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LABORATORIO # 5 PROTEINAS Y AMINOCIDOS

PRESENTADO POR: ADRIANA CAROLINA RODRGUEZ ROBIN ALIRIO YAYA EDGAR EDUARDO HIDALGO

PRESENTADO A: RICARDO BENITEZ

UNIVERSIDAD DEL CAUCA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS PROGRAMA DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL POPAYN 2005

OBJETIVO Explorar y analizar las diferentes reacciones presentes en los aminocidos para la determinacin de la presencia de protenas y la reactividad de los grupos R mediante los ensayos de identificacin. PROCEDIMIENTO PREPARACIN DE LAS MUESTRAS

PRUEBA DE BIURET

PRUEBA DE MILLON

PRUEBA DE NINHIDRINA

PRUEBA XANTOPROTEICA

DATOS Y RESULTADOS PRUEBA BIURET DeterminaEnlaces cin peptdico Clara de Violeta huevo (+) Gluten de Rosado trigo -violeta (+) Protena de Violeta soya (+) Urea Azul claro (-) Agua Azul-verde (-) FenilaAzul claro lamina (-) Histidina Azul ( -) Tirosina Amarillo(-) Triptfano Azul-verde (-) Glicina Azul-verde (-) MILLON Grupo hidroxifenilo Amarillo-rojo (+) Rojo ladrillo (-) Amarillo (-) Transparente (-) Transparente (-) Transparente (-) Transparente (-) Rojo - ladrillo Caf (+) Transparente (-) NINHIDRINA Grupo amino y cidos Azul-prpura (+) Prpura claro (+) Prpura (+) Transparente (-) Transparente (-) Transparente (-) Prpura (+) Prpura (+) Prpura (+) Prpura (+) XANTOPROTEICA Anillos bencnicos Anaranjado (+) Rojo ladrillo (+) Rojo-ladrillo (+) Transparente (-) Transparente (-) Transparente (-) Transparente (-) Rojo oscuro (+) Naranja (+) Transparente (-)

ANLISIS Para demostrar la presencia de protenas en una solucin hay una serie de ensayos qumicos, las protenas por sus uniones peptidicas reaccionan con los iones cpricos del reactivo de Biuret, y en medio alcalino forma un color rosa violeta. Esta prueba es positiva para todos los compuestos que contienen 2 o mas enlaces peptdico estableciendo entonces que la fenilalamina, urea, glicina, triptofano y agua utilizada es un dipptido ya que nos dio un color azul oscuro o claro por la presencia de CuS0 4. Pero en cambio para la clara de huevo y la protena de soya observamos por el color violeta obtenido, que la prueba dio positiva. La prueba de Milln especifica para grupos hidroxifenilo como la tirosina, que puede nitrarse fcilmente. Estas protenas que contienen Tirosina actan con el reactivo mencionado produciendo nitroderivados mercuriales de color rojo ladrillo. En el caso de la clara de huevo es un falso positivo ya que este presenta en el fondo unas pequeas manchas rojas (como precipitado) y podemos decir que no contiene este tipo de grupo hidroxifenilo (tirosina).

La prueba Xantoproteica se basa en la reaccin con el anillo benzoico por la presencia de HNO3 a temperaturas altas(esto se nota porque al agregarle el NaOH el tuvo de ensayo se calent-reaccin isotrmica) obteniendo as un precipitado de color amarillo y que se vuelve anaranjado en medio altamente alcalino. Este tipo de prueba fue positivo para la clara de huevo determinndose la presencia o la nitracin del anillo benzoico. La prueba de ninhidrina se da por la reaccin con un alfa aminocido libre, producindose un anion de color prpura intenso. La ninhidrina produce este tinte independientemente de la estructura del aminocido original. La cadena lateral de los aminocidos se pierde en forma de aldehdo. La prueba con la clara de huevo, glicina, protena de soya y el gluten de trigo en esta practica nos dio positiva lo cual indica que hubo este tipo de reaccin.

CAUSAS DE ERROR La medicin inadecuada de las cantidades pedida de los reactivos usados en la prctica. Utilizar el material sin un previo y adecuado lavado y secado, que permite mayor seguridad en la prueba y evita la posible mezcla de los reactivos con sustancias no deseadas presentes en los instrumentos. No tener una apreciacin segura y muy cuidadosa de los colores a obtener en las respectivas soluciones dadas en los resultados.

ANEXOS
1. Cual es la estructura general peptdico. de un aminocido y cual la de un enlace

La estructura primaria de una protena es su secuencia de aminocidos, que se forma al unirse el grupo carboxilo un tomo de carbono (C), dos tomos de oxgeno (O) y un tomo de hidrgeno H) de un aminocido con el grupo amino (NH2) del siguiente aminocido, mediante un enlace peptdico. Cada protena es una cadena larga constituida por muchos aminocidos, y por cada enlace peptdico que se forma se libera una molcula de agua.

2. Dibuje las molculas de los 20 aminocidos ms importantes y ponga un asterisco en el nombre las 10 molculas de aminocidos esenciales

3. Cul de las pruebas realizadas en el laboratorio identifica protenas (grupos peptdico) La prueba de Biuret es positiva para todos los compuestos que tienen dos o ms enlaces peptdicos, dando un color rosado-violeta caracterstico que es mas fuerte cuando ms enlaces peptdicos tenga la muestra. La reaccin no es especifica de modo absoluto para los enlaces peptdicos, pues cualquier compuesto que contenga dos grupos carbonilo unidos por un tomo de nitrgeno o de carbono, da resultado positivo. Los dipptido y los aminocidos (con excepcin de la serrina y leonina) no dan esta reaccin y producen el color azul celeste del sulfato de cobre. Cul prueba determina la presencia de aminocidos libres? La prueba de ninhidrina. En caliente reacciona con alfa-aminocidos libres y con protenas, proteosas, peptonas, y pptidos para dar complejos de color prpura, esta prueba es la mas empleada para la detencin cualitativa de protenas y sus productos de hidrlisis. Cul prueba diferencia la tirosina y el triptofano? La prueba de milln. Es una prueba especifica para grupos hidroxifenilos como la tirosina, que puede nitrarse fcilmente. Las protenas que tienen tirosina, reaccionan con el reactivo, produciendo nitroderivados mercuriales de color rojo-ladrillo. El triptofano da color tierra por el anillo bencnico correspondiente al indol, no por presencia de hidroxifenilos. 4. Clasificacin de los aminocidos Los aminocidos se han clasificados de a cuerdo a la polaridad de sus cadenas laterales. Cules son los aminocidos ionizables y cidos? Aspartato. cido asprtico, uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, que presenta un grupo carboxilo (COOH-) en el extremo de la cadena lateral.

A pH fisiolgico, este grupo funcional tiene una carga negativa, por lo que a menudo el cido asprtico tambin se denomina aspartato. Pertenece al grupo de aminocidos con cadenas laterales polares cargadas. Participa como promedio en un 5,5% (en relacin con todos los aminocidos) de la constitucin de las protenas. Puede ser sintetizado por el organismo humano, por lo que no es necesario ingerirlo con los alimentos. Glutamato. El glutamato es un aminocido presente en todos los alimentos que contienen protenas. Este aminocido es uno de los componentes ms abundantes e importantes de las protenas. El glutamato se produce naturalmente en los alimentos que contienen protenas tales como el queso, la leche, los hongos, la carne, el pescado y muchas verduras. El cuerpo humano tambin produce glutamato y es un elemento vital para el metabolismo y para el funcionamiento del cerebro. Qu es el glutamato monosdico? El glutamato monosdico o GMS es la sal sdica del glutamato. Se incorpora GMS a los alimentos para lograr que stos tengan un sabor similar al que el glutamato produce naturalmente en otros alimentos. EL GMS es agua, sodio y glutamato. Por qu se usa el GMS? El GMS sirve para resaltar el sabor de los alimentos y se utiliza efectivamente para que los alimentos sepan mejor, y para resaltar los sabores naturales. Muchos investigadores creen que el GMS imparte a los alimentos un quinto sabor, independiente de los cuatro sabores bsicos: dulce, cido, salado y amargo. Cules ionizables bsicos? Histidina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas. Posee como cadena lateral un anillo de imidazol, una molcula formada por tres tomos de carbono, tres de hidrgeno y dos de nitrgeno.

Pertenece al grupo de aminocidos con cadenas laterales polares con carga, y es el nico aminocido que puede cambiar el signo de su carga en el intervalo de pH fisiolgico. Por eso, la histidina aparece con mucha frecuencia en el centro activo de las enzimas, donde acta por ejemplo como catalizador cido-base. Participa como

promedio en un 2,1% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. Su biosntesis parte de etapas intermedias de la sntesis de nucletidos. No puede ser sintetizada por los mamferos, por lo que es uno de los aminocidos esenciales. Su abreviatura es His. Lisina, uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, que tiene como cadena lateral un grupo aminobutilo no ramificado.

A pH fisiolgico, el tomo de nitrgeno de esa cadena lateral est cargado positivamente. Pertenece al grupo de aminocidos con cadenas laterales polares con carga positiva, y participa como promedio en un 7% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. El precursor para su biosntesis es el cido asprtico. No puede ser sintetizado por los mamferos, por lo que es uno de los aminocidos esenciales. Su abreviatura es Lis. Arginina, uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, con un grupo guanidino ((NH2)9C(NH2)(NH)-) en el extremo de la cadena lateral que est cargado positivamente a pH neutro; es decir, pertenece al grupo de aminocidos con carga positiva.Es junto a la lisina, el aminocido con la cadena lateral ms larga, y es fuertemente hidrfilo. Este aminocido participa en un 4,7% (con respecto a todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. La arginina, formada en el ciclo de la urea, se transforma en el precursor de este compuesto. Este aminocido debe ser completado por el aporte en la alimentacin, por lo que la arginina es uno de los aminocidos esenciales para el ser humano. Su abreviatura es Arg. Cuales los no ionizables polares? Glicina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas. Es el aminocido ms simple, con un tomo de hidrgeno como cadena lateral. Pertenece a los aminocidos no polares, y a diferencia de todos los dems aminocidos su carbono a (tomo al que se encuentra unido el grupo carboxilo y el grupo amino) no es asimtrico. Participa como promedio en un 7,9% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas, y puede ser sintetizado por el organismo humano. Su abreviatura es Gly. Serina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas. Es, junto a la treonina, el nico aminocido con una cadena lateral hidroxilada. Pertenece al grupo de aminocidos con cadenas laterales polares sin carga, y se encuentra a menudo en los centros activos de las enzimas, por ejemplo en los de muchas enzimas digestivas. Participa como promedio en un 7,1% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. Puede ser sintetizado por el organismo humano. Es el aminocido precursor de la glicina y de la esfingosina. Su abreviatura es Ser. Treonina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, que al igual que la serina tiene una cadena lateral hidroxilada (CH3-CHOH-). Pertenece por tanto al grupo de aminocidos con cadenas laterales polares sin carga, y se encuentra con

frecuencia en los centros activos de las enzimas. El precursor para su biosntesis es el cido asprtico. Su abreviatura es Thr. Cisteina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, con un tomo de azufre en la cadena lateral: este grupo tiol (SH-) es extremadamente reactivo. Forma parte del grupo de aminocidos con grupos polares sin carga. Desempea un papel muy importante en la estructura espacial de las protenas por la formacin de puentes disulfuro entre dos radicales de cistena dentro de una misma protena o en protenas diferentes. Participa como promedio en un 2,8% (con relacin a todos los aminocidos) de la constitucin de las protenas, y puede ser sintetizado por el organismo humano. Su abreviatura es Cys. Asparagina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, con un grupo amido (NH2-CO-) en el extremo de su cadena lateral. Pertenece al grupo de aminocidos con cadenas laterales polares sin carga. Es qumicamente muy similar a la glutamina, diferencindose slo en que la cadena lateral tiene un tomo de carbono menos. Puede ser sintetizado por el organismo humano, siendo el precursor para su biosntesis el cido asprtico. Su abreviatura es Asn. Glutamina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, con un grupo amido al final de la cadena lateral. Con ello, la glutamina pertenece al grupo de aminocidos con cadenas laterales polares sin carga. La biosntesis tiene lugar a travs del cido glutmico. Acta como fuente y reserva de nitrgeno en muchas reacciones metablicas. Por ello, el control central del metabolismo de nitrgeno se ejerce a travs de la formacin de glutamina. Su abreviatura es Gln. Tirosina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas. La cadena lateral de la tirosina contiene un anillo de hidroxifenilo (HO-C6H4-CH2-). Pertenece al grupo de aminocidos con grupos polares sin carga. Participa como promedio en un 3,5% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. Los mamferos pueden sintetizar la tirosina, a partir de la fenilalanina, un aminocido esencial que debe obtenerse a travs de la alimentacin. Su abreviatura es Tyr. Cuales los no polares o hidrofobicos? Alanina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, con un grupo metilo como cadena lateral. Forma parte del grupo de aminocidos con grupos no polares (hidrfobos), y como promedio participa en un 9% de la composicin de las protenas. Puede ser sintetizado por el organismo humano. Su abreviatura es Ala. Valina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, que tiene como cadena lateral una cadena ramificada de hidrocarburos con tres tomos de carbono, el llamado grupo isopropilo ((CH3)2CH-). Pertenece por tanto al grupo de aminocidos con cadenas laterales no polares. Participa como promedio en un 6,9% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. La valina no puede ser sintetizada por los mamferos, por lo que constituye uno de los aminocidos esenciales que deben obtenerse a partir de la dieta. Su abreviatura es Val. Leucina, uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, que tiene como cadena lateral una cadena de hidrocarburos ramificada formada por cuatro tomos de carbono. Pertenece al grupo de aminocidos con cadenas laterales no polares

(hidrfobos), y participa como promedio en un 7,5% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. La leucina no puede ser sintetizada por los mamferos, por lo que es uno de los aminocidos esenciales. Su abreviatura es Leu. Prolina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas. Es, en sentido estricto, un iminocido. La cadena lateral de la prolina est unida tanto al tomo de carbono adyacente al grupo carboxilo como al tomo de nitrgeno. Esto da lugar a una molcula anular, que hace que la prolina tenga una conformacin relativamente rgida. Forma parte del grupo de aminocidos con grupos no polares (hidrfobos). Participa como promedio en un 4,6% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. Puede ser sintetizada por el organismo humano, por lo que no es imprescindible su presencia en la dieta. Su abreviatura es Pro. Isoleucina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, con una cadena ramificada de hidrocarburos con cuatro tomos de carbono como grupo lateral. Pertenece por tanto al grupo de aminocidos con cadenas laterales no polares (hidrfobos), y participa como promedio en un 4,6% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. No puede ser sintetizada por los mamferos, por lo que es uno de los aminocidos esenciales. Su abreviatura es Iso. Fenilalanina , uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas. La cadena lateral de la fenilalanina contiene un anillo aromtico de fenilo: Forma parte del grupo de aminocidos con grupos no polares (hidrfobos). Este aminocido participa como promedio en un 3,5% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. No puede ser sintetizado por los mamferos, por lo que constituye uno de los aminocidos esenciales. Su abreviatura es Phe. Triptofano uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas, que contiene como cadena lateral un grupo indol (C8H5NH). Pertenece al grupo de aminocidos con grupos no polares o hidrfobos. Participa como promedio en un 1,1% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. Los mamferos no pueden sintetizar el triptfano, por lo que figura entre los aminocidos esenciales. En el metabolismo, el triptfano es importante entre otras cosas para la formacin de la amida del cido nicotnico (tambin denominada nicotinamida o vitamina B3).

La carencia de triptfano en la dieta provoca una enfermedad conocida como pelagra. Su abreviatura es Trp. Metionina uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas. La cadena lateral de la metionina contiene un grupo tioter, un grupo funcional con un tomo de azufre. Esto significa que el grupo metilo del extremo puede cederse ms fcilmente, por lo que la metionina acta a menudo como donante de grupo metilo en reacciones de transmetilacin. La metionina no puede ser sintetizada por los mamferos, por lo que figura entre los aminocidos esenciales. Su abreviatura es Met.

5. Que significa que un aminocido sea ionizable o no ionizable? Algunas de las cadenas son polares o ionizadas a pH neutro y por consiguiente son hidrofilicas, en tanto que otras son no polares y por ello son hidrofobias. Debido a que los aminocidos individuales iones dipolo, son solubles en agua. Sin embargo, es indispensable considerar que cuando los aminocidos se combinan por polimerizacin forman pptidos y protenas, las cargas inicas sobre los grupos amino y carboxilo que forman los enlaces se han perdido. Como resultado, las caractersticas inicas, las polares o no polares de las cadenas laterales son las que influyen en gran medida a nivel general en la forma tridimensional, o la conformacin de una protena. 6. Cul es el nico aminocido que no tiene un grupo amino libre y se llama iminoacido? Prolina, uno de los 20 aminocidos constituyentes de las protenas. Es, en sentido estricto, un iminocido. La cadena lateral de la prolina est unida tanto al tomo de carbono adyacente al grupo carboxilo como al tomo de nitrgeno. Esto da lugar a una molcula anular, que hace que la prolina tenga una conformacin relativamente rgida:

Forma parte del grupo de aminocidos con grupos no polares (hidrfobos). 7. Compare las estructuras cuaternarias de las hemoglobina y la clorofila? Clorofila. La molcula de clorofila es grande y est formada en su mayor parte por carbono e hidrgeno; ocupa el centro de la molcula un nico tomo de magnesio rodeado por un grupo de tomos que contienen nitrgeno y se llama anillo de porfirinas[Porfirinas, sustancias qumicas de vital importancia, sintetizadas por casi todos los organismos vivos y necesarias para la respiracin celular. La estructura molecular fundamental de las porfirinas consiste en un esqueleto cclico de cuatro anillos unidos entre s, o compuesto tetrapirrlico. Cada anillo tipo pirrol est formado por cuatro tomos de carbono y uno de nitrgeno. Los diferentes tipos de porfirinas se distinguen por los tomos que se unen al esqueleto cclico y por los metales que ocupan la posicin central. El componente mayoritario de la hemoglobina es el grupo hemo, que es una ferroporfirina. La clorofila, que es la sustancia responsable del color verde de las plantas, es un derivado de una porfirina con magnesio..]. La estructura recuerda a la del componente activo de la hemoglobina de la sangre . De este ncleo central parte una larga cadena de tomos de carbono e hidrgeno que une la molcula de clorofila a la membrana interna del cloroplasto, el orgnulo celular donde tiene lugar la fotosntesis. Cuando la molcula de clorofila absorbe un fotn, sus electrones se excitan y saltan a un nivel de energa superior esto inicia en el cloroplasto una compleja serie de reacciones que dan lugar al almacenamiento de energa en forma de enlaces qumicos. Hemoglobina. Hemoglobina, pigmento especial que predomina en la sangre cuya funcin es el transporte de oxgeno. Est presente en todos los animales, excepto en algunos grupos de animales inferiores. Participa en el proceso por el que la sangre

lleva los nutrientes necesarios hasta las clulas del organismo y conduce sus productos de desecho hasta los rganos excretores. Tambin transporta el oxgeno desde los pulmones o branquias, donde la sangre lo capta, hasta los tejidos del cuerpo. Despus de liberar esta molcula en los tejidos orgnicos, invierte su funcin y recoge el principal producto de la respiracin celular o dixido de carbono. La hemoglobina transporta esta molcula hasta los pulmones para su espiracin. La hemoglobina es una protena contenida en los eritrocitos que constituye, aproximadamente, el 35% de su peso. Para combinarse con el oxgeno, los eritrocitos deben contenerla en cantidad suficiente y esto depende de los niveles de hierro que existan en el organismo, los cuales se obtienen de los alimentos por absorcin en el tracto gastrointestinal y se conservan y reutilizan de forma continua. La deficiencia de hemoglobina originada por la carencia de hierro conduce a la anemia.

8. Pierde valor nutricional una protena cuando se expone a calor excesivo? El calentamiento excesivo de una solucin con protena causa un incremento en la energa de vibracin y rotacin que puede rebasar el delicado equilibrio de interacciones dbiles que estabilizan la conformacin plegada, funcional. Determinados factores mecnicos (agitacin), fsicos (aumento de temperatura) o qumicos (presencia en el medio de alcohol, acetona, urea, detergentes o valores extremos de pH) pueden causar la inactivacion irreversible por medio de cambios covalentes, mejor dicho provocan la desnaturalizacin de la protena, es decir, la prdida de su estructura tridimensional; Las protenas se despliegan y pierden su actividad biolgica. 9. Qu son las poliamidas y como se clasifican? Polmero sinttico, formado por productos de condensacin que contienen grupos amidas. Las protenas y los pptidos estn formados por amidas. Un ejemplo de poliamida de cadena larga es el nailon 10. Cules son los dos grupos de alimentos vegetales ms ricos en protenas? Los cereales. Los cereales son las semillas de ciertas gramneas y en conjunto constituyen el producto alimenticio ms importante del mundo. Cocinados o molidos y transformados en harinas, aceites y otras sustancias, son excelente fuente de energa para el hombre y el ganado. La cerveza y otras bebidas alcohlicas se elaboran con cereales fermentados. Las legumbres, principal fuente de protenas vegetales, que se utilizan como alimento, por ejemplo el guisante (chcharo), la juda (frjol) o el man; otras que son productoras de aceite, como la soja (soya); algunas de inters forrajero como el trbol y la alfalfa. Protena de soja, una de las fuentes ms econmicas y tiles de protena en el mundo. Como todas las legumbres (judas frijoles o porotos, garbanzos, guisantes chcharos y lentejas). Contiene protena de alta calidad y es, por lo tanto, de gran valor para la dieta vegetariana.

CONCLUSIONES La muestra de clara de huevo contiene una gran cantidad de tirosina en sus protenas, por lo tanto al adicionar NaOH la solucin se fija de un color rojo ladrillo. Se pueden observar mediante las pruebas de laboratorio la existencia de diferentes aminocidos como la fenilalanina y los aminocidos de las protenas presentes en la clara de huevo. En la prueba de Milln ocurri una desnaturalizacin de las protenas de la clara del huevo debido a que la actividad biolgica de la mayor parte de las protenas fueron destruidas por la exposicin al calor formando un coagulo de clara de huevo y haciendo que esta desnaturalizacin sea irreversible por exceso de temperatura. En la prueba de Biuret para el aminocido Fenilalanina el resultado obtenido es negativo, debido a que este compuesto no tiene ms de dos enlaces peptdicos y los grupos carbonilo no estn unidos por un tomo de nitrgeno o carbono.

BIBLIOGRAFIA
Bioqumica. Casos y texto. Rex Montgomery. Sexta edicin. Madrid. Espaa.1998. Harcourt Brace. H. ROBERT HORTON. Bioqumica. Prentice Hall. Mxico. Seccin 9 9.38 RODNEY BOYER. Thomson Editores Conceptos en Bioqumica. Internacional