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Universidad Rafael Landvar

Facultad de Ingeniera
Ingeniera Qumica
Laboratorio de Bioqumica
Lic. Lucia Escobar
















REPORTE PRCTICA NO. 2:
AISLAMIENTO DE CASENA DE LECHE

















Zucely Castillo Monterroso
Carn 1022507
Interciclo 2012


Guatemala, 18 de Junio de 2012
1. SUMARIO


La casena es una protena de tipo globular presente en la leche y constituye el
aproximadamente el 80% del total de la protenas contenidas en la leche. El
objetivo de la prctica de laboratorio fue el aislamiento de la casena de leche
entera de vaca marca Dos Pinos, a partir de la acidificacin de la misma hasta el
punto de equivalencia de la casena (pH=4.6), utilizando una solucin de cido
actico al 10%.

La casena aislada fue separada del medio acuoso por medio de filtracin al vaco;
y fueron realizados dos lavados del slido extrado utilizando etanol y ter. El
lavado con etanol se realiz con la finalidad de eliminar residuos de carbohidratos,
dado a que ste forma puentes de hidrgeno con los grupos OH de los azcares;
mientras que el ter fue utilizada para eliminar residuos de cidos grasos debido a
su solubilidad en solventes orgnicos de baja polaridad.

El rendimiento prctico de la extraccin fue de 0.35g de casena con un porcentaje
de rendimiento de 53.84%; teniendo en cuenta que la composicin promedio de
casena en la leche es de 26g/L y la muestra de leche fue de 25 ml.



2. OBJETIVOS

- Separar casena de leche fluida de vaca por medio de floculacin utilizando
solucin de cido actico al 10% como agente floculante.

- Aislar la casena extrada por medio de centrifugacin y posteriormente
filtracin al vaco.



3. DATOS OBTENIDOS


Tabla 3.1: Mediciones realizadas durante la prctica

VARIABLE DE MEDICIN VALOR OBTENIDO
Volumen de leche entera de vaca Dos
Pinos
25 ml 0.5 ml
Temperatura de calentamiento de la leche 40C 0.5 C
pH de precipitacin de la casena 5
Volumen de etanol 10 ml 0.5 ml
Volumen de ter 10 ml 0.5 ml
Masa beacker 30 ml 28.7 g 0.005 g
Masa de beacker y muestra 29.05 g 0.005 g


4. CLCULOS


- Clculo de Rendimiento terico

Volumen de leche utilizado: 25 ml

Composicin de casena en la leche: 26 g/l

( )
26 1
_ 25 0.65
1000
g L
masa terica ml g
L ml
| |
= =
|
\ .



- Clculo de rendimiento prctico






- Clculo de rendimiento

( ) ( )
. 0.35
% dim 100 100 53.84%
. 0.65
r prctico
ren iento
r terico
= = =





5. RESULTADOS Y OBSERVACIONES


Tabla 5.1: Clculo de rendimiento terico, prctico y % de rendimiento


CLCULO RESULTADO
Rendimiento terico 0.65 g
Rendimiento prctico 0.35 g
% de Rendimiento 53.84 %
Tabla 5.2: Observaciones realizadas durante la prctica


DESCRIPCIN OBSERVACIN
Aspecto leche de vaca dos pinos Lquido blanquecino
Acidificacin de leche a pH 5 Se observ la formacin de grumos color
blanco en la superficie de la leche
Filtracin al vaco Se obtuvo un precipitado color blanco
Lavado con etanol y ter El precipitado permaneci inalterado, el
filtrado fue una solucin incolora.




6. DISCUSIN DE RESULTADOS


La casena es la protena ms importante de la leche por componer el 80% del
total de protenas presentes en la leche; es una fosfoprotena globular compuesta
en su mayora por serina y treonina, aminocidos polares, los cuales al pH 6.8 de
la leche se encuentran disueltos en la leche.

En la prctica de laboratorio la casena fue aislada de la leche por medio de la
desnaturalizacin cida de dicha protena; ya que segn Trudy Mckee (2009) la
desnaturalizacin de las protenas se ve promovida por: cidos y bases fuertes,
solventes orgnicos, detergentes, agentes reductores, concentraciones salinas y
la presencia de iones metlicos pesados como el plomo.

En el laboratorio fue utilizada una solucin de cido actico al 10% para disminuir
el pH de la leche de 6.8 a 5, promoviendo as la desnaturalizacin de la protena
por la protonacin de los grupos ionizables (NH
3
+
y COO
-
) de serina y treonina
presentes en la casena; lo cual altera los enlaces de hidrgeno y los puentes
salinos, haciendo a la casena insoluble cerca de su punto isoelctrico de 4.6.

Para separar la casena aislada del sobrenadante fue realizada una filtracin al
vaco. El slido obtenido fue tratado con 10 ml de etanol, con la finalidad de
eliminar residuos de carbohidratos; ya que stos presentan una afinidad con
solventes alcohlicos ya que pueden formar puentes de hidrgeno entre los
grupos OH del alcohol y el OH de las molculas de carbohidratos.
Para eliminar los residuos lpidos fue utilizado ter como solvente, dado que los
lpidos son molculas formadas por cidos monocarboxlicos de cadena larga
insolubles en medios acuosos pero solubles en solventes de baja polaridad como
el ter.

Tericamente la composicin promedio de casena por litro (1000ml) de leche es
de 26 g; por lo que utilizando una muestra de 25ml de leche el rendimiento terico
de la extraccin deba ser de 0.65g de casena si sta precipitaba por completo. El
rendimiento prctico de la extraccin fue de 0.35g con un 53.84% de rendimiento.
Los que posiblemente tuvieron una mayor influencia en el rendimiento obtenido
fueron:

- Medicin de pH: Durante la prctica se utiliz papel pH para determinar el
pH de la leche durante la acidificacin de la leche; con lo cual se maneja un
menor ndice de incerteza durante la medicin. Por otra parte la
acidificacin fue concluida a pH=5, por lo cual es probable que no toda la
casena haya precipitado por no llegar al valor del punto isoelctrico (4.6)
en donde se da la precipitacin mxima.

- Tamao de partcula: El precipitado obtenido fue de tamao de partcula
pequeo, por lo cual parte de ste pudo haber pasado a travs del papel
filtro.



7. CONCLUSIONES


- Fue posible aislar la casena de una muestra comercial de leche de vaca
entera marca Dos Pinos.

- Fueron obtenidos 0.35 g de casena con un porcentaje de rendimiento de
53.84% respecto a los 0.65g tericos calculado, teniendo en cuenta que la
composicin de casena en un litro de leche es de 26g.

- Los factores ms influyentes en el rendimiento de la extraccin fueron la
medicin de pH durante la prctica y el tamao de partcula. Dado que la
acidificacin no fue llevada hasta el punto isoelctrico de la casena; existe
la probabilidad de que sta no haya precipitado por completo.




8. PREGUNTAS POSTLABORATORIO


- Indique el tipo de leche utilizada en el experimento

El tipo de leche utilizada fue leche entera de vaca marca Dos Pinos.




- Determine la concentracin en g/l de la casena

Tericamente la concentracin promedio de casena en la leche es de 26g por
litro.


- Determine el rendimiento de la extraccin en (%)


( ) ( )
. 0.35
% dim 100 100 53.84%
. 0.65
r prctico
ren iento
r terico
= = =





9. BIBLIOGRAFA


- Mckee (2009) Bioqumica, Las Bases Moleculares para la Vida (4. Ed.).
Mxico, Mc Graw Hill

- Yurkanis (2008) Qumica Orgnica (2
o
. Ed). Mxico: Pearson.