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Anexo 1.

- Medios de cultivo

Medio Agar Mac Conkey Agar SS2 Agar XLD Agar tergitol 7

Carbohidrato Lactosa Lactosa y extracto de carne Lactosa y sacarosa Lactosa

Indicador Rojo neutro Rojo neutro Rojo de fenol Azul de bromo-timol

Inhibidor Cristal violeta Sales biliares Desoxicolato Heptadecilsulfato

Agar Hektoen

Lactosa, sacarosa y extracto de carne Lactosa y extracto de levadura Lactosa y sacarosa Lactosa y sacarosa

Azul de bromo-timol y fucsina Fucsina Eosina

Sales biliares

Agar Endo Agar EMB

Fucsina Azul de metileno Verde brillante

Agar Verde brillante

Rojo de fenol

Caractersticas Medio de cultivo para microorganismos Gramnegativos, se observa la fomentacin de la lactosa Se observa la formacin de acido sulfhdrico y la fermentacin de la lactosa, medio selectivo para bacterias Gram negativas. Medio selectivo diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de patgenos entricos Gram negativos, especialmente del gnero Shigella Acta inhibiendo la flora secundaria indeseable, inhibe la difusin de swarming de Proteus y favorece una mayor recuperacin de coliformes. Los microorganismos capaces de fermentar la lactosa en el medio producen colonias amarillas debido a la reaccin con el indicador azul de bromotimol y los que no son capaces de fermentarla producen colonias azules El medio de cultivo, permite una buena diferenciacin de las colonias e inhibe el desarrollo de algunos coliformes y otras bacterias no fermentadoras de lactosa, facilitando as la identificacin de Salmonella y Shigella. Medio de cultivo diferencial y ligeramente selectivo utilizado para la deteccin de coliformes y otros microorganismos entricos Es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae . Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp

Anexo2.- Pruebas bioqumicas


Prueba bioqumica Oxidasa Fundamento Se basa en la produccin bacteriana de una enzima oxidasa intracelular. Esta reaccin se debe a un sistema de citocromo oxidasa que activa la oxidacin del citocromo reducido por el oxgeno molecular, el que a su vez acta como un aceptor de electrones en la fase terminal del sistema de transferencia de electrones. La prueba positiva se observa por la oxidacin del reactivo incoloro en pocos segundos formndose un producto colorido. En presencia de tiosulfato en el medio o la degradacin de protenas liberando aminocidos azufrados, algunos microorganismos forman H2S gaseoso por medio de las enzimas tiosulfato reductasa y cistena desulfurilasa. El gas incoloro H2S reacciona con el citrato de amonio frrico para producir un precipitado negro insoluble de sulfuro ferroso metlico. Las enzimas triptofanasas oxidan el triptfano para formar tres metabolitos: indol, metil indol y cido indolactico. Los reactivos de Erhlich o Kovacs contienen DMABA que reacciona con el indol producido formado un compuesto quinnico color violeta, que se observa por la aparicin de un anillo en la superficie del medio. El medio de cultivo tiene consistencia semislida por lo que la movilidad se observa por el crecimiento del microorganismo en todo el tubo, ms all de la zona de inoculacin (picadura). Los microorganismos inmviles solo crecern en la zona inoculada. Fermentacin butilengliclica: en sta, Positiva Coloracin morada o azul Negativa Sin cambio de coloracin

SIM

Formacin de acido precipitado negro. Oxidacin de triptfano, halo rojo-rosado en parte superior del tubo. Movilidad, Crecimiento en todo el tubo

No cidos, sin cambio de color. No oxidacin del triptfano, Halo amarillo o sin cambio de coloracin. No movilidad, no crece en todo el tubo, solo en inoculacin.

RMVP

Halo de color

No hay cambio

Citrato de Simons

Urea

Fermentacin de carbohidratos en base de fenol

MIO

parte del piruvato se metaboliza produciendo cantidades menores de cido lctico, frmico y actico, la mayor parte del piruvato se condensa formando acetilmetilcarbinol, que es reducido a 2,3-butilenglicol, productos que son neutros Un microorganismo que puede utilizar el citrato como nica fuente de carbono tambin utiliza las sales de amonio del medio como nica fuente de nitrgeno. La extraccin de nitrgeno de las sales de amonio producen amoniaco y se alcaliniza el medio La hidrlisis de la urea por la enzima ureasa libera dos molculas de amoniaco que alcaliniza el medio, entonces se vira el indicador de pH, en el caso del rojo de fenol una prueba positiva es color bugambilia Los compuestos de carbono (carbohidratos o polialcoholes) deben ser incorporados, algunos requieren de ser degradados en monmeros y transportados a la clula para posteriormente en condiciones anaerobias ser metabolizados por la va fermentativa. La fermentacin (degradacin) de un compuesto orgnico se observa por la acidez en el medio de cultivo y la formacin de gas capturado en la campana de fermentacin Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina decarboxilasa e indol. La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde ms all de la lnea de inoculacin.

rojo-rosado en la parte superior del tubo

de coloracin en el tubo.

Azul

Verde

Coloracin bugambilia

Coloracin anaranjadaamarilla

Anaranjadaamarilla

Morada

Movilidad: crecimiento en todo el tubo. Coloracin amarilla por la ornitina positiva.

No movilidad: crecimiento solo en inoculacin Sin cambio de coloracin en ornitina negativa.

KIA (Kligler)

La reaccin positiva a la ornitina est dada por un color prpura del medio. Debido a la fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin cida y originando que el indicador de pH prpura de bromocresol vire al amarillo. La presencia de acidez, otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina decarboxilasa, la cual decarboxila la ornitina presente. Por decarboxilacin, se alcaliniza el medio, con el consecuente viraje del indicador hacia el color prpura. El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo En presencia de tiosulfato en el medio o la degradacin de protenas liberando aminocidos azufrados, algunos microorganismos forman H2 S gaseoso por medio de las enzimas tiosulfato reductasa y cistena desulfurilasa. El gas incoloro H2 S se forma en condiciones cidas y reacciona con el citrato de amonio frrico

Rojo despus de agregar reactivos produccin de indol

Sin cambio de coloracin al agregar reactivos, no produce indol.

Amarilla Acido, precipitado negro.

Roja-Anaranjada No acido, sin precipitado