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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGIA

GUÍA DE PRÁCTICAS DE BIOLOGÍA Y GENÉTICA

PARA LA ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGÍA

SEMESTRE CADÉMICO 2012 - I

COORDINADOR DEL CURSO: Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

DOCENTES COLABORADORES:

Blgo. Nelson Rivera Fernandez

Q.F

Adriana Cordero Vilca

CD.

Giovanna García Huamàn

CD.

Ciro Calderón Guevara

Vilca CD. Giovanna García Huamàn CD. Ciro Calderón Guevara Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 1
Vilca CD. Giovanna García Huamàn CD. Ciro Calderón Guevara Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 1

INTRODUCCIÓN

El laboratorio constituye el lugar trabajo, tanto para la enseñanza como para la investigación y es preciso conocer los diferentes materiales, instrumentos, reactivos y equipos con los que cuenta. Las prácticas de biología son una parte fundamental en la enseñanza de dicha materia ya que permiten que los conocimientos teóricos aprendidos por el alumno se puedan aplicar, es por esta razón que los estudiantes deben comprender los procedimientos básicos en la técnica del manejo de los materiales y equipos de laboratorio para lograr un buen aprendizaje de la bilogía. El concepto de asepsia y de trabajo ordenado ayuda al desarrollo de la práctica. El trabajo de laboratorio representa uno de los aspectos fundamentales que contribuye en la definición de la vocación tecnológica y científica del ser humano y en especial de los jóvenes por estar en un periodo de formación intelectual, ya que ello permite que la teoría sea comparada con la práctica. Es tarea fundamental de los docentes es motivar la participación activa de los estudiantes en el desarrollo de prácticas de laboratorio y de campo, con el fin de que se mejoren sus habilidades y destrezas en cuanto al manejo de materiales y reactivos, con lo cual están en posibilidades de lograr un cambio o transformación del entorno en donde vive, así como la de su propia realidad.

Por esta razón, creímos por conveniente la elaboración de esta guía de práctica, cuyo contenido tiene como finalidad brind ar al estudiante un material ordenado y de fácil acceso al trabajo de laboratorio en la asignatura de Biología. Esta guía está descrita de manera clara y sencilla con el fin de que la ejecución práctica pueda hacerse completamente. El presente trabajo consta de catorce experiencias, las cuales se desarrollaron en varias etapas mediante la recopilación de prácticas. Cada práctica inicia con el título en la parte central, el cual se seleccionó de acuerdo a la dosificación del programa por semana. La competencia hace referencia al aspecto

del programa por semana. La competencia hace referencia al aspecto Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
del programa por semana. La competencia hace referencia al aspecto Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

significativo que se pretende que logren los alumnos al final del experimento. El fundamento teórico de cada una de las prácticas, fue elaborado en base a diversas referencias bibliográficas. En la parte experimental, el procedimiento fue desarrollado consultando diversos manuales de Educación Superior; del mismo modo, en la preparación de la guía nos hemos apoyado en los años de experiencia en la enseñanza universitaria en diversas instituciones. El cuestionario en el que el alumno demuestra su aprovechamiento logrado al final de la secuencia de aprendizaje, se elaboró basado en el aspecto introductorio y resultados experimentales que se esperan de cada práctica. Finalmente, agradezco anticipadamente en nombre de la plana del curso y el mío propio a sus lectores por hacerlo de su conocimiento. Asimismo; agradezco de manera muy especial a la profesora Adriana Cordero Vilca por su valiosa participación en la elaboración de la presente guía.

Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Coordinador de la Asignatura de Biología y Genética

Antonio Mesía Guevara Coordinador de la Asignatura de Biología y Genética Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
Antonio Mesía Guevara Coordinador de la Asignatura de Biología y Genética Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

RECOMENDACIONES GENERALES

PARA EL TRABAJO BIOLOGÍA

EN EL LABORATORIO DE

1. La asistencia a práctica es obligatoria, no habrá tolerancia y el inicio es a la hora indicada, después de este tiempo, no se permitirá al acceso al laboratorio.

2. Los alumnos deberán ingresar con el uniforme completo, estando el guardapolvo debidamente abotonado.

3. Las mesas deberán estar siempre limpias y desocupadas, las mochilas serán colocadas en los cajones de las mesas de trabajo.

4. Está prohibido comer y fumar en el laboratorio, evite el uso de celulares durante el desarrollo de la práctica.

5. Limpiar y desinfectar el área de trabajo antes y después de usarla.

6. No pasear entre las mesas del laboratorio, el trabajo deberá efectuarse sentado y en su equipo de trabajo. Hablar sólo lo necesario con los compañeros.

7. El material para el desarrollo de la práctica, es responsabilidad de los integrantes del grupo, en caso de no traerlo se suspenderá la práctica para dicho grupo.

8. Ser cuidadoso con el uso del material de laboratorio (microscopios, materiales de vidrio y porcelana, reactivos, etc.), con el fin de evitar cualquier accidente.

9. Verifique que los frascos con las sustancias a emplear estén debidamente rotulados o etiquetados.

10. El material una vez terminada la práctica, deberá ser entregado totalmente limpio y ordenado.

11. Informe al profesor de cualquier accidente que ocurra. En caso de daño o deterioro de algún instrumento o equipo, SON LOS ALUMNOS QUE CONFORMAN LA MESA LOS RESPONSABLES DE DICHO DAÑO y deberán subsanarlo a la brevedad posible y en un tiempo no mayor a una semana, siendo retenido su carnet hasta el cumplimiento de la deuda pendiente.

12. La evaluación en el laboratorio será permanente. Se tomará dos exámenes, un examen parcial y un examen final de práctica sin derecho a sustitutorio.

un examen parcial y un examen final de práctica sin derecho a sustitutorio. Mg. Marco Antonio
un examen parcial y un examen final de práctica sin derecho a sustitutorio. Mg. Marco Antonio

CONTENIDO DE LAS PRÁCTICAS

SEMANA

PRÁCTICA

TEMAS

PÁGINA

1

1

RECONOCIMIENTO, USO Y MANEJO DE MATERIALES DE

6

LABORATORIO.

2

2

MICROSCOPÍA

16

3

3

RECONOCIMIENTO DE GLÚCIDOS

26

4

4

RECONOCIMIENTO DE LÍPIDOS

32

5

5

RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS

38

6

6

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

42

7

7

AISLAMIENTO DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS

49

8

 

EXAMEN PARCIAL

 

9

8

CÉLULA PROCARIOTA: TÉCNICA DE COLORACIÓN BACTERIANA

53

10

9

CÉLULA EUCARIOTA: ÓSMOSIS

59

11

10

PLASTIDIOS E INCLUSIONES CITOPLASMÁTICAS

69

12

11

CARIOTIPO HUMANO

75

13

12

DIVISIÓN CELULAR: MITOSIS

84

14

13

LEYES DE MENDEL

87

15

14

LA FERMENTACIÓN

90

14 13 LEYES DE MENDEL 87 15 14 LA FERMENTACIÓN 90 Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
14 13 LEYES DE MENDEL 87 15 14 LA FERMENTACIÓN 90 Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

PRÁCTICA 1: RECONOCIMIENTO DEL MATERIAL DE LABORATORIO

Y MEDICIÓN DE VOLÚMENES

I.

COMPETENCIAS:

Reconoce los materiales de laboratorio.

Describe correctamente el uso de ellos.

Efectúa mediciones de volúmenes usando los materiales necesarios.

II.

MATERALES

Vaso de Precipitado Erlenmeyer Balón de Fondo Redondo Balón de Fondo Plano Probeta Bureta Pipeta
Vaso de Precipitado
Erlenmeyer
Balón de Fondo Redondo
Balón de Fondo Plano
Probeta
Bureta
Pipeta Graduada.
Pipetas Aforadas
Tubos de Ensayo
Agitador
Embudo
Embudo de Separación
Cápsula de Porcelana
Crisoles
Gradilla

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

Triángulo Pinza para Tubos de Ensayo Espátula Soportes Vidrio de Reloj Pizetas Placas de toque
Triángulo
Pinza para Tubos de Ensayo
Espátula
Soportes
Vidrio de Reloj
Pizetas
Placas de toque
Micropipetas
Pipeteadores
Mortero y pilón.
Escobilla para tubos
Mechero bunsen

En el laboratorio se emplean una variedad de implementos para la realización de las experiencias, algunos de ellos son denominados volumétricos, ya que se usan para medir volúmenes de fluidos, ya sean líquidos o gases. Entre los aparatos volumétricos más usados tenemos: Probetas, Pipetas, Buretas, Vasos de precipitado, tubos de ensayo, entre otros. En algunos aparatos el líquido se mide adicionándolo en el interior de este, mientras que en otros como en el caso

adicionándolo en el interior de este, mientras que en otros como en el caso Mg. Marco
adicionándolo en el interior de este, mientras que en otros como en el caso Mg. Marco

de las pipetas el líquido se mide llenando esta mediante succión (o vacío) con peras de caucho. Una alternativa poco recomendable es hacerlo por succión por la boca y poniendo el dedo índice sobre la parte superior de la pipeta para evitar la salida de líquido, pero cuando se trabaja con líquidos corrosivos o venenosos esto puede desembocar en quemaduras o envenenamiento. Al medir un líquido con el uso de pipetas se debe tener la precaución de que la punta inferior quede muy por debajo de la superficie del líquido, ya que de lo contrario absorberá aire, el cual impulsará el líquido hasta hacer contacto con la boca o con la pera de caucho.

hasta hacer contacto con la boca o con la pera de caucho. Cuando se mide un

Cuando se mide un líquido, la superficie de este generalmente adopta una curvatura denominada menisco, para efectos de una buena medición la parte inferior del menisco debe quedar tangente a la señal de referencia.

del menisco debe quedar tangente a la señal de referencia. Diferencia entre materiales, instrumentos, reactivos y

Diferencia entre materiales, instrumentos, reactivos y equipos de laboratorio

Artefactos que facilitan el estudio
Artefactos que
facilitan el estudio

A continuación se hace referencia a los materiales de uso común en el laboratorio:

se hace referencia a los materiales de uso común en el laboratorio: Mg. Marco Antonio Mesía
se hace referencia a los materiales de uso común en el laboratorio: Mg. Marco Antonio Mesía

PROBETA GRADUADA

 

Se utiliza, para contener o medir volúmenes de líquidos de una forma aproximada. Es un recipiente cilíndrico de vidrio con una base ancha, que generalmente lleva en la parte superior un pico para verter el líquido con mayor facilidad.

PIPETA VOLUMÉTRICA

 

Instrumento de laboratorio que se utiliza para

medir

o

transvasar

pequeñas

cantidades de

líquido

ERLENMEYER

 

Son matraces de paredes rectas, muy usados para las valoraciones. Se pueden calentar directamente sobre la rejilla.

para las valoraciones. Se pueden calentar directamente sobre la rejilla. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
para las valoraciones. Se pueden calentar directamente sobre la rejilla. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

MORTEROS

Se utilizan para disgregar sustancias, mediante la presión ejercida, suelen ser de porcelana.

BURETA

Bureta, instrumento de laboratorio que se utiliza en volumetría para medir con gran precisión el volumen de líquido vertido.

PIZETA O FRASCO LAVADOR

Se utilizan para enjuagar el material de laboratorio

BALON DE FONDO PLANO

Son recipientes de vidrio, esféricos, provistos de un cuello. Algunos tienen marcada una determinada capacidad (aforados).

de un cuello. Algunos tienen marcada una determinada capacidad (aforados). Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
de un cuello. Algunos tienen marcada una determinada capacidad (aforados). Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

TRÍPODE

Se utiliza como soporte para calentar distintos recipientes; sobre la plataforma del trípode se coloca una malla metálica para que la llama no dé directamente sobre el vidrio y se difunda mejor el calor.

MECHERO BUNSEN

Mechero Bunsen, dispositivo que se utiliza mucho en los laboratorios debido a que proporciona una llama caliente, constante y sin humo.

REJILLA DE ASBESTO

Material de laboratorio de metal que está cubierto con un círculo de asbesto; se usa para proteger el fuego directo el material de vidrio que va a sufrir calentamiento. Se suelen colocar encima del mechero, apoyadas en un aro sujeto al soporte. Sobre ellas se coloca el matraz o recipiente que queremos calentar, evitando así que la llama le dé directamente.

que queremos calentar, evitando así que la llama le dé directamente. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
que queremos calentar, evitando así que la llama le dé directamente. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

EMBUDO BUCHNER

 

Es un embudo con la base agujereada. Se acopla

por

su

extremo

inferior

mediante

un

corcho

taladrado

al

matraz kitasato.

Encima

de

los

orificios se coloca un papel de filtro. Se utiliza para

filtrar sustancias pastosas.

 

CAJA PETRI

 

La placa de Petri es un recipiente redondo, de cristal o plástico, de diferentes diámetros (siendo más comunes los de diámetros alrededor de 10 cm), de fondo bajo, con una cubierta de la misma forma que la placa, pero algo más grande de diámetro, para que se pueda colocar encima y cerrar el recipiente.

Se utiliza en los laboratorios principalmente para el cultivo de bacterias y otros microorganismos.

CRISOL GUSH O CRISOL FILTRANTE

 

Suele ser de porcelana, de un metal inerte o de algún tipo de material refractario. Se utiliza para calcinar o fundir sustancias. Se calienta a fuego directo. Es similar a las cápsulas.

CÁPSULA DE PORCELANA

 

Sirve para calentar y evaporar líquidos, fundir cristalizar sólidos.

 
para calentar y evaporar líquidos, fundir cristalizar sólidos.   Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 11
para calentar y evaporar líquidos, fundir cristalizar sólidos.   Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 11

VARILLA DE AGITACIÓN

 

La varilla de agitación es de vidrio y se utiliza para agitar las disoluciones.

GRADILLA

 

Pueden ser de metal, madera o platico. Se utilizan para sostener los tubos de ensayo.

TUBOS DE ENSAYO

 

Son cilindros de vidrio cerrados por uno de sus

extremos que se emplean para calentar, disolver o

hacer

reaccionar

pequeñas

cantidades

de

sustancias. Los hay de vidrio ordinario y de “PIREX”. Estos últimos son los que se deben utilizar cuando se necesita calentar.

VASOS DE PRECIPITADO

 

Se usan para preparar, disolver o calentar sustancias. Junto con el matraz, la probeta y los tubos de ensayo constituyen lo que se llama en el laboratorio “Material de vidrio de uso general”. Se fabrican en vidrio ordinario y en “PIREX”, y de distintos tamaños. Son cilíndricos y en la boca llevan un pequeño apéndice en forma de pico para facilitar el vertido de las sustancias cuando se transvasan. Puede ir aforados o graduados, si bien su exactitud es menor que la de un matraz aforado o una probeta.

si bien su exactitud es menor que la de un matraz aforado o una probeta. Mg.
si bien su exactitud es menor que la de un matraz aforado o una probeta. Mg.

MATRAZ FONDO REDONDO

También se conoce con el nombre de matraz de

fondo esférico y se utiliza en pocas experiencias.

EMBUDOS

Se emplean para filtrar sustancias liquidas o

simplemente para trasvasarlas de un recipiente a

otro. En el laboratorio se utilizan embudos de diversos materiales: vidrio ordinario, “PIREX”,

plástico o porcelana, según el tipo aplicación que

se les vaya a dar. Hay embudos de cristal

graduados; en este caso tienen una llave en el tubo que, al cerrarla, impide la salida del líquido.

Es preferible que el extremo del embudo tenga un

corte oblicuo para facilitar la caída del líquido.

PINZAS PARA TUBOS DE ENSAYO

Son instrumentos en forma de tenacillas que sirven para sujetar los tubos de ensayo; pueden

ser de madera o metálicas.

ESCOBILLA

Se utiliza para la limpieza del material de laboratorio.

ESCOBILLA Se utiliza para la limpieza del material de laboratorio. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
ESCOBILLA Se utiliza para la limpieza del material de laboratorio. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

SOPORTE UNIVERSAL

El soporte universal es una herramienta que se utiliza en laboratorio para realizar montajes con los materiales presentes en el laboratorio y obtener sistemas de medición o de diversas funciones, como por ejemplo: un fusiómetro, un equipo de destilación. Está formado por una base o pie en forma de semicírculo o de rectángulo, y desde el centro de uno de los lados, tiene una varilla cilíndrica que sirve para sujetar otros elementos a través de doble nueces.

de uno de los lados, tiene una varilla cilíndrica que sirve para sujetar otros elementos a
de uno de los lados, tiene una varilla cilíndrica que sirve para sujetar otros elementos a

IV. PARTE EXPERIMENTAL:

RECONOCIMIENTO DE MATERIALES DE LABORATORIO

1- Para el desarrollo de la práctica el grupo recibirá un conjunto de materiales para identificarlos y señalar sus características. 2- Efectuar el dibujo científico correspondiente de todos los materiales de la práctica. 3- Realizar la actividad con sumo cuidado evitando romper los materiales.

MEDICIÓN DE VOLÚMENES

1. Cada alumno de la mesa medirá 2,5 y 7 ml de agua destilada y lo colocará en tubos de ensayo.

2. Medir 10 ml. de agua con una pipeta aforada de 5 ml y colocarlos en un tubo de ensayo.

3. Colocar 50 ml de agua medidos desde una probeta a un beaker.

4. Colocar en un vaso de precipitado de 250 ml, 200 ml de agua medidos con probetas, comparando los volúmenes.

de 250 ml, 200 ml de agua medidos con probetas, comparando los volúmenes. Mg. Marco Antonio
de 250 ml, 200 ml de agua medidos con probetas, comparando los volúmenes. Mg. Marco Antonio

V.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué volumen cree usted más exacto, el medido con una pipeta aforada o el medido con una graduada?

2. ¿Qué implementos volumétricos miden vaciando?

3. ¿Para qué se usan los implementos que se le entregaron en esta sesión d e laboratorio?

4. ¿Cuál es el objetivo de usar la rejilla de asbesto?

d e laboratorio? 4. ¿Cuál es el objetivo de usar la rejilla de asbesto? Mg. Marco
d e laboratorio? 4. ¿Cuál es el objetivo de usar la rejilla de asbesto? Mg. Marco

PRÁCTICA 2: MICROSCOPÍA

I.

COMPETENCIAS:

Identifica sin error cada una de las partes del sistema mecánico y óptico del microscopio convencional.

Describe correctamente el funcionamiento de cada una de las partes del microscopio compuesto.

Prepara correctamente las muestras para ser observadas al microscopio. Ilumina correctamente el campo del microscopio.

Gradúa debidamente la apertura del diafragma del microscopio compuesto para visualizar una imagen.

II.

MATERIALES

Microscopio

Láminas

Laminillas

Pizeta con agua destilada

Azul de metileno

Lana

Hisopos.

Una hoja de papel periódico con letras pequeñas.

Papel absorbente.

Microscopio.

III.

FUNDAMENTO TEÓRICO

MICROSCOPIO ÓPTICO

Se usa para aumentar el tamaño de la imagen aparente de los objetos, lo cual permite observar los detalles estructurales de los microorganismos.

lo cual permite observar los detalles estructurales de los microorganismos. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
lo cual permite observar los detalles estructurales de los microorganismos. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

El microscopio óptico normal que se usa para observar bacterias y otros organismos celulares es un microscopio compuesto, el cual está provisto de una fuente luminosa, una lente condensadora de luz que la dirige hacia el objeto a observar y dos juegos de lentes que ayudan a la amplificación de la imagen.

AMPLIFICACIÓN

La capacidad ampli ficadora de un microscopio compuesto es el producto del aumento individual de los oculares y los lentes objetivos. Un microscopio típico que se usa en bacteriología tiene objetivos con poder de amplificación de 10X, 40X y 100X y oculares de 10X, por lo cual es capaz de amplificar la imagen de la muestra 100, 400 y 1000 veces.

PODER DE RESOLUCIÓN La resolución se define como la capacidad para observar claramente dos puntos vecinos en el campo visual como entidades diferentes o independientes. El poder de resolución se mide utilizando como unidad la inversa del límite de resolución. Poder de resolución= 1/Límite de resolución

LÍMITE DE RESOLUCIÓN Se define como la distancia mínima entre 2 puntos, para que puedan distinguirse como tales. Se calcula con la fórmula de Abbe:

Límite de resolución = 0,61 X Longitud de onda Apertura numérica

A menor límite de resolución, mayor es el poder de resolución.

numérica A menor límite de resolución, mayor es el poder de resolución. Mg. Marco Antonio Mesía
numérica A menor límite de resolución, mayor es el poder de resolución. Mg. Marco Antonio Mesía

APERTURA NUMÉRICA

Esta expresión, que suele abreviarse AN, indica la cantidad de luz que entra en un objetivo desde un punto del campo del microscopio. La apertura numérica es una constante de cada lente y mide su calidad para concentrar luz. Tal valor es de suma importancia, de él depende el Límite de Resolución, la propiedad más importante de un objetivo. La apertura numérica es igual:

n x seno α

Siendo n el índice de refracción (cambio en la velocidad de la luz difractada) del medio entre el medio y el objeto, α es el ángulo de semiapertura de la lente, su

valor siempre es menor a 1 (0,93 como máximo en los microscopios actuales.)

El aire tiene un índice de refracción de 1.0, que limita la resolución que se puede obtener, pero se puede incrementar la AN poniendo aceite de inmersión entre el espécimen y el objetivo, aumentando así el poder de resolución del microscopio.

El

aceite

de

inmersión

tiene

un

índice

de

refracción de

1.5,

lo

que

aumenta

de refracción de 1.5, lo que aumenta considerablemente la AN ingresando por lo tanto un mayor

considerablemente la AN ingresando por lo tanto un mayor cono de luz hacia el

objetivo y permitiendo de esta manera la observación de la muestra.

La calidad de un objetivo es tanto mayor cuanto más elevada es su apertura numérica.

de un objetivo es tanto mayor cuanto más elevada es su apertura numérica. Mg. Marco Antonio
de un objetivo es tanto mayor cuanto más elevada es su apertura numérica. Mg. Marco Antonio

TIPOS DE MICROSCOPIO

Simple.

Los primeros microscopios, construidos por Leeuwenhoek alrededor de 1675, eran

simples, es decir, contenían sólo una lente o lupa. Compuesto.

Tiene varias lentes combinadas, capaces de producir gran aumento. Existe además

el Microscopio electrónico, que debido a sus posibilidades para obtener imágenes claras de los objetos más diminutos, ha hecho contribuciones de la mayor

importancia, sobre todo en el estudio de la constitución y ciclos vitales de los virus filtrables.

MICROSCOPIO COMPUESTO DE CAMPO LUMINOSO

El microscopio de uso más común en el trabajo de laboratorio es el microscopio compuesto de campo luminoso.

El microscopio compuesto consta de una fuente luminosa, una lente que concentra

la luz (condensador) y la dirige hacia el espécimen y dos juegos de lentes convergentes, objetivo y ocular, que ayudan a la amplificación de la imagen.

El objetivo está en el extremo inferior del tubo del microscopio, justo por encima del objeto que se halla encima de la platina, y cuya distancia focal es muy pequeña

(distancia focal, es la distancia entre el foco de la lente y su centro óptico). El

objetivo forma imagen real, invertida y aumentada del objeto. La otra lente llamada ocular, se halla en el extremo superior, de mayor distancia focal, y es por donde se

observa para percibir las imágenes. El ocular forma una imagen virtual, aumentada y derecha de la imagen formada por el objetivo.

El microscopio compuesto consta básicamente de dos lentes convergentes: el

objetivo y el ocular que reproducen al combinarse una imagen virtual, i nvertida y cuyo tamaño es el producto de las amplificaciones de ambas lentes.

y cuyo tamaño es el producto de las amplificaciones de ambas lentes. Mg. Marco Antonio Mesía
y cuyo tamaño es el producto de las amplificaciones de ambas lentes. Mg. Marco Antonio Mesía
O CULAR X O BJETIVO = AUMENTO OCULAR OBJETIVO AUMENTO 10 X 4 X 40

OCULAR X OBJETIVO = AUMENTO

OCULAR

OBJETIVO

AUMENTO

10

X

4 X

40 X

10

X

10

X

100

X

10

X

40

X

400

X

10

X

100 X

1000 X

PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO

Localice estas partes en su microscopio e indique en el esquema.

PARTE MECÁNICA:

1. Tubo óptico

2. Tornillo Macrométrico

3. Tornillo Micrométrico

4. Revolver

5. Brazo

6. Platina

7. Base o pie

1. Tubo Óptico: Es un cilindro de metal que en su parte superior se encuentra colocado el OCULAR y en su parte inferior se dispone el REVOLVER al cual se atornillan los OBJETIVOS. En la parte posterior se encuentra la CREMALLERA que se adapta a un piñón interno.

2. Tornillo Macrométrico: Se utiliza para enfocar la preparación, es de largo recorrido y permite movimientos de gran amplitud. Se utiliza para movilizar el tubo o platina (enfoque grosero).

3. Tornillo Micrométrico: También se utiliza para enfocar la preparación, pero es de pequeño recorrido, para movimientos de pequeña amplitud.

pero es de pequeño recorrido, para movimientos de pequeña amplitud. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
pero es de pequeño recorrido, para movimientos de pequeña amplitud. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

4.

Revolver: Es un dispositivo metálico giratorio que se encuentra en la

parte inferior del tubo óptico y posee de dos a cuatro lentes que al hacerles girar deben disponerse en el Retén, indicando que se encuentran en posición de observación.

5.

Brazo: es el metal macizo, en forma de “C”. Por la parte superior se une con el TUBO y por su extremidad inferior se pone en contacto con la BASE por medio de la CHARNELA, la que permite inclinar el aparato. En su extremo superior se encuentra el TORNILLO MACROMÉTRICO. El Brazo sirve para transportar el microscopio.

6.

Platina: es una plancha metálica de forma circular o cuadrangular, que se encuentra en la parte inferior del Brazo. Posee una abertura central denominada ABERTURA DE PLATINA,

cuyo fin es dejar pasar la luz hacia el objeto de observación colocado en su respectivo portaobjetos sujetado por las Presillas.

7. Base o pie: Es un dispositivo metálico pesado, unas vec es en forma de herradura, otras en forma circular que permite la estabilidad del Microscopio.

PARTE ÓPTICA:

1. Oculares

2. Objetivos

3. Condensador

4. Diafragma

5. Espejo

1. Oculares.- Son cilindros cortos y huecos que se

Espejo 1. Oculares .- Son cilindros cortos y huecos que se colocan en la parte superior

colocan en la parte superior del tubo óptico. Interiormente llevan dos lentes uno en cada extremo y entre ambos existe un diafragma. La lente superior se denomina lente ocular y la inferior lente de campo.

La lente superior se denomina lente ocular y la inferior lente de campo. Mg. Marco Antonio
La lente superior se denomina lente ocular y la inferior lente de campo. Mg. Marco Antonio

Observando la parte exterior del ocular notaremos la presencia de unos números 5X, 10X, 15X, etc., que es el aumento de cada ocular. Esta parte se llama así porque el ojo del observador se coloca en este lugar. La función del ocular es aumentar la imagen real e invertida dada por el objetivo.

Cuando se utiliza el ocular 10X con el objetivo de pequeño aumento da una amplificación final de 100 veces. El de 50X dará una amplificación final de 500 veces y el de 100X una amplificación final de 1000 veces. Actúa como una lupa y produce imagen virtual aumentada y derecha de la imagen del objetivo.

2. Objetivos.- Son tubos cortos atornillados al revolver en la parte inferior del

tubo óptico. El objetivo es un sistema de lentes de los cuales el que está más cerca del objeto se denomina lente frontal. El aumento de cada objetivo se encuentra en la parte exterior del mismo: 5X, 10X, 45X, etc.

Objetivo de pequeño aumento o "Seco débil".encuentra en la parte exterior del mismo: 5X, 10X, 45X, etc. Útil para observar microorganismos grandes,

Útil para observar microorganismos grandes, p. ej. Protozoarios. Este objetivo está marcado con un “3” ó “2/3”, que significa 2/3 de pulgada ó 16 mm. También está marcado como 10X. Tiene una lente en el extremo mucho más grande que cualquiera de los otros objetivos.

Objetivo de gran aumento o "Seco fuerte".mucho más grande que cualquiera de los otros objetivos. Este se usa para el examen de

Este se usa para el examen de microorganismos vivos suspendidos en gotas de agua u otros líquidos. Está marcado con “6” ó “1/6” q ue significa 1/6 de pulgada ó 4 mm. También está marcado como 45X o 50X. La lente del extremo es de menor tamaño que la del seco débil.

Objetivo de inmersión en aceite. Existen los objetivos denominados de inmersión (100X), que se utiliza con aceite de cedro y Existen los objetivos denominados de inmersión (100X), que se utiliza con aceite de cedro y se les reconoce por que llevan una banda roja.

3. Condensador.- Es un sistema de lentes cuya función es concentrar los

rayos luminosos a la preparación, los que son proyectados por el espejo.

rayos luminosos a la preparación, los que son proyectados por el espejo. Mg. Marco Antonio Mesía
rayos luminosos a la preparación, los que son proyectados por el espejo. Mg. Marco Antonio Mesía

Se

enfoque.

moviliza

mediante

una

cremallera

Se enfoque. moviliza mediante una cremallera accionada por un torni llo de 4. Diafragma .- En

accionada

por

un torni llo

de

4. Diafragma.- En algunos microscopios desprovistos de condensador, es un disco metálico circular que se encuentra dispuesto por debajo de la platina. Posee aberturas de diferentes diámetros y su función es regular la cantidad de luz proyectada a la abertura de platina. Existe diafragma iris que se encuentra por debajo del condensador.

5. Espejo.- Se encuentra debajo de la platina montada en un soporte

metálico en forma de herradura. Posee dos caras: una cóncava y otra plana.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

A. MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Coloque el microscopio delante suyo y acomode su asiento de tal manera que pueda observar con facilidad. Prenda el foco del microscopio.

2. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.

3. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.

4. Comenzar la observación con el objetivo de 5x (ya está en posición).

4. Comenzar la observación con el objetivo de 5x (ya está en posición). Mg. Marco Antonio
4. Comenzar la observación con el objetivo de 5x (ya está en posición). Mg. Marco Antonio

PARA REALIZAR EL ENFOQUE DE LA MUESTRA

a.

Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.

b.

Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macromé trico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

c.

Pasar

al siguiente objetivo. Para cambiar de objetivo, gire

cuidadosamente el revólver hasta escuchar un click que indica un tope. De esta forma usted pasará desde el objetivo de 5 al de 10 X y luego al de 40X.

ES PROBABLE QUE AL OBSERVAR LA MUESTRA LUEGO DEL CAMBIO DE OBJETIVO SE NOTE ALGO BORROSO. PARA CORREGIR SOLAMENTE DEBE MOVER EL TORNILLO MICROMÉTRICO, NO DEBE MOVER EL TORNILLO MACROMÉTRICO, SI LO HACE DESENFOCARÁ LA MUESTRA Y DEBERÁ EMPEZAR DE NUEVO DESDE EL PASO 5 DE ENFOQUE DE LA MUESTRA.

B. PREPARACION Y OBSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS.-

1. Corte una letra “e” minúscula de la hoja de periódico o revista, dejándole un pequeño marco alrededor.

2. Coloque el pedacito de papel en la parte media del portaobjeto. La letra debe estar siempre derecha.

3. Agregue una gota de agua sobre la muestra.

4. Cubra la muestra con una laminilla cubreobjetos evitando que se formen burbujas .Para esto en un primer momento, la laminilla debe ser colocada en uno de los extremos del preparado con una inclinación en un ángulo de 45 grados. Luego se deja caer suavemente la laminilla sobre la muestra, de

45 grados. Luego se deja caer suavemente la laminilla sobre la muestra, de Mg. Marco Antonio
45 grados. Luego se deja caer suavemente la laminilla sobre la muestra, de Mg. Marco Antonio

esta forma se evita la formación de burbujas que evita la correcta visualización de la muestra .Si la laminilla quedara chueca enderezarla delicadamente con ayuda de la pinza.

5. Quitar el excedente de agua tanto en la parte superior como de la base de la laminilla con ayuda de un pedazo de papel higiénico.

6. En otra lámina coloque una hebra muy delgada de lana o hilo de color y deje caer una gota agua sobre ella. Cúbralo con la laminilla como hiciera con la letra “e”. NO SE DEBE COLOCAR UN PEDAZO DE LANA GRUESA PORQUE ESTO IMPEDIRA EL PASO DE LUZ Y NO PODRA VISUALIZAR LA MUESTRA.

7. Trabaje con las muestras que haya traído siguiendo el mismo procedimiento.

C. CUIDADOS DEL MICROSCOPIO AL TERMINAR DE TRABAJAR

1. Luego de que ha realizado sus observaciones y hecho sus esquemas, saque la lámina de la platina y con un pedazo de papel higiénico limpie dicha platina.

2. Gire el revólver y colóquelo en el objetivo de menor aumento.

3. Apague la lámpara de iluminación.

4. desenchufe el microscopio y enrolle el cable alrededor de él.

CUESTIONARIO

1- Hacer un esquema del recorrido de la luz a través de un microscopio óptico compuesto.

2- Mencione las características de un microscopio compuesto.

3-

Defina: imagen virtual, imagen real, límite de resolución, lente convergente, poder de resolución.

4-

¿Cuál es la importancia que

tiene el diafragma en el microscopio?

5-

Importancia del microscopio en la actualidad.

en el microscopio? 5- Importancia del microscopio en la actualidad. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
en el microscopio? 5- Importancia del microscopio en la actualidad. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

PRÁCTICA 3: RECONOCIMIENTO DE GLÚCIDOS

I.

COMPETENCIAS:

Identifica la presencia de carbohidratos en diferentes insumos alimenticios.

II.

MATERIALES

- Soluciones diluidas (5 gr. en 100 ml.) de glucosa, almidón.

- Muestras de tubérculos, semillas, jugos, etc.

- Reactivo de Benedict

- Reactivo de Lugol (solución iodada).

- Gradilla con tubos de ensayo, pinzas sujetatubos, pipetas,

Beaker y mechero de alcohol.

III.

FUNDAMENTO TEÓRICO

Los carbohidratos o hidratos de carbono ó glúcidos constituyen compuestos químicos formados principalmente por carbono, hidrógeno y oxígeno, elementos que se conjugan para formar diversos tipos, en una proporción generalmente de 1:2:1, respectivamente. Químicamente se definen como polialcoholes con un grupo aldehído o cetona.

Estas biomoléculas ejercen funciones fundamentales en los seres vivos, como:

soporte (celulosa), reserva de alimento (almidón), reserva energética (glucógeno), energía inmediata (glucosa). Pueden clasificarse atendiendo a varios criterios: de acuerdo al número de monómeros que constituyen al carbohidrato, al número de carbonos de sus monómeros, según el grupo funcional que posee ese monómero.

Responden a la fórmula general (CH2O) n . Con n entre 3 y 7.

Responden a la fórmula general (CH2O) n . Con n entre 3 y 7. Mg. Marco
Responden a la fórmula general (CH2O) n . Con n entre 3 y 7. Mg. Marco

RECONOCIMIENTO DE AZÚCARES REDUCTORES

REACTIVO DE BENEDICT

Los monosacáridos tienen poder reductor debido a los radicales aldehído o cetona de sus moléculas. Los disacáridos con enlace glucosídico entre un radical reductor y un grupo alcohol también tienen poder reductor. Si el enlace se realiza entre los dos radicales reductores (carbonos carbonílicos), no tienen p oder reductor. Este poder reductor puede ponerse de manifiesto frente a sales de cobre, ya que el ión cúprico se reduce por ganancia de un electrón, pasando a ión cuproso en un medio alcalino:

Cu ++ + radical reductor -----> Cu + + radical oxidado

(Cúprico)

(Cuproso)

Esta reacción es específica para azúcares con grupo reductores libres (C=O). Todos los monosacáridos poseen un grupo reductor libre. Los disacáridos maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus componentes cuando ésta es formada.

La acción reductora se manifiesta mediante una solución de sulfato cúprico (SO 4 Cu) de color azul, que pasa a óxido cuproso (Cu 2 O) de color rojo ladrillo que precipita. El reactivo utilizado es el de Benedict o el de Fehling, que contienen sulfato cúprico. Una turbidez verde-amarillenta en los resultados indica un 0,1 -0,3% de azúcar reductor. Un precipitado de color ámbar anaranjado, indica más de un 1,5% de azúcar reductor.

La coloración dependerá de la concentración de óxido de cobre y ésta a su vez de la reducción del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo.

de la reducción del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo. Mg. Marco Antonio Mesía
de la reducción del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo. Mg. Marco Antonio Mesía
RECONOCIMIENTO DE POLISACÁRIDOS REACTIVO DE LUGOL El Lugol (solución de yodo-yodurado) colorea las micelas de

RECONOCIMIENTO DE POLISACÁRIDOS

REACTIVO DE LUGOL

El Lugol (solución de yodo-yodurado) colorea las micelas de almidón de color azul intenso casi negro. El almidón es una mezcla (en diferentes proporciones según las especies) de los polisacáridos amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%). El almidón es coloreado de azul en presencia de Lugol, debido a una adsorción o fijación del I - 3 sobre las unidades de glucosa de la amilosa, y ayuda a mantener su estructura. Al calentar hasta ebullición, desaparece la estructura ternaria (incoloro) y reaparece al enfriar (azul-violeta).

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

A. Preparación de las muestras

1. Se preparan soluciones con las diferentes muestras de alimentos raspando o triturando un trocito de tubérculo o semillas, adicionando aproximadamente 5 ml de agua destilada.

2. En el caso de jugos diluir previamente la muestra: Medir 0,5 mL de jugo y agregar 5 ml de agua destilada. Reservar en frascos rotulados.

mL de jugo y agregar 5 ml de agua destilada. Reservar en frascos rotulados. Mg. Marco
mL de jugo y agregar 5 ml de agua destilada. Reservar en frascos rotulados. Mg. Marco

3.

En el laboratorio se tendrán muestras controles de soluciones de

almidón, glucosa, etc.

B. Identificación cualitativa de azúcares reductores con el reactivo de Benedict

1. Se preparan una serie de tubos de ensayo con 2 ml. de las soluciones preparadas en A rotulando cada tubo.

2. Preparar un tubo control con 2 ml de la solución de glucosa.

3. Agregar a cada tubo 0,5 ml de reactivo de Benedict.

4. Llevar todos los tubos a baño María hirviente por 3 minutos.

Observar si se producen variaciones de coloración e interpretar los resultados. Concluye acerca de la existencia de azúcares reductores en la solución problema.

C. Identificación cualitativa de almidón con el reactivo de Lugol

1. Se preparan una serie de tubos de ensayo con 2 ml. de las soluciones preparadas en A rotulando cada tubo.

2. Preparar un tubo control con 2 ml de la solución de almidón.

3. Agregar a cada tubo 5 gotas de reactivo de Lugol.

4. Observar e interpretar los resultados. Concluye acerca de la

existencia de almidón en la solución problema.

D. Resultados:

1. Llenar la siguiente tabla en donde se colocará positivo (+) si hay cambio de coloración, formación de precipitado, etc. o negativo (-) si

la muestra no cambia con la adición del reactivo de identificación

(-) si la muestra no cambia con la adición del reactivo de identificación Mg. Marco Antonio
(-) si la muestra no cambia con la adición del reactivo de identificación Mg. Marco Antonio
Muestra Reactivo Reactivo de Lugol Benedict
Muestra
Reactivo
Reactivo de
Lugol
Benedict

E. Análisis de resultados:

1- Por cada muestra se indicará por separado si existe almidón ó azúcares reductores o si hay una mezcla de ambas.

V.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué otros reactivos químicos se utilizan para la identificación de carbohidratos?

2. Ejemplos de carbohidratos reductores y no reductores.

3. Esquematice la estructura química del almidón, de la glucosa, de la sacarosa, de la lactosa.

4. ¿Por qué se considera reductor un azúcar?

5. Escriba la reacción de cada una de las pruebas realizadas en la práctica.

Escriba la reacción de cada una de las pruebas realizadas en la práctica. Mg. Marco Antonio
Escriba la reacción de cada una de las pruebas realizadas en la práctica. Mg. Marco Antonio

6.

¿Qué ocurre si la disolución de sacarosa es tratada previamente con ácido clorhídrico? Explica tu respuesta.

7. ¿A qué se debe que el almidón con Lugol pierda el color al calentar, y que vuelva a recuperar su color azul-violeta después de enfriarse?

y que vuelva a recuperar su color azul-violeta después de enfriarse? Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
y que vuelva a recuperar su color azul-violeta después de enfriarse? Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

PRÁCTICA 4: RECONOCIMIENTO DE LÍPIDOS

I.

COMPETENCIAS:

Identifica cualitativamente la presencia de lípidos en muestras de alimentos.

II.

MATERIALES

Mechero.de lípidos en muestras de alimentos. II. MATERIALES Trípode Rejilla de asbesto Gradillas con tubos de

Trípodeen muestras de alimentos. II. MATERIALES Mechero. Rejilla de asbesto Gradillas con tubos de ensayo Vaso

Rejilla de asbestode alimentos. II. MATERIALES Mechero. Trípode Gradillas con tubos de ensayo Vaso de precipitado Solución

Gradillas con tubos de ensayoII. MATERIALES Mechero. Trípode Rejilla de asbesto Vaso de precipitado Solución de detergente Aceite vegetal

Vaso de precipitadoTrípode Rejilla de asbesto Gradillas con tubos de ensayo Solución de detergente Aceite vegetal Solución de

Solución de detergentede asbesto Gradillas con tubos de ensayo Vaso de precipitado Aceite vegetal Solución de Sudán III

Aceite vegetaltubos de ensayo Vaso de precipitado Solución de detergente Solución de Sudán III en frasco cuentagotas

Solución de Sudán III en frasco cuentagotasVaso de precipitado Solución de detergente Aceite vegetal Solución de Hidróxido sódico al 20%. Éter Cloroformo.

Solución de Hidróxido sódico al 20%.Aceite vegetal Solución de Sudán III en frasco cuentagotas Éter Cloroformo. Bencina Alcohol Acetona Mg. Marco

Éterfrasco cuentagotas Solución de Hidróxido sódico al 20%. Cloroformo. Bencina Alcohol Acetona Mg. Marco Antonio Mesía

Cloroformo.cuentagotas Solución de Hidróxido sódico al 20%. Éter Bencina Alcohol Acetona Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

BencinaSolución de Hidróxido sódico al 20%. Éter Cloroformo. Alcohol Acetona Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

AlcoholSolución de Hidróxido sódico al 20%. Éter Cloroformo. Bencina Acetona Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

AcetonaSolución de Hidróxido sódico al 20%. Éter Cloroformo. Bencina Alcohol Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

de Hidróxido sódico al 20%. Éter Cloroformo. Bencina Alcohol Acetona Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
de Hidróxido sódico al 20%. Éter Cloroformo. Bencina Alcohol Acetona Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
III. FUNDAMENTO TEÓRICO Los lípidos son un conjunto de moléculas orgánicas, la mayoría biomoléculas, compuestas

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

Los lípidos son un conjunto de moléculas orgánicas, la mayoría biomoléculas,

compuestas principalmente por carbono e hidrógeno y en menor medida oxígeno,

aunque también pueden contener fósforo, azufre y nitrógeno, que tienen como característica principal el ser hidrofóbicas o insolubles en aguay sí en disolventes

orgánicos como la bencina, el alcohol, el benceno y el cloroformo.

En términos generales llamamos aceites a los triglicéridos de origen vegetal, y corresponden a derivados que contienen ácidos grasos insaturados

predominantemente por lo que son líquidos a temperatura ambiente. (aceites vegetales de cocina, y en los pescados.

Los lípidos desempeñan diferentes tipos de funciones biológicas:

Función de reserva energética. Los triglicéridos son la principal reserva de . Los triglicéridos son la principal reserva de

energía de los animales ya que un gramo de grasa produce 9 kilocalorías en las reacciones metabólicas de oxidación, mientras que las proteínas y los

glúcidos sólo producen 4 kilocalorías por gramo.

Función estructural. Los fosfolípidos, los glucolípidos y el colesterol forman . Los fosfolípidos, los glucolípidos y el colesterol forman

las bicapas lipídicas de las membranas celulares. Los triglicéridos del tejido adiposo recubren y proporcionan consistencia a los órganos y protegen

mecánicamente estructuras o son aislantes térmicos.

Función reguladora, hormonal o de comunicación celular. Las vitaminas . Las vitaminas

liposolubles son de naturaleza lipídica (terpenos, esteroides); las hormonas

son de naturaleza lipídica (terpenos, esteroides); las hormonas Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 33
son de naturaleza lipídica (terpenos, esteroides); las hormonas Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 33
esteroides regulan el metabolismo y las funciones de reproducción; los glucolípidos actúan como receptores de

esteroides regulan el metabolismo y las funciones de reproducción; los

glucolípidos actúan como receptores de membrana; los eicosanoides

poseen un papel destacado en la comunicación celular, inflamación, respuesta inmune, etc. Función transportadora. El transporte de lípidos desde el intestino hasta su

lugar de destino se realiza mediante su emulsión gracias a los ácidos biliares

y a las lipoproteínas.

La característica común a todos los lípidos es que son insolubles en agua y

solubles en disolventes orgánicos como la gasolina, benceno, xilol, cloroformo.

Las grasas son insolubles en agua. Cuando se mezcla agua y aceite y se agita fuertemente la mezcla, se forma una emulsión transitoria. Esto significa que si se

deja la “mezcla” reposar unos instantes, las gotas de aceite, de menor densidad, suben y se unen entre sí, formándose dos capas, la superior de aceite y la inferior

de agua.

Si a esta mezcla se la añade una solución de jabón o detergente y se agita, se produce entonces una emulsión permanente. Esto es debido a que el jabón rodea

a las gotas de aceite quedando su parte hidrofóbica (cola del ácido graso) en contacto con el aceite y su zona polar (COO Na+) en contacto con el agua. Esto

es lo que da a los jabones en general, sus cualidades como agentes de limpieza y es una propiedad muy utilizada en la fabricación de cosméticos que tienen en su

composición agua y aceites, consiguiéndose un producto homogéneo (se evita la

formación de dos fases)

IV. PARTE EXPERIMENTAL

1- PRUEBA DE SOLUBILIDAD

OBJETIVO: Comprobar la solubilidad de las grasas y los aceites en diferentes

solventes.

la solubilidad de las grasas y los aceites en diferentes solventes. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
la solubilidad de las grasas y los aceites en diferentes solventes. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Colocar aproximadamente 2ml de aceite en 4 tubos de ensayo previamente rotulados.

2. Añadir a uno de ellos 2ml de agua, al otro 2ml de bencina, al otro 2 mL de cloroformo y 2 ml de alcohol al último tubo.

3. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.

4. Observar los resultados.

5. Colocar soluble, poco soluble, insoluble de acuerdo a sus resultados en la siguiente tabla:

bencina

agua

cloroformo

alcohol

Aceite

2- TINCIÓN CON SUDÁN III

OBJETIVO: Reconocer Lípidos con la Coloración de Sudan III.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Poner 2 ml. de aceite en un tubo, añadir 2 ml. de agua y dejar reposar. Una vez formadas las dos fases, dejar caer unas gotas de Sudán III y agitar. Dejar reposar el tubo y anotar los resultados.

Las grasas se colorean en rojo anaranjado por el colorante denominado

III.

Se

Sudan

observará en el tubo al que se le añadió Sudán, que todo el aceite

aparece teñido.

el tubo al que se le añadió Sudán, que todo el aceite aparece teñido. Mg. Marco
el tubo al que se le añadió Sudán, que todo el aceite aparece teñido. Mg. Marco

3- SAPONIFICACIÓN

OBJETIVO: Comprobar cómo los lípidos saponificables forman jabón.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.

2. Agitar enérgicamente y colocar el tubo al baño María de 20 a 30 minutos.

3. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara

que contiene la solución de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semisólida que es el jabón formado y una superior lipídica de aceite inalterado. 4. Dibuja el tubo de ensayo indicando lo que contiene cada una de las fases que observas.

4- FORMACIÓN DE EMULSIÓN ESTABLE

OBJETIVO:

Simular la acción de la Bilis durante la emulsión.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. En 2 tubos de prueba secos colocar en cada uno de ellos ,2 ml de aceite más 2 ml de agua.

2. Se mezcla y luego de unos minutos se le agrega 0,5 ml de detergente (que simula la acción de la Bilis) sólo a uno de los tubos y se mezcla nuevamente.

3. Observar los resultados. Dibuja los tubos e indica en cuál se forma una emulsión transitoria y en cuál una emulsión permanente.

se forma una emulsión transitoria y en cuál una emulsión permanente. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
se forma una emulsión transitoria y en cuál una emulsión permanente. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

V.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué son los jabones?

2. ¿Qué enzima logra en el aparato digestivo la hidrólisis de las grasas?

3. ¿Qué es el Sudan III?

4. ¿Qué es una emulsión?

5. ¿Qué son las sales biliares y cuáles son sus funciones?

emulsión? 5. ¿Qué son las sales biliares y cuáles son sus funciones? Mg. Marco Antonio Mesía
emulsión? 5. ¿Qué son las sales biliares y cuáles son sus funciones? Mg. Marco Antonio Mesía

PRÁCTICA 5: RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS

I.

COMPETENCIAS:

 

Identifica la presencia de proteínas alimentarios

en diferentes insumos

II.

MATERIALES

Mechero.alimentarios en diferentes insumos II. MATERIALES Trípode Rejilla de asbesto   Gradillas con tubos de

Trípodeen diferentes insumos II. MATERIALES Mechero. Rejilla de asbesto   Gradillas con tubos de ensayo

Rejilla de asbesto 

 

Gradillas con tubos de ensayoMATERIALES Mechero. Trípode Rejilla de asbesto   Vaso de precipitado Pipetas Clara de huevo o leche

Vaso de precipitadoRejilla de asbesto   Gradillas con tubos de ensayo Pipetas Clara de huevo o leche  

Pipetas  Gradillas con tubos de ensayo Vaso de precipitado Clara de huevo o leche   Pizeta

Clara de huevo o leche 

 

Pizeta con agua destiladaVaso de precipitado Pipetas Clara de huevo o leche   HCl concentrado Alcohol etílico Reactivo de

HCl concentradoClara de huevo o leche   Pizeta con agua destilada Alcohol etílico Reactivo de Biuret (Solución

Alcohol etílicoo leche   Pizeta con agua destilada HCl concentrado Reactivo de Biuret (Solución de SO4Cu al

Reactivo de Biuret (Solución de SO4Cu al 1% /NaOH al 20%)Pizeta con agua destilada HCl concentrado Alcohol etílico Solución de albúmina al 1-2%   Solución de

Solución de albúmina al 1-2% 

 

Solución de Hidróxido sódico al 20%.de Biuret (Solución de SO4Cu al 1% /NaOH al 20%) Solución de albúmina al 1-2%  

III.

FUNDAMENTO TEÓRICO

Las proteínas son macromoléculas compuestas por carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno. La mayoría también contienen azufre y fósforo. Las mismas están formadas por la unión de varios aminoácidos, unidos mediante enlaces peptídicos. El orden y disposición de los aminoácidos en una proteína depende del código genético, ADN, de la persona.

Las proteínas constituyen alrededor del 50% del pes o seco de los tejidos y no existe proceso biológico alguno que no dependa de la participación de este tipo de sustancias.

alguno que no dependa de la participación de este tipo de sustancias. Mg. Marco Antonio Mesía
alguno que no dependa de la participación de este tipo de sustancias. Mg. Marco Antonio Mesía

Las proteínas desempeñan un papel fundamental para la vida y son las biomoléculas más versátiles y más diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:

Estructural (colágeno y queratinacantidad de funciones diferentes, entre las que destacan: Reguladora (insulina y hormona del crecimiento)

Reguladora (insulina y hormona del crecimiento)entre las que destacan: Estructural (colágeno y queratina Transportadora (hemoglobina) Defensiva (anticuerpos) ,

Transportadora (hemoglobina)y queratina Reguladora (insulina y hormona del crecimiento) Defensiva (anticuerpos) , Enzimática (sacarasa y pepsina)

Defensiva (anticuerpos) , (anticuerpos),

Enzimática (sacarasa y pepsina)Transportadora (hemoglobina) Defensiva (anticuerpos) , Contráctil (actina y miosina) Son esenciales para el

Contráctil (actina y miosina)Defensiva (anticuerpos) , Enzimática (sacarasa y pepsina) Son esenciales para el crecimiento. Las grasas y

Son esenciales para el crecimiento. Las grasas y carbohidratos no las pueden sustituir, por no contener nitrógeno. Las grasas y carbohidratos no las pueden sustituir, por no contener nitrógeno.

Proporcionan los aminoácidos esenciales fundamentales para la síntesis tisular.no las pueden sustituir, por no contener nitrógeno. Son materia prima para la formación de los

Son materia prima para la formación de los jugos digestivos, hormonas, proteínas plasmáticas, hemoglobina, vitaminas y enzimas. vitaminas y enzimas.

Funcionan como amortiguadores, ayudando a mantener la reacción de diversos medios como el plasma.plasmáticas, hemoglobina, vitaminas y enzimas. Las proteínas están formadas por aminoácidos. Las

Las proteínas están formadas por aminoácidos. Las proteínas de todo ser vivo están determinadas mayoritariamente por su genética (con excepción de algunos péptidos antimicrobianos de síntesis no ribosomal), es decir, la información genética determina en gran medida qué proteínas tiene una célula, un tejido y un organismo.

en gran medida qué proteínas tiene una célula, un tejido y un organismo. Mg. Marco Antonio
en gran medida qué proteínas tiene una célula, un tejido y un organismo. Mg. Marco Antonio

COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS

Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de

coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70°C o al ser tratadas

con

soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.

La

coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su

desnaturalización por los agentes indicados, que al actuar sobre la proteína la desordenan por la destrucción de su estructura secundaria, terciaria y cuaternaria.

REACCIÓN DE BIURET

Esta reacción la producen los péptidos

y las proteínas, pero no los

aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoácidos. El reactivo de Biuret contiene CuSO 4 en solución acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La

reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu 2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. La intensidad de color depende de la concentración de proteínas.

O C HN R CH O C
O
C
HN
R
CH
O
C
HN R CH
HN
R
CH
C O NH HC R Cu 2+ C O NH HC R
C
O
NH
HC
R
Cu 2+
C
O
NH
HC
R
O C HN R CH O C HN R CH C O NH HC R Cu
O C HN R CH O C HN R CH C O NH HC R Cu

IV.

PARTE EXPERIMENTAL

REACCIÓN DE BIURET

1. En 2 tubos de ensayo colocar en uno 2 ml de clara de huevo diluida con agua y en el otro tubo 2 ml leche diluida con agua.

2. Agregar 1 ml del reactivo de Biuret a cada tubo.

3. Observar los resultados.

COAGULACIÓN DE PROTEINAS

1. Colocar en tres tubos de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo (puede diluirse en un poco de agua para obtener una mezcla espesa) o 2-3ml de leche.

2. Calentar uno de los tubos al baño María, añadir a otro 2-3ml de HCl concentrado

y al tercero 2 o 3ml de alcohol etílico.

3. Observar los resultados.

V.

CUESTIONARIO

1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo?

2. ¿Cuál de los agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?

3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?

4. ¿Qué coloración da la reacción del Biuret?

5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?

6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?

sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué? Mg. Marco Antonio Mesía
sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué? Mg. Marco Antonio Mesía

PRÁCTICA 6: ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

I.

COMPETENCIAS:

Al finalizar esta práctica el alumno:

Pondrá de manifiesto la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales.

Comprobará la acción de la temperatura sobre la actividad de las enzimas.

Comprobará la acción hidrolítica de la amilasa.

Realiza experimentalmente la hidrólisis del almidón por acción de la amilasa salival.

Identifica cualitativamente la presencia de sustrato y producto.

Evalúa el efecto del pH en la acción de la enzima.

II.

MATERIALES:

Gradillas

Tubos de ensayo

Mechero

Pipetas

Baño María

Trocitos de hígado

Trocitos de papa

Arena fina

Agua oxigenada

Beaker pequeño para colectar saliva

Solución de almidón al 1%

HCl

Reactivo Lugol

Reactivo de Benedict

almidón al 1%  HCl  Reactivo Lugol  Reactivo de Benedict Mg. Marco Antonio Mesía
almidón al 1%  HCl  Reactivo Lugol  Reactivo de Benedict Mg. Marco Antonio Mesía

III.

FUNDAMENTO TEÓRICO

Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas, siempre que sea termodinámicamente posible .En estas reacciones, las enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en moléculas diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en las células necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimáticas.

Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energía de activación (ΔG ) de una reacción, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reacción. Las enzimas son generalmente proteínas globulares sintetizadas por las propias células.

Las actividades de las enzimas vienen determinadas por su estructura tridimensional, la cual viene a su vez determinada por la secuencia de aminoácidos. Casi todas las enzimas son mucho más grandes que los sustratos sobre los que actúan, y solo una pequeña parte de la enzima (alrededor de 3 a 4 aminoácidos) está directamente involucrada en la catálisis. La región que contiene estos residuos encargados de catalizar la reacción es denominada centro activo. La mayoría de las enzimas, al igual que el resto de las proteínas, pueden ser desnaturalizadas si se ven sometidas a agentes desnaturalizantes como el calor y los pHs extremos. Estos agentes destruyen la estructura terciaria de las proteínas de forma reversible o irreversible, dependiendo de la enzima y de la condición.

reversible o irreversible, dependiendo de la enzima y de la condición. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
reversible o irreversible, dependiendo de la enzima y de la condición. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

IV.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL A

Para todas las pruebas, la velocidad de reacción (desprendimiento de burbujas), se registrará como sigue:

0 = No reacciona

1 = Lenta

2 = Moderada

3 = Rápida

4 = Muy rápida

1. Reconocimiento de la catalasa:

Como se mencionó anteriormente la catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales.

La

metabolismo

hidrógeno, H 2 O 2 (agua oxigenada).

celular,

función

de

esta

enzima

se

en

los

forma

una

tejidos

molécula

es

necesaria

tóxica

que

porque

es

el

el

peróxido de

durante

Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxígeno, por lo que se

soluciona el problema. La reacción de la catalasa sobre el H 2 O 2 , es la siguiente:

de la catalasa sobre el H 2 O 2 , es la siguiente: La existencia de

La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua

oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas de

las bacterias patógenas son anaerobias (no pueden vivir con oxígeno), mueren con

patógenas son anaerobias (no pueden vivir con oxígeno), mueren con Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
patógenas son anaerobias (no pueden vivir con oxígeno), mueren con Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

el desprendimiento de oxígeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos

actúa sobre el agua oxigenada.

Desarrollo:

Rotular tres tubos de ensayo con las letras A, B y C.

Colocar en el tubo A un pedazo de hígado del tamaño de un frijol, en el tubo B un pedazo similar de papa y en el tubo C arena.

Añadir 3 mililitros de agua oxigenada a cada tubo.

Se observa un intenso burbujeo debido al desprendimiento de

oxígeno (anote la velocidad de reacción según lo indicado

anteriormente).

2. Reutilización de la enzima:

Rotule dos tubos con las letras D y E.

Sacar 2 ml del sobrenadante del tubo A.

Verter 1 ml de dicho sobrenadante en D y 1ml en E.

Añadir al tubo D un pedazo de hígado fresco y al tubo E 1ml de agua oxigenada.

Anote sus observaciones.

3. Efecto del tamaño de las partículas:

Rotule dos tubos con las letras F y G.

Triturar un pedazo de hígado y colocarlo en el tubo F.

Triturar un pedazo de papa y colocarlo en el tubo G.

Añadir 2 ml de agua oxigenada a cada tubo.

Observar la velocidad de reacción y anote sus resultados.

4. Desnaturalización de la catalasa:

Mediante esta experiencia, vamos a ver una propiedad fundamental de proteínas,

desnaturalización.

Ya que la catalasa químicamente es una proteína, podemos desnaturalizarla al

someterla a altas temperaturas. Al perder la estructura terciaria, pierde también la

función y como

su función catalítica, por lo que no podremos

que

es

la

consecuencia

como su función catalítica, por lo que no podremos que es la consecuencia Mg. Marco Antonio
como su función catalítica, por lo que no podremos que es la consecuencia Mg. Marco Antonio

descomponer el agua oxigenada y no se observaremos ningún tipo de reacción

cuando hagamos la experiencia anterior con muestras de tejidos hervidos.

1. Colocar en un tubo de ensayo un trocito de hígado entero.

2. Poner el tubo en un beaker con agua hirviendo durante cinco minutos.

3. Después de este tiempo, retirar el tubo.

4. Añadir 2 ml de agua oxigenada.

5. Observar el resultado.

6. Repetir lo mismo con la papa cruda.

HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR ACCIÓN DE LA AMILASA

El almidón es un polisacárido homogéneo, formado por molécula de glucosa unidas mediante enlaces glucosídicos. Constituye la principal forma de

almacenamiento de sustancias de reserva de los vegetales y de algunas bacterias

bajo la forma de gránulos.

Estructuralmente el almidón se encuentra bajo 2 formas: la α- amilosa (cadena

lineal) y la amilopectina (cadena ramificada). Mediante esta experiencia, vamos a

ver la actividad de la

sobre el almidón, hidrolizando el enlace α-glucosídico, obteniéndose azúcares reductores como producto de la acción de la enzima. Se verá como el pH ácido

afecta la acción de la enzima.

enzima amilasa, presente en la saliva. Esta enzima actúa

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL B

COLECCIÓN DE SALIVA Antes de la colección se procederá a un enjuague

simple de la cavidad oral con agua; luego manteniendo la boca cerrada esperará

entre 5 a 7 minutos evitando hablar y pasar saliva. La colección se realizará en un recipiente de boca ancha (beaker) dejando caer por gravedad la saliva, evitando

así la formación de espuma.

dejando caer por gravedad la saliva, evitando así la formación de espuma. Mg. Marco Antonio Mesía
dejando caer por gravedad la saliva, evitando así la formación de espuma. Mg. Marco Antonio Mesía

DILUCIÒN DE LA SALIVA En un tubo de ensayo colocar 1 ml de saliva y agregar 4 ml de agua destilada. Mezclar por inversión .Se obtiene así la saliva diluida.

TUBOS DE DIGESTION

1

2

ml

de almidón al 1%

2.0

2.0

ml

de agua

1,0

-

ml

HCl 0.5 N

-

1,0

ml

saliva diluida

1.0

1.0

Incubar en baño María de 37 °C por 10 minutos .Luego retirar del baño María y agitando previamente los tubos de la digestión preparar las siguientes baterías:

REACCIÓN DE LUGOL

TUBOS

1

2

Digerido 1

ml

1.0

-

Digerido 2

ml

-

1.0

HCl 0.5 N

ml

0.5

0.5

Lugol

ml

2.0

2.0

Mezclar y observar los resultados:

REACCIÓN DE BENEDICT:

TUBOS

1

2

Digerido 1

ml

0.5

-

Digerido 2

ml

-

0.5

Reactivo de Benedict ml

0.5

0.5

Colocar en baño de agua hirviente (100 °C) por 5 minutos, observe los resultados.

en baño de agua hirviente (100 °C) por 5 minutos, observe los resultados. Mg. Marco Antonio
en baño de agua hirviente (100 °C) por 5 minutos, observe los resultados. Mg. Marco Antonio

VI.

CUESTIONARIO

a. ¿Qué sucede cuando se pone peróxido de hidrógeno en una herida? ¿Qué sugiere la evidencia?

b. Explique por qué tantas especies producen la enzima catalasa.

c. Mencione ejemplos de cosas en nuestro diario vivir que envuelven algún uso de enzima.

d. ¿Cuáles son los productos finales de la digestión del almidón por la amilasa?

e. ¿Qué función cumple el HCl 0,5 N en el tubo 3 de digestión?

amilasa? e. ¿Qué función cumple el HCl 0,5 N en el tubo 3 de digestión? Mg.
amilasa? e. ¿Qué función cumple el HCl 0,5 N en el tubo 3 de digestión? Mg.

PRÁCTICA 7: AISLAMIENTO DE ÁCIDOS NUCLEICOS

I.

COMPETENCIAS

Utiliza técnicas de extracción de núcleos de los tejidos

Emplea técnica de extracción del ADN

Reconoce las fibras de ADN extraídas

II.

MATERIALES

SDS al 20% ò detergente líquido.

NaCl 2M

Agua destilada

Colorante Wright

Baguetas

Embudos

Morteros c/ pilón

Hoja de bisturí

Guantes

Lámina y laminilla por Alumno

Hígado de pollo con sus dos lóbulos. al que se ha quitado previamente todo el tejido conjuntivo

150 gr. de fresa(6 fresas)

2 vasos de Beaker medianos :100 mL

1 paquete pequeño de gasa

Jugo fresco colado de piña recién hecho ( 50 mL)

2 frascos de 100 ml. alcohol etílico Helado

recién hecho ( 50 mL)  2 frascos de 100 ml. alcohol etílico Helado Mg. Marco
recién hecho ( 50 mL)  2 frascos de 100 ml. alcohol etílico Helado Mg. Marco

ATENCIÓN el alcohol debe ser colocado en el frízer desde el día anterior y tiene

que ser de 96º si Ud. tuvieran un recipiente hermético colocarlo para que se conserve bien frio hasta la hora de la práctica.

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

La información necesaria para la construcción de los seres vivos se encuentra almacenada en los ácidos nucleicos. Su nombre deriva de su carácter ácido y del

hecho de que fueron descubiertos en el núcleo de las células eucariontes. Existen dos variedades químicas de ácidos nucleicos: el DNA (ácido desoxirribonucleico) y el RNA (ácido ribonucleico). Generalmente, la información

genética se almacena en forma de cromosomas de DNA y se expresa en forma de mRNA (RNA mensajero).

Las células eucariotas presentan un contenido en DNA mucho mayor que las células procariotas. Las moléculas de DNA en eucariotas se combinan con

proteínas y se organizan en fibras de cromatina, la cual está totalmente condensada con el fin de ocupar el mínimo volumen posible en el interior del núcleo

de la célula.

Las principales funciones del DNA son:

- Almacenar la información genética completa, necesaria para determinar la

estructura de todas las proteínas y RNAs de cada especie.

- Programar en el tiempo y espacio ordenadamente la biosíntesis de las células y

los componentes de los tejidos.

- Determinar las actividades de un organismo a través de su ciclo de vida.

- Determinar la individualidad de un organismo dado.

Los RNAs, aun siendo mucho más cortos que los DNAs, son mucho más abundantes en la mayoría de las células. Tanto en células eucariotas como

procariotas las tres clases mayoritarias de RNAs son: mensajero (mRNA),

procariotas las tres clases mayoritarias de RNAs son: mensajero (mRNA), Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
procariotas las tres clases mayoritarias de RNAs son: mensajero (mRNA), Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

ribosomal (rRNA) y transferente (tRNA). Cada uno consta de una cadena simple de ribonucleótidos con un determinado peso molecular, secuencia de nucleótidos y función biológica. La cantidad y pureza de los ácidos nucleicos en una preparación puede estimarse mediante espectrofotometría. La absorción a 260 nm permite calcular su concentración: 1 unidad de absorbancia (UA) corresponde aproximadamente a 50 μg/mL para DNA de cadena doble y 40 μg/mL para DNA de cadena simple y RNA. El cociente A260/A280 da una estimación de la pureza de los ácidos nucleicos: una preparación pura de DNA y RNA tiene un valor de A260/A280 de 1,8

y 2,0 respectivamente. Valores significativamente menores indican contaminación

con proteínas o fenol, y, por consiguiente, no será posib le cuantificar con precisión

la cantidad de ácidos nucleicos.

El objetivo de esta práctica es aislar ácidos nucleicos (fundamentalmente DNA) a partir de un tejido animal: Hígado de pollo y tejido vegetal: Fresa

UTILIDAD DE LA PURIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS

La importancia del proceso de obtención y purificación del material genético es recobrar el producto máximo de ADN de alto peso molecular libre de proteínas, fenol e inhibidores de las enzimas de restricción. El ADN de alta calidad es un

prerrequisito para su uso en técnicas de Biología molecular como impresiones digitales de ADN o Fingerprinting (utilizando secuencias altamente repetitivas denominadas mini satélites que permite la identificación genética de las personas)

y PCR (para la identificación de las secuencias específicas de ADN mediante el usos de cebadores).

IV.

PROCEDIMIENTO

EXTRACCIÓN DE ADN: TEJIDO ANIMAL Ò VEGETAL

1. Triturar el hígado de pollo ò la fresa en un mortero.

2. Añadir al triturado, 50 ml. de agua destilada y con una cuchara, mover y presionar hasta que se torne homogénea.

y con una cuchara, mover y presionar hasta que se torne homogénea. Mg. Marco Antonio Mesía
y con una cuchara, mover y presionar hasta que se torne homogénea. Mg. Marco Antonio Mesía

3.

Filtrar, mediante una gasa, hasta verificar la separación de los restos de tejido.

4. El filtrado trasvasarlo a un Beaker mediano y añadir un volumen similar de NaCl 2M, mezclar. Agregar 5 ml. de Lauril sulfato de sodio (SDS) ò detergente líquido y mezclar bien agitando suavemente por 10 minutos.

5. Añadir 2 mL de jugo de piña fresco y agitar suavemente para no romper el ADN.

6. Añadir suavemente, por la paredes del vaso, alcohol etílico de 96º (preferencia frío), verificando que se formen 2 fases. En la interfase precipita el ADN.

7. Introducir una bagueta o varilla de vidrio y mover en una misma dirección para que las hebras de ADN se vayan enrollando y adhiriendo a la bagueta.

8. COLORACION: Tomar una muestra del ADN enrollado en la bagueta y extender sobre una lámina, dejar secar bien y agregar el colorante Wright, dejar por 5 minutos. Lavar y dejar secar, observar al microscopio con los objetivos de 10 y 40X.

V.

CUESTIONARIO

1. Explique los paso para realizar la extracción de ADN

2. ¿Qué función cumplen cada uno de los reactivos utilizados en la extracción de ADN?

3. ¿Qué utilidad tiene la extracción de ADN en el laboratorio?

4. ¿Qué importancia tiene la extracción del ADN en salud?

laboratorio? 4. ¿Qué importancia tiene la extracción del ADN en salud? Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
laboratorio? 4. ¿Qué importancia tiene la extracción del ADN en salud? Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

PRÁCTICA 8: CÉLULA PROCARIOTA-TÉCNICA DE

COLORACIÓN BACTERIANA

TINCIÓN DE PARED CELULAR

I.

COMPETENCIA

Conoce las diversas técnicas de tinción y el fundamento de las mismas.

II.

MATERIALES

Asa de siembra

Mechero Bunsen

Microscopio

Batería para tinción Gram

Porta objetos

Mondadientes

Aceite de inmersión

Guantes

Pizeta con agua destilada

Gorro

Solución salina

Mascarilla

III.

FUNDAMENTO TEÓRICO

PARED CELULAR

Debajo de las sustancias extracelulares tales como las cápsulas o capas mucosas y externas a la membrana citoplasmática está la pared celular que es una estructura muy rígida y que da forma a la célula. Las paredes celulares bacterianas son esenciales para el crecimiento y la división. Todas las bacterias poseen paredes celulares rígidas que protegen a la célula de explotar en medios de baja presión osmótica. Composición química de las paredes celulares.- El péptidoglucano proporciona a la pared celular una estructura rígida. Estos grandes polímeros, están compuestos de tres clases de bloques estructurales: N- Acetil-Glucosamina, Ácido N- Acetil-Murámico y un péptido que consta de cuatro o cinco aminoácidos. Además contiene proteínas con polisacáridos, lipoproteínas y lipopolisacáridos.

proteínas con polisacáridos, lipoproteínas y lipopolisacáridos. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 53
proteínas con polisacáridos, lipoproteínas y lipopolisacáridos. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 53

Propiedades y Funciones:

Brinda protección y resistencia a la bacteria frente a los posibles cambios de presión osmótica del medio en el que se encuentra y a la acción de ciertos agentes externos.

Presenta Poros que actúan como filtros, permitiendo el pasaje de agua y metabolitos esenciales.

Presenta antígenos de tipo y grupo específicos.

Participa en la división (multiplicación) bacteriana (se invagina junto con la membrana plasmática).

En las bacterias Gram .negativas tiene poder patógeno debido a que presenta endotoxinas (Lípido A).

MÉTODO DE TINCIÓN DE GRAM

A pesar de que fue desarrollada en el siglo XIX la tinción de Gram es la más

utilizada en el diagnóstico microbiológico.

La tinción de Gram es una tinción diferencial que permite distinguir dos grandes grupos bacterianos: las Gram (+) y las Gram (-). Tinción empleada en microbiología para la visualización de bacterias en muestras clínicas. También se emplea como primer paso en la diferenciación b acteriana. El examen con microscopio óptico de preparación con tinción de Gram se emplea de rutina para determinar la forma de las bacterias. Las formas comunes son cocos (esféricas), bacilos (alargadas) y formas espiraladas Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos. Los microorganismos Grampositivos se tiñen de azul, mientras que aproximadamente un tercio de los cocos, la mitad de los bacilos y todos los organismos espira lados se tiñen de rojo y se dice que son Gramnegativos.

El valor diagnóstico de esta tinción es variable; normalmente permite una buena

orientación al microbiólogo para seleccionar las técnicas de cultivo más adecuadas

al microbiólogo para seleccionar las técnicas de cultivo más adecuadas Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
al microbiólogo para seleccionar las técnicas de cultivo más adecuadas Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

y también tiene valor en orientar hacia un diagnóstico etiológico, en especial para instaurar un tratamiento inicial.

La tinción de Gram requiere cuatro soluciones:

Primer colorante: El cristal violeta es un colorante básico que en contacto con las células bacterianas cargadas negativamente, reaccionan con ellas coloreándolas.

Solución mordiente: El Lugol que fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las células. El ingrediente activo de este compuesto es el I 2 ; El KI simplemente hace soluble el I 2 en el agua. El I 2 entra en las células y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. Hasta este momento las células Gram (+) como Gram (-) se encuentran teñidas de color violeta.

Agente decolorante: El alcohol acetona es un solvente orgánico que disuelve la membrana externa de las Gram (-) facilitando la salida del complejo colorante-mordiente. Debemos tomar en cuenta la delgada capa de mureína incapaz de retener este complejo en las Gram (-). Luego de este tratamiento las bacterias Gram (+) mantienen el color violeta y las Gram (-) quedan decoloradas.

Colorante de contraste: Es un colorante básico de distinto color que el primer colorante, como la safranina ola fucsina básica

color que el primer colorante, como la safranina ola fucsina básica Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
color que el primer colorante, como la safranina ola fucsina básica Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
Los dos grupos bacterianos que distingue esta técnica difieren en el color con el que

Los dos grupos bacterianos que distingue esta técnica difieren en el color con el que finalmente aparecen. Las bacterias Gram (+) se tiñen de azul-violeta por el cristal violeta y no perderán esta coloración durante los pasos sucesivos. Las bacterias Gram (-) perderán la coloración inicial del cristal violeta en los siguientes pasos y se teñirán de rosa debido al colorante de contraste. La diferencia está determinada por la composición de su pared celular. Las bacterias Gram (+) poseen una gruesa malla de péptidoglucano en su parte más externa, mientras que, las Gram (-), recubriendo una capa fina de péptidoglucano, presentan una membrana lipídica externa que envuelve toda la célula.

presentan una membrana lipídica externa que envuelve toda la célula. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
presentan una membrana lipídica externa que envuelve toda la célula. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

PROCEDIMIENTO

REALIZACIÓN DEL FROTIS

1. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.

2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.

3. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el portaobjeto a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.

A) TINCIÓN DE GRAM

1. Realiza la preparación del frotis bacteriano como se explicó en el paso anterior

2. Teñir con cristal violeta 1min.

3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.

4. Cubrir con Lugol 1min.

5. Lavar con agua el exceso de Lugol.

6. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparación deje de perder color (30)

7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.

8. Teñir con safranina 1min.

agua para eliminar el resto de disolvente. 8. Teñir con safranina 1min. Mg. Marco Antonio Mesía
agua para eliminar el resto de disolvente. 8. Teñir con safranina 1min. Mg. Marco Antonio Mesía

9.

Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.

10. Secar la preparación.

11.Examinar al microscopio con aceite de inmersión y fijándose sobre todo en el color de cada preparación.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué es un frotis?

2. ¿Con qué finalidad se fija la muestra de microorganismos en el porta objetos?

3. ¿Qué importancia tiene teñir las muestras bacterianas?

4. ¿Por qué es necesario emplear aceite de inmersión para la observación de los microorganismos?

5. De los reactivos que utilizaste para la tinción de Gram, ¿cuál es el que funciona como colorante primario?

6. ¿Qué función tiene el Yodo en la tinción de Gram?

7. ¿Qué color se tiñen las bacterias Gram (+) y Gram (-)?

8. Menciona tres bacterias Gram (+) y escribe la enfermedad que causan.

9. Menciona tres bacterias Gram (-) y escribe la enfermedad que causan.

9. Menciona tres bacterias Gram (-) y escribe la enfermedad que causan. Mg. Marco Antonio Mesía
9. Menciona tres bacterias Gram (-) y escribe la enfermedad que causan. Mg. Marco Antonio Mesía

PRÁCTICA 9: CÉLULA EUCARIOTA-ÓSMOSIS

I.

COMPETENCIAS:

Al finalizar esta práctica el alumno:

Describe la estructura general de las células animales y vegetales y comprueba la importancia que tiene la concentración del medio en que están inmersas, para la vida de las células.

Comprueba el fenómeno de ósmosis en células animales y vegetales

II.

MATERIALES

Proporciona el Laboratorio

Microscopio Compuesto.y vegetales II. MATERIALES Proporciona el Laboratorio Azul de metileno. Lugol Solución salina:  0.9% NaCl

Azul de metileno.MATERIALES Proporciona el Laboratorio Microscopio Compuesto. Lugol Solución salina:  0.9% NaCl  0.2% NaCl 

Lugolel Laboratorio Microscopio Compuesto. Azul de metileno. Solución salina:  0.9% NaCl  0.2% NaCl 

Solución salina:Laboratorio Microscopio Compuesto. Azul de metileno. Lugol  0.9% NaCl  0.2% NaCl  2.0% NaCl

0.9% NaCl

0.2% NaCl

2.0% NaCl

Láminas portaobjetosalina:  0.9% NaCl  0.2% NaCl  2.0% NaCl Láminas cubreobjetos Gota de sangre III.

Láminas cubreobjetos0.9% NaCl  0.2% NaCl  2.0% NaCl Láminas portaobjeto Gota de sangre III. FUNDAMENTO TEÓRICO

Gota de sangre 2.0% NaCl Láminas portaobjeto Láminas cubreobjetos III. FUNDAMENTO TEÓRICO Traerán los alumnos Hisopos

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

Traerán los alumnos

Hisopos estériles.Gota de sangre III. FUNDAMENTO TEÓRICO Traerán los alumnos Planta Elodea Bulbo de cebolla Hoja de

Planta Elodea Elodea

Bulbo de cebollaTraerán los alumnos Hisopos estériles. Planta Elodea Hoja de geranio Pinza Gotero Hoja de afeitar Papel

Hoja de geranioalumnos Hisopos estériles. Planta Elodea Bulbo de cebolla Pinza Gotero Hoja de afeitar Papel servilleta La

Pinzaestériles. Planta Elodea Bulbo de cebolla Hoja de geranio Gotero Hoja de afeitar Papel servilleta La

GoteroPlanta Elodea Bulbo de cebolla Hoja de geranio Pinza Hoja de afeitar Papel servilleta La biología

Hoja de afeitarPlanta Elodea Bulbo de cebolla Hoja de geranio Pinza Gotero Papel servilleta La biología celular (antiguamente

Papel servilletade cebolla Hoja de geranio Pinza Gotero Hoja de afeitar La biología celular (antiguamente citología de

La biología celular (antiguamente citología de cito=célula y Logos=Estudio o

Tratado ) es una disciplina académica que se encarga del estudio de las células en cuanto a sus propiedades, estructura, funciones, orgánulos que contienen, su interacción con el ambiente y su ciclo vital.

orgánulos que contienen, su interacción con el ambiente y su ciclo vital. Mg. Marco Antonio Mesía
orgánulos que contienen, su interacción con el ambiente y su ciclo vital. Mg. Marco Antonio Mesía

Con la invención del microscopio óptico fue posible observar estructuras nunca antes vistas por el hombre, las células. Esas estructuras se estudiaron más detalladamente con el empleo de técnicas de citoquímica y con la ayuda fundamental del microscopio electrónico.

La biología celular se centra en la comprensión del funcionamiento de los sistemas celulares, de cómo estas células se regulan y la comprensión del funcionamiento de sus estructuras. Una disciplina afín es la biología molecular

La célula es la unidad fundamental de la vida, representa la unidad morfológica, fisiológica, genética y evolutiva de todos los seres vivos. Las células vivientes difieren unas de otras en forma, tamaño, estructura interna, funciones, etc. No existe pues, célula viva típica, hay una gran variedad en morfología y función, pero todas coinciden en la estructura básica: Envoltura celular, membrana, citoplasma y núcleo. En las células vegetales podemos encontrar además la presencia de plastos y pared celular celulósica y la ausencia de centriolo y lisosomas. Sin embargo, hay características comunes a la mayor parte de las células, de este modo, las cuatro partes básicas corresponden a:

a. Envoltura celular

b. Membrana celular

c. Citoplasma

d. Núcleo

DIFERENCIAS ENTRE CELULA ANIMAL Y VEGETAL

CÉLULA ANIMAL.

1. Presenta una membrana celular simple.

2. La célula animal no lleva plastidios.

3. El número de vacuolas es muy reducido.

4. Tiene centrosoma.

5. Presenta lisosomas.

de vacuolas es muy reducido. 4. Tiene centrosoma. 5. Presenta lisosomas. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
de vacuolas es muy reducido. 4. Tiene centrosoma. 5. Presenta lisosomas. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

6.

No se realiza la función de fotosíntesis (nutrición heterótrofa).

7. Nutrición heterótrofa.

CÉLULA VEGETAL

1. Presenta una membrana celulósica o pared celular, rígida que contiene celulosa.

2. Presenta plastidios o plastos como el cloroplasto.

3. Presenta numerosos grupos de vacuolas.

4. No tiene centrosoma.

5. Carece de lisosomas.

6. Se realiza función de fotosíntesis (nutrición autótrofa).

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Para observar célula animal:

1. Con un hisopo haga un raspado del epitelio bucal.

2. Coloque en una lámina porta objetos la muestra obtenida.

3. Realice un frotis en una sola dirección (extendido de la muestra).

4. Secar al medio ambiente durante 5 minutos.

5. Agregar 1 a 2 gotas de azul de metileno y esperar 3 minutos.

6. Echar unas gotas de agua sobre la preparación para lavar el exceso.

7. Observe al microscopio a menor y mayor aumento. Esquematice.

Para observar célula vegetal:

Célula de epidermis de la cebolla (Allium cepa)

1. Coloque una gota de agua en el centro de la lámina.

la

2. Con

epidermis de la cara interior de un

una

pinza

desprenda

catáfila

de

cebolla,

la

capa

epidérmica

deberá

ser

catáfila de cebolla, la capa epidérmica deberá ser Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 61
catáfila de cebolla, la capa epidérmica deberá ser Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 61
catáfila de cebolla, la capa epidérmica deberá ser Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 61

transparente.

3. Coloque en la lámina porta objeto la epidermis de la cebolla.

4. Extienda cualquier doblez de la epidermis.

5. Coloque una lámina cubre objetos sobre la epidermis; no aplique presión alguna sobre la lámina.

6. Observe con los objetivos: seco débil y seco fuerte. Esquematice.

7. Una vez observado la muestra anterior, separe la lámina del microscopio, levante el cubre objetos para agregarle 2 gotas de lugol y espere unos 3 minutos.

8. Si hay exceso de colorante, lave la muestra con cuidado o elimine con papel servilleta.

9. Coloque nuevamente el cubre objeto y observe.

Célula de Elodea (Planta acuática)

1. Coloque una gota de agua en el centro de la lámina.

2. Tome una hoja de Elodea, llévela al porta objeto.

3. Coloque una laminilla. Luego observe con los objetivos: seco débil y seco fuerte. Esquematice.

con los objetivos: seco débil y seco fuerte. Esquematice. Pared celular Cloroplastos Citoplasma Célula de Geranio

Pared celular

seco débil y seco fuerte. Esquematice. Pared celular Cloroplastos Citoplasma Célula de Geranio 1. Coloque una

Cloroplastos

Citoplasma
Citoplasma
fuerte. Esquematice. Pared celular Cloroplastos Citoplasma Célula de Geranio 1. Coloque una gota de agua en

Célula de Geranio

1. Coloque una gota de agua en el centro de la lámina.

2. Con una pinza desprenda la epidermis de la cara interior de la hoja, la capa epidérmica deberá ser transparente.

la cara interior de la hoja, la capa epidérmica deberá ser transparente. Mg. Marco Antonio Mesía
la cara interior de la hoja, la capa epidérmica deberá ser transparente. Mg. Marco Antonio Mesía

3.

Coloque en la lámina porta objeto la epidermis del geranio.

4. Extienda cualquier doblez de la epidermis.

5. Coloque una lámina cubre objetos sobre la epidermis; no aplique presión alguna sobre la lámina.

6. Observe con los objetivos: seco débil y seco fuerte. Esquematice.

7. Una vez observado la muestra anterior, separe la lámina del microscopio, levante el cubre objetos para agregarle 2 gotas de lugol y espere unos 3 minutos.

8. Si hay exceso de colorante, lave la muestra con cuidado o elimine con papel servilleta.

9. Coloque nuevamente el cubre objeto y observe.

servilleta. 9. Coloque nuevamente el cubre objeto y observe. Ostiolo Célula estomática FUNDAMENTO TEÓRICO-ÓSMOSIS La
Ostiolo
Ostiolo

Célula estomática

FUNDAMENTO TEÓRICO-ÓSMOSIS

La membrana celular además de delimitar y proteger las células, se encarga de regular el transporte de materiales entre éstas y su medio circundante.

Existen diferentes tipos de transporte, dependiendo de la naturaleza de las sustancias transportadas y de la cantidad en que se encuentren, dentro o fuera de las células.

A escala celular se reconocen 2 tipos de transporte: el pasivo y el activo. El transporte pasivo es el movimiento de moléculas a través de los poros de la membrana celular, desde una zona de alta concentración a otra de menor concentración; el proceso no implica gasto de energía. La difusión y osmosis son ejemplo de este tipo de transporte. La ósmosis es el movimiento de moléculas de agua a través de una membrana semipermeable.

movimiento de moléculas de agua a través de una membrana semipermeable. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
movimiento de moléculas de agua a través de una membrana semipermeable. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

La difusión es el movimiento de moléculas de una sustancia a través de la membrana desde una zona de mayor concentración de moléculas a una de menor concentración. Es un proceso físico irreversible, en el que partículas materiales se introducen en un medio que inicialmente estaba ausente, aumentando la entropía del sistema conjunto formado por las partículas difundidas o soluto y el medio donde se difunden o disolvente.

Normalmente los procesos de difusión están sujetos a la Ley de Fick. La membrana semipermeable puede permitir el paso de partículas y disolvente siempre a favor del gradiente de concentración. La difusión, proceso que no requiere aporte energético, es frecuente como forma de intercambio celular.

La ósmosis es el movimiento de moléculas de agua a través de una membrana semipermeable, se la define como un fenómeno en el que se produce el paso o difusión de un disolvente a través de una membrana semipermeable, la cual permite el paso del disolvente pero no el del soluto, desde una disolución más diluida a otra más concentrada.

La capacidad que tiene el agua de atravesar la membrana plasmática, que se comporta como una membrana semipermeable, depende de la diferencia d e concentración entre los líquidos extracelular e intracelular y viene determinada por la presencia de sales minerales y moléculas orgánicas disueltas.

SOLUCIONES FISIOLÓGICAS

El agua se mueve fácilmente cruzando las membranas celulares, a través de canales especiales revestidos de proteína. Si el total de la concentración de todos los solutos disueltos no es igual en ambos lados, habrá un movimiento neto de moléculas de agua hacia dentro o fuera de la célula. Para donde es el movimiento del agua, depende si el medio donde se encuentra la célula es isotónico, hipotónico

hipertónico.

o

donde se encuentra la célula es isotónico, hipotónico hipertónico. o Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
donde se encuentra la célula es isotónico, hipotónico hipertónico. o Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

Solución isotónica

Cuando dos medios son isotónicos, el total de la concentración molar de los solutos disueltos es el mismo en ambos. Cuando las células están en una solución isotónica, el movimiento de agua hacia afuera está balanceado con el movimiento de agua hacia adentro. Un 0.9% de solución de NaCl (salina) es isotónica para las células animales. Note que el número de moléculas de agua en ambos lados de la membrana, permaneces esencialmente sin cambios.

lados de la membrana, permaneces esencialmente sin cambios. Solución hipotónica Hipotónico viene del griego

Solución hipotónica

Hipotónico viene del griego "hypo," que significa bajo, y "tonos," que significa dilatarse. En una solución hipotónica, el total de la concentración molar de todas las partículas disueltas, es menos que el de otra solución o menos que el de la célula.

menos que el de otra solución o menos que el de la célula. Si las concentraciones

Si las concentraciones de solutos disueltos son menos fuera de la célula que dentro, la concentración de agua afuera es correspondientemente más grande. Cuando una célula es expuesta a condiciones hipotónicas, hay un movimiento neto de agua hacia dentro de la célula. Las células sin pared celular se inflan y pueden explotar (lisis). Si el exceso de agua no es removido de la célula. Las células con paredes celulares a menudo se benefician de la presión que da rigidez en medios hipotónicos. Note que el número de moléculas de agua dentro de la célula se incrementa con el tiempo, y la célula se hincha como resultado.

célula se incrementa con el tiempo, y la célula se hincha como resultado. Mg. Marco Antonio
célula se incrementa con el tiempo, y la célula se hincha como resultado. Mg. Marco Antonio

Solución hipertónica

Hipertónica viene del griego "hyper," que significa sobre

y "tonos," que significa expandirse. En una solución

hipertónica, la concentración molar total de todas las

partículas de soluto disuelto, es más grande que el de

la

otra solución, o más grande que la concentración de

la

célula.

o más grande que la concentración de la célula. Si las concentraciones de solutos disueltos son

Si las concentraciones de solutos disueltos son mayores fuera de la célula, la concentración de agua es correspondientemente menor. Como resultado, el agua dentro de la célula sale para alcanzar el equilibrio, produciendo un encogimiento de la célula. Al perder agua la célula también pierden su habilidad para funcionar o dividirse. Los medios hipertónicos, como la salmuera o jarabes, han sido utilizados desde la antigüedad para preservar la comida, debido a que los microbios q ue causan la putrefacción, son deshidratados en esos medios hipertónicos y son incapaces de funcionar. Note que el número de moléculas de agua dentro de la célula disminuye con el tiempo, y la célula se encoge como resultado.

I. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Experiencia 1: Permeabilidad celular en epidermis de cebolla

Haga tres preparaciones húmedas de epidermis de cebolla.

En la primera lámina coloque tres gotas de solución salina 0.9% (solución isotónica), en la segunda lámina coloque solución salina 2% (solución hipertónica) y en la última lámina coloque solución salina 0.2% (solución hipotónica).

Marque cada una de las preparaciones.

Cubra las diferentes preparaciones con las laminillas.

Examine al microscopio cada una de las preparaciones con los objetivos de menor y mayor aumento.

cada una de las preparaciones con los objetivos de menor y mayor aumento. Mg. Marco Antonio
cada una de las preparaciones con los objetivos de menor y mayor aumento. Mg. Marco Antonio

Dibuje sus observaciones. Incluya los dibujos con el aumento en donde se note mejor la estructura.

Experiencia 2: Permeabilidad celular en hoja de Elodea

Haga tres preparaciones húmedas de la hojita de Elodea.

Adiciónele tres gotas de solución isotónica a la primera lámina, tres gotas de solución hipertónica a la segunda lámina y finalmente tres gotas de solución hipotónica a la tercera lámina.

Marque cada una de las preparaciones.

Cubra las diferentes preparaciones con laminillas.

Observe con menor y mayor aumento.

Dibuje sus observaciones.

Experiencia 3: Permeabilidad celular en eritrocitos

Haga tres preparaciones colocando una gota de sangre sobre láminas portaobjeto.

Adiciónele tres gotas de solución isotónica a la primera lámina, tres gotas de solución hipertónica a la segunda lámina y finalmente tres gotas de solución hipotónica a la tercera lámina.

Marque cada una de las preparaciones.

Cubra las diferentes preparaciones con laminillas.

Observe con menor y mayor aumento.

Note el cambio que se produce en las células

Dibuje sus observaciones.

el cambio que se produce en las células  Dibuje sus observaciones. Mg. Marco Antonio Mesía
el cambio que se produce en las células  Dibuje sus observaciones. Mg. Marco Antonio Mesía

Plasmólisis en células de cebolla

Plasmólisis en células de cebolla II. CUESTIONARIO Plasmólisis en Elodea Crenación En glóbulos rojos 1. ¿Por

II.

CUESTIONARIO

Plasmólisis en Elodea

células de cebolla II. CUESTIONARIO Plasmólisis en Elodea Crenación En glóbulos rojos 1. ¿Por qué es
Crenación En glóbulos rojos
Crenación
En glóbulos rojos
Plasmólisis en Elodea Crenación En glóbulos rojos 1. ¿Por qué es posible obtener algunas células por

1. ¿Por qué es posible obtener algunas células por simple frotamiento del interior de la mejilla?

2. ¿Qué diferencia existen entre una célula eucariota y una célula procariota?

3. ¿Qué es una célula animal?

4. ¿Con qué finalidad empleamos el Lugol?

5. ¿Qué es una célula vegetal y cuáles son sus componentes?

6. ¿Por qué la pared celular es más fácil de observar que las estructuras de la áreas internas de la célula?

7. ¿Qué estructuras observó en la célula de Elodea?

8. ¿Qué diferencias estructurales existen entre las células del epitelio bucal con las de la cebolla?

9. ¿Qué es la ciclosis?

10. ¿A qué se llama solución hipertónica, hipotónica e isotónica?

11. ¿Qué es el osmómetro y en qué consiste?

12. ¿Qué es y en qué tipo de células actúa la bomba de Sodio / Potasio?

13. ¿Qué mecanismo presentan los peces para vivir, algunos en el agua salada y otros en el agua dulce? Explique.

14. ¿Qué puedes decir sobre la concentración osmótica del citoplasma de las células de la epidermis de cebolla?

15. ¿Se habrían obtenido los mismos resultados si se hubiera empleado un alga marina en el experimento?

mismos resultados si se hubiera empleado un alga marina en el experimento? Mg. Marco Antonio Mesía
mismos resultados si se hubiera empleado un alga marina en el experimento? Mg. Marco Antonio Mesía

PRÁCTICA 10: PLASTIDIOS E INCLUSIONES CITOPLASMÁTICAS

I.

COMPETENCIAS:

Reconoce algunos orgánulos vegetales: cromoplastos y amiloplastos, así como las diferentes inclusiones citoplasmáticas.

II.

MATERIALES

Microscopio óptico

Portaobjetos y cubreobjetos

Soporte para tinciones

Cuchilla o bisturí

Lugol.

Material biológico:

Papa

Tomates

Camote

Pimiento

Yuca

Zanahoria

Semillas de trigo

Penca de tuna

Arroz

Ajos.

III.

FUNDAMENTO TEÓRICO Los vegetales son seres autótrofos fotosintéticos. Gracias a la clorofila son capaces de sintetizar materia orgánica, fundamentalmente glúcidos, a partir de

compuestos inorgánicos como el CO 2 . Los plastos son los principales orgánulos

implicados en dicho proceso.

A. LOS PLASTIDIOS

Son orgánulos exclusivos de vegetales, provistos de una doble membrana y cuya función es almacenar y sintetizar determinadas sustancias.

membrana y cuya función es almacenar y sintetizar determinadas sustancias. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
membrana y cuya función es almacenar y sintetizar determinadas sustancias. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

Pueden ser:

CLOROPLASTOS: Son los plastidios más importantes, dentro de ellos se encuentra la clorofila y por eso los vegetales pueden fotosintetizar.

CROMOPLASTOS: Son plastidios fotosintéticamente inactivos, contiene

pigmentos amarillos, (Xantofilas) anaranjados (Carotenos) y rojos (Licopeno) Son los responsables del color de las flores y frutos. Sirven como indicadores de madurez en función de su concentración además poseen proteínas lípidos y RNA.

LEUCOPLASTOS

Presentes en órganos de reserva. Los encontramos en tubérculos (papa), rizomas

(batata), frutos (banana), y semillas (maíz). Es una fuente de energía.

AMILOPLASTOS

Son leucoplastos especializados en la reserva de almidón

B. INCLUSIONES CITOPLASMÁTICAS:

CRISTALES DE OXALATO DE CALCIO:

La formación de cristales de oxalato de calcio parece jugar un papel centra l en importantes funciones de las plantas, entre las que se incluyen la regulación en los niveles de calcio, la protección contra la herbivoría y la detoxificación de metales pesados. Las morfologías especie-específicas que presentan estos cristales, indican que su formación está altamente regulada. Esta regulación es llevada a cabo por una matriz proteica que se encuentra dentro de la vacuola de células altamente especializadas llamadas idioblastos. Esta matriz controla la forma, orientación y estado de hi dratación de los cristales de oxalato de calcio formados por la planta, dotándolos de características especiales que no comparten con su contraparte inorgánica.

especiales que no comparten con su contraparte inorgánica. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 70
especiales que no comparten con su contraparte inorgánica. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página 70

La mayoría de las plantas producen cristales de oxalato de calcio, los cuales pueden representar más del 85 % del peso seco de algunas de ellas (cactáceas) (1). Los

primeros reportes de estos cristales en las plantas fueron realizados por Leeuwenhoek en el siglo XVII; sin embargo, no se les dio mucha importancia, ya que se les consideró

sólo como productos de desecho. Debido a que presentaban morfologías peculiares y

una compleja fenomenología asociada a su formación, en la década de los años 70 se iniciaron una serie de estudios para demostrar que estos cristales no eran simples

productos de desecho. Cristales de este mineral han sido observados virtualmente en todos los tipos de tejidos

vegetales e igualmente en algunas bacterias, hongos y animales. La formación de

oxalato de calcio es un proceso esencial en la mayoría de las especies de plantas conocidas y en algunos casos cerca del 90 % del calcio total en la planta puede

encontrarse secuestrado en forma de cristales de oxalato de calcio; sin embargo, este porcentaje varía entre las diferentes especies de plantas que presentan este tipo de

cristales. Lo anterior parece indicar que su formación representa el mayor mecanismo de

regulación de los niveles de calcio en la planta. Las plantas producen cristales de oxalato de calcio en una gran variedad de formas y

tamaños, aunque la mayoría de los cristales pueden clasificarse dentro de cuatro tipos principales en base a su morfología: rafidios (cristales aciculares en agregados), drusas

(agregados cristalinos esféricos), estiloides (cristales aciculares) y prismas. (Fig.1).

Generalmente la morfología de los cristales y su distribución dentro de los tejidos de la planta son especie específicos.

El tipo de polimorfo del oxalato de calcio presente en las plantas también es especie- específico y puede ser la whewellita (oxalato de calcio monohidratado) o la weddellita

(oxalato de calcio dihidratado)

CÉLULAS FORMADORAS DE CRISTALES

Los idioblastos son células que están especializadas para la acumulación de Ca2+ en forma de oxalato de calcio cristalino. Estas células crecen muy rápidamente y se

diferencian de todas las demás células vegetales por su gran tamaño.

Los idioblastos jóvenes son células extremadamente activas en relación a la síntesis de proteínas, además poseen una gran cantidad de mitocondrias, aparato de Golgi,

además poseen una gran cantidad de mitocondrias, aparato de Golgi, Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página
además poseen una gran cantidad de mitocondrias, aparato de Golgi, Mg. Marco Antonio Mesía Guevara Página

ribosomas y retículo endoplásmico, organelos asociados con los procesos metabólicos, los cuales proveen la energía para el secuestro del calcio, la síntesis de proteínas, lípidos y polisacáridos y la producción de ácido oxálico. Cuando los idioblastos maduran totalmente (es decir poseen un cristal totalmente formado en su interior) inhiben el flujo de calcio hacia su interior, lo cua l demuestra su capacidad para regular los procesos de transporte de calcio a través de la membrana plasmática. A pesar de que el cristal ocupa casi todo el espacio disponible en los idioblastos, estos permanecen activos, lo cual está relacionado con su hab ilidad para utilizar el calcio cristalino almacenado bajo condiciones de déficit de calcio en la planta.

bajo condiciones de déficit de calcio en la planta. TIPOS DE CRISTALES DE OXALATO CÁLCICO :

TIPOS DE CRISTALES DE OXALATO CÁLCICO:

DRUSAS Cristales de oxalato cálcico con numerosas caras y puntas muy agudas. Tamaño: 5-10 nm de diámetro. Normalmente hay una por célula.

muy agudas. Tamaño: 5-10 nm de diámetro. Normalmente hay una por célula. Mg. Marco Antonio Mesía
muy agudas. Tamaño: 5-10 nm de diámetro. Normalmente hay una por célula. Mg. Marco Antonio Mesía

RAFIDIOS Cristales de oxalatos cálcicos muy largos, finos y afilados que se presentan agrupados y en gran número formando un haz dentro de la célula. Algunos están bajo presión dentro de la célula.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

CROMOPLASTOS.

1. Partir una zanahoria y raspar con la punta del bisturí, depositando el producto obtenido en un portaobjeto.

2. Adicionar una gota de agua y colocar el cubreobjetos.

3. Observar al microscopio a menor y mayor aumento.

4. Esquematice sus observaciones.

5. Repetir con tomate, pimiento.

sus observaciones. 5. Repetir con tomate, pimiento. LEUCOPLASTOS: AMILOPLASTOS. 1. Partir una patata y raspar

LEUCOPLASTOS: AMILOPLASTOS.

5. Repetir con tomate, pimiento. LEUCOPLASTOS: AMILOPLASTOS. 1. Partir una patata y raspar con la punta

1. Partir una patata y raspar con la punta del bisturí, depositando el producto obtenido en dos porta- objetos.

2. A la primera lámina adicionar una gota de agua y colocar la lámina cubreobjetos.

3. A la segunda lámina adicionar una gota de Lugol y colocar la lámina cubreobjetos.

4. Observe al microscopio a menor y mayor aumento.

la lámina cubreobjetos. 4. Observe al microscopio a menor y mayor aumento. Mg. Marco Antonio Mesía
la lámina cubreobjetos. 4. Observe al microscopio a menor y mayor aumento. Mg. Marco Antonio Mesía

5.

Esquematice sus observaciones.

6. Repetir el proceso con camote, yuca y semillas de arroz, trigo.

INCLUSIONES CITOPLASMÁTICAS: CRISTALES

OBSERVACIÓN DE DRUSAS

1. Realizar un corte fino de la aparte interna del tallo de una tuna y extenderla sobre una lámina.

2. Agregar una gota de agua y cubrir con una lámina cubreobjetos.

3. Observar a menor y mayor aumento.

4. Esquematice sus observaciones.

OBSERVACION DE RAFIDIOS

1. Exprimir un trozo de hoja de una planta ornamental que el profesor le proporcionara.

2. Extender sobre un portaobjetos.

3. Cubrir con una lámina cubreobjetos.

4. Observar a menor y mayor aumento.

5. Esquematice sus observaciones.

ANÁLISIS Y CONCLUSIONES.

V.

Esquematice sus observaciones. ANÁLISIS Y CONCLUSIONES. V. Realizar un informe en el que se incluyan las

Realizar un informe en el que se incluyan las figuras

plastos, y cristales analizando las diferencias de los mismos.

de cada uno de los tipos de

CUESTIONARIO:

1- ¿Qué son los cromoplastos y leucoplastos y qué funciones cumplen? 2- ¿Qué importancia tienen los cristales de oxalato de calcio para la planta?

3-

¿Cuál es la razón de utilizar Lugol para el reconocimiento de leucoplastos.

4-

Defina cada una de las inclusiones observadas en la práctica.

4- Defina cada una de las inclusiones observadas en la práctica. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara
4- Defina cada una de las inclusiones observadas en la práctica. Mg. Marco Antonio Mesía Guevara

PRÁCTICA 11: CARIOTIPO

I.

COMPETENCIAS:

Al finalizar esta práctica el alumno:

Reconoce los pares cromosómicos humanos a partir de las placas

metafísicas.

Construye el Cariotipo Humano sobre la base de las características

establecidas.

II.

MATERIALES

Foto de placas matafásicas (Anexo)sobre la base de las características establecidas. II. MATERIALES Lápiz Tijeras Regla Goma III. FUNDAMENTO TEORICO

Lápizestablecidas. II. MATERIALES Foto de placas matafásicas (Anexo) Tijeras Regla Goma III. FUNDAMENTO TEORICO

Tijerasestablecidas. II. MATERIALES Foto de placas matafásicas (Anexo) Lápiz Regla Goma III. FUNDAMENTO TEORICO

Reglaestablecidas. II. MATERIALES Foto de placas matafásicas (Anexo) Lápiz Tijeras Goma III. FUNDAMENTO TEORICO

Gomaestablecidas. II. MATERIALES Foto de placas matafásicas (Anexo) Lápiz Tijeras Regla III. FUNDAMENTO TEORICO

III.

FUNDAMENTO TEORICO

El conjunto de cromosomas de un individuo constituye su cariotipo. En 1956 Tjio y

Levan demostraron que el cariotipo humano está formado por 46 cromosomas, o lo que

es igual, 23 parejas. Para estudiar los cromosomas humanos se cultivan linfocitos y mientras se están dividiendo se tratan con colchicina, que interrumpe las mitosis en

metafase, que es el momento más adecuado para observar los cromosomas. Después

se someten a una solución hipotónica para que se hinchen y dispersen, y por último se tiñen con orceína acética y se fotografían a través del microscopio.

Los cromosomas se diferencian por su tamaño y por su forma; en 1960 un grupo de expertos acordó ordenar los cromosomas humanos de mayor a menor tamaño, y dentro

del mismo tamaño, por la posición del centrómero. Se clasificaron después en 7 grupos designados por letras (desde la A a la G). Un idiograma es la representación

esquemática del tamaño, forma y patrón de bandas de todo el complemento

esquemática del tamaño, forma y patrón de bandas de todo el complemento Mg. Marco Antonio Mesía
esquemática del tamaño, forma y patrón de bandas de todo el complemento Mg. Marco Antonio Mesía

cromosómico, los cromosomas se sitúan alineados por el centrómero, y con el brazo largo siempre hacia abajo.

alineados por el centrómero, y con el brazo largo siempre hacia abajo. Mg. Marco Antonio Mesía
alineados por el centrómero, y con el brazo largo siempre hacia abajo. Mg. Marco Antonio Mesía
alineados por el centrómero, y con el brazo largo siempre hacia abajo. Mg. Marco Antonio Mesía

SÍNDROME

 

TIPO DE

CARACTERÍSTICAS Y SÍNTOMAS DE LA MUTACIÓN

MUTACIÓN

Síndrome de

Trisomía del 21 (tienen 47 cromosomas)

Se caracteriza por retraso mental, ojos oblicuos, trastornos cardiacos, crecimiento retardado, propensión a las infecciones, etc. Es más frecuente en hijos de madres adolescentes o de edades tardías, por anomalías en la meiosis.

Down o

mongolismo

Síndrome de

Trisomía del 18 (tienen 47 cromosomas)

Anomalías en la forma de la cabeza, boca pequeña, mentón huido, lesión cardiaca y membrana interdigital en los pies.

Edwards

Síndrome de

Trisomía del 13 o del 15 (tienen 47 cromosomas)

Labio leporino, lesiones cardiacas, frecuentemente dedos supernumerarios, etc.

Patau

Síndrome de

44

autosomas

Varones de estatura elevada, brazos

Klinefelter

+

XXY

y piernas largos, bajo coeficiente de inteligencia, desarrollo de mamas y esterilidad.

(intersexo

 

masculino)

Síndrome de

44

autosomas

Elevada estatura, personalidad

duplo Y