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TOMA DE MUESTRA Indicaciones generales En el momento de extraer la muestra se despliega con cuidado la sobretapa de ppel junto con la tapa

y una vez tomada la muestra se tapa hermticamente; por ninguna razon debera permitir que la tapa se apoye o este en contacto con objeto alguno. Las muestras se rotulan o se anotan en la tarjeta de control inmediato, indicando los siguientes datos: 4.2.1. Tcnicas de muestreo 4.2.1.1 En un grifo o caeria de agua corriente Antes de extraer la muestra, se limpiara la parte externa e interna del grifo, dejando luego salir un chorro fuerte de agua durante 2-3 minutos para eliminar las impurezas acumuladas y el agua almacenada en el interior del ramal y finalmente se tomara la muestra. Una vez obtenida la muestra, se tapa el frasco y se asegura la sobretapa. 4.2.1.1 En un grifo o caeria de agua corriente Si el pozo funciona con omba accionada a mano se hara salir el agua durante 5 minutos antes de tomar la muestra, se obtendra la muestra con cuidado dejando caer directamente el agua al frasco. Si el pozo esta funcionando con bomba motor se tomara antes que el agua llegue al tanque o a la cisterna. Tratandose de un pozo de uso continuo bastara dejar correr agua durante 3 minutos antes de proceder a la obtencin de las muestras, pero si en cambio se utiliza poco o esta fuera de servicio es prudente dejar salir agua mas de media hora a fin de eliminar la que esta almacenada en el conducto de aspiracion, y luego proceder a la obtencin de la muestra. 4.2.1.3 Si la muestra se obtiene de rios, arroyos, vertientes, lagos, estanques y piscinas Se procede de la siguiente forma, despus de destapar el frasco con las precauciones indicadas se le sostiene con una pinza de brazos largos, o las manos bien lavadas o un cordel que sujete del cuello al frasco y se le sumerge rpidamente a 1520cm de profundidad aproximadamente debajo de la superficie del agua; dirigiendo la boca del frasco en sentido contrario al de la corriente natural como ocurre en los estanques, lagos y reservorios, se imprime al frasco un movimiento semicircular y una vez lleno se le levantara de inmediato y se coloca la tapa, asegurando la tapa con la sobretapa de papel y el cordelillo. 4.3.- ENVIO DE LAS MUESTRAS

Siendo una de las condiciones indispensables para obtener resultyados microbiologicos confiables, que la muestra sea examinada a la brevedad posible, debe cumplir con los siguientes requisitos, si no es posible examinarla de inmediato como ocurre cuando el laboratorio esta distante al punto de muestreo, se mantendra esta a baja temperatura a 6C en cajones apropiados para su transporte. Silas muestras son enviadas de lejos, la muestra debe ser tomada en el frasco esterilizado y enviado en una ajita de madera u otro material resistente que permita mantener temperaturas inferiores a 10 C u otro material resistente que permita mantener temperanturas inferiores a 10 C y convencionlmente acondicionada para evitar la ruptura de frascos. Finalmente una vez llegada la muestra al laboratorio se procede a su respectivo analisis. 5.0 TRABAJO DE LABORATORIO 5.1 EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO El material que a continuacin se indica es el indispensable par aun laboratorio de microbiologa de aguas a realizar el: recuento de colonias, coliformes totales, coliformes fecales, las operaciones que se debe seguir en un laboratorio son las siguientes: Equipo y materiales para preparacin de los medios de cultivo. Balanza analtica de 500 gramos de capacidad, sensible al centigramo. Probetas graduadas de 1,000m, 500ml y 250ml de capacidad. Matraces de 2,000ml, 1,000ml y 500ml de capacidad. Pipetas de 10 ml y de 1ml. Medios de cultivo para: AGUA Caldo Lauril Sufato Simple concentracin Caldo Lauril Sufato Doble concentracin Caldo Lactosado Verde Brillante Bilis Caldo EC Caldo A-1 Simple concentracin Caldo A-1 Doble concentracin ALIMENTOS Agua Peptonada al 0.1% Agua Peptonada Tamponada Caldo Selenito Cistina Caldo Tetrationato Caldo Rappaport Agar Verde Brillante(VB) Agar Bismuto Sulfito (BS) Agar Salmonella-Shiguella (SS) Agar (XLD) Caldo Lauril Sufato Simple concentracin Caldo Lactosado Verde Brillante Bilis

Caldo EC Agar Tripticasa de Soya (TSA) Agar Baird-Parker Agar Plate COUNT Agar bilis lactosa glucosa rojo neutro cristal violeta (ABLGRNCV) Agar Oxitetraciclina gentamicina extracto de levadura glucosa. (OGY) Agar yema de huevo polimixina rojo fenol (MYP) Agar EMB ( agar-eaosina-azul de metileno-lactosa-sacarosa) Agar TSI (agar tres azucares) Agar LIA (agar lisina hierro) Agar citrato Caldo triptona (Reaccin al Indol), entre los mas principales.

5.1.3 Equipos y materiales para el analisis microbiologico de las aguas Incubadora de bao de agua(Bao Maria). Se utiliza para el anlisis de coliformes fecales y salmonella, debe mantener una temperatura de 44.5C 0.2C Equipo de filtracin.- Pueden ser de vidrio o de acero quirurgico, se utiliza para filtrar las muestras de agua, de una capacidad de 120ml que consta de las siguientes partes : Embudo de filtracin, portafiltros y vaso receptor. Incubadora de aire caliente Los microorganismos (germenes) para vivir y reproducirse requieren una temperatura adecuada, la temperatura adecuada es de 35C 0.2C Instrumentos y materiales para la siembra Asas de platino nicron nmero 22-24, con sus respectivas porta-asas Mechero BUNSEN Encendedor de bencina o fsforos. Frascos de vidrio para la toma de muestras con tapa rosca y boca ancha. Frascos para las diluciones Pipetas de 10 y 1 ml. Se esterilizan envolvindolas en papel kraft de preferencia, previo taponamiento de la boquilla con algodn. Perillas de goma para evitar una posible contaminacin con muestras problema. Placas petri para la siembra y conteo de colonias, no debe presentar sopladuras ni rayaduras ni fracturas. Gradilla para tubos de ensayo, de acero y de plstico Tubos con agua dilucin. Tubos de ensayo, Su tamao depende del medio de cultivo que debe contener y de la muestra a sembrar. Tubos Durhan.- Son los tubos de fermentacin que van dentro de los tubos con medio de cultivo.

5.2 TECNICAS MICROBIOLOGICAS Preparacin del material Los anlisis microbiolgicos de la muestra exigen el uso del material de vidrio, medios de cultivo limpios y estriles (sin microbios) para la cual debern seguir los siguientes pasos.

5.2.1 Lavado de Materiales Lavado de Materiales El material sucio debe dejarse remojando en agua con detergente, esto se da tambin en el material que contienen muestras negativas, pero si el material a lavar contiene muestras positivas se procede de dos formas, se autoclava dicho material , despus de autoclavar procedemos a remojar el material, en agua con detergente ello se remoja y se procede a efectuar el lavado manualmente y de la otra forma es dejar remojando el material en agua con detergente y leja hasta que quede limpio, para el enjuague usamos agua potable y el agua destilada con el fin de limpiar cualquier residuo qumico. Esterilizacin por vapor a presin Se realiza en una autoclave y se utiliza para esterilizar ciertos materiales de laboratorio como por ejemplo los frascos de vidrio con tapas de material de plstico, tubos que tienen tapas de plstico, estos materiales son esterilizadas a una temperatura de 121C, a una presin de 1.0 bar y por un tiempo de 15min. La esterilizacin por vapor a presin se utiliza tambin para esterilizar los medios de cultivo que se preparan en el laboratorio. Esterilizacin por calor seco Se realiza en una estufa y se usa para esterilizar materiales de vidrio y de metal, dichos materiales se colocan en estuches de papel kraft, para que mantengan su esterilidad durante su almacenamiento; se esteriliza a una temperatura de 170C por 2:30 horas. METODOLOGIA Toma de muestras Agua de Mar en playas Utilizar frascos esterilizados de vidrio, proporcionado por el laboratorio, mantener cerrado hasta que se vaya a utilizar. El frasco debe sostenerse cerca de la base con la mano, para sumergirla boca abajo. Girar la botella hasta que el cuello apunte hacia arriba con la boca hacia la corriente. La muestra debe tomarse en la linea de playa aproximadamente 2 a 6mt. Medir la temperatura del mar y del ambiente. El volumen de la muestra debe ser suficiente para realizar todos los anlisis necesarios, no debe ser menor de 200ml. Tape inmediatamente el frasco y coloque el capuchn de papel. Poner con claridad todos los datos solicitados del punto de muestreo.

Enviar la muestra sin retraso al laboratorio. Hasta 6 horas con refrigeracin bajo de 10C Acompaar con la cadena de custodia. Identificacin de la muestra - Nro de Muestra - Origen de la fuente - Punto de muestreo Nombre de la playa - Distrito - Provincia - Departamento - Muestreador - Fecha y hora de muestreo - Fecha y hora de llegada al laboratorio - Temperatura

AGUA POTABLE Utilica frascos esterilizados de vidrio proporcionado por el laboratorio, mantenerlas cerrado hasta que se vaya a utilizar. Llevar frascos con 0.1ml de tio sulfato de sodio 3% para 120 ml de muestra que contengan cloro residual. El cao no debera tener ningun dispositivo, tales como pedazos de manguera u otros objetos. El cao no debera tener escapes de agua, no debe ser defectuoso ni golpear or la superficie de existir fugas deberan ser reparadas antes de tomar la muestra. Abrir completamente el grifo y deje correr el agua durante 2 o 3 minutos para limpiar la tubera de servicio. Si la limpieza parece insuficiente, se pude aplicar una solucion de hipoclorito de Sodio (100mg de NaOCL/l) a la boca de grifo, antes de tomar la muestra dejar correr el agua por 2 o 3 minutos despus del tratamiento. Reducir el caudal del agua para poder llenar el frasco sin derramar. Llenar el frasco sin enjuagarlo se debe dejar un amplio espacio aereo en el frasco de muestreo (al menos 2,5cm) para facilitar la mezcla por agitacin antes de proceder al estudio. Para el caso de pozos con bomba de mano, se bombeara durante 5 minutos antes de la toma. Si el pozo esta equipado con una bomba mecaniza se realiza la toma en el grifo de descarga. Si el pozo no cuenta con una bomba la muestra se realiza de forma directa por medio de una botella esterilizada con un peso en la base. Tape inmediatamente el frasco y coloque el capuchn de papel. Poner con claridad todos los datos solicitados del punto de muestreo. Enviar la muestra sin retraso al laboratorio. - Hasta una hora sin refrigeracin como mximo - Hasta 24 horas con refrigeracin bajo 10 C Identificacin de la muestra - Nro de Muestra - Origen de la fuente

Punto de muestreo Nombre de la playa Distrito Provincia Departamento Muestreador Fecha y hora de muestreo Fecha y hora de llegada al laboratorio Temperatura.

Aguas Superficiales (Rios, Lagos o pantanos) Utilizar frascos esterilizados de vidrio, proporcionado por el laboratorio, mantener cerrado hasta que se vaya a utilizar. El frasco debe sostenerse cerca de la base con la mano, para sumergirla boca abajo. Girar la botella hasta que el cuello apunte hacia arriba con la boca hacia la corriente. Si no hay corriente como en el caso de los pantanos se debe crear una corriente artificial ampujando el frasco en forma horizontal en direccion contraria a la de la mano. En el caso de rios se debera evitar el contacto con la orilla o en el lecho del rio, pude contaminarse el agua. El volumen de la muestra debe ser suficiente para realizar todos los analisis nesecarios, no debe ser menor de 100ml. Tape inmediatamente el fradco y coloque el capuchn de papel. Poner con claridad todos los datos solicitados del punto de muestreo . Enviar la muestra sin rtetaso al laboratorio. - Hasta 6 horas con refrigeracin bajo de 10C. Acompaar con la cadena de custodia. Identificacin de la muestra - Nro de Muestra - Origen de la fuente - Punto de muestreo Nombre de la playa - Distrito - Provincia - Departamento - Muestreador - Fecha y hora de muestreo - Fecha y hora de llegada al laboratorio - Cloro residual - PH y Temperatura.

Alimentos La toma de muestras se hace utilizando diferentes tcnicas pero el objetivo es investigar los defectos del producto que puedan perjudicar la salud, para muestrear se debe tomar en consideracin el tamao del lote, la naturaleza y la forma de acondicionamiento del producto Diluyentes:

Es importante usar un lquido de dilucin desprovisto de accin bactericida. El contenido de bacterias puede ser variable, depender de su grado de contaminacin y esto obliga a diluir la muestra en porciones alcuotas Agua Para la preparacin del agua dilucin se agregar 1.25 ml de la solucin stock A de fosfato monopotasico y 5 ml de la solucin stock B de sulfato de magnesio a un litro de agua destilada. Se distribuir en una serie de tubos con 9 ml y /o frascos 90ml. Se dispone de una serie de tubos con 9 ml de agua dilucin; la muestra de agua a examinar se agita varias como 20 veces, se flamea la boca del frasco y una vez destapado, se retira 1 y/o 10 ml, porcin que se pasa al primer tubo con agua dilucin, debe ser homogenizada y con otra pipeta estril se retira 1 ml de la primera dilucin se pasa a otro frasco con agua dilucin y as sucesivamente hasta llegar a una dilucin conveniente. Alimentos Para diluir muestras de alimentos se usa la Solucin de Peptona al 0.1% y la Solucin de agua Taponada. Se dispone de una serie de frascos con 90 ml de Solucin de Peptona al 0.1%; la muestra de agua a examinar se agita varias veces, se flamea la boca del frasco y una vez destapado, se retira 10 ml, porcin que se pasa al primer frasco con agua de peptona, debe ser homogenizada y con otra pipeta estril se retira 10 ml de la primera dilucin se pasa a otro frasco con agua peptona y as sucesivamente hasta llegar a una dilucin conveniente.