9/2/2013

IDENTIFICACIN DE CIDOS NUCLEICOS. C

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IDENTIFICACION DE ACIDOS NUCLECOS.

La pentosa (Reaccin de Feulgen) Bases nitrogenadas (Absorcin ultravioleta)

Radical fosfato (Mtodo de Galocianina Cromalumbre, tincin con verde metiloPironina)

cidos Nucleicos.
Son macromolculas. Son polmeros formados por la repeticin de monmeros llamados nucletidos. Los nucletidos estn unidos por enlaces fosfodiester.

Tienen carcter cido.

Su funcin principal es almacenar y transmitir la informacin gentica.

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ADN
Ncleo mitocondrias

ARN
Nuclolo

Citoplasma: ribosomas
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Bases Nitrogenadas.
Son compuestos orgnicos que contiene uno o ms tomos de nitrgeno como lo indica su nombre. Existen cuatro bases nitrogenadas, clasificadas de la siguiente manera: PURINAS: Adenina - Guanina. PIRIMIDINA: Timina - Citosina.

Existe una quinta base nitrogenada, que slo encontramos en ARN: uracilo. Esta reemplaza a la citosina. O sea, en ARN las bases nitrogenadas se clasifican de la siguiente manera:
PURINAS: Adenina - Guanina. PIRIMIDINA: Timina - URACILO.
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PODEMOS IDENTIFICAR EN
Cultivos celulares Frotis de biopsias Centrifugados de punciones
Tejidos fijados

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Reaccin de Feulgen.
Feulgen y Rossenberg, 1921. Est basada en la identificacin de un elemento qumico en la pentosa. La hidrlisis cida moderada separa selectivamente del ADN las bases pricas (adenina y guanina) dando un producto de degradacin polinucleotdico: cido apurnico. La ruptura de este enlace glicosdico hace que aparezcan grupos pseudo aldehdicos en el C-1 de la desoxirribosa. Estos grupos aldehdos reaccionarn con el reactivo de Schiff.
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Hidrlisis cida moderada.

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Factores de los que depende la Hidrlisis.

Este es un paso crtico por lo que hay que tener en cuenta: El tiempo de exposicin a la hidrlisis cida. pH ([ H+]) al que se lleve a cabo la reaccin, Temperatura. Fijador utilizado en el tejido. Grado de compactacin de la cromatina que depende de la naturaleza del tejido.
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Reactivo de Schiff.
pH 1,6-2,0 Si pH entre 0,8 y 1,2 intensidad disminuye. Si pH mayor que 2 intensidad es mayor e inespecfica. Por esto se debe guardar el reactivo en frasco mbar, muy bien tapado y refrigerado.
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El cido sulfuroso, que contiene el dixido de sulfuro, es

preparado en el transcurso de la elaboracin del reactivo de Schiff, tras la reaccin del metabisulfito de sodio con el cido

clorhdrico, el agua. La reaccin con el cido sulfuroso agrega un grupo cido

sulfnico al carbono central de la estructura del trifenilmetano

(fucsina bsica). En este punto, la molcula de fucsina bsica es reducida, destruyendo la estructura cromfora transformndose
en su leucoderivado.
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Laboratoprio Ciencias Biomdicas Universidad de Valaparaso

Fijacin en Bouin

Fijacin en formalina

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Controles.
La efectividad de la R. de Feulgen puede ser chequeada de la siguiente manera: Omitir la hidrlisis cida. Determinar para cada muestra el tiempo de hidrlisis ptimo, es decir aquel que rinde un mximo de coloracin. Extraccin enzimtica de los ac. Nucleicos. Extraccin qumica de los ac. Nucleicos.
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Extraccin Qumica.
TCA 4% a 80C por 15 minutos.(DNA y RNA). Ac. Perclrico, HClO4 10% a 60C minutos (ADN y RNA). Ac. Perclrico, HClO4 10% a 4C toda la noche (RNA). Los reactivos usados para la extraccin qumica son ms baratos pero menos especficos. Estos reactivos deben ser manipulados cautelosamente pues son altamente peligrosos.

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