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TECNICA DE FISH

Se utiliza sondas especficas para determinados cromosomas o secuencias de ellos. Se desnaturaliza el ADN con calor y se incuban las muestras con formamida y tampn o bien son a su vez detectables por un intermediario marcado con fluorescencia. Esto nos permite poner de manifiesto alteraciones cromosmicas (translocaciones, deleciones, monosomas y trisomas). Para utilizar la FISH es necesario que las clulas se encuentren en metafase o en interface. Para estudiar pequeas translocaciones cromosmicas con sondas completas de un determinado cromosoma, la tcnica ha de realizarse en metafase con los cromosomas separados para lo cual es necesario disponer de un cultivo celular75. Es una tcnica de gran sensibilidad que puede realizarse con relativa rapidez. El FISH centromrico permite contar exactamente el nmero de centrmeros presentes en una clula, o valorar varios centrmeros a la vez en cada clula usando zonas de varios colores, adems requiere una cantidad de ADN muy pequea. Las desventajas de esta tcnica es que es muy laboriosa, no permite estudiar las muestras varias veces , no puede ser automatizada y es difcil la diferenciacin morfolgica entre clulas normales y malignas25. Se emplea tres tipos de sondas21: 1. Pintado de cromosomas: Es una sonda compuesta por: a. secuencia especfica de un cromosoma, y b. secuencias compartidas por otros cromosomas. El resultado obtenido es una hibridacin uniforme en todo el cromosoma diana. 2. Sondas centromricas: Se basan en el ADN satlite alfa (a), que son secuencias especficas de cada cromosoma. 3. Sondas de csmidos: vectores que cionan fragmentos grandes de ADN de eucariotas.

Aplicacin en dermatologa
Identificacin de anomalas cromosmicas en muestras prenatales (numricas. translocaciones, etc), deteccin de translocaciones especficas de determinados tipos tumorales o t(9,11) o t(9,22)en leucemias mieloides,

altercaciones del cromosoma 12 en los lipomas) o incluso deteccin de amplificaciones de oncogenes como el neu en los carcinomas de mama o de prstata, o deteccin de insercin cromosmica de genomas virales. Se ha detectado la presencia de trisoma 7 en algunos estudios de queratoacantomas, una alteracin tambin descrita en el carcinoma epidermoide de piel76. Al igual que el estudio de p53 mediante PCR, se ha utilizado FISH para valorar los mrgenes de reseccin de neoplasias. Valorando el nmero de copias de ciertos cromosomas en clulas epiteliales descamadas mediante cepillado, puede detectarse clulas tumorales en mrgenes aparentemente libres de tumor en el carcinoma epidermoide de cavidad oral77