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QUMICA ANALTICA

Unidad 4 Actividad 5. Prctica 1. Cuantificacin glucosa en mermeladas

Integrantes:

Actividad 4. Prctica 1. Cuantificacin glucosa en mermeladas

INTRODUCCIN La glucosa es ampliamente empleada en productos de confitera caramelos duros, caramelos / caramelo / dulce de azcar, gomas y gelatinas, pasta de azcar, bombones, chicles, etc. El objetivo funcional de la glucosa en caramelos, caramelos duros o cocidos es el evitar la cristalizacin de la sacarosa presente, reduce coloramiento caf en dulces hervidos, controla el nivel de dulzor y produce un producto claro y no cristalino. Adems, contribuye hacer a las confituras, jaleas y conservas agradables al paladar. El propsito funcional de la glucosa en mermeladas, jaleas y conservas que es el control de la cristalizacin de sacarosa, darle cuerpo, dulzura y apariencia. El cido 3.5-Dinitrosalicylic (cido 2-hidroxi-3, 5-dinitrobenzoico el nombre DNS o DNSA, IUPAC) es un compuesto aromtico que reacciona con azcares reductores y otras molculas reductoras para formar el cido 3-amino-5-nitrosalicilico, que absorbe la luz fuertemente a 540 nm.

MARCO TERICO La espectrofotometra comprende una serie de tcnicas analticas usadas para anlisis cualitativo y cuantitativo. Una radiacin electromagntica se puede describir como un flujo de partculas llamadas fotones, o bien como una onda propagndose en el espacio. De esta ltima descripcin se toma el concepto de longitud de onda, definindolo como la distancia entre dos mximos consecutivos de la onda. Esta es inversamente proporcional a la energa de la misma, de tal manera que el espectro de radiaciones electromagnticas abarca un amplio rango de energas, las de menor energa son las ondas de radio y las de mayor energa son las llamadas radiacin gamma. Las molculas tienen un estado energtico que se puede alterar por la absorcin de radiacin electromagntica a determinada longitud de onda, lo que se puede medir para realizar un estudio cualitativo o cuantitativo.

Las principales ventajas de la espectrofotometra son: Sensibilidad relativa elevada. Facilidad para realizar mediciones rpidas. Grado de especificidad relativamente elevado.

Para obtener la mxima sensibilidad en una determinacin debe conocerse la longitud de onda de mayor absorcin de la sustancia analizada, que no deber coincidir con una alta absorcin de otras sustancias presentes en la reaccin. El DNS reacciona nicamente con los azcares reductores. La sacarosa es un disacrido no reductor, pero tras su hidrlisis en medio cido se liberan glucosa y fructosa que s son reductores y reaccionan con el DNS generando un producto. La intensidad del color, que se puede medir por mtodos espectrofotomtricos es proporcional a la concentracin de sacarosa. Los mtodos espectrofotomtricos permiten calcular la intensidad de radiacin (luz con una longitud de onda determinada) emitida o absorbida por una sustancia. La cuantificacin se realiza aplicando la ley de Lambert-Beer:

Ley de Lambert y Beer La absorbancia de una solucin es directamente proporcional al camino recorrido por la radiacin electromagntica y a la concentracin de la solucin. A=.c.l Donde: A = Absorbancia medida en el espectrofotmetro

= Coeficiente de absorcin molar a una determinada longitud de onda. Es la absorcin de luz con una determinada longitud de onda de una disolucin 1M, cuando el paso ptico es de 1cm. Se expresa en M-1. cm-1 c = Concentracin en moles/litro (M) (en las mismas unidades que ) l = Paso ptico (espesor del tubo que contiene la disolucin, en cm). En las cubetas estndar que se utilizan para hacer las medidas es de 1 cm.

Curva de calibracin Absorbancia vs Concentracin Permite determinar la concentracin de una muestra incgnita, por medio de la preparacin de muestras de concentracin conocida y creciente utilizando los mismos diluyentes y reactivos que se emplear en la preparacin de la muestra incgnita. Medir la absorbancia de estas muestras. Medir la absorbancia de la muestra problema. Graficar Absorbancia vs concentracin.

Si la sustancia cumple con la Ley de Lambert y Beer el grfico ser una recta y ser posible sacar un factor ya que la pendiente de la recta ser la misma en todos los puntos. As se podr calcular la concentracin de la muestra problema. Si la sustancia no cumple la Ley, el grfico ser una curva y se extrapolar dentro de un rango apropiado para calcular el valor de la muestra problema.

OBJETIVOS El objetivo de esta prctica consiste en utilizar la tcnica de espectrofotometra para determinar la glucosa a partir de concentraciones en las muestras tomadas. Para ello, se graficarn los valores de absorbancia vs concentracin, para obtener la curva de calibracin, y partiendo de ella determinar la concentracin de glucosa en las muestras. Finalmente se determinar la concentracin de glucosa por gramo de mermelada. - Reforzar el aprendizaje del uso del espectrofotmetro. - Realizar espectro de absorcin de la glucosa. - Realizar una curva de absorbancia vs concentracin. - Determinar la concentracin de una muestra problema de la glucosa en mermeladas.

DESARROLLO Materiales y reactivos 10 g DNSA 200 ml NaOH 2.0M 300 g tratrato de sodio Agua destilada Matraces Erlenmeyer Matraces aforados de 100 ml

PROCEDIMIENTO 1. Preparen el reactivo DNSA (cido 3,5-dinitrosaliclico): disuelvan 10 g de DNSA en 200 ml de NaOH 2.0M. 2. Calienten la disolucin y mezclen perfectamente. 3. Disuelvan 300 g de tratrato de sodio y potasio en 500 ml de agua (estabilizante de color). 4. Mezclen ambas disoluciones, agiten y enrasen a 1.0 l con agua destilada. Cuantificacin de azcares totales 1. 2. 3. 4. 5. Pesen 1.0 g de mermelada en un matraz Erlenmeyer y aadan 10 ml de H2SO4 2M. Calienten en bao de agua hirviendo durante 20 minutos Dejen enfriar y aadan con mucho cuidado 12 ml de NaOH al 10% p/v Agiten y filtren a un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada. Transfieran 10 ml de la disolucin de la mermelada a otro matraz aforado de 100 ml y enrasar con agua destilada.

Cuantificacin de azcares reductores 1. Pesen 3.0 g de mermelada en un matraz Erlenmeyer y aadan 50 ml de agua destilada. 2. Calienten y agiten durante 10 minutos 3. Filtren a un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada. 4. Transfieran 10 ml de la a otro matraz aforado de 100 ml y enrasar con agua destilada.

Obtencin de la curva de calibracin 1. Preparen la solucin estndar de glucosa (15 mg/ml): pesen 1.5 g de glucosa en un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada.

2. Etiqueten 5 matraces aforados de 100 ml con las letras A, B, C, D y E. 3. En cada matraz transfieran los volmenes de solucin estndar de glucosa y agua destilada de acuerdo a la siguiente tabla: Matraz Volumen de solucin estndar de glucosa (ml) Volumen de agua destilada (ml) Concentracin de glucosa (mg/ml) A 2 98 0.3 B 3 97 0.45 C 6 94 0.9 D 8 92 1.2 E 10 90 1.5

4. Etiqueten y llenen seis tubos de muestra tal y como se muestra en la siguiente tabla:

Nmero de la muestra Solucin estndar de glucosa (matraz) Volumen de solucin estndar de glucosa (ml) Volumen de reactivo DNSA (ml) Volumen de agua destilada (ml)

Blanco 1 2 3 4 5 N/A A B C D E 0 1 1 1 1 1 1 3 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2

5. Calienten los tubos en agua hirviendo durante 5 minutos. 6. Dejen enfriar los tubos y aadan 6 ml de agua destilada a cada tubo.

7. Midan la transmitancia de cada uno de los tubos a 430 nm en el espectrofotmetro. Concentracin de glucosa (mg/ml) Transmitancia (lectura del espectro, T%) 27.54 23.44 20.04 18.21 15.13 14.45 Absorbancia (A) Absorbancia especfica de la glucosa (A Ablanco) 0 0.07 0.13 0.18 0.26 0.28

0 (Blanco) 0.30 0.45 0.90 1.20 1.50

0.56 0.63 0.69 0.74 0.82 0.84

8. Grafiquen los valores de Absorbancia vs. Concentracin, para obtener la curva de calibracin. RESULTADOS

Concentracin vs Absorbancia
0.3 0.25 Absorbancia 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0 0.3 0.45 0.9 Concentracin 1.2 1.5

Medidas de las muestras de mermelada 1. Coloquen 1 ml de la disolucin de mermelada, 1 ml del reactivo de DNSA y 2 ml de agua destilada en un tubo de ensayo. 2. Calienten los tubos en agua hirviendo, durante 5 minutos. 3. Dejen enfriar los tubos y aadan 6 ml de agua destilada a cada tubo. 4. Determinen la transmitancia de cada tubo en el espectrofotmetro a 430 nm. 5. Los valores obtenidos para las muestras fueron los siguientes:

Muestra

1 2

Transmitancia (lectura del Spektra, T%) 18.6 21.3

Absorbancia (A) 0.73 0.67

Absorbancia especfica de la glucosa (A Ablanco) 0.17 0.11

6. Con la ayuda de la curva estndar, determinen la concentracin de glucosa en las muestras. 0.73 0.56 = 0.17 0.67 0.56 = 0.11

7. Finalmente determinen la concentracin de glucosa por gramo de mermelada, no olviden considerar las diluciones de cada una de las muestras. Valores ledos de acuerdo a la grfica: Valores Extrados de la Grfica 0.8 0.17 0.4 0.11

Disolucin = 10 Volumen de 1g de la muestra de mermelada = 100ml

Muestra 1

Muestra 2

CONCLUSIONES La espectrofotometra es una tcnica analtica utilizada para medir la cantidad de luz de una determinada longitud de onda absorbida por una muestra en solucin. Esta medicin se relaciona con las propiedades pertinentes de la solucin, por ejemplo, la concentracin. Las longitudes de onda de la luz utilizada en el rango de espectrofotometra ultravioleta-visible desde aproximadamente 250 nm a 750 nm, el intervalo visible s que van desde ~ 400 nm (violeta) a ~ 700 nm (rojo). Esta medicin de la cantidad de luz absorbida por la muestra se realiza por medio de un espectrofotmetro.

Las soluciones que absorben la luz visible son generalmente coloreadas. Es importante reconocer que el color de la solucin est relacionado con la longitud de onda de la luz absorbida por la solucin. Haciendo uso de esta coloracin producida por los azcares, es posible conocer la concentracin de una sustancia, en esta prctica, la glucosa. La absorbancia de las soluciones muestras se pueden medir, y comparar con la absorbancia de soluciones patrn de concentracin de glucosa conocida. El mtodo utilizado para la determinacin de la concentracin de glucosa en mermelada implica la hidrlisis de muchos de los azcares no reductores (en mermelada principalmente sacarosa) en glucosa, utilizando cido sulfrico (H2SO4) y subsiguiente neutralizacin con hidrxido de sodio (NaOH). Los azcares reductores (por ejemplo glucosa y fructosa) generan un producto rojo-marrn cuando son calentados en presencia de cido 3,5 dinitrosaliclico (DNSA, tambin conocido como cido 2-hidroxi-3 ,5-dinitrobenzoico).

REFERENCIAS

EHU. "Elaboracin de una curva patrn para cuantificar la sacarosa". [ONLINE] Disponible en: http://www.ehu.es/biomoleculas/bq1/pdf/practica_3.pdf [Recuperado el 7 Agosto 2013].

UAM. "TCNICAS ANALTICAS PARA LA CUANTIFICACIN DE COMPONENTES QUMICOS DE FRUTAS Y HORTALIZAS DETERMINACIN DE AZCARES". [ONLINE] Disponible en: docencia.izt.uam.mx/lyanez/anlisis/practicas/a ucares.rtf [Recuperado el 7 Agosto 2013].

UNP. "ESPECTROFOTOMETRIA". [ONLINE] Disponible en: http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2010/08/2011-TP-1ESPECTROFOTOMETRIA.pdf [Recuperado el 8 Agosto 2013].

UVA. "Determinacin por espectrofotometra de la concentracin de carbohidratos en una muestra alimentaria". [ONLINE] Disponible en: https://www5.uva.es/guia_docente/uploads/2011/470/45803/1/Documento4.pdf [Recuperado el 8 Agosto 2013].