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INFORMACION. METODO INTERNO 1.

Calibracin interna: Si antes de la determinacin se le agrega a la muestra una cantidad fija de una sustancia con caractersticas qumicas similares a las de la especie a determinar, esta sustancia es llamada estndar interno y el mtodo se denomina de calibracin interna o mtodo del estndar interno. El agregado sirve para calibrar un paso crtico que de otra manera introduce una gran incerteza, por ejemplo el volumen de muestra inyectado en una corrida de Cromatografia Gaseosa. La seal producida por este estndar interno es producida en las mismas condiciones que la de los analitos, porque se encuentran juntos en la muestra. Para averiguar la concentracin de los analitos, se aplica alguno de los modelos lineales vistos anteriormente utilizando como seal del patron, la seal producida por el estndar interno. La concentracin del estndar interno puede variarse para comprobar la linealidad y construir una curva de calibrado, o puede usarse un modelo de un nico patrn. Hay que tener en cuenta que si el estndar interno no tiene la misma sensibilidad en el detector que los analitos, hay que corregir las seales de estos con un factor de respuesta. Estos factores de respuesta se calculan a priori mediante estndares de los compuestosa determinar (ver Willett, J. E., Gas Chromatography, Analytical Chemistry by Open Learning, Wiley, 1987). La forma ms sofisticada del mtodo del estndar interno es el mtodo de dilucin isotpica. Aqu se opta por agregar a la muestra una sustancia que es qumicamente igual a la sustancia a determinar pero an as discernible de la original. Este mtodo utiliza la misma sustancia como patrn pero con al menos un tomo de su estructura reemplazado por un istopo. Por ejemplo, 12C es reemplazado por 13C en un compuesto orgnico. Para este mtodo debe utilizarse un tcnica selectiva a istopos, generalmente espectrometra de masa.

2.El patrn interno es una sustancia que se aade a dotas las muestras y estndares en cantidad conocida y a la vez en cantidad suficiente para poder ser determinado sin problemas. Su adicin no debe causar ningn tipo de interferencia en el anlisis, y debe proporcionar una seal analtica similar al analito en el anlisis pero distinguible del mismo. Por supuesto, no debe estar presente en la matriz en estudio. Se utiliza cuando el analista est interesado en la concentracin de uno o algunos de los componentes y el mtodo de anlisis est sujeto tanto errores sistemticos como aleatorios.

El mtodo se basa en que cuando las seales del analito y el patrn interno responde proporcionalmente a las fluctuaciones del mtodo y del instrumento empleado, entonces la razn de estas seales es independiente de tales fluctuaciones. La principal ventaja es que con l se eliminan los problemas de fluctuacin instrumental, minimizndose los errores instrumentales, ya que tanto el analito como el patrn interno experimentan las mismas variaciones. DEPARTAMENTO DE QUMICA ANALTICA Y TECNOLOGA DE ALIMENTOS ANALISIS INSTRUMENTAl I

3.Calibracin por el mtodo del estndar interno Se emplea un estndar interno para minimizar las diferencias en las propiedades fsicas de un conjunto de soluciones muestra que contiene el mismo analito. En este mtodo, una cantidad fija de una sustancia pura se aade tanto a las soluciones muestra como a las soluciones estndares, se determinan luego las respuestas del analito y del estndar interno, cada una corregida por el fondo y se calcula el cociente de las dos respuestas. Si se controlan los parmetros que afectan las respuestas medidas, la respuesta de la lnea del estndar interno ser constante, por supuesto que la concentracin del estndar interno no es fija, sin embargo, si vara uno o ms de los parmetros que afectan las respuestas medidas, dichas respuestas del analito y del estndar interno- deben ser afectadas por igual. Por lo tanto, el cociente de respuestas (del analito al estndar interno) depende solamente de la concentracin del analito.

4.CALIBRACIN DE LOS MTODOS INSTRUMENTALES Todos los mtodos instrumentales, excepto el mtodo gravimtrico y el culombimtrico, necesitan una calibracin, proceso en el que se va a relacionar la seal analtica medida con la concentracin del analito. Los tres mtodos ms frecuentes son: Curvas de calibrado. Mtodo de la adicin estndar. - Mtodo del patrn interno.

5.El calibrado y el anlisis cuantitativo instrumental Cuando un qumico analtico se enfrenta a una muestra, ste tiene, desde un punto de vista muy general, dos tareas fundamentales: conocer que sustancias forman parte de la

materia (anlisis cualitativo) y conocer en que cantidad aparecen dichas sustancias (anlisis cuantitativo). Centrndonos en esta ltima, los mtodos analticos empleados pueden ser clsicos, donde se obtiene la cantidad de analito que reacciona estequiomtricamente con un reactivo que se aade en cantidad perfectamente conocida a una porcin de muestra, o instrumentales donde se mide una propiedad (utilizando un instrumento) que est directamente relacionada con la presencia de analito y cuya intensidad depende de la cantidad del mismo. Es aqu donde debemos introducir el concepto de calibrado. El calibrado en un mtodo instrumental es el proceso mediante el que se obtiene una relacin matemtica (funcin analtica) entre la seal del analito y su concentracin mediante la comparacin con uno o ms patrones. Generalmente se trabaja en disolucin, con lo que se entiende por patrn a una disolucin de analito de concentracin perfectamente conocida. Utilizando esta funcin analtica se puede calcular la concentracin de analito en la muestra a partir de la seal medida. La expresin de esta funcin analtica se corresponde con la ecuacin de una curva (curva de calibrado). Siempre que sea posible se busca que la relacin entre la seal analtica y la concentracin del analito en los patrones sea lineal, obteniendo la lnea de mejor ajuste a los datos experimentales obtenidos para los patrones mediante el mtodo de mnimos cuadrados.La IUPAC ofrece guas sobre este tema, para uno (1) o mltiples (2) componentes, siendo recomendable su lectura para profundizar en el tema. Aqu simplemente nombraremos los tipos de calibrado que se suelen emplear en el anlisis qumico dando unas breves indicaciones de como y cuando se utilizan.

-Calibrado con patrn interno En algunas ocasiones, debido a la forma de introducir una muestra en el sistema de medida o a un tratamiento previo de la misma, sta puede sufrir prdidas de analito. El problema surge cuando al repetir el mismo proceso una y otra vez las prdidas de analito son diferentes, con lo que estaremos ante un problema en la repetitividad del mtodo. Por poner un ejemplo, imaginemos que en el tratamiento de muestra acuosa se realiza una extraccin con un volumen X de disolvente orgnico. Ese volumen X se lleva a un volumen final Y y se mide la propiedad proporcional a la cantidad de analito. Quien ha realizado una extraccin lquido-lquido sabe que es prcticamente imposible recuperar todo el volumen X en cada extraccin. Si en vez de recuperar X recupero X-1 y lo llevamos al mismo volumen final Y, la concentracin de analito depender del volumen que he recuperado. Este es una caso en el que es aconsejable el uso de un patrn interno. La filosofa de un calibrado con patrn interno es introducir en todas y cada una de las muestras, as como en los patrones, una sustancia en concentracin constante (la misma en todas las muestras y patrones) y perfectamente conocida, un patrn interno, que sufra prdidas de manera anloga al analito. Entre las caractersticas bsicas de un patrn interno debe estar que sea lo ms parecido posible al analito, qumica y fsicamente, y por supuesto, que no sea una especie que ya est contenida en la muestra originalmente. Ni que decir tiene que debe ser de elevada pureza y estabilidad.

El calibrado se realiza representando el cociente entre la seal obtenida para el analito y la obtenida para el patrn interno frente al cociente de sus concentraciones. Se calculan los parmetros de la recta de calibrado y se sustituye el cociente de seales obtenido para la muestra, obteniendo as el cociente de concentraciones en la muestra. Como conocemos la cantidad de patrn interno aadida, es sencillo calcular la concentracin de analito.