UNIVERSIDAD NACIONAL UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA DE PIURA

AO DE LA INVERSIN PARA EL DESARROLLO RURAL Y AO DE LA INVERSIN PARA EL DESARROLLO LA SEGURIDAD ALIMENTARIA RURAL Y LA SEGURIDAD ALIMENTARIA

INFORME DE LABORATORIO N 5

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

CURSO:

MECANISMO DE AGRESIN Y DEFENSA I

DOCENTE: Ms. C. Csar Torres Daz ALUMNO: Ian Gallardo Bayona

IV CICLO 2013

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE ESTAFILOCOCOS

1. INTRODUCCION:
Morfolgicamente los Staphylococcus son cocos grampositivos. Los estafilococos crecen fcilmente sobre casi todos los medios bacteriolgicos, en cultivos su crecimiento es mejor en el medio sal manitol y agar sangre, esto puede llegar a dar problemas en el corazn hgado, tales como la perdida de un hgado. Es un coco anaerobio facultativo, esto significa que puede crecer tanto en condiciones con oxgeno como carente de ste. Su mayor velocidad de crecimiento es a 5 - 25 C; pero tambin se puede ver en activa fisin binaria entre 30 y 27 C. Adems, producen catalasa, lo que los diferencia de los estreptococos. Tiene importancia mdica principalmente el S. aureus, y en humanos adems de ste, el S. saprophyticus y el S. epidermidis. La ms grave para el humano, el Staphylococcus aureus debido a una endocarditis bacteriana, siendo la endocarditis en humanos la ms frecuente subsecuente a la infeccin por Staphylococcus aureus.

2. OBJETIVOS
Familiarizarse con el manejo de STAPHYLOCOCCUS y con las tcnicas de aislamiento en placa de Petri, as como los medios de cultivo. Obtener colonias separadas. Estudiar la morfologa de cada colonia de STAPHYLOCOCCUS, as como su crecimiento. Aprender la tincin GRAMM para este tipo de bacterias. Identificar la estructura de este tipo de bacterias. Aplicar la prueba de COAGULASA para el discernimiento de estas bacterias del resto.

3. MATERIALES:
PARA AISLAMIENTO:

AGAR MANITOL-SAL (CHAPMAN):

HISOPO Y BAJALENGUA:

MECHERO BUNSEN:

INCUBADORA:

ASA:

LAMINA PORTAOBJETO:

SUERO BHI:

4. EN LABORATORIO:
AISLAMIENTO: 1. Antes de empezar cualquier procedimiento en laboratorio se debe tener en cuenta las medidas de bioseguridad correspondientes. 2. Para comenzar el cultivo necesitamos de donde extraer los microorganismos a observar, para ello necesitaremos de un alumno (a) de quien tomaremos una muestra bacteriana de las paredes laterales de su cavidad farngea mediante un hisopado.

3. Acercar al mechero la placa PETRI con el agar correspondiente en este caso AGAR CHAPMAN y aplicar el mtodo de extensin mltiple por estra en superficie (AGOTAMIENTO), que consiste en formar estriaciones sobre la superficie del agar dividindolo en cuatro cuadrantes y llenndolos en sentido anti horario e ir disminuyendo el nmero de estras.

4.

Una vez culminado este proceso se procede a rotular la placa y llevarlo a una incubadora colocando en forma invertida la placa para evitar que la condensacin del agua afecte el proceso por un tiempo de 18 a 24 hrs.

RESULTADOS:

CRECIMIENTO DE ESTAFILOCOCOS

AGAR TSA (24 Hrs ANTES): Colocar una pequea muestra de microorganismos colonizados en la placa con agar manitol salado a un tubo inclinado TSA.

PRUEBA DE COAGULASA

Prueba en tubos (coagulasa libre): 1.- Colocar aspticamente 0.5 ml de plasma de conejo reconstituido en el fondo de un tubo estril. 2.- Aadir 0.5 ml de un cultivo puro de 18 a 24 horas en caldo del organismo por investigar (caldo BHI). 3.- Mezclar por rotacin suave del tubo, evitando remover o agitar el contenido. 4.- Colocar el tubo en un bao de agua a 37C. Observar la formacin de un coagulo visible. INTERPRETACIN: La reaccin se considera positiva ante cualquier grado de coagulacin visible dentro del tubo. La reaccin se observa mejor inclinando el tubo. Si es positiva, el coagulo o gel permanece en el fondo del tubo. Las bacterias fuertemente coagulasa positivas pueden producir un coagulo en 1 a 4 horas; por lo tanto, se recomienda observar el tubo a intervalos de 30 minutos durante las primeras 4 horas de la prueba. Algunas cepas de S. aureus pueden formar fuertes fibrinolisinas que disuelven el coagulo recin formado. Por consiguiente, pruebas positivas pueden pasar inadvertidas si no se observa el tubo a intervalos frecuentes. Otras cepas de S. aureus pueden producir slo suficiente coagulasa como para dar una reaccin positiva tarda luego de 18 a 24 horas de incubacin; por lo tanto, todas las pruebas negativas a las 4 horas, deben observarse despus de las 18 a 24 horas de incubacin.

Nota: la coagubilidad del plasma utilizado puede comprobarse aadiendo 1 gotade cloruro de calcio al 5% a 0.5 ml de plasma de conejo reconstituido. Se debe formar un coagulo en 10 o 15 seg. Cada ampolleta de plasma reconstituida debe ensayarse con organismos de control positivo (S. aureus coagulasa positiva) y una cepa coagulasa negativo (S. epidermidis). RESULTADOS: COAGULASA POSITIVA

PRUEBA DE CATALASA

Se utiliza para comprobar la presencia de la enzima catalasa que se encuentra en la mayora de las bacterias aeorobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principal excepcin es ESTREPTOCOCCUS. Mtodo del portaobjetos:

Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un portaobjetos limpio de vidrio. Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H2O2 al 30% sobre el microorganismo sin mezclarlo con el cultivo. Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo). Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante. Si se invierte el orden del mtodo (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse falsos positivos.

Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de agar sangre, se debe tener la precaucin de no retirar algo de agar con el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio contienen catalasa y su presencia dar un falso resultado positivo.

RESULTADOS: PRUEBA DE CATALASA POSITIVA

5. CONCLUSIONES:
Conocer la morfologa de estos microorganismos es de gran importancia ya que es una de las bacterias ms comunes que encontramos y que tambin es parte de nuestra flora bacteriana. Saber cmo se asla es de importancia para conservar la muestra y as diagnosticar.

6. BIBLIOGRAFA:

http://es.wikipedia.org/wiki/Staphylococcus_aureus http://www.joseacortes.com/microbiologia/pruebasbioq/catalasa.htm
http://www.ucol.mx/acerca/coordinaciones/cgd/DGEMS/archivos/manaclinico3.pdf