INFORME QUMICA ANALTICA INSTRUMENTAL CARTULA (obligatoria)

TRABAJO PRACTICO: Integrantes del Grupo (Apellidos y Nombres): Fecha de Realizacin: Alumnos que recuperan (Apellidos y Nombres comisin/subcomisin): Ayudantes a cargo del TP:

Validacin de mtodos analticos 1) Rodrguez, Denise 17-Sept Comisin: 06 Subcom: C

1) Pablo y Valeria.

Los informes deben incluir las secciones de objetivos, resultados, conclusiones y anexo de clculos, siguiendo las pautas requeridas en cada Trabajo Prctico en particular.

Calificacin

Condicin

Fecha de Correccin

Docente a cargo de la correccin

Objetivos . Reconocer las diferencias instrumentales y operacionales entre espectroscopia de fluorescencia y espectroscopia UV-Visible 1

. Comparar dos mtodos analticos espectroscpicos (uno oficial y otro del propio laboratorio) en cuanto a su aptitud para el anlisis cuantitativo de un determinado compuesto. Los criterios a tener en cuenta son: precisin, exactitud, sensibilidad, linealidad, selectividad y robustez. .Observar el fenmeno de quenching en una solucin concentrada de fluorescena sdica. Metodologia . Segn gua de trabajos prcticos de Qumica Analtica Instrumental paginas 24 a 32. Resultados A. Espectroscopia UV visible. Seleccin de parmetros operacionales Seleccin de longitud de onda optima. Longitud de onda optima= 485nm Evaluacin de criterios analticos RANGO LINEAL
diferentes.

Tabla 1: Absorbancia de blancos de muestra fortificados con fluorescena a

concentraciones

Soluciones de lectura (g F/ml) 0 0.5 1.25 2.5 5

Absorbancia 0.017 0.061 0.192 0.395 0.761

Grafico 1: Regresin lineal de los resultados de la tabla1.

Coeficiente de regresin lineal: 0.9982 LIMITE DE DETECCIN y CUANTIFICACION

Tabla II: Medidas independientes de Absorbancia del blanco de muestra.

Medida 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 SD Media Blanco Absorbancia 0.016 0.014 0.014 0.014 0.022 0.011 0.015 0.015 0.011 0.014 0.0031 0.0146

LoD

0.0604 g / ml

LoQ

0.2015 g / ml

PRECISIN

Tabla III: Medidas de Absorbancia de la muestra

Muestra 1 2 3 4 5 6 Absorbancia 0.39 0.402 0.406 0.396 0.402 0.407

SD

0.0064

EXACTITUD

Tabla IV: Medidas de Absorbancia de muestra con adicin de estndar.

Muestra Sin Fortificar Fortificado Fortificacion ABS 0.192 0.398 Concentrac in (g/ml) 1.238 2.593 1.250

Recuperacion (%) 108.421053

ESPECIFICIDAD
Absorbancia 0.204 Concentracion(g /ml) 1.32

ROBUSTEZ
Absorbancia 0.277

ENSAYO CUANTITATIVO
Muestra 1 2 3 4 5 6
ME D IA S D

Absorbancia 0.39 0.402 0.406 0.396 0.402 0.407

2 .6 1 g /m l 0 .0 0 6 4

Solucin Estndar: 0.396 Porcentaje del valor declarado en el rotulo: 104%

B. Espectroscopia de Fluorescencia. Seleccin de parmetros operacionales Seleccin de longitud de onda optima. Longitud de onda ptima de excitacin= 485 nm Longitud de onda ptima de emisin = 510 nm Evaluacin de criterios analticos RANGO LINEAL Tabla V: Intensidad de emisin de fluorescena a seis niveles de concentracin
Solucin de lectura 0.00 0.01 0.02 0.03 0.05 0.06 0.08 Intensidad de emisin 0.35 2.28 4.50 6.46 9.56 11.00 13.56

Grfico II: Regresin lineal de los datos de la tabla V

Coeficiente de regresin lineal: 0.9904 LIMITE DE CUANTIFICACION Y DETECCION

LoD LoQ 0.0012 0.0039

PRECISION
Muestra 1 2 Intensidad 6.51 6.66

SD

0.11

EXACTITUD
Concentra cin (g/ml) 0.03 0.04 0.01

Muestra Sin Fortificar Fortificado Fortificacion

PORCENTAJE DE RECUPERACION 100%

ESPECIFICIDAD
Concentracion( g/ml) 0.03

Intensidad 6.24

ROBUSTEZ
Intensidad 6.14

ENSAYO CUANTITATIVO Intensidad Solucin Estndar: 6.51 Fluorescena presente en la muestra: 0.03 g/ml Porcentaje del valor declarado en el rtulo: 100 % Conclusiones En primer lugar, mediante los barridos de emisin y absorcin se determinaron las longitudes de onda ptimas de excitacin y de emisin de la fluorescena que resultaron 485 y 510 nm respectivamente. El lmite de deteccin y cuantificacin en el mtodo de espectrometra de fluorescencia es menor que en el de espectrometra de UV-Visible, siendo 0.06 LoD y 0.204 LoQ en UVVisible, 0.0012 LoD y 0.0039 LoQ en Fluorescencia. Esta gran diferencia en la sensibilidad del mtodo de fluorescencia se puede explicar porque es mejor medir un poco de luz contra ninguna, que evaluar una pequea disminucin en un haz de luz. Si tomamos en cuenta la precisin de ambos mtodos, se podra decir que la espectroscopia de UV-Visible es ms precisa. Sin embargo, en el mtodo de espectroscopia de Fluorescencia se tom

una menor cantidad de muestras, por lo que no estamos en condicin de afirmar cual es la ms precisa. En cuanto a la exactitud, tomando como criterio de aceptacin entre el 98%-102% de recuperacin (con lo cual es equivalente a 2 % de error relativo). Siendo 100% para Fluorescencia y 108% para UV-Visible. Es ms exacto el mtodo de fluorescencia. El mtodo de fluorescencia es ms especfico que el mtodo de UV-Visible. Esto es debido a que existen menos compuestos capaces de fluorescer que especies capaces de absorber luz. Adems, es poco probable que dos compuestos tengan la misma longitud de onda de excitacin y de emisin de fluorescencia. En cambio, en espectroscopia UV hay una gran variedad de compuestos que absorben a la misma longitud de onda. La variacin de la intensidad de emisin de fluorescencia frente a un cambio de pH respecto del estndar fue significativa al igual que UV-Visible. Siendo 0.37 la diferencia de intensidad en fluorescencia y 0.119 la absorbancia en UV-visible. Ambos mtodos no presentan robustez, ya que se ven afectadas las determinaciones por la variacin de pH. El producto cumple con el contenido declarado en el rotulo al 100%, siendo de 100mg de fluorescena por mililitro por el mtodo de Espectroscopia de fluorescencia. Para el mtodo de UV-Visible, tambin se cumple con el contenido declarado siendo 104 %, tomando como criterio de aceptacin (10010) %. Se observo fenmeno de quenching en una muestra concentrada de fluorescena. Es de color naranja cuando se encuentra concentrada pero cuando se produce la dilucin la muestra cambia a un color amarillo verdoso fluorescente. Esto se da por perdida de energa no radiante por colisin entre las molculas debido a la alta concentracin.

Anexo de clculos: Anlisis Cuantitativo: - UV-VISIBLE Muestra: 2,61 g/ml 1ml--------------2,61 g/ml 100ml-----------261 g/ml 5ml--------------261 g/ml 2000ml----------104400 g/ml = 104,4 mg/ml -Fluorescencia Muestra:0,03 g/ml 1ml------------- 0,03 g/ml 100ml-----------3 g/ml 3ml-------------- 3 g/ml 100000ml ------ 100000 g/ml = 100 mg/ml