REQUERIMIENTOS GENERALES PARA EL DESARROLLO MICROBIANO

I.- INTRODUCCIN

I.1.- Objetivo General Describir los factores que afectan el desarrollo bacteriano, analizando el tipo de alteracin y su aplicacin en la fabricacin y conservacin de alimentos.

I.2.- Objetivos Especficos Reconocimiento y determinacin de la temperatura optima de crecimiento de los diferentes cultivos Conocer los efectos de la presin osmtica y del calor en el desarrollo y supervivencia de los microorganismos. Considerar las diferentes concentraciones de pH en los medios de cultivos que influyen en la inhibicin o desarrollo de los microorganismos Comprobar a que cantidad de glucosa los microorganismos se reproducen mejor. Confirmar que las bacterias y hongos utilizados en el experimento siguen vivos basndose en los conocimientos previos que el alumno posee.

II.- REVISIN BIBLIOGRFICA

III.- MATERIAL Y MTODOS III.1.- MATERIAL III.1.1 Material Biolgico: Cepas de B. subtilis, E. coli, Aspergillus niger, Candida sp, Salmonella sp., Staphylococcus aureus. III.1.2 Material de Laboratorio Pipetas de 1 y 10 mL Asas bacteriolgicas 1 Mechero de Bunsen Balanza Papel para pesar Esptula Placas Petri Lminas Portaobjetos

III.1.3 Reactivos Medios de cultivo (preparados con anterioridad)

Alcohol antisptico Set de coloracin de Gram Azul de Lactofenol Azul de Metileno de Loeffler Hidrxido de Potasio al 10%

III.2.- MTODOS Experimento N 1: Prepare los medios de cultivo apropiados para el crecimiento de Bacillus subtilis, Staphylococcus sp., Salmonella sp., Candida sp. Y Aspergillus niger. En cinco placas con agar sembramos por agotamiento cada microorganismo en estudio, estas placas sern dejadas a diferentes temperaturas durante 24 horas. Temperatura Congelador (-18C) Refrigerador (2-6C) T. Ambiente (20C) 45C 37C Experimento N 2: Prepare los medios de cultivo apropiados para el crecimiento de Bacillus subtilis, Staphylococcus sp., Salmonella sp., Candida sp. Y Aspergillus niger. Medir el pH del medio de cultivo y modifquelo de ser necesario para cumplir con el experimento. Sembrar por agotamiento en cada parte con el cultivo correspondiente, estas debern ser incubadas a 37C (Salmonella sp, Staphylococcus), 25C (hongos y levaduras) y luego pasados a la refrigeradora. pH 3: pH 7: pH 11: Resultado

Experimento N 3: a. Tomamos 9 placas con medios de cultivos diferentes; con distintas concentraciones de glucosas; 3 con diferentes concentraciones de NaCl y 3 con distintas concentraciones de glucosa en agar extracto de malta (AEM), cada una de las placas las dividimos en tres sectores: hongos, Staphylococcus aureus, Salmonella sp. y levaduras. Sembramos por agotamiento en cada sector partiendo del cultivo correspondiente, posteriormente todas las placas fueron incubadas a 30 C (temperatura del laboratorio) durante una semana. o Glucosa 0% 10% 25% NaCl 5%

10% 15% Glucosa (AEM) 0% 15% 40%

Posteriormente realizamos la fijacin de las frotis de la siguiente manera, en los 3 porta objetos que nos fueron asignados dividimos en 4 partes cada uno. En el primer porta objeto, (NaCl) fijamos el frotis de igual manera, pero esta vez partiendo de los 4 tubos de caldo glucosado con diferentes concentraciones de NaCl, (0,5 %, 5 %, 15 %, 20 %) los frotis fueron fijados de acuerdo con la concentracin correspondiente, a estos se les realiz tincin de Gram, para posteriormente observarlos a travs del microscopio. En el segundo portaobjeto (sacarosa), fijamos de la misma forma, pero partiendo de los otros 4 tubos de caldo glucosado con sacarosa de diferentes concentraciones (5%, 15%, 30%, 60%), ya realizados los frotis, de igual manera se les aplic tincin de Gram, para despus ser observadas por medio del microscopio En el tercer portaobjeto (Hongo), a travs de un trozo de cinta plstica, tomamos el frotis de una placa que contena hongos (A. Nger), agregamos una gota de azul de algodn, sobre el portaobjetos y fijamos la cinta plstica, posteriormente lo observamos con el microscopio.

Experimento N 4: Tomamos 6 tubos y tres placas (por cada microrganismo en estudio) con agar preparado segn se necesite crecimiento de bacterias o de hongos para el experimento. Luego identificamos todos los sectores de esta manera: 5 10 15 20 S= Sin inculo C= Control, se inocula al principio del experimento con el microorganismo correspondiente Las placas las dividimos en 6 y las rotulamos como los tubos. Luego inoculamos los tubos con las bacterias para el estudio y procedemos de la siguiente manera: Sembramos en cada tubo el microorganismo en estudio, los sumergimos en bao de mara a 50 C, luego a 70C y luego a 85C. En cada caso controlar la temperatura, una vez pasado 5 minutos de exposicin a 50C, inoculamos el sector 5 de la placa,

pasados otros 5 minutos de exposicin a 50, inoculamos el sector 10 y as hasta inocular todos los sectores de la placa. Los seis tubos y las placas sern expuestos durante 24 horas a una temperatura de 37C, transcurridas las 24 horas se observaron de la siguiente manera:

Para 50 C: Salmonella, E. Coli, Staphylococcus Sp., Bacillus subtilis, Esporas S= C= 5 = 10 = 15 = 20 = Para 70 C: Salmonella, E. Coli, Staphylococcus Sp., Bacillus subtilis, Esporas S= C= 5 = 10 = 15 = 20 = Para 85 C: Salmonella, E. Coli, Staphylococcus Sp., Bacillus subtilis, Esporas S= C= 5 = 10 = 15 = 20 = IV.- DISCUSIONES V.- RECOMENDACIONES VI.- CONCLUSIONES VII.- BIBLIOGRAFA CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. 6. A qu llamamos Temperatura ptima de Crecimiento? Por qu se modifica la actividad enzimtica de la bacteria? Considera Ud. que los hongos se desarrollan en condiciones adversas? Qu se puede concluir de la variacin de pH en un medio de cultivo? A qu cantidad de Glucosa crecen mejor las bacterias? A qu cantidad de ClNa crecen mejor las bacterias?