Centro de Bachillerato Tecnolgico Industrial y de Servicios No.

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MANUAL DE HEMATOLOGIA
Grupo: 4 C Maestra: Taboada Torres Lucina

INDICE 1.-Obtencin de sangre (venosa y capilar).. 1-8 2.-Microhematocrito y macrohematocrito.. 9-12 3.-Cuantificar la concentracin de hemoglobina... 13-17 4.-Recuento de glbulos rojos.18-21 5.-calcula los ndices eritrocitarios 22-27 6.-morfologa de los glbulos rojos.. 26-28 7.-recuento de los reticulocitos. 8.-recuento de leucocitos

Practica 1 Obtencin de sangre (Venosa y capilar)

Extraccin de sangre venosa

Objetivo:
Al trmino de la prctica el alumno tendr la habilidad para tomar muestras sanguneas a partir de las regiones anatmicas mas frecuentes para la toma de sangre venosa.

Introduccin:
Para la realizacin de estudios sanguneos es necesario obtener muestras de sangre adecuadas, ya que esta si es correcta no produce modificacin alguna en los resultados. Casi todas las muestras de sangre se obtienen por puncin venosa. Es el mtodo ms fcil y adecuado para obtener un volumen de sangre suficiente para llevar a cabo gran nmero de pruebas como por ejemplo: pruebas serolgicas, recuento hemticos y la qumica sangunea. Las venas ms utilizadas son las del antebrazo, especialmente las del pliegue del codo, la media ceflica y la baslica, tambin pueden ocuparse las venas de la mueca o del dorso de la mano solo en casos muy necesarios. La sangre puede obtenerse con jeringa o agujas ordinarias, con tubos al vacio existentes en el comercio; este mtodo presenta varias ventajas: ya que absorbe cantidades de sangre previstas y los tubos ya cuentan con el anticoagulante necesario.

Obtencin de sangre venosa con jeringa Materiales:

*torundas *Ligadura o torniquete *Jeringas de 3 ml.

Procedimiento:
1.- Verificar que todo nuestro material est listo, la ligadura, las torundas, las jeringas estril y que el paciente se sienta cmodo.

2.- El paciente deber abrir y cerrar la mano durante unos segundos y despus la mantendr cerrada, esto ayudar a que las venas resulten ms palpables. (fig.3) 3.-Se selecciona la vena adecuada para la puncin. Se limpia la zona de la puncin con una torunda humedecida con alcohol isoproplico al 70%, o yodopovidona al 1%. Se comienza comienza en el punto de la puncin y se prosigue la limpieza hacia afuera siguiendo un movimiento espiral. .4- Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro dedos por encima de la flexin del codo o a 10 cm del codo, sujetar con un medio nudo.

Puntos para la extraccin de sangre

5.- se fija la vena tanto, por encima como por debajo del lugar de puncin, con ayuda de los dedos pulgar y medio o ndic3 y pulgar. 6.- se realiza la venopuncin: a) se penetra la piel con la aguja formando un ngulo de 15 con el brazo y con el bisel hacia arriba se sigue la direccin de la vena; b) se introduce la aguja con suavidad pero con rapidez para reducir las molestias. No hay que enterrar la aguja; c) si se utiliza una jeringa, se tira hacia atrs el mbolo, con tensin lenta y uniforme a medida que la sangre va fluyendo en su interior; d) si se utiliza un tubo al vaco, en cuanto la aguja haya penetrado en la vena se dirigir el tubo todo lo posible hacia adelante apoyndose en el dispositivo de sujecin (de la misma forma en que se introduce el mbolo de una jeringa). Al mismo tiempo mantenga firmemente en su lugar. Una vez que se haya llenado el tubo, se retira cogindolo por su extremo y tirando suavemente de l. 7.- cuando la sangre comience a fluir se libera el torniquete. Una vez obtenida la muestra, hay que indicar al paciente que relaje el puo y que no bombee con la mano. 8.-coloque suavemente una torunda de algodn estril sobre el punto de puncin. Se extrae la aguja (con un movimiento rpido) y a continuacin se ejerce presin sobre la zona. NO aplique masaje.

IMPORTANTE:
Compruebe el estado del paciente, verificando si se ha mareado y si la hemorragia est controlada. Esquemas:

Puncin de la vena yugular externa: en los lactantes y nios pequeos puede elegirse la vena yugular externa el lactante se envuelve en una manta para que los brazos queden a los lados del cuerpo. Luego se coloca sobre una mesa con la cabeza colgando sobre el borde, y un ayudante sostiene la cabeza del paciente, volvindola a un lado. Cuando el nio grita, la vena yugular que expuesta. Se desinfectara la superficie de la piel. Se estira sobre el sitio de puncin y se penetra la vena saliente, despus de completar la puncin, se aplica presin con gasa esterilizada sobre el sitio puncionado y se sienta al nio, apoyando en el cuerpo de la enfermera. Puncin de la vena Femoral: preferiblemente la puncin de la vena femoral debe estar a cargo de un mdico o bioqumico adiestrado. Se coloca las piernas del nio en posicin de abduccin leve, mientras el cuerpo y los brazos son inmovilizados por un ayudante que se inclina sobre el nio. Se localiza el pulso

femoral inmediatamente por debajo del ligamento inguinal; en la unin del tercio medio con los dos tercios exteriores se aplica un antisptico a la piel y el rea que cubre el pulso, se estira entre dos dedos para puncionar con una aguja larga en direccin posterior ligeramente medial con respecto al impulso mximo. En cuando la guja toca el hueso se retira muy lentamente y al mismo tiempo el mbolo de la jeringa se eleva ligeramente para que la sangre pueda entrar en la jeringa. Despus de completar la aspiracin, se aplica presin sobre el sitio de puncin usando gasa esterilizada.

Obtencin de sangre capilar. Sangre capilar: es una tcnica relativamente sencilla y se recurre a la obtencin de este tipo de muestra cuando la cantidad de sangre utilizada para los estudios es mnima o para microanlisis, en algunos casos se utiliza cuando la puncin venosa resulta difcil. La obtencin de un espcimen de sangre por puncin cutnea obliga a puncionar la piel de la yema del dedo o el lbulo de la oreja de los adultos, o del dedo grueso del pie o taln de los neonatos. Para el caso no se escogern sitios fros, cianticos e hinchados, pues las muestras obtenidas sern inadecuadas. El rea donde se har la puncin se limpia con una sustancia antisptica y se punza con una aguja o lanceta para luego recoger la sangre en una pipeta (tubo pequeo de vidrio), en una laminilla de vidrio, sobre una tirilla de examen o en un recipiente pequeo. Finalmente, se puede colocar algodn o un vendaje en el sitio de la puncin si el sangrado persiste. Material: Lancetas Torundas con alcohol Gasas estriles

PROCEDIMIENTO: 1.-Seleccionar un punto adecuado para la puncin. Este no debe haberse puncionado previamente.

2.-calentar la zona de puncin con una compresa hmeda (42C); con ello se aumenta el flujo de sangre a travs de las arteriolas y capilares y se consigue que la sangre tenga un mayor componente arterial, particularmente til en las determinaciones de pH y gasometras. 3.-Limpie la zona de la puncin con torundas saturadas con alcohol isoproplico al 70%. A continuacin se deja secar la piel. 4.- la puncin se lleva a cabo con una lanceta estril, realizando un nico movimiento con el instrumento. Cuando la puncin se efecta en el taln, ste se sujetara con el primer dedo sobre el arco y con el pulgar prximo al punto de puncin, en la zona del tobillo. 5.- desechar la primera gota de sangre enjuagndola con una gasa estril. Regule el flujo de sangre mediante presin con el pulgar. No realizar maniobras de ordea, ya que se puede hemolizar la muestra e introducir en ello un exceso de lquido hstico. 6.- recoja la muestra en un recipiente adecuado. Un mtodo alternativo es el de microtubos recolectores. 7.- si la muestra se recolecto en tubos capilares, deben sellarse los extremos introducindolos en plastilina. 8.- etiquetar el recipiente de la muestra con los datos del paciente 9.-indicar en el informe que los resultados corresponden a sangre de puncin cutnea, considerando que existen algunas diferencias en las concentraciones de glucosa, potasio, protenas totales y calcio entre el suero de este tipo de sangre y el de la sangre venosa. ESQUEMAS:

RESULTADOS:

COMENTARIOS:

CUESTIONARIO: Menciona las ventajas de los especmenes obtenidos por puncin cutnea:

Dibuja el sitio adecuado para la puncin en el taln:

Describe brevemente la puncin de la vena femoral:

Menciona las ventajas de loes especmenes obtenidos por puncin venosa:

Realizar un esquema de las venas superficiales del brazo.

MACROHEMATOCRITO Y MICROHEMATOCRITO OBJETIVO: el alumno determina el macrohematocrito y el microhematocrito en una muestra de sangre correctamente. Introduccin El hematocrito es una medida de la proporcin de sangre comprende clulas rojas de la sangre. El valor se expresa como un porcentaje o fraccin de clulas sanguneas en la sangre. Por ejemplo, con un valor de hematocrito de 40% significa que hay 40 mililitros de glbulos rojos en 100 mililitros de sangre. El hematocrito se incrementa cuando el nmero de glbulos rojos de la sangre aumenta, o cuando el volumen de plasma se reduce, como en los casos de deshidratacin. El hematocrito disminuye a un valor inferior a la normal, indicando anemia, cuando el cuerpo reduce la produccin o incrementa la destruccin de las clulas rojas de la sangre, o cuando la sangre se pierde debido a la hemorragia. El hematocrito refleja el nmero de clulas rojas de la sangre y su volumen (MCV o el volumen corpuscular medio). Si el tamao de las clulas rojas de la sangre disminucin, el valor del hematocrito tambin disminuye y viceversa.
Con el valor hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y patologas, como es el caso de las anemias y la policitemia. En esta prueba se mide la cantidad de eritrocitos de la sangre en porcentaje del total, o lo que es lo mismo, el porcentaje de clulas que transportan oxgeno frente al volumen total de sangre, determinado por proceso de centrifugacin. En este proceso, se pueden apreciar dos niveles, los corpsculos formes que se sedimentan, y el plasma total que flota. En definitiva es la relacin porcentual entre ambos lo que representa el valor hematocrito.

Macrohematocrito
FUNDAMENTO: si se toma sangre con anticoagulante y se coloca en un tubo de dimetro uniforme, de fondo plano y graduado de 0 a 10 y se somete a una velocidad de centrifugacin determinada, durante un tiempo constante, la parte slida se va al fondo contituye el paquete de glbulos rojos, que medido en relacin al volumen total de sangre, es el volumen porcentual o hematocrito. Para este mtodo se hace el tubo wintrobe.

Material: Pipeta pasteur Gradilla

Centrifuga Tubos Wintrobe EDTA al 10% Sangre venosa PROCEDIMIENTO: 1.-Agitar la sangre anti coagulada contenida en el tubo, para homogeneizarla. 2.-Con una pipeta Pateur o de Wintrobe, tomar una muestra de sangre y depositarla en un tubo de Wintrobe, empezando a llenarlo desde el fondo (evitando la formacin de burbujas) hasta la marca de 10. 3.-Centrifujar a 3,000 rpm durante 30 min cuando el radio del cabezal de la centrifuga sea de 22.5 cm. 4.-Leer la altura que alcanz la columna de glbulos rojos en la escala de numeracin descendente. 5.-Expresar el valor en porciento. ESQUEMAS:

RESULTADOS:

CONCLUSIONES:

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MICROHEMATOCRITO FUNDAMENTO:
El mtodo de microhematocrito se puede realizar con sangre capilar o venosa. Es una tcnica muy utilizada, por necesitar muy poca cantidad de sangre, muy sencilla y poderse realizar en gran nmero de muestras a la vez y en muy poco tiempo. Se utilizan tubos capilares de vidrio de 7 a 7,5 cm. de longitud por 1mm. De dimetro interno. Heparinizados o no, dependiendo del tipo de muestra (sangre entera anti coagulada o sangre capilar). Si se utiliza sangre capilar, se desechar la primera gota despus de la puncin. Se llena el tubo capilar hasta tres cuartas partes de su capacidad con la sangre (aproximadamente 50 l). El llenado de los tubos se realiza por capilaridad, favoreciendo el proceso inclinando el capilar hacia abajo a medida que se va llenando. Limpiar con papel o gasa el capilar y tapar el extremo limpio con plastilina o sellndolo a la llama del mechero. Una vez cerrados se colocan los capilares en la centrfuga con el extremo del capilar cerrado hacia fuera y de modo que quede perfectamente equilibrada. Se centrifugan durante cinco minutos a 12.000 rpm. Tan pronto se detiene la centrfuga se extraen los capilares y se procede a su lectura

MATERIAL: Tubos capilares Centrifuga para tubos capilares Regla Sangre Centrifuga para tubos capilares Procedimiento: 1.-Para calcular el valor del hematocrito, en caso de no contar con tubos de Wintrobe, se utilizan tubos capilares (heparinizados si se toma sangre capilar). 2.-llenar los tubos capilares con sangre las 2/3 partes. 3.-una vez cargados con sangre se obturan por un extremo ya sea con plastilina o a la llama del mechero; 4.-se centrifugan durante cinco minutos a 11000rpm en centrfuga a para microhematocrito. 5.- con una regla se mide la altura de la columna se sangre total y la del paquete de eritrocitos calculando por una proporcin el valor hematocritico.

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RESULTADOS:

CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO: Cul es la frmula que se emplea en el macrohematocrito?

Cules son los valores de referencia del hematocrito?

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PRACTICA 3 CUENTIFICAR LA CONCENTRACION DE HEMOGLOBINA

Objetivo:
Los alumnos aprendern a determinar la concentracin de hemoglobina con ayuda de cianometahemoglobina en la sangre humana.

Introduccin:
Los exmenes de laboratorio pueden realizarse por muchas razones, como investigacin rutinaria de salud o sospecha de enfermedad o de toxicidad. Tambin pueden ser utilizados para determinar si la efectividad de un medicamento mejora o empeora. Los exmenes pueden medir el xito o fracaso de un tratamiento. Pueden ser solicitados por razones mdicas o legales. Las siguientes son posibles razones por las que este examen puede realizarse:

Acidosis lctica Anemia de clulas falciformes Anemia por deficiencia de hierro Embolia grasa

La hemoglobina es una protena en los glbulos rojos que transporta oxgeno. La hemoglobina est compuesta por una protena (globina) y la no protena es (Hem, Hemo, Heme) compuesta por hierro y protoporfirina. Un examen sanguneo puede determinar qu tanta hemoglobina tiene uno en la sangre, lisando a los eritrocitos mientras su contenido es liberado. La densidad de la solucin es proporcional a la concentracin de hemoglobina, midindose en gramos por decilitros (g/dl) representando la cantidad de protena por unidad de volumen. La hemoglobina se mide por medio de citometros de flujo, por lo tanto es necesario dar valores de referencia de hombre, mujer y nios los cuales son: Hombres: 16 g/dl (lmites de 14.5-17.5 g/dl) Mujeres: 14 g/dl (lmites de 12.5-15.5 g/dl) Nios RN: 13-19 g/dl Mujeres embarazadas: 11-14 g/dl Antes de usar el fotocolormetro o espectrofotmetro para hacer las determinaciones de hemoglobina, es necesario preparar una curva de calibracin, para lo que se requiere de una solucin de referencia (estndar) de

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cianometahemoglobina (nombre comercial: Acuglobin). La concentracin de soluciones de referencia generalmente se da en mg por 100 ml (mg%). Para calcular el valor de hemoglobina en gramos por 100 ml se usa la siguiente formula:

Nota: 1000 es el factor para convertir miligramos a gramos y 251 es el factor de disolucin cuando 0.02 ml de sangre se diluyen con 5.0 ml de reactivo de Drabkin. Ya que 251/1000 es casi 0.25, la formula anterior se puede simplificar de la siguiente forma: Concentracin de la solucin de referencia (mg%) x 0.25

Fundamento:
Pigmento de color rojo, que al interaccionar con el oxgeno toma un color rojo cereza, que es el color de las arterias y al interaccionar con el dixido de carbono toma un color rojo oscuro o azulejo, que es el color caracterstico de las venas. -Oxihemoglobina: hemoglobina que se encuentra unida al oxgeno normalmente. -Carboxihemoglobina: hemoglobina resultante de la unin con el CO. La medicin de la hemoglobina forma parte de la biometra hemtica, sirve para detectar enfermedades que se acompaen de anemia, ayuda a determinar la intensidad de anemia, a vigilar la respuesta al tratamiento y valorar la policitemia.

Valores de referencia:
Hombres: 16 g/dl (lmites de 14.5-17.5 g/dl) Mujeres: 14 g/dl (lmites de 12.5-15.5 g/dl) Nios RN: 13-19 g/dl Mujeres embarazadas: 11-14 g/dl

Material:
Tubo con anticoagulante y tapn de hule Tubos de ensayo de 120 x 13 mm Jeringa y aguja hipodrmica No. 20, desechables Tubera de aire con boquilla Algodn con alcohol

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Pipetas graduadas de 5.0 ml. Pipetas de sahli de 20 mmc. Fotocolormetro o espectrofotmetro Reactivo de Drabkin

Material biolgico:
Sangre

Procedimiento:
1. Extraer sangre por puncion venosa recibirla en un tubo de anticoagulante; (agitar suavemente para mezclar). 2. Con pipeta de Sahli tomar una muestra de sangre hasta la marca de 20 mmc o 25 mmc, (con una gasa o papel suave hmedo, limpiar el extremo de la pipeta). En caso de utilizar el mtodo de puncion capilar, tomar la muestra directamente en la herida. 3. En un tubo de ensayo de 120 x 13 mm, colocar 5.0 o 6.25 ml de reactivo Drabkin (segn el aforo de la pipeta que se vaya utilizar). La disolucin debe ser 1:251. 4. Descargar el contenido de la pipeta en el reactivo enjuagando por succion varias veces, con el mismo reactivo, a fin de arrastrar toda la sangre de las paredes de la pipeta. 5. Por burbujeo brusco homogenizar la sangre con el reactivo. 6. Dejar reposar por lo menos 10 minutos a la temperatura del laboratorio. 7. Leer en el fotocolormetro a 550 nm, ajustando el aparato a 100% de transmitancia con el reactivo de Drabkin 8. Extrapolar la lectura registrada en la curva o tabla de calibracin para obtener el resultado que se expresa en g/100 ml de sangre. A continuacin un pequeo ejemplo de cmo utilizar la curva de calibracin : Concentracin de la solucin de referencia= 60.0 mg/100 ml (60 mg%) concentracin de hemoglobina= 60 x 0.25= 15.0 g/100 ml

Procedimiento:
1. A partir de la solucin de referencia prepare por lo menos cuatro diluciones segn se indica a continuacin Tubo numero 1 2 3 4 Solucin de referencia 4.0 2.0 1.3 1.0 Reactivo de Drabkin (ml) 0 2.0 2.7 3.0

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2. 3.

4.

5.

Dilucin 1:1 1:2 1:3 1:4 Mezcle sus contenidos y djelos reposar durante cinco minutos Realice las lecturas en el fotocolormetro usando un filtro verde o una longitud de onda de 550 nm, si se usa en un espectrofotmetro utilice una longitud de onda de 540 nm. (el cero del aparato se ajusta con el reactivo de Drabkin) Usando papel semilogaritmico grafique la concentracin sobre las abscisas(eje horizontal), contra la transmitancia en % sobre las ordenadas (eje vertical). Si se utilizan lecturas de densidad ptica, la grafica se trazara sobre el papel lineal comn. (en ambos casos se obtiene una lnea recta) A partir de la grafica se prepara una tabla de valores de hemoglobina( 2.018.0 g/100 ml) con sus respectivas lecturas de transmitancia o densidad ptica.

Esquemas:

Resultados:

Conclusin:

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Cuestionario:
1. Menciona cuales son algunas causas de error para determinar la concentracin de hemoglobina:

2. Cules son las cifras en adolescentes de hemoglobina en g/dl?

3. Cmo se produce las anemias?

4. Menciona la frmula de la hemoglobina

5. Cul es el valor normal de hemoglobina en recin nacidos?

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Practica 4 RECUENTO DE GLBULOS ROJOS OBJETIVO: Los alumnos efectuaran e interpretaran los recuentos de los glbulos rojos en la sangre humana

INTRODUCCIN: El resultado final de la eritropoyesis es la produccin de una clula : El eritrocito con capacidad de ejercer una funcin principal, que es la de transportar oxgeno y bixido de carbono. Su falta de ncleo le da la capacidad de llevar ms oxigeno sin consumir prcticamente nada de l, su forma bicncava es la que mejor se presenta para afrontar la hemolisis; su membrana impide la salida de la hemoglobina. Los eritrocitos son celulas adultas que presenta la ultima etapa de la eritropoyesis. Se trata de dicos biconcavos. Carecen de nucleo y se tien de color rosa o gris rosaceo con el colorante Wrigth, debido que la hemoglobina es acidfila, es decir atrae al colorante acido, la eosina, en la tincin de Writh. El diametro de los eritrocitos es aproximadamente de 6 a 8 micrometros y 2 micrometros de espesor y cada uno contiene aproximadamente 29 pg de hemoglobina, as exsisten en promedio 900 gramos de hemoglobina en un hombre adulto. Factores necesarios para su produccin * Vitamina B12: Es un factor necesario para la sntesis y multiplicacin de las clulas. Debido a que las clulas madre de la mdula sea deben multiplicarse muy rpidamente para producir glbulos rojos, la falta de vitamina B12 origina anemia. * Acido flico: Es necesario para la sntesis de glbulos rojos, y su falta en la dieta tambin puede producir anemia. * Hierro: Es necesario para la produccin de hemoglobina. La mayor parte del hierro se encuentra en la hemoglobina. Valores disminuidos * Embarazo * Anemias varias * Cncer * Hemorragias * Enfermedades sistmicas * Alteraciones en la dieta * Fibrosis de mdula sea

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Valores aumentados * Enfermedades pulmonares crnicas * Cardiopatas * Altitud: Un conteo de glbulos rojos alto es comn en personas que en altitudes elevadas debido a que es la manera en que el cuerpo se adapta a la falta de oxgeno. * Poliglobulia de diferentes causas

Utilizacin de la cmara de Neubauer

Para los globulos rojos la muestra debe examinarse en un plazo de 2 horas y mezclarse muy bien, se agita la pipeta para rojos, se desechan las 4 primeras gotas y se llena la camara por capilaridad, colocando la punta en uno de los extremos abiertos de la camara, se deja asentar la mezcla en la camara y se enfoca el cuadrado central y los 4 cuadraditos de las esquinas. Se calcula el nmero de globulos rojos por mm3 agregando 4 ceros al total de globulos rojos contados en 5 cuadrados. RBCs x mm3 es igual a las celulas contadas en 5 cuadrados ENTRE la superficie contada x altura de la camara x dilucion de la sangre o sea Celulas contadas ENTRE 5/25 x 1/10 x 1/200 igual a celulas contadas por 10000.

Los clculos son:

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N= nmero de eritrocitos contados 200= factor de dilucin 10= correccin de la altura de la cmara N x 10,000= eritrocitos /

FUNDAMENTO: Diluir la sangre con los lquidos de Gower, en una cantidad exacta para as poder examinar al microscopio una porcin de la muestra, que se ha colocado en la cmara de Neubauer, para as contar el nmero de glbulos rojos que hay en la cuadricula media de la cmara. MATERIAL: Hemocitometro completo Microscopio Tubos de ensayo 120 x 13 mm Agitador hemtico EDTA al 10% Solucin Gower

Material biolgico:
Sangre

Procedimiento:
1. Se aspira sangre en la pipeta para hemates hasta la marca de 0.5, con mucha exactitud. 2. Limpiece con una gasa el exterior de la pipeta 3. Se aspira el liquido de disolucin (Gower) hasta la seal 101 4. Se agita durante 3 minutos para mezclar perfectamente. (en caso de dejar la pipeta en reposo repetir este paso) 5. Cargar las cmaras de hemocitometro. (se llena una cmara por cada pipeta) 6. Dejar reposar de 3 a 5 minutos sobre la platina del microscopio 7. Con un poco de aumento se localiza al cuadro central de los 9 mayores 8. Con gran aumento (40x) se contaran los eritrocitos de las cuatro esquinas y el cuadro central

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Esquemas:

Resultados:

Conclusin:

Cuestionario:
1. Cul cuadricula de la cmara de Neubauer es la que tenemos que contabilizar?

2. Para qu sirve el recuento de los globulos rojos

3.- Cules son las cifras normales en los recin nacidos

4 cual es la zona de la cmara de Neubauer que se debe contar?

5. Menciona de que tamao son los glbulos rojos

6 que sucede si hay una baja de glbulos rojos?

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PRACTICA 5 CALCULA NDICES ERITROCITARIOS CUENTA ERITROCITARIA Introduccin: Cuando la eritropoysis tiene lugar normalmente, su resultado final es la produccin de una clula-eritrocito perfectamente diferenciada y apta para su funcin principal que es la de transportar oxgeno y CO2 . La falta de ncleo le confiere la virtud de acarrear el oxgeno sin consumir prcticamente nada de el; su forma bicncava es la que mejor se presta para afrontar la hemlisis; su membrana no admite la salida de hemoglobina. Fundamento terico: Consiste en diluir la sangre con el lquido de Hayem en una proporcin exacta y luego examinar al microscopio una pequea cantidad de la muestra colocada en la cmara de Neubauer, contando el nmero de elementos que se encuentran en el retculo de la cmara y mediante una operacin matemtica se obtiene la cifra total. Material: Tubos de ensayo de 13x100mm pipetas de Thomas para glbulos rojos cmara de Neubauer boquillas microscopio gasa gradilla sangre capilar o venosa con anticoagulante Cmara de Neubauer La que ms se utiliza es la de Neubauer que presenta un retculo con una superficie total de 9mm2 dividida en 9 cuadros de 1mm2 los cuatro cuadros grandes de los extremos son los que usualmente se emplean para contar

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leucocitos. De los 9 cuadros centrales grandes el central es el nico dividido en 25 cuadros. Reactivos: EDTA (sal di sdica) al 10% Lquido de Hayem: Cloruro de mercurio 0.5 g Cloruro de sodio 1.0g Sulfato de sodio 5.0g Agua destilada 100ml Procedimiento: Las pipetas estn constituidas por dos porciones capilares y un bulbo central. El tubo capilar inferior est dividido en 10 partes iguales con marcos de0.5 y 1.0. En el interior del bulbo existe una perlita de plstico (roja), para favorecer la mezcla de la sangre con el lquido y en el capilar superior hay una marca 101. 1.- llenar con sangre bien mezclada la pipeta de Thoma, hasta la marca 0.5. 2.- se limpia cuidadosamente con gasa la parte externa de la pipeta. 3.- completar con lquido de Hayem hasta la marca 101. 4.- agitar durante 3 minutos para mezclar perfectamente. 5.- colocar el cubre hematmetro sobre la cmara. 6.- desechar las primeras 4-5 gotas de la pipeta y llenar la cmara por uno de los bordes del cubre hematmetro. 7.- se deja que el lquidos penetre lentamente entre la cuadrcula y el cubre hematmetro hasta que la plataforma de recuento este completamente cubierto. 8.- dejar reposar de 3.5 minutos sobre la platina del microscopio. 9.- con objetivo de 40x se encuentra los eritrocitos contenidos en 80 cuadros pequeos; uno central y cuatro de los extremos.

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Clculos: Si se considera que el retculo central tiene 400 cuadritos se realizar el siguiente clculo. N x 200 x 10 x 400 = N x 10,000 80 N= nmero de eritrocitos contados 200= factor de dilucin 10= correccin x altura de la cmara Valores de referencia: Hombres 4.5 x 106 - 5.5 x 106 mm3 Mujeres 4.3 x 106 - 5.0 x 106 mm3 Los ndices eritrocitarios Sirven para clasificar a los eritrocitos de acuerdo a su tamao y contenido de hemoglobina Se utiliza el hematocrito y la cuenta de eritrocitos para calcular los ndices: -VCM (Volumen Corpuscular Medio) -CMHC (Concentracin Media de la Hemoglobina Corpuscular) -HCM (Hemoglobina Corpuscular Media) Es posible medir de manera directa los ndices eritrocitarios en contadores celulares automticos. Por ejemplo: el coulter; al pasar los eritrocitos a travs de un orificio en el cual fluye una corriente elctrica.

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cuestionarios Para qu sirven los ndices eritrocitarios?

Para qu se utiliza el hematocrito y la cuenta de eritrocitos?

Cules son los valores de referencia en un hombre?

Con que aparato es posible medir de manera directa los ndices eritrocitarios?

Qu significan las siglas CMHC?

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PRACTICA 6 Morfologa de los glbulos rojos

INTRODUCCION: se utiliza para el diagnstico de algunas anemias, presentan alteraciones caractersticas esferocitosis hereditaria, hemoglobinopatia S, eliptocitosis congnita. Asimismo, ante cualquier anemia de origen desconocido, resulta til valorar la intensidad de la policromatofilia, presencia de normoblastos, punteado basfilo, anillos de Cabott, cuerpos de Howell-Joly.

Fundamento: La sangre es un tejido fluido de un color rojo caracterstico por la presencia de la hemoglobina contenido en los eritrocitos. La sangre es considerada un tipo de tejido conectivo especializado. Presenta una fase slida, integrada por los elementos formes que comprende a los glbulos blancos, los glbulos rojos y las plaquetas; y una fase lquida, o fraccin a celular (matriz), representada por el plasma sanguneo.

Los eritrocitos en la sangre se presentan como discos circulares homogneos de tamao casi uniforme, variando entre 6 micras a 8 micras de dimetro, sin embargo se pueden encontrar tamaos desde 5.5 a 9.5 micras de dimetro, en el centro los eritrocito son ms plidos que en la periferia, en enfermedades el eritrocito varia de contenido de hemoglobina, tamao, propiedades de tincin y estructura. MATERIALES Sangre con anticoagulante. Lmina portaobjetos. Pipeteador. Wright. Agua destilada. Microscopio. Aceite de inmersin.

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PROCEDIMIENTO Se realiza un extendido sanguneo. Se deja secar. Se cubre con colorante de Wright. Se diluye con agua destilada (30 gotas). Se esperan 10 minutos. Se deja secar. Se observa en el microscopio en 100X. MORFOLOGA NORMAL Caninos: clulas de tamao similar y palidez central destacada. Felinos: clulas ms pequeas que las del canino, ligera anisocitosis y palidez central limitada.

ANORMALIDADES EN EL TAMAO. Como se anot anteriormente el dimetro de la clula roja oscila entre 6.2 - 8.2 micras con un tamao promedio de 7.2 micras. Cuando patolgicamente se aumenta o disminuye dicho dimetro el resultado ser: Macrocitos: Son eritrocitos con dimetro superior a 8.5 micras. La macrocitosis est usualmente acompaada de un PVC por encima de 100 fL. Su aparicin puede estar asociada a: Deficiencia de vitamina B12 y/o cido flico. Estrs medular cuando hay eritropoyesis acelerada. Trastornos hepticos. Es importante anotar que normalmente los extendidos de sangre perifrica de neonatos se caracterizan por presentar una macrocitosis significativa.

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Cuestionario: Para qu sirve la morfologa de los eritrocitos?

Qu son los macrositos?

Este tipo de eritrocito tiene dimetro superior a 8.5 micras, y est usualmente acompaada de un PVC por encima de 100 fL.

Por qu la prueba de drepanocitos cambia la morfologa de los eritrocitos?

Qu se nota en la anormalidad de tamao de un eritrocito?

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Practica 7

RECUENTO MANUAL DE LOS RETICULOCITOS. Los eritrocitos atraviesan seis etapas hasta conseguir su maduracin. Los reticulocitos son los glbulos rojos jvenes que circulan en la sangre desde hace menos de un da (duracin de vida de los glbulos rojos:120 das ). Estos se encuentran ya en mdula sea y en sangre perisfrica, en mdula sea permanecern 2 das madurando, y en sangre perisfrica 1 da ms. Convirtindose finalmente en hemates maduros.
INTRODUCCION Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros no nucleados que contiene RNA residual. En la secuenciad e m a d u r a c i n d e l e r i t r o c i t o , s t e permanecer dos das en la mdula sea y un da en al s a n g r e perifrica, al madurar el eritrocito disminuye la cantidad de RNA

Fundamento: Ellos se evidencian sobre unos frotis gracias a ciertos colorantes supravitales como el azul de metileno o azul de cresil brillante, que permite observar los organoides citoplasmticos que an llevan y que han desaparecido en los glbulos rojos adultos: es la <<sustancia reticulofilamentosa>>. La tcnica ha de realizarse a ser posible antes de que transcurra 2 horas de la extraccin, con un mximo de 24 horas. Puede apreciarse sobre un porta el porcentaje de glbulos rojos que son reticulocitos, pero es deseable expresar los resultados en valores absolutos, as pues como el ciclo vital de un hemates es de 120 das, la mdula sea reemplaza todos los das aproximadamente 1% de hemates. Material y reactivo: Microscopio 100x. Portas. Tubo comercial con azul cresil billante al 1% o azul de metileno. Pipeta Pasteur.

Muestra: - Sangre venosa con EDTA o sangre capilar.

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Procedimiento: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Aadir 3 gotas de sangre al tubo comercial. Mezclar bien. Incubar a temperatura ambiente de 10 a15 minutos. Volver a mezclar y hacer las extensiones. Dejar secar. Observar con objetivo de inmersin 100x.

Clculo: Se realiza el recuento de reticulocitos en 10 campos, en los cuales, haya aproximadamente 100 hemates/campo. Seguidamente calculamos la proporcin de reticulocitos en dichos campos.
% Reticulocitos = n de reticulocitos observados n de hemates contados
X 100

Valores normales: En adultos de 0.5 a 2%. En recin nacidos de 2,5 a 6,5%, alcanzando al valor del adulto a las dos semanas de vida.

Cuando existe anemia, con disminucin del nmero de hemates. Su valor deber ser corregido de acuerdo a la intensidad de la anemia, aplicndose la siguiente frmula:
% Reticulocitos corregidos = % reticulocitos observados x hematocrito del paciente hematocrito normal (45)

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Cuestionario: Qu ocurrira si existe anemia con disminucin del nmero de hemates?

Qu son los reticulocitos?

Cul es la muestra que se necesita?

Cules son los valores normales de un recin nacido?

y cules son los valores normales de un adulto?

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PRACTICA 8 *CUENTA LEUCOCITARIA Introduccin: La leucopoysis es un proceso que se lleva a cabo con gran actividad, ya que si el nmero de granulocitos circulantes de ninguna manera es comparable al de los eritrocitos, en cambio se estima que la sobrevida de los neutrfilos no excede de 5 das, de las cuales solo pasan 10 hrs. en la sangre circulante. Fundamento: La sangre se diluye 1:2 con una solucin hipotnica de cido actico que destruye a los eritrocitos. El azul de metileno permite reconocer fcilmente el lquido y observar mejor los glbulos blancos, a los que tie ligeramente Los normoblastos no se destruyen, por lo que se deben tomar en cuenta para corregir los resultados Material: Tubos de ensayo de 13 x 100mm Pipeta de Thoma para glbulos blancos Cmara de Neubauer Microscopio Boquillas Gasa Sangre capilar o venosa con anticoagulante Reactivos: EDTA (sal disdica) al 10 % Liquido de Turk: cido actico glacial 3.0 ml Agua destilada c.b.p. 100 ml

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Adicionar 1 o 2 gotas de azul de metileno Procedimiento 1.- Llenar la pipeta con sangre bien mezclados hasta la marca de .5 2.- Limpiar cuidadosamente la pipeta por fuera 3.- Aforar con solucin de Turk hasta la marca de II 4.- Agitar la pipeta durante 3 min. 5.- Se desechan las primeras 4 o 5 gotas de la pipeta y se carga la cmara de Neubauer 6.-Dejar reposar la cmara durante 3 min. 7.- En el microscopio con el objetivo de 10x, se cuentan los leucocitos presentes en los cuatro cuadros grandes de los extremos 8.- Multiplicar por 50 el promedio de los leucocitos con la siguiente frmula Clulas contadas x 20 (dilucin) x 10 (correccin de altura) / 4 (nm. De cuadro de 1mm contados) Este factor vara si se cambia la dilucin y o el nmero de cuadros contados *En caso de existir normoblastos (eritrocitos nucleados) deber hacer la cuenta diferencial leucocitaria Valores de referencia: Leucocitos: -Adultos: 5000 - 10 000 / mm3 - Recin nacidos: 10 000 - 25 000 / mm3 -Nios: 8000 - 15 000 Por este proceso se podr decir cuntos normoblastos hay por cada 100 leucocitos. Ejemplo: Si hay 28 normoblastos por cada 100 leucocitos se aplica la siguiente relacin: 128 - 100 12000 -- x

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x = 9375 leucocitos La cuenta leucocitaria diferencial es el conteo del nmero de los distintos tipos de leucocitos. Identifica a los individuos con una mayor susceptibilidad a la infeccin Valores de referencia: Valores normales en la cuenta leucocitaria

En el recin nacido de 10 a 26 mil/mm3

A los 3 meses de 6 a 18 mil/mm3

Al ao de vida de 8 a 16 mil/mm3

Entre los 3 y 5 aos de 10 a 14 mil/mm3

De los 5 a los 15 aos de 5,5 a 12 mil/mm3

En el hombre adulto de 4,5 a 10 mil/mm3

En la mujer adulta de 4,5 a 10 mil/mm3

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CUESTIONARIO: Para qu sirve el recuento leucocitario?

Qu liquido nos permite reconocer fcilmente el lquido y observar mejor los glbulos blancos, a los que tie ligeramente?

Qu es un leucocito?

Cules son los 2 tipos de leucocitos que podemos encontrar gracias a este procedimiento?

Cules son los valores de referencia en un hombre adulto?

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Practica 9 Recuento diferencial de glbulos blancos OBJETIVO: Efectuar la cuenta diferencial de leucocitos utilizando la tincin de Wright, identificando los diferentes tipos de glbulos blancos (Neutrfilos, Linfocitos, (Clulas B y T), Monocitos, Eosinofilos, Basfilos) contenidos en un frotis teido, para la determinacin de posibles leucemias o para el complemento de una biometra hemtica. FUNDAMENTO: La tincin de Wright es una tincin de tipo Romanowsky. Es extremadamente importante en el laboratorio de hematologa este tipo de tincin, ya que puede obtenerse una cantidad abundante de informacin a partir del examen de un frotis de sangre perifrica bien teido Una tincin de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidacin, as como eosina Y o eosina B.

INTRODUCCIN: La cuenta diferencial mide los porcentajes de cada tipo de leucocitos, el conteo de estos puede indicar enfermedades inflamatorias, leucemia, linfoma y trastornos de medula sea. En el ser humano existen un conjunto de clulas sanguneas que son los efectores celulares de la respuesta inmunitaria, estos se llaman leucocitos, como ya sabemos estos intervienen en la defensa del organismo contra sustancias extraas o agentes infecciosos (conocidos como antgenos), podemos clasificar a los leucocitos como constituyentes del sistema inmunolgico. MATERIAL:

REACTIVOS: * Colorante Wright * Agua destilada * Aceite de inmersin

Muestra de sangre Portaobjetos Pipeta Microscopio

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PROCEDIMIENTO: 1.- Frotis sanguneo 1.1.- se coloca una pequea gota de sangre en un porta objetos (Fig. 1) 1.2.- se coloca un segundo porta objetos formando un ngulo de 45 con el primero, asegurndose de que se apoya en todo el borde. (Fig. 2) 1.3.- se desliza lentamente el porta objetos hacia la gota de sangre (veras como la sangre se extiende por el borde) (Fig. 3) 1.4.- ahora con un movimiento rpido y uniforme se desliza el porta objetos haciendo que la gota de sangre se extienda sobre todo el porta objetos. (Fig. 4) 2.- Tincin de Wright 2.1.- Una vez hecho el frotis sanguneo se deja secar 2.2.- Despus se cubre el frotis con colorante Wright 2.3.- Se diluye con agua destilada (30 gotas) 2.4.- Se espera 10 min. 2.5.- Se deja secar. 3.- se observa al microscopio a 100x

INTERPRETACIN DE RESULTADOS:

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NOTA: la formula leucocitaria absoluta nos indica la cantidad de elementos por milmetro cubico.

VALORES DE REFERENCIA CELULAS Neutrfilos totales Neutrfilos segmentados Neutrfilos en banda Linfocitos Monocitos Eosinofilos Basfilos VALORES RELATIVOS 40 65% 40 - 65% 0 2% 20 - 45% 4 - 9% 1 4% 0 1% VALORES ABSOLUTOS 2,500 7,000 / mm3 2,500 7,000 / mm3 0 200 / mm3 1,500 4,500 / mm3 200 800 /mm3 40 440 mm3 0 100 /mm3

VALORES NORMALES EN LA CUENTA LEUCOCITARIA En el recin nacido de 10 a 26 mil/mm3 A los 3 meses de 6 a 18 mil/mm3 Al ao de vida de 8 a 16 mil/mm3 Entre los 3 y 5 aos de 10 a 14 mil/mm3 De los 5 a los 15 aos de 5,5 a 12 mil/mm3 En el hombre adulto de 4,5 a 10 mil/mm3 En la mujer adulta de 4,5 a 10 mil/mm3

Alteracin en los parmetros normales La disminucin en el nmero de leucocitos es denominado como leucopenia. Esta aparece en procesos de depresin o fallo de la actividad de la mdula sea por diferentes factores como son:

* las infecciones virales, * enfermedades del hgado y rin * mononucleosis, * fiebre tifoidea, * tumores,

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* fibrosis, * intoxicaciones y dems; asimismo, * tratamientos con quimioterpicos, * ingestin de sales de oro o metales pesados, Presencia de sustancias citotxicas e intoxicaciones diversas como arsnico o benceno, ESQUEMAS:

Fig. 1

Fig. 2

Fig. 3

Fig. 4

RESULTADOS:

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COMENTARIOS:

CUESTIONARIO: 1. Para qu se usa la tincin de Wright?

2. Cules son los factores que pueden incluir en el resultado de una buena tincin?

3. Cmo podemos medir los porcentajes de cada tipo de leucocitos, ya que estos puede indicar enfermedades?

4. Cules son los reactivos que utilizamos para esta prctica?

5.- La disminucin en el nmero de leucocitos Cmo es denominado?

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Practica 10 Recuento de Plaquetas OBJETIVO: Realizar el conteo de plaquetas existentes en un milmetro cbico de sangre total. Las plaquetas son las que ayudan a la coagulacin de la sangre y son ms pequeas que los glbulos blancos y los glbulos rojos. FUNDAMENTO:

INTRODUCCION: Las plaquetas son clulas producidas por los megacariocitos en la mdula sea mediante el proceso de fragmentacin citoplasmtica, circulan por la sangre y tiene un papel muy importante en la coagulacin. Para ello forman nudos en la red de fibrina, liberan substancias importantes para acelerar la coagulacin y aumentan la retraccin del cogulo sanguneo. En las heridas las plaquetas aceleran la coagulacin, y adems al aglutinarse obstruyen pequeos vasos, y engendran substancias que los contraen. El recuento de plaquetas es la medida de concentracin de plaquetas que circulan por la sangre y junto a los eritrocitos, leucocitos, concentracin de hemoglobina, el valor de hematocrito y los ndices eritrocitarios (VCM, HCM, CCHM), constituyen el llamado perfil hematolgico bsico o hemograma. El resultado del RECUENTO DE PLAQUETAS es importante ya que desempea un papel vital en la hemostasia. Los recuentos celulares pueden realizarse mediante mtodos manuales (recuentos en cmara) o automticos (recuentos en contadores electrnicos MATERIALES 1. cmara de Neubauer 2. Solucin de procana 3. Pipetas 4. Cmara hmeda 5. Tubos de ensaye 6. Microscopio

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MTODO 1. Mezclar bien la muestra de sangre obtenida con EDTA 2. Hacer una dilucin de 20 ul de sangre total con 380 uL de solucin de procana en un tubo de ensaye (dilucin 1/20). 3. Dejar en reposo por 15 minutos en una gradilla. 4. De esta dilucin, llenar en cmara de Neubauer. 5. Dejar en reposo por 15 minutos en cmara hmeda. 6. Enfocar con objetivo de 40x y contar las plaquetas en el retculo central de 1 mm2 cuadrado. 7. Calcular el nmero total de plaquetas segn la frmula que se lee a continuacin:

RESULTADOS Se aplica la siguiente frmula: N de plaquetas x mm3 = plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos altura x dilucin x rea Reemplazando

= plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos 1/10 x 1/20 x 1/5 = plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos 1/1000 = plaquetas contadas x 1000 Valores de referencia 150 000 - 450 000 plaquetas/mm3 Recuento en lmina Se cuentan 10 campos con objetivo de 100x y se multiplica por 1000 que es la Frmula convencional para recuento de plaquetas. Valores de referencia 150 000 - 450 000 plaquetas/mm3

Un nmero de plaquetas por debajo de lo normal (trombocitopenia) puede deberse a:

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Quimioterapia contra el cncer Ciertos medicamentos Coagulacin intravascular diseminada (CID) Anemia hemoltica Hiperesplenismo Prpura trombocitopnica idioptica (PTI) Leucemia Transfusin de gran cantidad de sangre Vlvula cardaca protsica Prpura trombocitopnica trombtica (PTT) Celiaqua Deficiencia de vitamin k

Un nmero de plaquetas ms alto de lo normal (trombocitosis) puede deberse a:

Anemia Leucemia mieloctica crnica (LMC) Policitemia vera Trombocitemia primaria Extirpacin reciente del bazo

ESQUEMAS:

RESULTADOS:

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COMENTARIOS:

CUESTIONARIO: Para qu sirve el recuento de plaquetas?

Qu son las plaquetas?

Porque es importante el resultado del recuento de plaquetas?

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