9 . El anlisis de los geles 9.

1 Introduccin Despus de que el funcionamiento de la electroforesis es completa , el gel debe ser analizado , ya sea cualitativamente o cuantitativamente . Debido a que la mayora de las protenas no son directamente visibles , el gel debe ser procesada de manera como para determinar la ubicacin y la cantidad de las molculas separadas . Las protenas son por lo general tieron con azul brillante de Coomassie en una solucin de fijacin o , despus de la fijacin , con plata por un desarrollo de tipo fotogrfico. Con coloidal Coomassie tincin con azul de , aproximadamente 40100 ng de protenas es el lmite inferior detectable en una banda. Sin embargo , con azul de Coomassie convencional mancha puede detectar 8-10 ng de protenas . La tincin con plata , los sistemas son aproximadamente 100 veces ms sensible , con un lmite de deteccin inferior de aproximadamente 1 ng de protenas . Una vez que el gel se tie , se puede fotografiar , escanear o secos sobre un soporte transparente o papel de filtro para un registro de la posicin y la intensidad de cada banda ( Merril , 1990 ; Steinberg , 2009 ) . 9.2 Coomassie tincin con azul La tincin con azul de Coomassie se basa en la unin del colorante azul de Coomassie

9.2 Coomassie tincin con azul La tincin con azul de Coomassie se basa en la unin del colorante azul de Coomassie R250, el cual se une no especficamente a prcticamente todas las protenas. Aunque la tincin con azul de Coomassie es menos sensible que la tincin de plata, que es ampliamente utilizado debido a su conveniencia. El gel se empapa en una solucin del colorante. Cualquier colorante que no est unido a la protena se difunde fuera del gel durante

los pasos Destain. Azul de Coomassie se une a las protenas de aproximadamente estequiomtricamente, y as este mtodo de tincin es preferible cuando es necesario determinar cantidades relativas de protenas por densitometra. Para la mayora de los geles, las protenas separadas se pueden fijar y teir simultneamente en la misma solucin. El gel se desti a continuacin, para eliminar el fondo. Las protenas son detectados como bandas azules sobre un fondo claro. Cuando la tincin pptidos pequeos, el gel es primero fijado en una solucin que contiene glutaraldehdo para reticular los pptidos y prevenir ellos se difunda fuera del gel durante las posteriores etapas de tincin. Tabla 8 resume la protocolos para la tincin con azul de Coomassie (Neuhoff, 1988)

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9.3 tincin de plata La tincin con plata es el mtodo ms sensible para la tincin visible permanente deprotenas en geles de poliacrilamida. Su sensibilidad, sin embargo, se produce a expensas de la susceptibilidad a la interferencia de un nmero de factores. Momento preciso, la alta calidad de los reactivos utilizados y limpieza son esenciales para obtener resultados de alta calidad reproducibles. En la tincin de plata, el gel es impregnado con iones de plata solubles y desarrollado por el tratamiento conformaldehdo, lo que reduce los iones de plata para formar un precipitado marrn insoluble de plata metlica. este la reduccin es promovida por las protenas (Figura 7). Hay muchas variaciones de laplata proceso de tincin. Tabla 9 resume los protocolos comunes para las tinciones de plata protena en el gel (Merril et al., 1983).