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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BAJA CALIFORNIA

FACULTAD DE MEDICINA Y PSICOLOGIA


MANUAL DE ANÁLISIS CLINICOS

Código: L1M-N3- Efectividad:


No.de Revisión: 2
001 2009-1

Facultad de Medicina y Psicología

Manual de Laboratorio de Análisis Clínicos

Autor(es): QFB. Selene Valerio Naranjo Firma: Fecha: Enero 2009


Revisó: QFB. René Francisco Bassó Quevedo Firma: Fecha: Enero 2009
Autorizó: Dra. Sara Cortés Bargalló Firma: Fecha: Enero 2009
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MANUAL DE ANÁLISIS CLINICOS

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OBJETIVOS Y CONTROL DE CALIDAD

Sesión 1
Introducción al Curso y Control de Calidad

1. Objetivos:

Al finalizar la sesión el alumno:


-Conocerá el propósito y los objetivos del curso.
-Habrá leído la NOM-166-SSA1-1997

2. Fundamentos:

En esta primera sesión es importante que el alumno conozca los propósitos y objetivos
del curso, así como las normas que se seguirán a lo largo del semestre, además de los
mecanismos de evaluación.

Es necesario también conocer la legislación que regula el funcionamiento de los


laboratorios de análisis clínicos en nuestro país.

3. Recursos necesarios:

- Una copia por alumno de la NOM-166-SSA1-1997

4. Descripción de la Actividad:

- Se leerá el reglamento del laboratorio y se resolverán dudas que se planteen.


- El alumno leerá la NOM-166-SSA1-1997
- Se formarán equipos de trabajo y se asignará la mesa para cada equipo.

5. Resultados: (No procede este inciso en esta sesión)

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6. Conclusiones:

7. Mecanismos de evaluación:

- Cada alumno presentará por escrito algunas consideraciones sobre la


Norma Oficial Mexicana estudiada en esta sesión.

8. Bibliografía:

-NOM-166-SSA1-1997

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TOMA DE MUESTRAS / MANEJO DE RESIDUOS

Sesión 2
Muestras Biológicas

1. Objetivos:

Al finalizar la sesión el alumno conocerá:


-La técnica para la punción venosa
-El sistema de tubos al vacío y su código de colores
-Las indicaciones para el uso de los anticoagulantes y conservadores
utilizados comúnmente en el laboratorio clínico
-El contenido de la NOM-087-ECOL-1995

2. Fundamentos:

La sangre para análisis puede ser obtenida de venas, arterias o capilares. La muestra que
se utiliza con mayor frecuencia es la obtenida por punción venosa. En niños pequeños
frecuentemente se utiliza la punción en la piel para obtener sangre capilar. La punción
arterial se utiliza principalmente para obtener muestra para análisis de gases en sangre.
Actualmente es mas utilizado el sistema de tubos evacuados (es decir, al vacío), aunque
también se puede utilizar una aguja y jeringa.
Es responsabilidad de médicos y personal de laboratorio tener la habilidad,
conocimientos y paciencia para realizar la punción venosa con el mínimo de molestias al
paciente.

3. Recursos necesarios:

-Solución alcohólica desinfectante


-Torundas de algodón
-Torniquete
-Sistema de tubos al vacío con agujas y sujetador y/o jeringas con agujas.

-Una copia por alumno de la NOM-087-ECOL-1995

4. Descripción de la Actividad:
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a) El alumno leerá la NOM-087-ECOL-1995 y se resolverán las dudas que se


planteen.

b) Cada alumno efectuará una punción venosa, con la siguiente técnica:

1. Posicionar al paciente apropiadamente para tener un acceso fácil y cómodo a la fosa


antecubital.
2. Preparar el equipo a utilizarse: tubos de recolección, torniquete, jeringas, agujas, material
para la asepsia, etc.
3. Pedir al paciente que cierre su puño para hacer sus venas mas palpables.
4. Seleccionar una vena apropiada para la punción. Las venas de la fosa antecubital, en
particular la mediana cubital y la cefálica son las preferidas. En caso necesario se pueden
utilizar las venas de la muñeca, tobillos y manos. Si un brazo tiene una línea intravenosa,
utilizar el otro brazo para la recolección de la muestra.
5. Esterilizar el sitio de la punción con una torunda impregnada en solución alcohólica
desinfectante, iniciando en el sitio de la punción y siguiendo hacia afuera en movimiento
circular. Permita que seque el área. No toque esta área con ningún objeto no estéril.
6. Colocar el torniquete arriba de la zona de punción, nunca dejándolo por más de un
minuto.
7. Fijar bien la vena tanto abajo como arriba de la zona de punción, utilizando su pulgar y el
índice o el pulgar y el dedo medio.
8. Realice la punción, penetrando la piel a un ángulo aproximado de 15°, con el bisel de la
aguja hacia arriba, procurando minimizar la incomodidad al paciente. Jale el émbolo de la
jeringa suavemente o llene los tubos al vacío en este momento.
9. Libere el torniquete tan pronto como la sangre empiece a fluir.
10. Después de haber tomado la muestra, pedir al paciente que abra su puño. No permita que
el paciente abra y cierre repetidamente el puño.
11. Coloque una torunda de algodón estéril ligeramente sobre el sitio, retire la aguja y
aplique presión sobre el sitio.
12. Coloque una banda adherible al sitio o sobre el algodón.
13. Mezcle los tubos con anticoagulante.
14. Descarte el material contaminado de forma apropiada.
15. Asegúrese que el paciente se encuentre en buenas condiciones y que no esté sangrando
antes de permitirle que se retire.

5. Resultados: (Este inciso no procede en esta sesión)

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6. Conclusiones:

7. Mecanismos de evaluación:

Cada alumno:

-A fin de esquematizar el código de colores de los tapones de los tubos al vacío,


hará una tabla con los siguientes encabezados:

COLOR ADITIVO USO

-Presentará por escrito algunas consideraciones sobre la Norma Oficial Mexicana


estudiada en esta sesión.

8. Bibliografía:

-NOM-087-ECOL-1995

-National Comitte for Clinical Laboratory Standards: Standard for evacuated


tubes for blood specimen collection, NCCLS Standard ASH-1, 2a. Edición,
EUA, 1980.

-EDWARD R. ASHWOOD y CARL A. BURTIS: Tietz Fundamentals of Clinical


Chemistry, 5a. Edición, EUA, W.B. Saunders Company. 2000.

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BIOMETRIA HEMATICA: I.- FORMULA BLANCA

Sesión 3
Hematología

1. Objetivos: El alumno realizará un recuento total de leucocitos, así como un


recuento diferencial de leucocitos.

2. Fundamentos:

La biometría hemática la podemos dividir en el estudio de los glóbulos blancos


(fórmula blanca) y el estudio de los eritrocitos (fórmula roja). La fórmula blanca
incluye el recuento total y diferencial de los leucocitos; es de gran utilidad en el
diagnóstico de muchas enfermedades, y se utiliza como indicador del progreso del
paciente en infecciones.

Es necesario que el alumno conozca las metodologías para la realización


de una fórmula blanca, así como la forma de reportar los resultados y su
interpretación.

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Sangre total utilizando EDTA como anticoagulante.

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO:


-Dilutor
-Solución de Turk
-Agitador mecánico
-Microscopio
-Hemocitómetro de Neubauer
-Portaobjetos
-Colorantes para tinción de Wright o Wright-Giemsa
-Contador de teclas

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4. Descripción de la Actividad:

RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS:

-Mezcle la muestra de sangre


-Diluya 0.5 partes de sangre con 9.5 partes de diluyente de Turk
-Mezcle por aproximadamente 2 minutos
-Llene la cámara de recuento y espere aproximadamente un minuto
-Cuente los leucocitos en los cuatro cuadros grandes de las esquinas
-Calcule el número total de leucocitos por milímetro cúbico.

RECUENTO DIFERENCIAL:

-Haga un frotis sanguíneo y permita que seque


-Fije y tiña el frotis
-Registre en un contador de teclas cada leucocito que observe hasta que haya
contado 100 leucocitos
-Examine la morfología de los eritrocitos y la morfología y número de plaquetas
presentes

5. Resultados:

6. Conclusiones:

7. Mecanismos de evaluación:
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-Reporte por equipo con los resultados obtenidos


-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos

-Cuestionario (entrega individual):


1. Dibujar el rayado de Neubauer a escala señalando claramente todas sus
medidas.
2. Explique como calculó su resultado de leucocitos totales
3. Haga un dibujo de: neutrófilo segmentado, neutrófilo en banda,
linfocito, monocito, eosinófilo y basófilo.

4. y 5.: Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor.

8. Bibliografía:

-BARBARA A. BROWN: Hematology: Principles and Procedures


5a. Edición, EUA, Lea & Febiger, 1993.

-JOHN BERNARD HENRY: Clinical Diagnosis and Management by


Labortory Methods, 20a. Edición, EUA, W.B.Saunders Company, 2001.

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BIOMETRIA HEMATICA: II.- FORMULA ROJA

Sesión 4
Hematología

1. Objetivos: El alumno podrá realizar e interpretar un hematocrito.


Conocerá el manejo del espectrofotómetro.
Aprenderá a calcular los índices hemáticos y sabrá interpretarlos.

2. Fundamentos:

La fórmula roja consiste generalmente en la determinación de la concentración de


hemoglobina, el hematocrito y los índices hemáticos. Con el surgimiento de los
contadores electrónicos de células se ha incluido también el recuento total
eritrocitos. Es necesario examinar la morfología celular en un frotis observado
con el microscopio.

La biometría hemática es quizá el procedimiento realizado con mayor frecuencia


en un laboratorio de análisis clínicos y es uno de los análisis que brinda mayor
Información sobre el estado de salud de paciente. En particular, la fórmula roja es
necesaria para el manejo de las anemias.

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Sangre total utilizando EDTA, mezcla de oxalatos o heparina como


anticoagulante.

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO:


-Tubos capilares para microhematocrito
-Plastilina o mechero para sellar un extremo del capilar
-Centrífuga para microhematocrito.
-Lector de tubos de microhematocrito o regla
-Reactivo de cianometahemoglobina
-Solución estándar de cianometahemoglobina
-Pipetas y tubos de ensayo
-Espectrofotómetro

4. Descripción de la Actividad:

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DETERMINACION DEL HEMATOCRITO:

-Mezcle la muestra de sangre


-Llene aproximadamente 2/3 de un tubo capilar con la muestra
-Selle un extremo del tubo con plastilina o con la llama del mechero
-Centrifuge por 5 minutos a 11,500-15,000 rpm
-Registre el resultado.

CONCENTRACION DE HEMOGLOBINA:

-Siga las instrucciones del fabricante de los reactivos.

5. Resultados:

6. Conclusiones:

7. Mecanismos de evaluación:

-Reporte por equipo con los resultados obtenidos


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-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos.

-Cuestionario (entrega individual):


1. ¿Qué significan las siglas en inglés CBC, WBC y RBC?
2. Defina los términos poiquilocitosis y anisocitosis. Cite ejemplos.
3. ¿Qué son los índices hemáticos, como se determinan y cual es su
utilidad?

4. y 5.: Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor.

ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA: El alumno visitará algún laboratorio que


cuente con equipo automatizado para la realización de una biometría hemática, a fin de
que se familiarice con el conteo electrónico de células.

8. Bibliografía:

-BARBARA A. BROWN: Hematology: Principles and Procedures


5a. Edición, EUA, Lea & Febiger, 1993.

-JOHN BERNARD HENRY: Clinical Diagnosis and Management by


Labortory Methods, 20a. Edición, EUA, W.B.Saunders Company, 2001.

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RECUENTO DE PLAQUETAS, TIEMPO DE SANGRADO Y


TIEMPO DE PROTROMBINA
Sesión 5
Hemostasis

1. Objetivo: El alumno podrá realizar algunos análisis para valorar la hemostasis


de un paciente, conocerá la utilidad de éstos y los valores de referencia.

2. Fundamentos:

La hemostasis es el proceso que retiene la sangre dentro del sistema vascular.


Cuando se presenta una herida en un vaso sanguíneo, el proceso hemostásico está
diseñado para repararlo y detener la hemorragia. La primera respuesta al sangrado es la
vasoconstricción, después las plaquetas se agregan y adhieren al vaso dañado para inhibir
el sangrado. Los factores de la coagulación se activan, interactuando para formar la
fibrina y el coágulo que detiene el sangrado. Posteriormente se inicia la lisis lenta del
coágulo y la reparación total.
El laboratorio de análisis clínicos aporta al médico mucha información para la valoración
de la hemostasis y la coagulación.

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Sangre total utilizando EDTA como anticoagulante.


Plasma citratado.

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO:

-Líquido para dilución de plaquetas


-Hemocitómetro de Neubauer
-Caja de Petri y papel filtro
-Microscopio
-Lanceta
-Papel filtro circular
-Reloj
-Torundas con alcohol

-Baño de agua a 37°C


-Mezcla de cloruro de calcio-tromboplastina
-Tubos de ensayo

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-Plasma control en el rango normal

4. Descripción de la actividad:

RECUENTO DE PLAQUETAS:

-Mezcle la muestra y efectúe una dilución 1:200 con el líquido diluyente


-Llene el hemocitómetro y colóquelo en una cámara húmeda
-Espere 15 minutos
-Utilizando el objetivo 40X cuente las plaquetas de los cuatro cuadros grandes
de las esquinas
-Calcule el número total de plaquetas por milímetro cúbico.

TIEMPO DE SANGRADO (Método de Duke):

-Limpie el lóbulo de la oreja con una torunda con alcohol y permita que seque.
-Efectúe una punción profunda con la lanceta, inicie el cronómetro.
-Con el papel filtro absorba la sangre cada 30 segundos sin tocar la herida.
-Cuando cese el sangrado, pare el reloj y registre el tiempo de sangrado.

TIEMPO DE PROTROMBINA:

-Siga las instrucciones del fabricante de los reactivos.

5. Resultados:

6. Conclusiones:

7. Mecanismos de evaluación:

-Reporte por equipo con los resultados obtenidos


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-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos

-Cuestionario (entrega individual):


1. Explique como calculó (operaciones realizadas) el número de plaquetas
por milímetro cúbico.
2. Haga un esquema en forma de cascada que muestre la interacción entre
los factores de la coagulación.
3. Enumere al menos 4 causas que prolonguen el tiempo de protrombina

4. y 5.: Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor

8. Bibliografía:

-BARBARA A. BROWN: Hematology: Principles and Procedures


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TIPO SANGUINEO Y PRUEBA CRUZADA MAYOR

Sesión 6
Inmunohematología

1. Objetivo: El alumno conocerá su tipo sanguíneo y hará un esquema indicando a que


tipos sanguíneos puede donar sangre y de cuales puede recibir.

2. Fundamentos:

Anualmente se realizan millones de transfusiones sanguíneas, por lo que la aplicación


mas importante de la inmunohematología es en la transfusión sanguínea segura. Una
segunda aplicación es el conocimiento de la patogénesis, diagnóstico y prevención de la
inmunización Rh asociada al embarazo.
Además de sus aplicaciones en la medicina clínica, la inmunohematología hace
importantes contribuciones en las áreas de genética humana, antropología, criminología y
otras aplicaciones de la medicina legal.

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Sangre total del donador y suero del receptor.

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO;


-Sueros hemoclasificadores anti-A, anti-B y anti-D
-Suero de Coombs (antiglobulina humana)
-Tubos de ensayo, placas de vidrio y/o portaobjetos
-Aplicadores de madera
-Pipetas de transferencia
-Microscopio
-Centrífuga
-Baño María a 37°C

4. Descripción de la Actividad:

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DETERMINACION DE GRUPOS SANGUINEOS:

Prueba en placa o portaobjetos:


-Colocar separadamente una gota de suero anti-A, anti-B y anti-D
-Al lado de éstas depositar una gota de sangre venosa o capilar
-Con un palillo de madera distinto, mezclar y extender aprox. 2 cm
-Mover de forma circular la placa para favorecer la mezcla.
-Observe si existe aglutinación macroscópica antes de 3 minutos.

-En caso de resultado dudoso, examine la mezcla en el microscopio


con objetivo 10X
-Interprete y registre sus resultados.

Prueba en tubo:
-Centrifugar la sangre venosa y descartar el plasma.
-Preparar una suspensión entre 2-5 % de eritrocitos con solución salina
isotónica.
-Colocar una gota de anti-A, de anti-B y anti-D en tres diferentes tubos
previamente rotulados “A”, “B” y “Rh”
-Agregar una gota de la suspensión de eritrocitos a cada tubo y mezclar
-Incubar a 37°C durante 5 minutos
-Centrifugar a 1,000 rpm durante 1 minuto
-Agitar suavemente y observar si existe aglutinación macroscópica,
pudiéndose confirmar ésta por observación al microscopio.
-Interprete y registre sus resultados

PRUEBA CRUZADA MAYOR:

-En un tubo coloque 2 gotas del suero del receptor y 2 gotas de suspensión
al 5% de eritrocitos lavados del donador. Rotule el tubo “PRUEBA”
-En un tubo coloque 2 gotas del suero del receptor y 2 gotas de suspensión
de eritrocitos del receptor. Rotule este tubo como “TESTIGO”
-Mezcle y centrifuge a 1,000 rpm durante 1 minuto
-Mover suavemente el sedimento y observar si hay aglutinación.
-Si los resultados son negativos, débilmente positivos o dudosos, incubar
los tubos a 37°C durante 60 minutos.
-Centrifugar y obsevar si existe aglutinación. Si la reacción continúa sien-
do negativa, positiva débil o dudosa, lavar los eritrocitos 4 veces.
-Después del último lavado se decanta la solución salina dejando sólo
1 o 2 gotas para resuspender los eritrocitos. Agregar 1 gota de suero de

Coombs a cada tubo, mezclar bien y centrifugar a 1,000 rpm durante 1


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minuto.
-Mover suavemente el sedimento y observar si existe aglutinación. Para
confirmar reacciones débiles, observar al microscopio.
-La presencia de aglutinación se interpreta como prueba positiva (incom-
patibilidad)

-En el tubo testigo no debe haber aglutinación.

5. Resultados:

6. Conclusiónes:

7. Mecanismos de evaluación:

-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos

-Cuestionario (entrega individual)


1. Complete la siguiente tabla:

GRUPO SANGUINEO ANTIGENOS EN EL ERITROCITO ANTICUERPOS (AGLUTININAS)


O ni A ni B anti-A y anti-B
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A
B
AB

2. Mi grupo sanguíneo es: ________________, por lo que teóricamente


puedo donar sangre a los siguientes grupos:

__________________________________________________________

y puedo recibir transfusión de los siguientes grupos:

___________________________________________________________

3., 4. y 5.: Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor.

8. Bibliografía:

-IOVINE ENRIQUE y SELVA ALEJANDRO: El Laboratorio en la Clínica,


2a. Edición, Argentina, Editorial Médica Panamericana, 1979.

-BEATRIZ BAYARDO PEREZ, Apuntes de Análisis Clínicos, 5a. Edición,


México, Universidad de Guadalajara, 1978.

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PRUEBA DE EMBARAZO / HIV

Sesión 7
Inmunología

1. Objetivos: El alumno realizará algunos análisis utilizando como herramienta


la reacción antígeno-anticuerpo.

2. Fundamentos:

Muchas técnicas en el laboratorio de análisis clínicos utilizan la reacción antígeno-


anticuerpo como herramienta para detectar y/o cuantificar constituyentes
de la sangre o de otros fluidos corporales.

En la mayoría de los inmunoensayos, la muestra del paciente contiene el antígeno


(analito), y el anticuerpo se adiciona como reactivo para detectar o medir el antígeno.
Por otra parte, en los casos de enfermedad infecciosa, determinaciones serológicas,
pruebas de alergias y pruebas para anticuerpos autoinmunes, es la medición del
anticuerpo en la muestra del paciente la que es clínicamente importante. En estos casos,
se utiliza como reactivo un antígeno de composición conocida.

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Suero

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO:


-Conjunto de reactivos para determinación de prueba de embarazo.
-Conjunto de reactivos para practicar prueba de HIV.

4. Descripción de la actividad:

El alumno leerá íntegramente el inserto del fabricante de los reactivos (uso, fundamentos,
descripción de los componentes, requerimientos de muestra, almacenamiento, estabilidad,
procedimiento, control de calidad, interpretación, etc.)

Se realizarán las pruebas siguiendo estrictamente las instrucciones del fabricante.

5. Resultados:

6. Conclusiones:

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7. Mecanismos de evaluación:

-Reporte por equipo con los resultados obtenidos


-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos

-Cuestionario (entrega individual):


1. Enumere al menos 12 análisis de laboratorio cuyo fundamento sea la
reacción inmunológica.
2. ¿Qué significa ELISA?
3. Explique en que consiste la prueba de Western-blot y porqué es necesaria.
4. Definir sensibilidad y especificidad
5. Explique la ventaja de utilizar una prueba de embarazo que determine la
fracción ß de la HGC sobre una que detecte la HGC íntegra.

…Cada semestre el profesor podrá adicionar algunas preguntas.

8. Bibliografía:

-LAWRENCE KAPLAN, AMADEO PESCE y STEVEN KAZMIERCZAK:


Clinical Chemistry, Theory, Análisis, Correlation, 4a. Edición, EUA,
Mosby, 2003.

-ENGVALL, E.: “Enzyme immunoassay ELISA and EMIT”, Methods in


Immunology, 70:419-439, EUA, 1980

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EXAMEN GENERAL DE ORINA

Sesión 8
Urianálisis

1. Objetivos: El alumno practicará el examen físico, químico y microscópico en una


muestra de orina.

2. Fundamentos:

EXAMEN FISICO:
El examen físico de la orina incluye la determinación de su color, aspecto
y gravedad específica. La observación de éstas características provee información
preliminar respecto a algunas enfermedades como sangrado glomerular, enferme-
dad hepática, errores innatos del metabolismo e infección en el tracto urinario. Es-
tos resultados pueden utilizarse para confirmar o explicar algunos resultados del
examen químico y microscópico de la orina.

EXAMEN QUIMICO:
Las tiras reactivas para el examen de la orina proveen un método rápido y
sencillo para practicar análisis químicos de significado clínico, incluyendo el pH,
proteína, glucosa, cuerpos cetónicos, sangre, bilirrubina, urobilinógeno, nitritos,
estearasa leucocitaria y gravedad específica.

EXAMEN MICROSCOPICO:
El examen microscópico del sedimento urinario constituye un procedi-
miento de gran utilidad en el estudio del riñón. Podemos observar cristales orgá-
nicos e inorgánicos poco solubles, células como eritrocitos, leucocitos y células
epiteliales, así como material de naturaleza proteica insoluble como los cilindros,
además podríamos encontrar bacterias, levaduras, parásitos y muchos otros com-
ponentes.

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Muestra de orina fresca, de preferencia la primera de la mañana.

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO:


-Recipiente para recolección de orina
-Tubos cónicos graduados
-Urinómetro y/o refractómetro
-Tiras reactivas para análisis químico de la orina
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-Lector de tiras reactivas


-Centrífuga
-Portaobjetos y cubreobjetos
-Microscopio

4. Descripción de la Actividad:

EXAMEN FISICO:

-Color y aspecto:
Mezcle la muestra, utilice un tubo claro, observe contra un fondo blanco,
utilice buena iluminación, registre el color y el aspecto.

-Gravedad específica:
Siguiendo las instrucciones del fabricante, determine gravedad específica
según los métodos que se tengan disponible (urinómetro, refractómetro y/o
reacción en tira reactiva). Compare los resultados obtenidos por diferentes
métodos.

EXAMEN QUIMICO:

-Sumerga la tira reactiva en una muestra de orina bien mezclada, no centrifugada


a temperatura ambiente
-Remueva el exceso de orina tocando la tira reactiva con la pared del recipiente
-Espere el tiempo especificado para cada reacción
-Compare el color de las zonas de reacción en la tira con el esquema de colores
proporcionado por el fabricante de la tira, utilizando buena iluminación. Puede
utilizarse un lector automático de tiras reactivas.

EXAMEN MICROSCOPICO

-Mezcle la muestra y coloque 10 ml en un tubo de centrífuga


-Centrifuge a 2,000 rpm durante 5 minutos
-Decante, dejando en el tubo 1.0 ml de orina y resuspenda el sedimento
-Coloque una gota de este sedimento entre porta- y cubreobjetos
-Observe con objetivos de 10X y 40X
-Registre y reporte sus hallazgos

5. Resultados

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6. Conclusiones:

7. Mecanismos de evaluación:

-Reporte por equipo de los resultados obtenidos


-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos

-Cuestionario (entrega individual)


1. ¿Qué significan las sigles en inglés: lpf y hpf?
2. Presente una correlación clínica para cada uno de los análisis efectuados
3. Dibuje los elementos que con mayor frecuencia se identifican en un examen
microscópico del sedimento urinario

4. y 5.: Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor.

8. Bibliografía:

-SUSAN KING y MARJORIE SCHAUB: Urinalysis and Body Fluids,


4a. Edición, EUA, F.A.Davis Company, 2001

-HABER M.: Urinary Sediment: A Textbook Atlas, 1a. Edición,


EUA, American Society of Clinical Pathologists, 1981.

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No.de Revisión: 2
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ESPERMOGRAMA/ ESTUDIO DE LIQUIDO SEMINAL

Sesión 9
Semen y Otros Fluidos Corporales

1. Objetivo: Efectuar un estudio de liquido seminal y conocer sus características.

2. Fundamentos:

El examen del semen usualmente se practica como parte del protocolo del estudio
de la pareja con problemas de fertilidad. Por su relativa simplicidad, frecuente-
mente se solicita antes de someter a la mujer a estudios que son mas complicados.
Además el laboratorio clínico realiza estudios postvasectomía y análisis forenses.

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Se recolecta la muestra después de un período de abstinencia sexual


de 3 días, preferentemente por masturbación.

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO


-Recipiente para la recolección de la muestra
-Recipiente para medir la muestra idéntico al de la recolección
-Probeta graduada de 10 ml
- Pipetas volumétricas de 5 ml
-Pipetas volumétricas de 10 ml
-Micropipetas de 10 y 100 uL
-Pipetas de transferencia
-Papel para determinación de pH
-Tubos de 12 x 75
-Cámara de Neubauer
-Portaobjetos y cubreobjetos
-Colorantes para Tinción Giemsa
- Varilla de vidrio
-Microscopio

4. Descripción de la Actividad:

VOLUMEN: Utilice el otro recipiente igual al de la recolección de muestra, y vierta agua


hasta el mismo volumen de la muestra, después vaciar el agua a la probeta para obtener el
volumen.

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VISCOSIDAD Y TIEMPO DE LICUEFACCION: La licuefacción debe ser total


antes de 30 minutos. Para valorar la viscosidad, sumergir una varilla de
vidrio en la muestra y medir la longitud del filamento (normal: 5-10 mm);
Otro criterio es que debe gotear libremente.

pH: Utilice un papel indicador de pH

RECUENTO: El método de conteo esta basado en el manual de la OMS.


10 micras de liquido seminal se coloca en un porta y se cubren con un cubreobjeto .
Se observa en objetivo 40x del microscopio, se observa cantidad de células espermáticas y se
decide en base a la cantidad si se elije una dilución de 1:50, 1:20, 1:10.
Se realiza con solución salina. Elegida la dilución se coloca una gota de esta en la cámara de
Neubawer, se observa en el cuadrante central y según la cantidad de células espermáticas
encontradas en un cuadrito de este cuadrante se hace el conteo.
< A 10 espermas se procede a contar 25 cuadritos.
10 a 40 espermas se cuenta 10 cuadritos.
> De 40 se cuenta 5 cuadritos.

Para realizar el cálculo se considera el factor que le corresponda.


FACTORES DE CORRECCION:

DILUCIONES # CUADROS # CUADROS


Semen + diluyente 25 10 5
1+9 10 4 2
1+19 15 2 1
1+49 2 0.8 0.4

EJEMPLO: Si la muestra es diluida 1+9 y se contaron 25 cuadros, el factor de corrección será de


10.

MOTILIDAD: Valorarla entre los 30 y 60 minutos del eyaculado.


Colocar 10 lambdas entre porta- y cubreobjetos y observar con el
Objetivo 40X del microscopio.
El porcentaje de espermatozoos con movimiento progresivo hacia
adelante puede estimarse después de observar aproximadamente
20 campos.
La motilidad se puede clasificar en la escala de A, B, C, D, indicando
4 movimiento rápido progresivo, lento, in situ, inmóvil.

MORFOLOGIA: Teñir un frotis delgado utilizando el método de Giemsa, Wright


o Papanicolaou. Observar bajo aceite de inmersión
espermatozoos y reportar como porcentaje células normales y anormales.
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La diferenciación se realiza contando células normales y anormales, clasificándolos en


anormalidades de cabeza a cuello y cola, entre normales y anormales igual a 100 células.

5. Resultados:

6. Conclusiones:

7. Mecanismos de evaluación:

-Reporte por equipo con los resultados obtenidos


-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos

-Cuestionario (entrega individual):


1. ¿Qué instrucciones da Usted al paciente para una adecuada recolección
de muestra para espermatobioscopía?
2. ¿En que consiste la prueba de Sims-Huhner?
3. ¿Cuál es el protocolo a seguir para la valoración postvasectomía?

4. y 5.: Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor.

8. Bibliografía:

-SUSAN KING y MARJORIE SCHAUB: Urinalysis and Body Fluids,


4a. Edición, EUA, F.A.Davis Company, 2001

-WORLD HEALTH ORGANIZATION: WHO Laboratory Manual for the


Examination of Human Semen and Sperm-Cervical Interaction.
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1a. Edición, Inglaterra, Cambridge University Press, 1999.

QUIMICA SANGUINEA

Sesión 10
Química Clínica

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1. Objetivos: El alumno conocerá los fundamentos de la química clínica y aprenderá


a utilizar el espectrofotómetro. Se realizará la cuantificación de algunos me-
tabolitos, primero manualmente y posteriormente con el autoanalizador.

2. Fundamentos:

Muchas de las determinaciones efectuadas en el laboratorio clínico se basan


en la medición de la energía radiante emitida, transmitida, absorbida o reflejada
bajo condiciones controladas. En esta sesión calcularemos la concentración en –
sangre de algunos metabolitos midiendo absorbancia y/o transmitancia con un
espectrofotómetro.

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Suero

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO:


-Autoanalizador
-Espectrofotómetro
-Conjunto de reactivos para determinación de diferentes analitos.
-Tubos de ensayo
-Pipetas serológicas
-Micropipetas

4. Descripción de la Actividad:

Cada equipo realizará la determinación de un analito diferente, informando sus


resultados al resto de los equipos.

El alumno leerá íntegramente el inserto del fabricante de los reactivos (uso, fun-
damentos, descripción de los componentes, requerimientos de muestra, almace-
namiento, estabilidad, procedimiento, control de calidad, interpretación, etc.)

Se realizarán las pruebas siguiendo estrictamente las instrucciones del fabricante.

ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA: En la siguiente sesión, se efectuarán las


mismas determinaciones en forma automatizada.

5. Resultados:

6. Conclusiones:

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7. Mecanismos de Evaluación:

-Reporte por equipo de los resultados obtenidos en todas las mesas


-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos

-Cuestionario (entrega individual):


1. Haga un esquema de los componentes internos de un espectrofotómetro.
2. Explique la ley de Lambert-Beer
3. Escriba la(s) reacción(es) que practicó para convertir su analito en un
producto colorido.

4. y 5.: Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor.

8. Bibliografía:

-EDWARD R. ASHWOOD y CARL A. BURTIS: Tietz Fundamentals of Clinical


Chemistry, 5a. Edición, EUA, W.B. Saunders Company. 2000.

-LAWRENCE KAPLAN, AMADEO PESCE y STEVEN KAZMIERCZAK:


Clinical Chemistry, Theory, Análisis, Correlation, 4a. Edición, EUA,
Mosby, 2003.

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ENZIMOLOGIA CLINICA / AUTOMATIZACION

Sesión 11
Química Clínica

1. Objetivos:
El alumno:
-Determinará la actividad de algunas enzimas séricas
-Conocerá el funcionamiento de un autoanalizador de
química sanguínea.

2. Fundamentos:

ENZIMOLOGIA CLINICA:

El laboratorio de enzimología clínica está interesado principalmente en determi-


nar los cambios en la actividad de enzimas que son predominantemente intrace- lulares
(enzimas no plasma específicas) por lo que normalmente se encuentran en muy bajas
concentraciones en el suero. Estas enzimas se liberan cuando las célu-
las se dañan o mueren; Midiendo los cambios de actividad de éstas enzimas en
la enfermedad, es posible inferir la localización y la naturaleza de los cambios
patológicos en algunos de los tejidos del cuerpo.

AUTOMATIZACION:

Actualmente, la mayoría de los laboratorios de análisis clínicos realizan parte


de sus procedimientos de manera automatizada (es decir, mediante la mecani-
zación de los procesos analíticos).

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Suero

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO:


-Autoanalizador
-Espectrofotómetro
-Baño María a 37°C
-Conjunto de reactivos para determinación de diferentes analitos.
-Tubos de ensayo
-Pipetas serológicas
-Micropipetas

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4. Descripción de la Actividad:

Cada equipo practicará la determinación de la actividad sérica de dos enzimas,


una de ellas con un método de punto final y otra de ellas con un método cinético.

El alumno leerá íntegramente el inserto del fabricante de los reactivos (uso, fun-
damentos, descripción de los componentes, requerimientos de muestra, almace-
namiento, estabilidad, procedimiento, control de calidad, interpretación, etc.)

Se realizarán las pruebas siguiendo estrictamente las instrucciones del fabricante.

ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA: Según los reactivos y protocolos que se


tengan en el laboratorio, realice la cuantificación de algunos analitos en
el autoanalizador.

5. Resultados:

6. Conclusiones:

7. Mecanismos de evaluación:

-Reporte por equipo de los resultados obtenidos


-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos

Cuestionario (entrega individual):


1. Enumere 10 enzimas séricas con su importancia en el diagnóstico.
2. Explique la diferencia entre un método de medición enzimática de
punto final y un método cinético.
3. Enumere 5 ventajas que se obtengan con la automatización en el
laboratorio clínico.

4. y 5.: Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor.

8. Bibliografía:
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-EDWARD R. ASHWOOD y CARL A. BURTIS: Tietz Fundamentals of Clinical


Chemistry, 5a. Edición, EUA, W.B. Saunders Company. 2000.

-LAWRENCE KAPLAN, AMADEO PESCE y STEVEN KAZMIERCZAK:


Clinical Chemistry, Theory, Análisis, Correlation, 4a. Edición, EUA,
Mosby, 2003.

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QUIMIOLUMINISCENCIA / EVALUACION PROSTATICA

Sesión 12
Quimioluminiscencia

1. Objetivos:

El alumno conocerá los fundamentos y el equipo utilizado en las determinaciones


basadas en la quimioluminiscencia.

Se determinará la concentración de Antígeno Prostático Específico (APE) total y


libre en una muestra de suero.

2. Fundamentos:

QUIMIOLUMINISCENCIA:
La reacción quimioluminiscente es una reacción química en la cual
uno de los productos es luz, sin producción de calor. Es una metodología de
alta sensibilidad y especificidad.

ANTIGENO PROSTATICO ESPECIFICO:


Es una enzima producida por las células de la glándula prostática. Niveles
bajos se encuentran normalmente en la sangre del hombre. El cáncer de próstata y
otras condiciones no cancerosas (prostatitis, hiperplasia benigna de próstata) pue-
den aumentar los niveles de APE.

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Sueros de pacientes masculinos mayores de 50 años.

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO:


-Equipo medición de quimioluminiscencia
-Conjunto de reactivos para la determinación de APE total y libre.

4. Descripción de la Actividad:

El alumno leerá íntegramente el inserto del fabricante de los reactivos (uso, fun-
damentos, descripción de los componentes, requerimientos de muestra, almace-
namiento, estabilidad, procedimiento, control de calidad, interpretación, etc.)

Se realizará el análisis siguiendo estrictamente las instrucciones del fabricante.

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5. Resultados:

6. Conclusiones:

7. Mecanismos de Evaluación:

-Reporte por equipo de los resultados obtenidos.


-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos

-Cuestionario (entrega individual):


1. Escriba la serie de reacciones que se llevaron a cabo.
2. Explique la utilidad de la determinación de APE total y libre
3. ¿Por qué es controversial el uso de esta prueba?
4.Haga una relación de otras moléculas que se utilicen como
marcadores tumorales y el tejido que ayudan a valorar.

Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor.

8. Bibliografía:

-EDWARD R. ASHWOOD y CARL A. BURTIS: Tietz Fundamentals of Clinical


Chemistry, 5a. Edición, EUA, W.B. Saunders Company. 2000.

-LAWRENCE KAPLAN, AMADEO PESCE y STEVEN KAZMIERCZAK:


Clinical Chemistry, Theory, Análisis, Correlation, 4a. Edición, EUA,
Mosby, 2003.

-RIES LAG, EISNER MP, KOSARY CL, HANKEY BF, MILLER BA,
KLEGG L, MARIOTTO A, FEUER EJ, EDWARDS BK (eds),
SEER Cancer Statistics Review, 1975-2001, National Cancer Institute
EUA, 2004.

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ELECTROLITOS SERICOS

Sesión 13
Química Clínica

1. Objetivos:

La determinación de los electrolitos es una de las funciones mas importantes


del laboratorio clínico, ya que niveles anormales de éstos pueden ser tanto la
causa como la consecuencia de diferentes enfermedades.

Sodio, Potasio y Cloro son los electrolitos que con mayor frecuencia se cuan-
tifican en la práctica de la química clínica.

2. Fundamentos:

Son dos los métodos analíticos actualmente mas utilizados:

FLAMOMETRIA:
La muestra se diluye y es aspirada hacia una flama de aire-propano que
suministra suficiente energía en forma de calor para excitar a los iones de sodio,
potasio y litio. Cuando estos iones térmicamente excitados regresan a su nivel
basal, emiten luz que se mide con un fotodetector. La intensidad de la energía
radiante es directamente proporcional a la concentración de los iones en la mues-
tra. El uso de esta técnica ha disminuído en los últimos años, aunque se sigue con-
siderando el método de referencia.

ELECTROQUIMICA (Electrodos ion-selectivos):


Esta metodología es la mas utilizada y se basa en la potenciometría, es
decir, en la medición de una diferencia de potencial (voltaje) entre dos electro-
dos (un electrodo de medición, llamado ion selectivo y un electrodo de referen-
cia).

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3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Suero libre de hemólisis.

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO:


-Flamómetro y/o analizador con electrodos de ion selectivo.
-Pipetas serológicas y micropipetas
-Soluciones estandar de sodio, potasio, litio y cloro.
-Controles en los niveles bajo, normal y alto para cada electrolito.

4. Descripción de la Actividad:

Siguiendo las instrucciones del fabricante, el alumno practicará la determi-


nación de electrolitos séricos, utilizando la metodología disponible en el
laboratorio.

5. Resultados:

6. Conclusiones:

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No.de Revisión: 2
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7. Mecanismos de evaluación:

-Reporte por equipo con los resultados obtenidos


-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos.

-Cuestionario (entrega individual):


1. ¿Cuáles desventajas han hecho caer en desuso la flamometría?
2. Haga una correlación clínica de los valores anormales de Na, K y Cl
3. ¿Cuál es la utilidad médica de la determinación de niveles séricos de
litio?

4. y 5.: Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor.

8. Bibliografía:

-EDWARD R. ASHWOOD y CARL A. BURTIS: Tietz Fundamentals of Clinical


Chemistry, 5a. Edición, EUA, W.B. Saunders Company. 2000.

-LAWRENCE KAPLAN, AMADEO PESCE y STEVEN KAZMIERCZAK:


Clinical Chemistry, Theory, Análisis, Correlation, 4a. Edición, EUA,
Mosby, 2003.

-WANG J: Electroanalytical Techniques in Clinical Chemistry and Laboratory


Medicine, 1a. Edición, EUA, VCH Publishers, 1988.

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FARMACOS DE ABUSO

Sesión 14
Fármacos

1. Objetivos: El alumno conocerá algunas de las metodologías para la identificación


de fármacos de abuso y/o sus metabolitos.
Se efectuará un rastreo urinario para detección de los fármacos de abuso.

2. Fundamentos:

La adicción y abuso del alcohol y otros fármacos afectan a un número importante de la


población de muchos países incluyendo el nuestro. El alcohol es la sustancia de abuso
más común en la civilización occidental y los patrones del comportamiento con el alcohol
son similares con otras substancias como la marihuana. Cocaína, benzodiacepinas,
opiáceos y otros fármacos.
Muchas empresas utilizan un análisis para detectar el uso de éstas sustancias antes de
contratar a un trabajador que pudiera poner en riesgo la seguridad de la empresa.

Efectuaremos un análisis inmunocromatográfico para la detección cualitativa de las


drogas y/o sus metabolitos en la orina.
Es un inmunoensayo competitivo en el cual el fármaco y sus metabolitos en la muestra de
orina compiten con moléculas del fármaco químicamente marcadas por un número
limitado de anticuerpos fijadores. Se utilizan anticuerpos específicos para cada clase de
fármaco por identificar.
Los resultados obtenidos con estas metodologías se deben considerar como preliminares
y deben ser confirmados por otros métodos como GC/MS (cromatografía de
gases/espectrofotometría de masas).

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Orina reciente a temperatura ambiente

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO:


-Conjunto de reactivos para detección de fármacos de abuso
-Pipetas de transferencia
-Recipientes para muestra de orina
-Controles positivos para cada fármaco analizado.
-Cronómetro

4. Descripción de la Actividad:
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El alumno leerá íntegramente el inserto del fabricante de los reactivos (uso, fundamentos,
descripción de los componentes, requerimientos de muestra, almacenamiento, estabilidad,
procedimiento, control de calidad, interpretación, etc.)

Se realizará la prueba siguiendo estrictamente las instrucciones del fabricante.

5. Resultados:

6. Conclusiones:

7. Mecanismos de evaluación:

-Reporte por equipo con los resultados obtenidos


-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos.

Cuestionario (entrega individual)


1. ¿Cuál es el fundamento del método de la cromatografía de gases/espec-
trofotometría de masas?
2. ¿Por qué es el método GC/MS el ideal para hacer la confirmación de un
resultado positivo preliminar de drogas en orina?

3. 4. y 5.: Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor.

8. Bibliografía:

-EDWARD R. ASHWOOD y CARL A. BURTIS: Tietz Fundamentals of Clinical


Chemistry, 5a. Edición, EUA, W.B. Saunders Company. 2000.
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No.de Revisión: 2
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-LAWRENCE KAPLAN, AMADEO PESCE y STEVEN KAZMIERCZAK:


Clinical Chemistry, Theory, Análisis, Correlation, 4a. Edición, EUA,
Mosby, 2003.

-PRICE C. y NEWMAN D. (eds): Principles and Practices of Immunassays,


2a. Edición, EUA, Stockton Press, 1997.

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TOXICOLOGIA INDUSTRIAL

Sesión 15
Toxicología

1. Objetivos:

Se efectuará la determinación de una sustancia tóxica en una muestra de sangre u orina.


El análisis a practicar dependerá de la disponibilidad de reactivos y equipo.

2. Fundamentos:

El laboratorio de análisis clínicos con capacidad para la realización de análisis


toxicológicos aporta información práctica al médico ocupacional sobre los riesgos de
salud, evaluación de la exposición y para el seguimiento del personal en tratamiento.

3. Recursos necesarios:

MUESTRA: Sangre total, suero u orina, según el análisis a practicar.

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO:


-Los indicados por el fabricante del conjunto de reactivos a utilizarse.

4. Descripción de la Actividad:

Según la disponibilidad de reactivos y equipo, seguir fielmente el protocolo establecido


para el análisis a realizar.

ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA: Visitar un laboratorio que realice exámenes


toxicológicos y conocer algunas de sus metodologías.

5. Resultados:

6. Conclusiones:

7. Mecanismos de evaluación:

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No.de Revisión: 2
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-Reporte por equipo con los resultados obtenidos


-Discusión del desarrollo de la práctica y de los resultados obtenidos.

-Cuestionario (entrega individual):


1. Enumere al menos 10 tóxicos industriales o de exposición profesional,
que el laboratorio clínico cuantifique.
2. ¿Cuáles son los límites máximos permisibles de nivel de plomo en
sangre en trabajadores expuestos?

3. 4. y 5. Preguntas adicionales elaboradas cada semestre por su profesor.

8. Bibliografía:

-EDWARD R. ASHWOOD y CARL A. BURTIS: Tietz Fundamentals of Clinical


Chemistry, 5a. Edición, EUA, W.B. Saunders Company. 2000.

-www.osha.gov

-www.stps.gob.mx

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TEMA ABIERTO

Sesión 16
Laboratorio Clínico

1. Objetivos:

Cada equipo seleccionará alguna práctica de laboratorio clínico no incluida en las


sesiones anteriores, exponiendo verbalmente a todo el grupo la importancia de ésta.

2. Fundamentos:

El laboratorio de análisis clínicos realiza cientos de diferentes análisis, en diversas


muestras biológicas. Cada alumno, según su especial interés, realizará alguna prueba que
no fue incluida en las sesiones anteriores.

3. Recursos necesarios:

-Variarán según la actividad seleccionada.

4. Descripción de la Actividad:

Una vez aprobada por el profesor de la materia el análisis seleccionado por cada equipo,
se realizará la práctica siguiendo las normas de seguridad y de buena práctica de
laboratorio.

Cada equipo informará a los demás sus resulados, mismos que serán reportados por
todos, incluyendo valores de referencia y método utilizado.

5. Resultados:

6. Conclusiones:

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7. Mecanismos de evaluación:

-Reporte por equipo de todos los resultados obtenidos en las diferentes mesas de trabajo,
incluyendo valores de referencia y método utilizado.
-Discusión de la práctica y de los resultados obtenidos

8. Bibliografía:

-Libros y artículos sugeridos por el profesor a cada equipo, según la práctica


seleccionada.

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