aparicin de estos mltiples o repetitivos tensiones no se contabilizan en los experimentos manipulativos incluidos en el meta -anlisis.

4.5 . Limitaciones y recomendaciones para futuras investigaciones sobre la composicin de las semillas Centrar el enfoque meta -anlisis sobre el contenido de los componentes de semillas junto con la concentracin revel varias situaciones en las que un aumento en la concentracin de los componentes de la semilla no se asoci con un aumento de la sntesis. Esta observacin proporciona informacin bsica importante para futuros experimentos para comprender los factores fisiolgicos que regulan la composicin de la semilla de soja . Concentraciones de los componentes finales ( mg mg - 1 ) resultan de los cambios en el contenido relativo de todos los componentes de la semilla por semilla (mg ) . Estos a su vez se determinan por la velocidad ( mg semilla - 1 d - 1 ) y la duracin de su acumulacin ( das ) . La resolucin de la complejidad de la composicin de la

semilla en desarrollo estos componentes ms simples puede proporcionar una aproximacin ms racional para definir los mecanismos genticos que regulan el metabolismo de las semillas y el desarrollo . Que muchos estudios han pasado por alto esta compleja interaccin entre el metabolismo de las semillas y el desarrollo es evidente en su enfoque nico en la concentracin del componente final. Los estudios que carecen de contenido de componentes (o incluso la masa de semillas ) de datos limitaron el poder de resolucin de los meta - anlisis, ya que fue necesario utilizar una combinacin de los conjuntos de datos para analizar el efecto de cada factor ambiental en la composicin de la semilla . El efecto de la N - suministro de protena de la semilla , por ejemplo , incluye 230 estudios que informan de la concentracin de protena de la semilla , slo 69 de estos informado contenido de protena de la semilla (Fig. 2c ) . Teniendo en cuenta los tratamientos cuantitativos como cualitativos tambin limita el poder de resolucin de los meta -anlisis. El estrs hdrico intensidad , por ejemplo , no siempre fue documentado , o puede haber sido reportado en diferentes unidades en todos los estudios . Por lo tanto, podra no ser posible estandarizar la magnitud de los tratamientos en todos los casos . En relacin a la magnitud de los tamaos del efecto de tratamiento o intensidad es posible slo cuando los tratamientos son explcitamente cuantitativa (por ejemplo, dosis de fertilizante ) . Sin embargo , el tratamiento cualitativo de variables ambientales en el meta -anlisis se representa con xito los efectos generales sobre la composicin de la semilla de soja, y sirve como una gua para la investigacin futura .

EFECTO DE ALTA TEMPERATURA Y ESTRS HDRICO EN germinacin del polen Y FERTILIDAD EN ARROZ ESPIGUILLA

RESUMEN En los climas futuros , arroz con mayor frecuencia podra ser sometido a altas temperaturas y estrs hdrico simultnea durante las etapas de desarrollo sensibles como la floracin . En este estudio, cinco genotipos de arroz fueron expuestos a altas temperaturas, la escasez de agua y la temperatura alta y estrs hdrico durante la floracin combinado para cuantificar su respuesta a travs de espiguilla fertilidad. Anlisis microscpico revel diferencias significativas en la dehiscencia de las anteras entre los tratamientos y los genotipos , con una moderadamente alta asociacin con el nmero de granos de polen sobre el estigma germinadas . Hubo una fuerte relacin entre la espiguilla fertilidad y el nmero de polen germinado en estigmas . A pesar de que los tres tratamientos de estrs como resultado esterilidad de la espiguilla , alta temperatura estrs causado la mayor esterilidad en los cinco genotipos. Una disminucin lineal acumulativa de la fertilidad espiguilla con aumento de la duracin de la tensin de alta temperatura independiente y en combinacin con el estrs de agua se cuantific . Mejor dehiscencia de las anteras , mayor en la germinacin del polen vivo, y una mayor fertilidad espiguilla se observaron tanto en el N22 adhesiones en comparacin con IR64 , Apo y Moroberekan a altas temperaturas , la escasez de agua y el estrs combinado , lo que indica su capacidad de tolerar mltiples estreses abiticos .

1 . INTRODUCCIN El arroz es un cereal bsico importante crecimiento en los sistemas de cultivo de regado del sur y sudeste de Asia , las temperaturas withmaximumday ya sea cerca o por encima del umbral crtico que oscila entre los 33 C ( Nakagawa et al. , 2002) y 35 C ( Yoshida, 1981 ) . Los ltimos modelos climticos globales predicen un aumento de la temperatura media de 2 a 4,5 C y la superficie de arroz afectadas por la escasez de agua se duplique para finales de este siglo (IPCC, 2007 ) . Recientemente, los puntos calientes de alta temperatura combinada y la escasez de agua se produce en la floracin sensible y llenado de grano de arroz etapa se identificaron utilizando los datos del almanaque arroz y el anlisis espacial utilizando el sistema de informacin geogrfica ( Wassmann et al. , 2009 ) . Por lo tanto , la superacin de los efectos de las altas temperaturas y la escasez de agua en la produccin de arroz es esencial para la seguridad alimentaria en el futuro.

Estrs de alta temperatura se define como el aumento de la temperatura ms all de un umbral crtico durante un perodo de tiempo suficiente para causar daos irreversibles en el crecimiento y desarrollo de plantas ( Wahid et al . , 2007 ) . Respuestas de arroz a altas temperaturas varan segn la etapa de desarrollo , con la sensibilidad ms alta registrada en la etapa reproductiva. Las temperaturas > 35 C en la floracin y dura ms de 1 hora puede conducir a alta esterilidad del arroz ( Jagadish et al. , 2007 ) . Un aumento de alta temperatura inducida por el estrs en la esterilidad de la espiguilla se atribuy a la dehiscencia de la antera anormal ( Matsui y Omasa , 2002 ) , alteracin de la polinizacin ( Matsui et al . , 2005 ) , y la germinacin del polen ( Jagadish et al . , 2010 ) . Por otra parte , la temperatura alta de 39 C da un da antes de la floracin dado lugar a pobres dehiscencia de las anteras durante la antesis posterior ( Matsui y Omasa , 2002 ) . Condicin limitada de agua ( tambin conocida como la sequa ) , que afecta a 23 millones de hectreas de arroz regularmente ( Pandey et al. , 2007 ) es una condicin relacionada con suficiente humedad disponible en el suelo para apoyar la produccin media de los cultivos. La respuesta de las plantas al estrs de agua depende de la duracin y la gravedad de la tensin ( Araus et al , 2002 ; . Bartels y souer , 2004 ) y la etapa de desarrollo ( Zhu et al , 2005 . ) . El arroz es sensible al estrs por sequa en particular durante la etapa de floracin , lo que resulta en graves prdidas de rendimiento ( Liu et al . , 2006 ) . Los procesos fisiolgicos durante la etapa de floracin delicada , que afecta negativamente a la fertilidad espiguilla bajo estrs hdrico [ dehiscencia de las anteras ( Ekanayake et al, 1989 , 1990 , . Liu et al, 2006 . ) ; Germinacin del polen ( Saini y Westgate, 2000 )] fueron similares a el estrs de alta temperatura ( Yoshida, 1981 ; . Jagadish et al, 2010 ) . Adems , pancula exercin ( O'Toole y Namuco , 1983 ) , y la longitud del pednculo ( He et al . , 2009 ) eran en parte responsable de la mayor esterilidad bajo estrs hdrico . La aparicin simultnea de mltiples estreses abiticos en lugar de una tensin particular, se observa comnmente en condiciones de campo ( Mittler , 2006 ) . La combinacin de alta temperatura y estrs hdrico representa un excelente ejemplo de mltiples estreses abiticos que ocurren simultneamente en el campo. Se encontr que el estrs combinado tena una significativamente mayor efecto perjudicial sobre el crecimiento y la productividad de la exposicin a un solo tensin en Hordeum vulgare ( Savin y Nicolas , 1996 ) y Poa pratensis ( Wang y Huang , 2004 ) . Efectos de esta combinacin en Arabidopsis thaliana ( Rizhsky et al . , 2004 ) , Triticum aestivum ( Shah y Paulsen , 2003 ) y la Nicotiana tabacum ( Rizhsky et al . , 2002 ) se han documentado . Sin embargo , relativamente poca informacin disponible para el arroz , en respuesta a la alta temperatura combinada y estrs hdrico en general, y en la etapa de floracin ms sensibles en

particular. Por lo tanto, los experimentos se llevaron a cabo con los siguientes objetivos ( 1 ) estudiar el efecto de la alta temperatura ( HT ) , la escasez de agua ( WS ) y alta temperatura y agua combinada tensin (HT + WS ) en el perodo de floracin , el alargamiento pednculo y panoja exercin en el arroz ; ( 2 ) grabar el impacto en la dehiscencia de las anteras , polen y la germinacin en el estigma y la fertilidad espiguilla cuando se expone a las tensiones antes mencionadas a la floracin , y ( 3 ) probar la hiptesis de que " alta temperatura un da antes de la floracin afecta a la fertilidad de espiguillas de apertura el da siguiente " .

2 . MATERIALES Y MTODOS

2.1 . cra de cultivos Cinco de arroz ( Oryza sativa L. ) genotipos que difieren en su respuesta a cualquiera HT o WS momento de la floracin se utilizaron para este estudio ( Tabla 1 ) . Las semillas se sembraron en bandejas de siembra con suelo franco arcilloso despus de romper la latencia ( 2 d, 50 C). Plantas de semillero de catorce das de edad fueron trasplantadas en macetas de plstico con dos agujeros en la parte inferior sellados con tapones para facilitar el control del agua . Cada maceta se llen con 6,0 kg de la misma arcilla suelo franco con 2,0 g de ( NH4 ) 2SO4 ( urea ) , 1,0 g de cloruro de potasio ( KCl ) y 1,0 g de superfosfato simple ( SSP ) . Un 2,5 g adicionales de ( NH4 ) 2SO4 fue superior vestido , 25 a 30 d despus del trasplante . Cipermetrina ( Cymbush ) 0,42 g L- 1 se pulveriz 30 d despus del trasplante para controlar la mosca blanca ( Bemisia spp . ) . No haba otros problemas de plagas o enfermedades . 2.2 . invernadero Las plantas se cultivaron en un invernadero de temperatura controlada mantenida a 29/21 C da / noche de temperatura [ real : 28,8 C ( SD } { desviacin estndar = 0,84 ) / 20,9 C ( SD = 0,27 ) ] y da / noche relativa humedad (RH ) del 75-85 % [ actual 75,2 % ( SD = 0,11 ) / 86,7 % ( SD = 0,07 ) ] en condiciones de luz natural en el Instituto Internacional de Investigacin del Arroz (IRRI ) , Filipinas. Las plantas se colocan en un banco espaciados a 30 - cm para evitar efectos de sombreado. La temperatura ambiente y la humedad relativa se midieron utilizando termopares ( Chessell 392, EE.UU. ) cada 10 s con un promedio de ms de 10 min .

2.3 . cmara de crecimiento Cmaras de crecimiento interior ( Thermoline , Australia ) se utilizaron con temperaturas automatizados para aumentar gradualmente desde 29 C a 38 C, a partir 0730-0830 ( 2,5 h despus del amanecer ) y se mantuvo a 38 C ( SD = 1,23 ) hasta 1430 , con una HR de 75 % ( dE = 3,88 ) durante los dos experimentos 1 y 2 . Tanto la temperatura ( P > 0,97 ) y humedad relativa ( P > 0,73 ) se mantuvieron constantemente entre los experimentos para evitar cualquier efecto de cmara sobre las observaciones de plantas registradas . Las plantas fueron separadas a unos 15 -20cm de evitar el hacinamiento . Un termopar colocado por encima del dosel en la cmara de crecimiento mide la temperatura del aire ambiente y la humedad relativa cada 10 s y los promedio de ms de 10 min ( 392 Chessell , EE.UU. ) . Fotosinttico de la densidad de flujo de fotones se mantuvo a 640molm - 2 s - 1 . No se midi la concentracin de CO2.

2.4 . tratamientos de estrs Dos experimentos se llevaron a cabo con condiciones ligeramente diferentes . Cinco y siete rplicas de plantas se utilizaron para cada uno de los cuatro tratamientos (control , HT , WS y HT + WS ) en el Experimento 1 y 2 , respectivamente . Las plantas de los cinco genotipos se cultivaron en condiciones de invernadero de temperatura controlada a 29/21 C y se utilizaron como controles absolutos para los experimentos . Para el experimento 1 , las plantas se expusieron a HT durante 6 h ( 0.830 a 1.430 ) , en el primer da de la antesis ( es decir, la aparicin de anteras ) y luego se movieron de nuevo a las condiciones de control ( 29/21 C ) . Del mismo modo , la transferencia entre el HT condiciones de control y se continu durante cinco das consecutivos de floracin . Para WS , fueron seleccionados y etiquetados principales cultivadores de 5 d antes de dirigirse ( DAP) . Tapones en la parte inferior de estas macetas se desenchufados durante la noche drenaje para alcanzar la mxima capacidad de retencin de agua por la maana siguiente. La bandera de la hoja principal timn en los cinco genotipos comenz a rodar despus de 5 das no consecutivos de riego antes de dirigirse . Tras principal timn rodante bandera de hojas y basado en el promedio de agua perdida ( peso de la olla en la hoja de laminacin de peso posterior al pesaje) , a travs de genotipos , se aadi un volumen constante ( 500 mL) de agua de nuevo todos los das hasta el principal timn complet antesis seguido por inundacin completa . Un conjunto diferente de las plantas identificadas en 5 DBH por HT + tratamiento WS y se expone a WS como se describi anteriormente . Estas plantas

seleccionadas fueron expuestos a ambos WS y dos das de alta temperatura ( 38 C ) a partir del primer da de la antesis . Para el experimento 2 , la tensin de alta temperatura se impone como se describe en el Experimento 1 durante cuatro das consecutivos de floracin . Del mismo modo , para WS , se identificaron principales macollos en 5 DAP como se describe en el Experimento 1 y se inici WS . WS se monitoriz continuamente mediante el registro de bandera de hojas contenido relativo de agua ( RWC ) utilizando la siguiente frmula de la RWC ( % ) = [ ( W - DW ) / ( TW - DW ) ] x 100 ( Liu et al . , 2006 ) , donde W : peso fresco , TW : peso turgente y DW : peso seco. A diferencia de la primera experiencia , el volumen de agua aadida vuelta se determin con base en el peso pote individual. El HT + WS se impuso como en el Experimento 1 excepto que el HT se le dio durante cuatro das consecutivos de floracin a partir de la primera da de la antesis .

2.5 . Observaciones

2.5.1 . Longitud del pednculo y exercin panoja Se midi la longitud del pednculo (PEL ) a partir del nodo de panoja para el nodo inmediatamente anterior . Desde panculas no fueron completamente exertos debido WS o HT + WS , partes de la panoja ( fuera exserted ) y el interior ( atrapado ) se midieron con el cuello de la bandera de hojas como referencia. Pednculo y longitud de pancula (PAL ) se midieron en ambos experimentos.

2.5.2 . El anlisis microscpico Quince a 20 espiguillas se tomaron muestras al azar entre 1030 y 1200 , de los cuatro tratamientos y cinco genotipos. Para esto, espiguillas a punto de flor en la caa del timn principal fueron marcados usando pintura acrlica , y , despus de la polinizacin ( alrededor de 30 minutos despus de las espiguillas cerrado ) espiguillas marcadas se recogieron en viales llenos con la FAA ( 50 % etanol absoluto , cido actico al 5 % , 27 % de formaldehdo y 18 % de agua esterilizada ) fijador siguiendo el protocolo por Jagadish et al. ( 2010 ) . Anteras separadas de las espiguillas fijos se utilizan para registrar ciento dehiscencia de anteras . Espiguillas se lavaron con agua desionizada antes de la diseccin bajo un microscopio estereoscpico (Olympus SZX7 , Olympus Corp. , Japn). Estigmas aisladas se borran en NaOH 8N durante 3-5 horas a temperatura ambiente y se

tieron con azul de anilina disuelta en 0,1 M K2HPO4 durante 5-10 min y el nmero y el polen germinado en el estigma se registraron . Las imgenes fueron tomadas con una cmara digital DP70 unido a un 2 Axioplane microscopio ( Carl Zeiss , Alemania) a 100 ( fig. 1 ) .

2.5.3 . Perodo de floracin y dehiscencia de la antera El nmero de das necesarios por el timn principal para terminar la floracin se registr como perodo de floracin ( FP ) de cuatro tratamientos y los cinco genotipos. Las anteras de las espiguillas recogidos para registrar la cantidad de polen y la germinacin , ya sea con basal y / o apical de poro abierto se registraron como dehiscencia y el restante como anti - dehiscencia utilizando un estereomicroscopio ( Olympus SZX7 , Olympus Corp. , Japn ) . Dehiscencia de las anteras se calcul como la relacin entre el nmero de anteras dehiscentes al nmero total de anteras ( dehiscencia + undehisced ) .

2.5.4 . espiguilla fertilidad Espiguilla fertilidad ( SF ) de ambos experimentos se estim a partir de la caa de timn principal - pancula utilizando los procedimientos de Prasad et al . (2006) y Mohammed y Tarpley ( 2009 ) . Quince a veinte das despus de la finalizacin de la antesis , espiguilla de fecundidad se estim pulsando la espiguilla entre el pulgar y el dedo ndice para determinar si se llena o no . Espiguillas llenas en forma parcial o totalmente se clasificaron como espiguillas llenas . Espiguilla fertilidad se calcul como la relacin de espiguillas llenas con el nmero total de espiguillas . Adems , en el segundo experimento , se identificaron espiguillas de apertura durante cuatro das consecutivos flores usando la pintura acrlica de color diferente siguiendo el protocolo de Jagadish et al . (2007, 2008 ) . Arados usados para recoger espigas para el anlisis microscpico no fueron incluidos para el anlisis de la fecundidad. 2.6 . El anlisis estadstico Los datos sobre la floracin , longitud del pednculo , longitud de pancula , panoja exercin (PE ) , dehiscencia de las anteras y espiguilla fertilidad se analizaron como dos vas de diseo completamente al azar con el programa SPSS 13.0 ( Versin 13 , LEAD Technologies Inc. ) con 5 y 7 repeticiones en Experimento 1 y 2 , respectivamente . Se utiliz la diferencia menos significativa de Tukey ( LSD ) a un nivel de probabilidad de 5 % y 1 % para comparar las diferencias entre tratamientos y genotipos .

3 . Resultados

3.1 . Fenologa de la floracin Managed WS result en RWC bandera de hojas que se mantiene en torno a 50-60 % durante todo el perodo de estrs, lo cual coincidi con el balanceo de la bandera de la hoja en los cinco genotipos , lo que evidencia la condicin de que las plantas en el Experimento 1 fueron al contenido de agua similar a la del Experimento 2 ( fig. 2 ) . En todos los cinco genotipos , perodo de floracin se ampli de manera significativa ( P < 0,05 ) cuando se expone a HT , WS y HT + WS tanto en los experimentos en comparacin con las plantas de control ( Tabla 2 ) . El efecto entre WS y HT + WS tratamiento no fue significativa ( P> 0,05 ) . A travs de los tratamientos , la FP entre los genotipos vari de manera significativa , oscilando entre 5,5 y 7,6 d , con Moroberekan grabacin de la ms larga FP tanto en el Experimento 1 y 2 . Del mismo modo , la longitud del pednculo fue significativamente ( P < 0,05 ) reducido por HT ( 8 % ) , WS ( 24 % ) y HT + WS ( 27 % ) en todos los genotipos y en ambos experimentos en comparacin con el control ( Tabla 2 ) . Los genotipos respondieron consistentemente PEL bajo estrs, con Moroberekan tener el pednculo ms largo , mientras que tanto las adhesiones N22 tiene los pednculos ms cortos . Aunque , no hubo diferencia en longitud de la pancula bajo HT , WS y un HT + WS en los cinco genotipos (datos no muestran ) , pancula exercin mostr diferencias significativas con los tratamientos relacionados WS . Bajo WS y HT + WS , PE fue obstaculizado significativamente ( P < 0,05 ) en comparacin con el control, mientras que HT estrs no tuvo efecto ( P> 0,05 ) (tabla 2 ) . IR64 y Moroberekan tiene significativamente superior pancula exercin % ( P < 0,05 ) en comparacin con los otros tres genotipos .

3.2 . dehiscencia de las anteras Dehiscencia de las anteras se ve muy afectada por HT y diferencias genotpicas claras se observaron (Fig. 3 ) . Ambos N22 adhesiones mostraron significativamente mayor dehiscencia de las anteras en todos los tratamientos ( P < 0,05 ) , mientras que Moroberekan genotipo HT - sensible registr la dehiscencia de la antera menos . Bajo WS , se observ una diferencia significativa slo con Moroberekan entre los cinco genotipos . Con HT + WS , dehiscencia de las anteras se vio afectada similar a HT , lo que indica que la reduccin de la

dehiscencia de las anteras fue influenciado en gran medida por HT . Comparativamente , una adhesin de N22 ( 19.379 ) tuvieron una menor dehiscencia de la antera con HT + WS comparacin con HT , mientras que Apo y Moroberekan fueron los ms afectados significativamente genotipos ( P < 0,01 ) .

3.3 . Polen germinado sobre el estigma y la fertilidad de espiguilla El nmero de polen sobre el estigma fue significativamente ( P < 0,01 ) reducido por HT ( 72 % ) , WS ( 31 % ) , y HT + WS ( 71 % ) , a travs de ambos los experimentos . HT ( p < 0,01 ) y HT + WS redujo (P < 0,05 ) significativamente la cantidad de polen con N22 adhesiones que tienen la ms alta concentracin de polen (52 a 70) en comparacin con los otros tres genotipos ( < 21 % ) . El nmero de polen germinado en el estigma disminuy significativamente ( P < 0,01 ) cuando las plantas se expusieron a HT ( 81 % ) , WS ( 59 % ) , y HT + WS ( 84 % ) de media sobre los dos experimentos , en comparacin con el control ( Fig. . 4 ) . En ambos experimentos , IR64 tuvo el mayor nmero de polen germinado en condiciones de control . Entre los tratamientos de estrs , WS tena significativamente mayor (P < 0,01 ) la germinacin del polen de HT y HT + WS , mientras que no hubo diferencias significativas ( P > 0,05 se observaron ) entre HT y HT + WS . El HT + WS en el Experimento 1 con 2 d de HT result en la germinacin del polen superior % entre N22 adhesiones mientras que la diferencia desapareci al aumentar la duracin a 4 d en el Experimento 2 (Fig. 4 ) . Comparativamente , la germinacin del polen fue menos sensible a WS con 55 % y 62 % ms alta en comparacin con la germinacin y HT HT + WS , respectivamente . Bajo HT estrs , el nmero de polen germinado en el estigma fue significativamente mayor en ambos N22 adhesiones ( P < 0,05 ) en comparacin con los otros tres genotipos . Espiguilla fecundidad fue significativamente ( P < 0,01 ) redujo por HT , WS y HT + tratamientos WS ( P < 0,01 ) ( Fig. 4 ) . Cinco das de espiguilla HT reducen la fertilidad en un 81 % en el Experimento 1 y un 72 % con cuatro das de exposicin en el Experimento 2 . Por otro lado , un ( 2 d ) HT ms corto con WS tena una disminucin de 63 % y 80 % con una ( 4 d ) la exposicin de la TH + WS ms largo . Espiguilla fertilidad tuvo la menor disminucin ( 21 % ) bajo WS en ambos experimentos . Dos accesiones de N22 mostraron significativamente mayor fertilidad espiguilla ( P < 0.05 ) con HT y HT + WS que los otros tres genotipos a travs de ambos experimentos. Espiguilla fertilidad en das consecutivos flores se redujo significativamente con la duracin de la exposicin al HT y HT + WS en ambos N22accessions y Moroberekan . N22 , sin embargo , tenan una fertilidad significativamente mayor en los cuatro das en tanto HT y HT + WS ( fig. 5 ) .

Disminucin de la fertilidad espiguilla bajo HT fue ms baja en N22 - 03911 ( 0.047 ) y N22 - 19379 ( -0.098 ) en comparacin con Moroberekan ( -0.189 ) . Por otro lado , espiguilla fecundidad se redujo por 0,053 y 0,124 con ambas las adhesiones de N22 y Moroberekan , respectivamente, bajo HT + WS . Espiguilla fertilidad en Moroberekan se redujo a 0 % desde el segundo da de la floracin en tanto HT y HT + WS estrs.

4 . DISCUSIN En los ecosistemas de arroz de secano , las plantas suelen ser objeto de una combinacin de factores abiticos desfavorables , entre los que la ocurrencia simultnea de HT y WS es ms frecuente ( Mittler et al. , 2001 ) . El aumento de la tolerancia del arroz durante la etapa de floracin ms sensible a estas tensiones es una estrategia de adaptacin ideal para climas futuros altamente variables ( Horie et al . , 1996 ) . Tolerancia comprende clsicamente elementos de fuga , es decir genotipos de arroz o bien pueden escapar o evitar HT durante la antesis , en la partida durante los perodos ms fros de la temporada ( macro - escape) , por anthesing durante las horas ms frescas de la maana ( micro - escape) ( Jagadish et al . , 2008 ) , o mediante refrigeracin por transpiracin eficiente de dosel ( Weerakoon et al . , 2008 ) . Tolerancia absoluta de estrs es la capacidad de arroz para llevar a cabo procesos fisiolgicos fundamentales, como las anteras , la polinizacin , germinacin del polen y la fecundacin, bajo estrs , pero todava mantienen alta la semilla -set ( Jagadish et al. , 2008 , 2010 ) . Condiciones fenolgicas de floracin en diferentes estreses abiticos , en cierta medida determinan la fertilidad posterior espiguilla . El estado hdrico de la planta en WS se controla normalmente con contenido relativo de agua ( Lafitte et al, 2006 ; . Lafitte, 2002 . Liu et al, 2006) . El tiempo necesario para llegar a la bandera de la hoja de destino RWC de 50 a 60 % fue significativamente diferente entre los genotipos (datos no muestran ) , similar a Srinivasan et al. , 2008 . La imposicin de WS mediante la reduccin de la RWC al 50-60 % dio lugar a una disminucin significativa de la fertilidad espiguilla entre los cinco genotipos en comparacin con las condiciones de control , pero la fertilidad global fue mayor en respuesta a WS . Por ejemplo , IR64 registrada 66 % fertilidad espiguilla con 50-60 % RWC en nuestros estudios , mientras que el mismo genotipo tena 33 % fertilidad cuando se expone al 40-50 % - hoja bandera RWC ( Liu et al . , 2006 ) . Esto indica que las plantas experimentaron un terminal de WS moderada y el principal factor de la reduccin de la fertilidad fue HT .

Pancula exercin ha sido sugerido para ser un rasgo importante que refleja en ltima instancia en el rendimiento de grano de plantas de arroz cuando se encuentran con WS o combinado HT + WS . PE est influenciado principalmente por el alargamiento del pednculo . Las panculas parcialmente exerta tanto con WS y HT + WS , tena el 29% y el 37% de las espiguillas atrapados en la vaina de la hoja , respectivamente , debido principalmente al pednculo acortados. Hubo una fuerte relacin positiva entre la panoja exercin y longitud del pednculo (R2 = 0,84 y R2 = 0,74 en el Experimento 1 y 2 , respectivamente) . El efecto negativo de WS en panoja exercin durante la antesis y posteriormente en el rendimiento se inform anteriormente ( Jearakongman , 2005 ) . Del mismo modo , encontramos que las espiguillas dentro de la vaina de la hoja bandera mostraron esterilidad completa tanto con WS y HT + WS , que fue en parte responsable de la reduccin general de la fertilidad espiguilla . Espiguillas atrapados dentro de la vaina de la hoja en el resultado de una ausencia de la antesis y la fertilizacin ( Cruz y O'Toole , 1984 ; O'Toole y Namuco , 1983 ) y , por otra parte , con la TH + WS , el calor adicional atrapado dentro de la vaina de la hoja , desprovisto flujo de aire libre dio lugar a una esterilidad mucho mayor. La etapa reproductiva en el arroz se efecta irreversiblemente por HT ( Prasad et al . , 2006 ) y WS ( Liu et al . , 2006 ) de la etapa vegetativa . El dficit hdrico durante la etapa reproductiva reduce significativamente la viabilidad del polen (Liu , 2003 ) , espiguilla fertilidad ( Praba et al. , 2009) y el rendimiento de grano ( Boonjung y Fukai , 1996 ) . Asimismo , se registr una reduccin significativa de la espiguilla fertilidad bajo HT , HT + WS y WS . Independiente HT y HT + WS inducida anormal dehiscencia de las anteras , dando como resultado un nmero reducido de polen germinado en el estigma , por consiguiente, la reduccin de la fertilizacin , dando lugar a esterilidad de la espiguilla . En general , la dehiscencia de las anteras ms alta result en significativamente ms polen sobre el estigma , pero , en los genotipos altamente sensibles como Moroberekan , incluso con mayor dehiscencia de la antera la cantidad de polen ( fig. 6 ) se redujo como se dio cuenta por Jagadish et al . , 2010 . Esto podra atribuirse a la asincrona entre los mecanismos de machos ( polinizacin ) y hembra ( receptividad del estigma ) de rganos reproductivos durante la antesis , como se ve en el maz ( Herrero y Johnson , 1981 ) . Adems, espiguillas con al menos 10 o> 20 polen germinado registran altas tasas de fecundidad , dando confianza al nmero crtico identificado previamente equipararse a las semillas -set ( Jagadish et al. , 2010 ) . N22s en nuestro presente estudio mostraron una mayor dehiscencia de la antera y el polen y por lo tanto ms polen germinado en el estigma en comparacin con los otros tres genotipos , lo que indica la verdadera tolerancia de la TH y para HT + WS . Resultados similares se obtuvieron a partir de informes anteriores de Mackill et al . , 1982 y Satake y Yoshida , 1978 y , ms recientemente, se demostr claramente

que N22 tenan un recuento de polen significativamente mayor y la germinacin de polen sobre el estigma en comparacin con el Moroberekan ms sensible . Adems, en comparacin, N22 tena una tasa normal de crecimiento del tubo de polen en comparacin con significativamente ms lenta tasa de crecimiento del tubo de polen con el IR64 tolerante moderada ( Jagadish et al . , 2010 ) que demuestra el nivel ms alto de tolerancia al calor durante la antesis . Aunque un periodo de floracin prolongado en respuesta a los tratamientos de estrs impuestas podra ser un potencial mecanismo de escape alternativa , las plantas que encuentran HT independiente y en combinacin con WS no tienen una mayor fertilidad espiguilla incluso con el periodo de floracin prolongado . Por lo tanto , aparte del efecto negativo directo de HT coincidiendo con la antesis , lo que resulta en la esterilidad de la espiguilla , el efecto de arrastre en espiguillas sin anthesised incluso despus de la eliminacin de estrs tambin dio como resultado la esterilidad . Siguiendo el criterio que marca espiguilla se prob el efecto negativo del estrs acumulado HT prolongada en das de floracin consecutivas. La disminucin lineal en la fertilidad espiguilla en das consecutivos en flor , ya sea en N22 HT- tolerantes o sensibles genotipo Moroberekan indic un efecto acumulativo de HT estrs. Esto confirm adems que el estrs HT dado un da antes de la antesis afectado el funcionamiento normal del saco dehiscencia de polen ( anteras ) y la viabilidad del polen ( Matsui y Omasa , 2002 ) . Por lo tanto , la hiptesis de que la TH coincidiendo exactamente en la antesis y no antes tendra un efecto sobre la fertilidad ( Yoshida , 1981 ) es cuestionable . Adems , Sato y Yokoya ( 2007 ) mostraron un aumento de la tolerancia de las plntulas de arroz de dficit de agua despus de la exposicin previa al TC a 42 C durante 24 h ; sobre-expresin de protenas de choque trmico aumenta la tolerancia al dficit de agua posterior en Nicotiana tabacum ( Cho y Hong , 2006 ) y el dficit de agua y sal estrs en Arabidopsis thaliana (Sun et al. , 2001 ) . Del mismo modo , un porcentaje de fertilidad espiguilla mayor en el HT + WS independiente en comparacin con HT era debido a la tolerancia adquirida posiblemente debido al aumento de las protenas de choque trmico durante el WS anterior resulta en una mayor tolerancia a la termo posterior estrs HT . Mecanismos fisiolgicos y moleculares que producen ese fenmeno novedoso en el arroz est actualmente siendo investigados . En conclusin , el estudio ha confirmado la verdadera HT tolerancia de N22 y su capacidad para resistir una combinacin de HT y WS . Por lo tanto , es un candidato potencial para las variedades de arroz de cra capaces de adaptarse a una variedad de estreses abiticos durante la floracin . Hemos demostrado que la duracin prolongada de la HTA o HT + WS tena un efecto acumulativo negativo

en espiguilla fertilidad y que este aspecto tiene que ser considerado durante la seleccin de germoplasma para la tolerancia .

ALTAS TEMPERATURAS NIGHTTIME afectan la productividad del arroz mediante la germinacin del polen ALTERADO Y FERTILIDAD ESPIGUILLA

RESUMEN Temperaturas de la noche en temporada alta ( HNTS ) a lo largo de la costa del Golfo de los Estados Unidos y en las regiones de clima similar , que se producen durante las etapas crticas del desarrollo , reducir arroz ( Oryza sativa L. ) de rendimiento y calidad. El objetivo de este estudio fue determinar los efectos de los efectores exgenos HNT y preventivo (a- tocoferol , glicina betana y cido saliclico ) sobre el crecimiento , el desarrollo , la fisiologa y el rendimiento de las plantas de arroz . Las plantas se sometieron a temperatura ambiente durante la noche ( ANT ) ( 27 8C ) o HNT ( 32 8C ) a travs del uso de calentadores de infrarrojos controlados continuamente , a partir de 2000 hasta 0600 h h . La HNT no afect las tasas de fotosntesis hoja , sin embargo , no se observaron efectos profundos en el contenido de clorofila , el contenido de nitrgeno foliar , porcentaje de germinacin del polen y espiguilla fertilidad. Adems , HNT aceler las tasas de desarrollo de la planta , como se indica por la fecha de aparicin panoja . Las plantas cultivadas en HNT mostraron una disminucin del 90 % en el rendimiento en comparacin con las plantas cultivadas en ANT . Distribucin de materia seca de los granos de cv. Cocodrie disminuyen en HNT , principalmente debido a los efectos sobre la germinacin del polen y la fertilidad espiguilla, pero no la fotosntesis. Nuestros resultados indican que la aplicacin exgena de cido saliclico reduce los efectos negativos de HNT por 16 % .

1 . INTRODUCCIN El arroz ( Oryza sativa L.) , el cultivo alimentario ms importante en trminos de consumo directo , se cultiva en una amplia gama de entornos , muchas de las cuales estn experimentando aumentos de las temperaturas diurnas y nocturnas . Modelos de circulacin global del proyecto que la temperatura global se incrementar en 1.4 a 5.8 C , debido a los aumentos proyectados en las concentraciones de todos los gases de efecto invernadero, en el final del siglo 21 ( Houghton et al. , 2001 ) . Gran parte de este aumento de la temperatura global media es debido a un aumento previsto de la temperatura durante la noche como consecuencia de una menor prdida de calor radiante debido a aumento de la nubosidad ( Alward et al . , 1999 ) . Variacin Ao a ao en el rendimiento de grano de arroz se ha atribuido a temperatura nocturna ( Peng et al. , 2004 ) . En el futuro, se puede esperar que las prdidas de rendimiento de grano de arroz en

respuesta a la temperatura nocturna a aumentar en frecuencia y severidad . Por otra parte, aunque el aumento global de la temperatura nocturna es a una velocidad mayor que la temperatura durante el da y es bien sabido que las altas temperaturas son un obstculo importante para la productividad del cultivo , especialmente cuando las temperaturas extremas coinciden con las etapas crticas del desarrollo de la planta ( McWilliam , 1980 ) ; la mayor parte de los estudios sobre el crecimiento y rendimiento del cultivo de cereales se basan en la temperatura del aire media diaria , lo que supone ninguna diferencia en la influencia de da versus la noche la temperatura ( Peng et al. , 2004 ) . Se ha demostrado que las temperaturas nocturnas altos ( HNTS ) para aumentar las tasas de fotosntesis hoja de la siguiente durante el da ( Pn ) mediante la reduccin de la inhibicin por retroalimentacin inducida por carbohidratos de la fotosntesis ( Turnbull et al . , 2002 ) , aunque otros estudios no mostraron efectos de HNT en Pn ( Gibson y Mullen , 1996 ; Frantz et al , 2004 ) . . Las plantas expuestas a HNT en muchos casos operan con presupuestos reducidos de energa ( Deal y Raulston , 1989 ) bajo Pn y / o . Los efectos negativos de HNT sobre la fotosntesis son debido a los efectos indirectos sobre el contenido de clorofila de la hoja ( Vagen et al . , 2003 ) , y / o rea de la hoja ( Thomas y Raper , 1978 ) , y / o el contenido de nitrgeno foliar ( LNC ) y / o diversas enzimas implicados en la fotosntesis . Adems, la alta temperatura puede reducir Pn por causar dao a los fotosistemas ( Guo et al , 2006 . ) Y / o de transporte de electrones - en particular en el sitio del fotosistema II ( Havaux y Tardy , 1996 ) y / o al causar dao oxidativo a membranas ( Larkindale y Knight, 2002 ) . Adems de provocar daos en los fotosistemas y membranas de alta temperatura tambin puede reducir Pn al afectar la concentracin de CO2 intercelular ( Ci) y la conductancia estomtica ( Farquhar y Sharkey, 1982 ) . Anteriores estudios informaron la prdida prematura de la clorofila ( Reynolds et al . , 1994 ) , que fue vinculado a una menor Pn ( Guo et al . , 2006 ) , bajo altas temperaturas . Adems , LNC mostr una fuerte asociacin con Pn y tambin juega un papel importante en la aclimatacin trmica ( Morison y Morecroft , 2006 ) . La etapa reproductiva es relativamente ms sensible que la etapa vegetativa al estrs por calor en muchas especies de cultivos (Hall , 1992 ) . Por otra parte , se ha informado de sensibilidad a la temperatura diferencial para el crecimiento vegetativo y reproductivo del arroz ( Baker et al . , 1992 ) . La HNT ( 24 C ) se muestra para promover el crecimiento vegetativo temprano en comparacin con ANT ( 19 C ) en la soja ( Glycine max L. Merr . ) ( Huxley et al . , 1976 ) . Sin embargo , HNT no afecta a las caractersticas morfolgicas tales como altura de la planta , nmero de ramas auxiliares y el nmero de nodos en la soja , pero no acelerar la madurez fisiolgica en muchas especies de cultivos , incluyendo el

arroz , lo que lleva a la disminucin de la acumulacin de fotosintatos en el grano , disminuyendo de ese modo rendimiento de la planta ( Seddigh y Jolliff , 1984 ; . Morita et al , 2005 ) . En el arroz , las temperaturas nocturnas por encima de 29 C pueden aumentar la susceptibilidad a la esterilidad con una reduccin subsiguiente en la produccin de semilla y el rendimiento de grano ( Satake y Yoshida , 1978 ) . Las dos etapas ms sensibles del desarrollo del arroz a las altas temperaturas estn en flor ( antesis y fertilizacin ) y arranque ( microsporognesis ) ( Satake y Yoshida, 1978 ) . En el arroz , esterilidad de la espiguilla inducida por el calor est ligado a la disminucin de la dehiscencia de las anteras , pobres derramamiento de polen , la mala germinacin de los granos de polen sobre el estigma y la disminucin de la elongacin de los tubos polnicos ( Prasad et al . , 2006 ) . Plantas pre - tratados con a-tocoferol ( vitamina E ) , la glicina betana ( GB ) , o cido saliclico ( SA ) , los efectores potenciales exgenos preventivos ( productos qumicos ) utilizadas en este estudio , mostraron termo - tolerancia y la proteccin inducida contra el dao oxidativo ( Mohammed y Tarpley , 2009 ) . El alfa-tocoferol es uno de los inactivadores de un solo oxgeno ms eficaces y es un potente antioxidante ( Munn - Bosch y Alegre , 2002 ) , mientras que GB mejora la tolerancia a altas temperaturas mediante la proteccin de ciertas enzimas ( por ejemplo , Rubisco y citrato sintasa ) contra el calor inducida por la inactivacin ( Makela et al . , 2000 ) . El cido saliclico juega un papel esencial en la termo tolerancia en las plantas mediante la prevencin de dao oxidativo a las membranas por desintoxicar los radicales superxido y la estabilizacin de trmeros de factores de transcripcin de choque trmico ( Larkindale y Knight , 2002 ) , as como a travs de los efectos de sealizacin de calcio ( Kawano et al. , 1998 ) . A pesar de la importancia de los antioxidantes en la tolerancia al estrs, se sabe poco sobre la respuesta de termotolerancia arroz para estos efectores exgenos preventivas (vitamina E, GB y SA ) . Nuestros resultados anteriores indican reduccin en la produccin de arroz como resultado de HNT debido a las tasas de respiracin ms altos y menor estabilidad de la membrana ( Mohammed y Tarpley , 2009 ) . Sin embargo , el porcentaje de disminucin en el rendimiento en HNT era mucho ms alto que el porcentaje de incremento en las tasas de respiracin en HNT , lo que indica que la relacin entre la temperatura , la respiracin y el rendimiento es un proceso complejo y determinacin del rendimiento implica a muchos otros procesos de la planta , aparte de la respiracin . Estudios anteriores han demostrado asociacin de rendimiento con tasas de respiracin ( Mohammed y Tarpley , 2009 ) , contenido de azcar y almidn ( Turnbull et al . , 2002 ) , estabilidad de la membrana ( Reynolds et al . , 1994 ) , desarrollo de la yema floral ( Ahmed y Hall , . 1993 ) , la

viabilidad del polen ( Prasad et al , 2006 ) , el tiempo de floracin y la disminucin de tamao de la semilla ( Gibson y Mullen , 1996 ) , y el perodo de desarrollo o tasa en muchas especies de cultivos ( Seddigh y Jolliff , 1984 ; . Morita et al , 2005 ) , en respuesta a la alta temperatura . Por lo tanto, nuestro objetivo en el presente estudio fue estudiar el impacto de HNT en los procesos de las plantas distintas de la respiracin y la estabilidad de la membrana . El objetivo de nuestra investigacin es comprender la influencia del calentamiento durante la noche en la produccin de la cosecha de arroz , en particular, para discernir si los efectos son principalmente de la fotosntesis , los eventos reproductivos , la tasa de desarrollo , o una combinacin . Para ayudar en este , varios efectores qumicos se aplicaron exgenamente en un intento de modificar la respuesta de la planta de arroz a las temperaturas nocturnas . 2 . MATERIAL Y MTODOS

2.1 . cultivo de plantas Se realizaron tres experimentos en el invernadero en el Centro de Investigacin y Extensin Cooperativa de Texas en Beaumont, Texas, EE.UU. . ' Cocodrie ' , una de tipo japnica cultivar comn tropical EE.UU. arroz , se utiliz en todos los tres experimentos . Las plantas fueron cultivadas en macetas de 3 L que se colocaron en una caja cuadrada ( 0,84 m2), 10 macetas por caja. Las cajas estaban forradas con plstico negro (espesor = 0,15 mm; FILMGARD , Minneapolis, MN, EE.UU. ) que serva como depsito de agua . Las macetas se llenaron con un suelo rico en arcilla que es comn a las explotaciones de arroz en la zona. En 20 das despus de la emergencia ( DAE ) , las cajas se llenan con agua a aproximadamente 3 cm por encima de la parte superior del suelo en cada tiesto . Una cubierta de espuma se coloca sobre la superficie del agua para evitar un calentamiento por infrarrojos directa del agua . Una aplicacin de divisin de tres vas de nitrgeno se realiz como se describe por Mohammed et al . ( 2007 ) , tanto en los experimentos . El nitrgeno se aplic en forma de urea y sulfato de amonio , y el fsforo en la forma de P2O5 . Urea - N se aplic a razn de 113,5 kg ha - 1 junto con 45,4 kg ha - 1 de fsforo ( P2O5 ) durante la siembra. Las fertilizaciones de nitrgeno restantes ( ambos 79,5 kg ha - 1 de nitrgeno en la forma de sulfato de amonio ) se aplicaron 20 DAE y en la etapa de panculas diferenciacin . En el Exp- I,- II , y III las fechas de siembra fueron 31 de marzo ( 2006 ) 29 de marzo ( 2007 ) y 10 de abril ( 2007 ), respectivamente . Las plantas fueron uniformes en trminos de etapa de desarrollo , como se indica por el desarrollo timn , al comienzo de los tratamientos trmicos se describen a continuacin .

2.2 . tratamientos de temperatura Hay tres experimentos presentados en el estudio . La asignacin del tratamiento trmico a la ubicacin de efecto invernadero fue al azar dentro de cada experimento . Las temperaturas nocturnas promedio ( entre 2000 hy 0600 h ) en Beaumont, TX, EE.UU. ( longitud : 94 16'59 '' W , latitud: 30 04'00 '' N ) durante el crecimiento reproductivo de las plantas de arroz a menudo distancia superior a 25 C (hasta 28 C) ( Mohammed y Tarpley , 2009 ) . Por lo tanto , la temperatura ambiente durante la noche ( ANT ) se fij en 27 C. Se mantuvo el invernadero a 27 C de temperatura durante la noche y , dentro de esta , las plantas de tratamiento de la HNT fueron sometidos a elevada temperatura durante la noche mediante el uso de casi continuamente controlada ( sub - segunda respuesta ) calentadores de infrarrojos ( 1.100 W , Chromalox , Ogden , UT , EE.UU. ) , segn lo descrito por Mahoma y Tarpley ( 2009 ) . Los calentadores de infrarrojos se colocan 1,0 m por encima de la parte superior de las plantas y proporcionan enriquecimiento de temperatura por infrarrojos . En tratamientos de temperatura ambiente durante la noche , se proporcionaron calentadores ficticias para dar cuenta de sombreado. Las longitudes de onda de funcionamiento de los calentadores de infrarrojos son muy por encima de 1200 nm , y la salida del calentador de infrarrojos es despreciable por debajo de 1200 nm ( Omega , 2008 ) . Por lo tanto , no haba ninguna emisin significativa de longitudes de onda foto morfognicas . Los calentadores de infrarrojos se controlan mediante controladores de semiconductores de potencia ( SCR Power Control , Watlow Electric Manufacturing Company , St. Louis, MO , EE.UU. ) para permitir la dosificacin accin de calentamiento en lugar de en / offaction , lo que permite el mantenimiento de la temperatura de 0,5 C. La temperatura de la noche fue impuesta desde 2000 hasta 0600 h h desde 20 DAE hasta la cosecha. La temperatura durante el da , la temperatura y la humedad durante la noche fueron controlados de forma independiente del sistema de control de temperatura mediante sensor / registradores independiente ( HOBO , H08 -003 -02, Onset Computer Corporation, Bourne , MA , EE.UU. ) en las dos partes del estudio. El Vagabundos fueron colocados en la cubierta cerca de la base de la pancula ( pocos centmetros en la cubierta ) . Los dispositivos se leyeron cada 15 min . Los valores medios de temperatura y humedad para el da (0600-2000 h ) y la noche (2000 - 600 h ) se presentan como la media de las lecturas de 15 min. La media de las temperaturas diurnas / nocturnas eran 31,6 / 27,3 C y 32.8/31.8 C y durante el da / noche humedad era 14.4/15.9 g m- 3 y 14.3/14.4 g m- 3 en el ambiente y ambiente +5 C tratamientos de temperatura ( . Fig. 1a y b ) . Para controlar la respuesta fisiolgica de plantas para el tratamiento de calefaccin por

infrarrojos , temperatura de las hojas se midieron en diferentes etapas de desarrollo de las plantas de arroz ( inicio, a principios del grano de relleno (EGF ) y la mitad de la masa ( MD) etapa) con un LI -COR 6400 (cuando los calentadores infrarrojos son ON) . La depresin de la temperatura en las hojas en comparacin con el aire circundante era consistentemente menos ( 3 C [ resultados no mostrados ] ) para ambos tratamientos de calor , lo que indica que las plantas mantienen un buen estado fisiolgico en respuesta a la calefaccin por infrarrojos .

2.3 . Los tratamientos qumicos El a-tocoferol , GB , y SA se aplicaron a razn de 100 ml por aplicacin a las hojas usando un pulverizador de perfume botella de pre - calibrada . Cada planta se trat tres veces ( en un solo da ) para permitir una cobertura completa antes de imponer el estrs por calor , para un total de 300 ml por tratamiento. Se disolvieron los productos qumicos en agua desionizada con 0,5 % ( v / v ) tensioactivo ( Latron AG- 98 spreader activador , Rohm and Haas Company, Filadelfia , PA, EE.UU. ) . El atocopherol se aplic a razn de 58 mmoles por planta por pulverizacin ( es decir , 580 mM ) ; GB se aplic a razn de 182,3 mmoles por planta por pulverizacin ( es decir , 1,823 M ) , y SA a la tasa de 0,1 mmol por planta por pulverizacin ( es decir , 1 mM ) . El a- tocoferol y SA fueron adquiridos de Sigma- Aldrich (St. Louis, Missouri, EE.UU. ) . La GB fue suministrada por Capstone Ingredientes Alimentarios ( Marion , MA , EE.UU. ) .

2.4 . fotosntesis de la hoja Las tasas de fotosntesis neta hoja ( Pn ) se midieron al vegetativa ( 40 DAE ) , arranque ( 54 DAE ) , EGF ( 70 DAE ) y MD ( 80 DAE ) etapas. El Pn se midi en las hojas penltimas utilizando un LI - 6400 sistema de fotosntesis porttil ( LI COR Inc. , Lincoln , NE , EE.UU. ) entre 1000 h y 1200 h . Al medir Pn , la densidad de flujo de fotones fotosintticos ( PPFD ) , proporcionada por una fuente de luz LED 6400-02 , se estableci en 1,500 mmol m- 2 s - 1 . La temperatura y la concentracin de CO2 en la hoja de cubeta se establecieron a 25 C y 360 ppm ( concentracin de CO2 ambiente en el invernadero ) , respectivamente . Humedad en la cubeta fue controlada por la circulacin del aire a travs de desecante . Se mantuvo una velocidad de flujo constante de 500 mmol s - 1 en la cmara de hoja . Se midieron tres hojas individuales ( penltimo ) por planta de 13 plantas de cada combinacin de tratamiento qumico x temperatura. Adems , en el Exp. - II y III Exp. , Pn se midi en todas las hojas del tallo principal de viables en cada tratamiento , 75 DAE .

2.5 . clorofila La clorofila se determin en las hojas penltimos en TI, bota, EGF y MD vegetativas . Tres discos de hojas ( 0,196 cm2 cada uno) se obtuvieron a partir de mediados de la hoja , evitando la vena central y se colocan en un vial ( 2,5 ml ) con 1 ml de dimetil - sulfxido ( DMSO ) y se incubaron a temperatura ambiente durante 24 h en la oscuridad para permitir para la extraccin completa de la clorofila en la solucin . La absorbancia del extracto se mide en placas de microtitulacin de material de polipropileno utilizando una energa de onda de espectrofotmetro de microplacas ( Bio - Tek Instruments , Inc. , Winooski , VT , EE.UU.) a 648 nm y 664 nm para calcular la clorofila a y la clorofila b concentraciones ( Chappelle et al . , 1992 ) . Utilizando el mtodo de Chappelle et al . ( 1992 ) , que utiliza una extraccin con DMSO , las concentraciones de los pigmentos se calculan a partir de los valores de absorbancia a 648 nm y 664 nm usando ecuaciones descritas por Lichtenthaler ( 1987 ) . Las concentraciones de pigmentos se expresaron en forma de rea foliar , mg cm2. Clorofila total se calcul mediante la suma de los valores de la clorofila y la clorofila b .

2.6 . LNC En el experimento II y Exp- III , N se midi utilizando un -528 FP nitrgeno / protena analizador ( LECO Corporation, St. Joseph , MI , EE.UU. ) . Para el anlisis de LNC , la segunda y la cuarta hoja desde la parte superior se recogieron a las 75 DAE ( entre la etapa de EGF y la etapa MD ) . Contenido de nitrgeno foliar se expresa como porcentaje ( % ; w / w ) .

2.7 . El crecimiento y el desarrollo Altura de la planta ( desde la base del tallo hasta la punta de la hoja superior de largo alcance ) , longitud del tallo ( desde la base del tallo hasta la base de la pancula ) y el nmero de macollos y panculas se registraron a intervalos semanales y durante la cosecha . Las observaciones diarias se hicieron para la aparicin de panculas . El nmero de hojas se cont en las etapas vegetativa , EGF y MD , as como en la cosecha . Adems , en la etapa , longitud de la hoja individuo EGF ( desde el punto de contacto de la lmina de la hoja y el vstago de la punta de la hoja) y la anchura de hoja ( parte ms ancha de la hoja) se midieron para calcular el rea total de la hoja (calculado rea foliar ) . La cosecha final se llev a cabo a 100 DAE. Se adoptaron los procedimientos de muestreo

destructivos : plantas fueron disecados , nmero de hojas y tallos de retraso se contaron , se determinaron reas hoja (medida de rea foliar ) fueron medidos, y los pesos secos. Macollos Lag son los retoos producidos despus de emergencia de la pancula y rara vez contribuyen a ceder. El rea foliar se midi utilizando un medidor de CI- 251 rea (CID Inc., Camas, WA , EE.UU. ) . 2.8 . germinacin de polen En el Exp. - II y III - Exp. , la germinacin del polen por ciento ( PPG ) se determin a travs de la germinacin in vitro en un medio de cultivo . Un estudio preliminar se realiz utilizando diferentes medios de cultivo . El medio de cultivo seleccionado para este estudio tuvo el mayor PPG en el estudio preliminar . El medio de cultivo se prepar de acuerdo con los medios de comunicacin de Song et al . ( 2001 ) , con modificaciones menores . Los componentes de medios de cultivo en el presente estudio son 15 g de sacarosa , 0,03 g de nitrato de calcio , y 0,01 g de cido brico disuelto en 100 ml de agua desionizada . Agar , 0,06 g , se aadi a esta solucin y se calienta sobre una placa caliente para disolver el agar . Cuando el agar se disolvi en la solucin , 10 ml de este medio se verti por una placa de Petri ( dimetro 8,5 cm ) y se dej enfriar durante 15 min . El polen de los diferentes tratamientos se espolvore sobre thismedium tan pronto como el florete abri en la maana ( SOPB. Samonte , Texas AgriLife Extensin e Investigacin Centro , Beaumont, TX, EE.UU. , comunicacin personal). El polen se espolvorea sobre dos conjuntos de placas de Petri . Un conjunto se incub a 27 8C , y el otro a 32 8C , durante 24 h en la oscuridad . La temperatura de incubacin se refiere a la temperatura a la cual se incub el polen y la temperatura de crecimiento se refiere a la temperatura a la que se cultivaron las plantas . El polen se considera como germin cuando la longitud del tubo de polen fue al menos igual al dimetro de grano segn se determina usando un microscopio . El nmero total de granos de polen , polen germinados y no germinados en cada placa de Petri fueron contados y el PGG se registr .

2.9 . Espiguilla fertilidad ( SF ) Espiguilla fertilidad se estim utilizando los procedimientos de Prasad et al . ( 2006 ) . La proporcin de granos llenos con el nmero total de sitios reproductivos ( floretes ) se calcul y se expres como porcentaje . Cada flsculo fue presionado entre el pulgar y el dedo ndice para determinar si el grano se llena o no . El nmero de granos llenos incluye tanto completamente y granos parcialmente llenos .

2.10 . Diseo experimental y anlisis de datos Los experimentos se presentan en un diseo completamente al azar , y se repitieron durante un total de tres veces . Un conjunto de las plantas se cultivan bajo condiciones de temperatura ambiente durante la noche , mientras que el otro conjunto se cultiv en condiciones de alta temperatura durante la noche . Los tratamientos de temperatura fueron asignados al azar entre los experimentos . En el primer experimento , en cada conjunto , haba 12 plantas , 3 plantas por tratamiento qumico , mientras que en el Exp. Exp. - II y - III , en cada conjunto , haba 20 plantas , 5 plantas por tratamiento qumico . Para probar la importancia de los experimentos , las temperaturas nocturnas , los tratamientos qumicos y sus efectos interactivos sobre el desarrollo del crecimiento y los parmetros fisiolgicos , los datos fueron analizados estadsticamente mediante anlisis de la varianza ( ANOVA , anlisis estadstico SAS paquete de la versin 9.0 , SAS Institute, Cary , NC , EE.UU. ) . Las medias se separaron usando la diferencia menos significativa de Tukey ( LSD ) a un nivel alfa de 0,05 . Si no hubo ninguna diferencia significativa entre los experimentos para un parmetro , entonces los valores de todos los experimentos para que el parmetro (por ejemplo , n = 13 ) se utilizaron para obtener la media y el error . Los errores tpicos de la media tambin se calculan y presentan en los grficos como barras de error .

3 . RESULTADOS A menos que se indique lo contrario , no se encontraron diferencias entre los experimentos de las variables estudiadas . Adems no hubo efectos interactivos de los productos qumicos de temperatura para las variables estudiadas .

3.1 . Las tasas de fotosntesis hoja y clorofila No hubo diferencias entre las temperaturas de la noche con respecto a las tasas de fotosntesis hoja ( Pn ) (Fig. 2a ) . Adems , las plantas cultivadas bajo ANT no mostraron diferencias entre los tratamientos qumicos con respecto a Pn . Sin embargo , las plantas no tratadas que crecen bajo HNT mostraron disminucin del 22 % en comparacin con Pn plantas tratadas en las etapas vegetativas y EGF . Se observaron resultados similares con respecto a la conductancia estomtica (Fig. 2b ) . Sin embargo , no hubo diferencias entre las temperaturas de la noche y entre los tratamientos qumicos para la concentracin de CO2 interno ( Ci ) , excepto para las plantas tratadas con SA cultivados bajo ANT . Las plantas tratadas con cido saliclico cultivados bajo ANT mostraron 10 % y 8 % de

disminucin en comparacin con Ci plantas no tratadas en EGF y MD etapas (Fig. 2c ) . Las plantas que crecen bajo HNT mostraron 7 % y 13 % disminuye en el contenido total de clorofila y 13 % y el 12 % disminuye en un contenido de clorofila en las etapas vegetativas y de arranque , respectivamente , en comparacin con las plantas cultivadas bajo ANT ( fig. 3a y c ) . Sin embargo , no hubo diferencias entre las temperaturas de la noche con respecto a la clorofila b (Fig. 3b ) . Adems , no hubo diferencias entre los tratamientos qumicos con respecto a la clorofila total, el contenido de clorofila a y la clorofila b en cualquier etapa particular del desarrollo (Fig. 3a - c ) .

3.2 . Las tasas fotosintticas y LNC de posicin de la hoja Las tasas de fotosntesis hoja medidos en las hojas viables en el tallo principal no mostraron diferencias entre las temperaturas de la noche , o entre los tratamientos qumicos en cualquier posicin de la hoja en particular , 75 DAE (Fig. 4a). Sin embargo , Pn fue menor en las posiciones de hojas inferiores. Contenido de nitrgeno foliar medido en la segunda y la cuarta hoja mostr diferencias entre las temperaturas de la noche , 75 de DAE . Las plantas que crecen bajo HNT mostraron 29 % y disminucin del 18 % en LNC de la segunda y la cuarta hoja, respectivamente , en comparacin con las plantas cultivadas bajo ANT (Fig. 4b ) . La segunda hoja en comparacin con el cuarto hoja tena un 13% ms LNC para las plantas cultivadas bajo ANT . Sin embargo , las plantas cultivadas en HNT no mostraron diferencias entre las posiciones de las hojas con respecto a LNC (Fig. 4b ) . Adems , no hubo diferencias entre los tratamientos qumicos con respecto a LNC para cualquiera de las posiciones de las hojas.

3.3 . caractersticas morfolgicas En promedio , las plantas cultivadas en HNT mostraron una disminucin del 10 % en el nmero de hojas viables en la etapa vegetativa en comparacin con las plantas cultivadas bajo ANT (Fig. 5a ) . Sin embargo , en la etapa de EGF , las plantas cultivadas bajo ANT mostraron una disminucin del 10 % en el nmero de hojas viables en comparacin con las plantas cultivadas en HNT . No hubo diferencias entre los tratamientos qumicos con respecto al nmero de hojas viables (Fig. 5a ) . En la etapa de EGF , el rea de la hoja estimado de las plantas cultivadas en HNT era dos veces el rea de la hoja de las plantas cultivadas en ANT . En la cosecha, se observaron resultados similares con respecto a la

superficie foliar medido (Fig. 5b ) . En la etapa de EGF , las plantas cultivadas bajo ANT y se trat con GB y SA mostraron 13 % y 10 % disminuye en el rea de la hoja estimado , respectivamente . Sin embargo , las plantas que crecen bajo HNT no mostraron diferencias entre los tratamientos qumicos con respecto al rea foliar estimada ( Fig. 5b ) . En la cosecha , las plantas cultivadas bajo ANT y se trat con vitamina E mostraron disminucin del 50 % en el rea de la hoja en comparacin con las plantas tratadas con otros productos qumicos (Fig. 5b ) . Glicina betana - y SA - tratada , plantas cultivadas bajo HNT , mostraron 44 % y 26 % disminuye en el rea de la hoja en comparacin con las plantas no tratadas . No hubo diferencias entre las temperaturas de la noche para la altura de planta , longitud del tallo , nmero de timn y el nmero de panculas ( Fig. 6a yb ) . Adems , no hubo diferencias entre los tratamientos qumicos con respecto al nmero de tallos y nmero de panculas . Plantas Sin embargo , el documento GBtratados eran ms cortas que las plantas no tratadas , tanto en los tratamientos trmicos . Las plantas cultivadas en HNT mostraron 168 % , 75% y 46 % el aumento de macollos retraso , sobre el suelo de peso seco de raz y peso seco , respectivamente , en comparacin con las plantas cultivadas en ANT (Fig. 6b yc). Sin embargo , no hubo diferencias entre los tratamientos qumicos con respecto a los parmetros mencionados anteriormente en cualquiera de los tratamientos de calor . Las plantas que crecen bajo HNT mostraron una disminucin del 90 % en el rendimiento en comparacin con las plantas cultivadas bajo ANT (Fig. 6c ) . Las plantas tratadas con vitamina E , GB y SA mostraron 18 % , 21 % y 24 % , y 5 % , 77 % y aumentar cinco veces en el rendimiento cuando se cultivan bajo ANT y HNT , respectivamente , en comparacin con las plantas no tratadas (Fig. 6c ) . 3.4 . Emergencia de la pancula , PPG y SF Nuestros resultados indican diferencias entre las temperaturas de la noche con respecto a la fecha de la primera aparicin panoja . Las plantas que crecen bajo HNT mostraron aparicin pancula anterior por 2 das , en comparacin con las plantas cultivadas bajo ANT (Fig. 7a y b ) . Las plantas que crecen bajo ANT y tratados con SA mostraron retraso surgimiento panoja por 2 das en comparacin con otros tratamientos qumicos ( Fig. 7a). Sin embargo , las plantas cultivadas en HNT no mostraron diferencias entre los productos qumicos con respecto a la primera fecha de aparicin pancula (Fig. 7b ) . No hubo efectos de la incubacin as como la temperatura de crecimiento en PPG (Fig. 8a ) . En promedio , el polen se incub a una temperatura ms alta ( 32 C ) mostr 20 % de disminucin en PPG , en comparacin con el polen se incubaron a temperatura ms baja ( 27 C ) . En promedio, las plantas y las plantas tratadas con vitamina E , GB y SA no tratados mostraron 34 % , 18 % , 22 % y disminucin

del 6 % en PPG , respectivamente , cuando su polen se incub a 32 C en comparacin con 27 C (Fig. 8a). Las plantas no tratadas y las plantas tratadas con vitamina E , que se cultiva bajo ANT , mostraron 38 % y 20% de disminucin en PPG , respectivamente , cuando su polen se incub a 32 C en comparacin con 27 C. Sin embargo , las plantas tratadas con GB y SA , crecido bajo ANT, no mostraron diferencias para PPG entre temperaturas de incubacin . Las plantas que crecen bajo HNT no mostraron diferencias entre los tratamientos qumicos con respecto a PPG cuando el polen se incub a 32 C (Fig. 8a ) . No hubo diferencias entre las temperaturas de la noche y entre los tratamientos qumicos , con respecto a SF ( Fig. 8b ) . En promedio , las plantas cultivadas bajo HNT mostraron 72 % de disminucin en la ciencia ficcin , en comparacin con ANT . Las plantas tratadas con uno de los productos qumicos en general tuvieron mayores SF que las plantas no tratadas en ANT y HNT ( Fig. 8b ) . Las plantas tratadas con vitamina E , GB y SA mostraron 9 % , 15 % y 18 % , y 47 % , 120 % y 195 % aumento en SF cuando se cultivan bajo ANT y HNT , respectivamente , en comparacin con las plantas no tratadas ( Fig. 8b ) .

4 . DISCUSIN Nuestros hallazgos indican claramente disminuy la produccin de arroz como resultado de HNT de conformidad con el trabajo anterior en el arroz por Morita et al . ( 2005 ) . Sin embargo , en el presente trabajo , HNT no afect Pn de la siguiente durante el da en cualquier etapa particular del desarrollo o en cualquier posicin de la hoja dentro de la planta . Esto difiere de los hallazgos de Turnbull et al . ( 2002 ) , que indic que HNT puede aumentar Pn de la siguiente durante el da mediante la reduccin de la inhibicin inducida por carbohidratos de la fotosntesis . Nuestros resultados tambin indican ninguna relacin de Pn con la conductancia estomtica o concentracin de CO2 interno ( Ci), lo que sugiere que, aparte de la conductancia estomtica y Ci , un nmero de factores incluyendo la actividad del enzima Rubisco y fotosistemas ( Pastenes y Horton , 1996a , b ) regulan la fotosntesis . Tanto el contenido de clorofila y la LNC tambin estn estrechamente relacionados con la capacidad fotosinttica ( Mae, 1997 ) y la LNC en particular, se ha utilizado para estimar las capacidades fotosintticas ( Llorens et al. , 2003 ) . El trabajo previo indica disminucin en el contenido de clorofila ( Guo et al , 2006 . ) Como resultado de la prdida prematura de la clorofila ( Reynolds et al , 1994 . ) Y una disminucin en LNC a altas temperaturas ( Wollenweber et al , 2003 ; . Xu y Zhou , 2006 ) . En el presente trabajo , los resultados similares de disminucin en el contenido de clorofila y la LNC se notaron . Sin embargo, ni el contenido de clorofila ni la LNC se asociaron con Pn .

Resultados similares a la falta de asociacin entre la LNC y Pn se informaron en una hierba perenne ( Xu y Zhou, 2006 ) . Sicher y Bunce ( 1997 ) afirmaron que la alta temperatura conduce a la supresin de Pn principalmente por la disminucin de la proporcin de protena soluble total de la hoja de N , lo que afecta negativamente a la protena y la actividad Rubisco . Sin embargo , en el presente estudio , la proporcin de protena soluble total de la hoja de N no se estim . Alta temperatura nocturna no tuvo efectos sobre la altura de planta , longitud del tallo, el nmero de hijos y el nmero de panculas por planta. Resultados similares de ningn efecto de HNT en parmetros morfolgicos fueron reportados en la soja ( Seddigh y Jolliff , 1984 ) . Temperatura alta durante la noche se redujo el nmero de hojas por planta en la fase vegetativa en contraste con los hallazgos de Thomas y Raper ( 1978 ) , que indica que HNT no tuvo efecto sobre el nmero de hojas por planta . En el presente trabajo , HNT se increment el nmero de macollos lag , rea foliar , peso sobre el suelo y el peso seco por planta, sin embargo, la duracin del crecimiento del cultivo se redujo en HNT como indica anteriormente surgimiento panoja . Resultados similares de disminucin de la duracin del crecimiento de los cultivos se observaron como resultado de altas temperaturas durante el da ( Prasad et al . , 2006 ) . El trabajo previo indica la disminucin de los rendimientos de maz ( Zea mays L. ) en virtud de HNT eran debido a la reducida acumulacin de fotosintatos como resultado de la disminucin de la duracin del crecimiento de los cultivos ( Cantarero et al . , 1999 ) . En el presente trabajo , adems de la disminucin de la duracin del crecimiento de los cultivos bajo HNT , la disminucin de PPG y SF tambin contribuy a la disminucin de los rendimientos. Al igual que en el presente trabajo , PPG disminuy en muchos cultivos con un aumento de la temperatura ( Hall, 1992 ; . Matsui et al , 2001 ) . La disminucin de PPG a altas temperaturas resultados pobres de dehiscencia de las anteras y polen de recepcin ( Prasad et al . , 2006 ) y la reduccin de la inflamacin y la disminucin de polen antera tamao de poro ( Matsui y Kagata , 2003 ) . En el presente trabajo , se redujo SF era debido en parte a la disminucin de PPG . Sin embargo , a temperaturas ms altas , SF tambin se rige por el equilibrio hormonal en el flsculo ( Micheal y Beringer , 1980 ) o la disponibilidad y el transporte de fotosintatos a la del ncleo ( Afuakwa et al . , 1984 ) o de la incapacidad de las yemas florales para movilizar los hidratos de carbono bajo calor estrs ( Dinar y Rudich , 1985 ) o las actividades alteradas de enzimas de la biosntesis de almidn y azcar (Keeling et al , 1994 ; . . Singletary et al , 1994 ) . En el presente trabajo , disminucin de PPG redujo el nmero de sumideros reproductores aparentemente conducen a un aumento de la distribucin de materia seca en las estructuras vegetativas tales como tallos, hojas y races , lo

que aumenta el nmero de macollos lag , hojas, rea foliar y el peso sobre el suelo y peso seco de raz . En el presente trabajo, la GA- SA y las plantas tratadas fueron eficaces para reducir los efectos negativos de HNT . Aplicacin exgena de GB y SA no afectar a los parmetros morfolgicos de plantas , sin embargo , cada uno tena un efecto sustancial en PPG y SF , por lo tanto el rendimiento . Aplicacin exgena de GB y SA aument los niveles de antioxidantes endgenos en las plantas de arroz , evitando as el dao oxidativo a las membranas ( Mohammed y Tarpley , 2009 ) . Estabilidad de la membrana puede desempear un papel importante en el agua , iones , y el movimiento orgnico - soluto a travs de las membranas ( Christiansen , 1978 ) . Adems , el aumento de los niveles de antioxidantes pueden proteger a los enzimas contra las especies reactivas de oxgeno inducidas por calor ( ROS ) de degradacin mediada ( Sen Gupta et al . , 1993 ) . Movimiento de agua y fotosintatos travs de las membranas y las actividades de las enzimas ( Singletary et al . , 1994 ) juegan un papel importante en el proceso de llenado de grano . En conclusin , la disminucin en la produccin de arroz " Cocodrie ' como resultado de HNT no estaba relacionado con la fotosntesis. Los parmetros que regulan la fotosntesis como la conductancia estomtica , concentracin interna de CO2, contenido de clorofila y nitrgeno foliar no se asociaron con la fotosntesis . No hubo ningn efecto de HNT sobre la fotosntesis . Como resultado , no hay efectos sobre los parmetros morfolgicos se observaron ms all de los debidos a una disminucin de la capacidad reproductiva fregadero . Sin embargo , hubo una disminucin en el rendimiento en HNT que se atribuy a la disminucin de la duracin crecimiento de los cultivos , por ciento germinacin del polen y la fertilidad espiguilla . Aplicacin exgena de betana glicina y cido saliclico aument los rendimientos bajo HNT posiblemente actuando a travs de observados previamente el aumento de los niveles de antioxidantes , que podran haber protegido las membranas y enzimas contra el calor inducida por la degradacin mediada por ROS .