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A PRACTICA 4

DETERMINACION ESPECTROFOTOMETRICA DE HIERRO EN COMPLEMENTOS


VITAMINICOS

Antecedentes:

Las vitaminas son sustancias que actúan como coenzimas, es decir, ayudan a
las enzimas a dirigir y controlar las reacciones químicas necesarias para la
utilización adecuada de los nutrientes, no producen energía ni forman tejidos.
Los minerales son sustancias inorgánicas que sirven para que el organismo
pueda llevar a cabo sus funciones. Los esenciales para la vida son: fosforo,
calcio, sodio, potasio, magnesio, hierro, azufre, yodo, manganeso, cobalto,
cobre y zinc.
EL Hierro es una sustancia esencial para la vida. Sólo existe en el organismo en
pequeñas cantidades (trazas) pero su deficiencia se nota por participar en
procesos vitales, mediante los cuales las células producen energía.
En nuestro organismo el Hierro se encuentra principalmente en la
HEMOGLOBINA (proteína de las células rojas) y en la MYOGLOBINA (proteína de
las células de los músculos). El Hierro también es requerido por enzimas
envueltas en la fabricación de aminoácidos, hormonas y neurotransmisores.
Nuestro organismo trata de conservar el Hierro que contiene, y lo recicla para
usarlo nuevamente, pero siempre una cantidad se pierde en el sudor, en las
heces, en la orina o si sangramos. Como la mayor cantidad de Hierro se
encuentra en la sangre, es por éste medio que una persona puede perder
mayor cantidad de Hierro.
Una deficiencia de Hierro causa anemia, fatiga, cansancio, reducida resistencia
a infecciones, reducida capacidad de aprendizaje, inhabilidad para prestar
atención, reducida capacidad para reaccionar, reducida coordinación de
movimientos, aumento en el tiempo de sanar heridas.
Poco Hierro es malo, pero un exceso de Hierro tampoco es bueno. El exceso de
Hierro en el organismo, llamado HEMOCHROMATOSIS, es causado por un
defecto en un gen, que aumenta la absorción de Hierro de los alimentos.
Una sobrecarga de Hierro también se produce por repetidas transfusiones de
sangre, o por tomar mucho Hierro en la forma de suplementos dietarios.
A éste exceso de Hierro se le asocian enfermedades bacteriales comunes,
como así también letargia, pigmentación de la piel, el hígado se agranda,
enfermedades en las coyunturas, pérdida de pelos en el cuerpo, amenorrea, e
impotencia en los hombres. En los niños puede causar la muerte por
envenenamiento
Para la determinación de Hierro en el siguiente trabajo utilizamos una técnica
espectrofotométrica, en la cual la ortofenantrolina reacciona con el Fe+2 ,
originando un complejo de color rojo característico que absorbe notablemente
en las regiones del espectro visible de alrededor de 508 nm.
Como el Fe+3 no presenta absorción a esa longitud de onda, éste debe ser
reducido a Fe+2 mediante un agente reductor apropiado. La reacción es
cuantitativa y reproducible en un amplio intervalo de pH, siendo el óptimo
entre 6 y 9.

Objetivo:

Elaborar una curva de calibración para realizar la cuantificación del hierro en


complementos vitamínicos

Material y Equipo
Vaso ppt de 100 ml
3 matraces volumétricos de 100 ml
Embudo conico
Anillo
Soporte para anillo
8 matraces volumétricos de 25 ml
Pipeta 10 ml
2 pipetas de 5 ml
Vaso ppt de 50 ml
Probeta de 50 ml
2 matraces volumétricos de 50 ml
1 matraz volumétrico de 10 ml
Espátula
Pipetor
Piseta
Potenciómetro
Espectrofotómetro UV-vis
Sustancias:

10 ml de solución de hidroquinona 10 g/L, recién preparada


50 ml del 10-fenantrolina al 0.25 % en etanol al 10% (frasco ambar)
100 ml de solución patrón de Fe (0.04 mg de Fe/ml) a partir de Fe(NH4)2
(SO4)2 6 H2O, en H2SO4 al 0.1 % v/v
100 ml de HCl 6 M
100 ml de NaOH 1 M
Papel filtro
50 ml de solución amortiguadora de pH 4 (acido acético/acetato de sodio)

Procedimiento:

1- En un vaso de ppt de 100 ml se coloca el contenido de una capsula de


complemento vitamínico y se lleva a ebullición 15 min con 25 ml de HCl
6 M.

2- Filtrar en un matraz volumétrico de 100 ml. Lavar el precipitado y el vaso


de ppt varias veces, para trabajar cuantitativamente.

3- Enfriar y aforar.

4- Se diluye 1.25 ml de la solución a 25 ml. Si el empaque indica que la


tableta contiene <15 mg, se diluye 2.5 ml en lugar de 1.25 ml.
Determinar el pH de la solución de la capsula, y si es necesario, subir el
pH a 4 con una solución de NaOH 1 M antes de aforar a 25 ml en un
matraz volumétrico.

5- Transferir 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 ml de solución patrón a matraces


volumétricos de 25 ml. Añadir 0.5 ml de la solución amortiguadora, 0.5
ml de la solución de Hidroquinona, y 0.75 ml de 1-10 fenantrolina a cada
matraz.

6- Preparar un blanco

7- Transferir 2.5 ml de la solución de la capsula a un matraz volumétrico de


25 ml. Añadir 0.5 ml de la solución amortiguadora, 0.5 ml de la solución
de hidroquinona y 0.75 ml de la de 1-10 fenantrolina.

8- Permitir que los patrones y muestras reposen por 10 min. Se aforan con
agua destilada.

9- No olvidar calibra a cero con el blanco a una longitud de onda de 508


nm.

10-Medir la absorbancia de las soluciones patrón y muestras.

11-Efectuar la regresión linear y determinar los valores de la pendiente,


intercepto y coeficiente de correlacion.

12-Determinar la cantidad de hiero en mg, por capsula.


La cantidad de hierro recomendado en un complemento vitamfnico,
especialmente para mujeres embarazadas es de 30 mg. La curva de
calibración es una Iínea determinada por la información de respuesta de
calibración de un instrumento. La función describe las respuestas del
detector a lo largo de un rango de concentraciones y es utilizada para
predecir la concentracion de una muestra desconocida, basandose en la
respuesta del detector.
Los estandares quimicos son estandares de contenido quimico; son
sustancias puras, mezclas, disoluciones, gases o materiales como aleaciones
o sustancias biologia que se usan para calibrar o validar toda o parte de la
metodologia de un analisis quimico. Para construir una curva de calibracion,
las concentraciones de 105 patrones deben de abarcar el rango de
concentracion esperado de las muestras de analisis.
Todos los valores patron medidos deben estar sobre una linea recta, pero en
la practica, los valores siempre presentan cierta dispersión.
Se debe de aplicar un metoda estadístico para encontrar el mejor ajuste de
los datos a la curva de calibracion. EI metodo estadístico mas frecuente es la
regresion lineal, conocido como el metodo de minimos cuadrados.

Resultados:

Se utilizo una tableta de Biometrix, el contenido de hierro de la capsula es de


10 mg, por lo que la dilución fue de 2.5 ml en lugar de 1.5ml.

El contenido de la capsula fue de 30 mg de sulfato ferroso, esto es equivalente


a 10 mg de Fe.

Despues de realizar el analisis obtuvimos estos resultados: en la tabla 1


observamos las absorbancias que se midieron de cada estandar a una longitud
de onda de 508 nm.

Soluciones Patron Concentracion Abs a LO de 508nm


estandar0 0 -0.001
estandar0-2 0 -0.001
estandar1 0.5 0.16
estandar1-2 0.5 0.16
estandar2 1 0.328
estandar2-2 1 0.328
estandar3 1.5 0.489
estandar3-2 1.5 0.489
estandar4 2 0.661
estandar4-2 2 0.661
estandar5 2.5 0.862
estandar5-2 2.5 0.862
Tabla 1

En la tabla 2 se encuentran las absorbancias y las concentraciones de las


muestras.

Muestras BIOMETRIX Concentracion Abs a LO de 508 nm


Muestra1 0.656 0.214
Muestra2 0.627 0.204
Media 0.6415 0.209

Tabla 2

En la siguiente figura presentamos la grafica a partir de los datos obtenidos


mediante el equipo utilizado en el laboratorio de análisis instrumental, que fue
el espectrofotómetro UV-vis.
En la siguiente grafica se presentan los datos de las concentraciones que
fueron calculadas con base en la ecuación que el equipo proporciono al hacer
la regresión lineal; la figura 1 muestra la grafica de concentración vs
absorbancia y la línea que mejor se ajusta a los datos, así como su ecuación y
el coeficiente de correlación.

Figura 1

Se tromaron de la solución patrón ya preparada alícuotas de 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5


ml, a partir de estos volúmenes, sacamos la cantidad de hierro que cada
muestra de la solución patrón contenía.

Se prepararon 100 ml de la solución patrón, esta tenía un contenido de Fe/ml)


a partir de Fe(NH4)2 (SO4)2 6 H2O, en H2SO4 al 0.1 % v/v
Se calcularon la cantidad de Fe en cada alícuota:

Con base en los resultados obtenidos con el espectrofot6metro y después de


calcular la masa de hierro en cada estándar graficamos la absorbancia vs la
masa de hierro presente en cada estándar y obtuvimos la grafica que aparece
en la figura 2. Después de realizar la regresión lineal y el coeficiente de
correlacion lineal procedimos al calculo neto de Fe en cada muestra, utilizando
esa misma ecuación.

Muestra Concentracion Masa de Fe en estandares Abs a LO de 508nm


blanco 0 0 -0.001
blanco 0 0 -0.001
1 0.5 2.00E-05 0.16
1.1 0.5 2.00E-05 0.16
2 1 4.00E-05 0.328
2.1 1 4.00E-05 0.328
3 1.5 6.00E-05 0.489
3.1 1.5 6.00E-05 0.489
4 2 8.00E-05 0.661
4.1 2 8.00E-05 0.661
5 2.5 1.00E-04 0.862
5.1 2.5 1.00E-04 0.862
Tabla 3
Los resultados obtenidos se representan en la siguiente grafica:

Figura 2

Con base a la ecuación de la pendiente calculamos los mg de Fe en cada


muestra:

Muestra 1:

25ml de solución – 2.5 ml de sol original

5 ml de solución – x

X= 0.5 ml de la sol original

Cantidad de Fe obtenida:

y = 8541.4x - 0.0106

x = y + 0.0106 / 8541.4x

x= .026295 para y=0.214

0.026295 mg de Fe – 0.5 ml de sol original

X -- 100 ml

X= 5.26 mg de Fe.
Muestra 2:

25ml de solución – 2.5 ml de sol original

2.5 ml de solución – x

X = .25 ml de solución

Cantidad de Fe obtenida:

y = 8541.4x - 0.0106

x = y + 0.0106 / 8541.4

x= 0.02512 para y=0.204

0.02512 mg de Fe – 0.25 ml de sol original

X -- 100 ml

X= 10.048 mg de Fe

Observaciones y conclusiones:

• para esta practica utilizamos como muestra una capsula de BIOMETRIX,


esta capsula tenía un contenido de 30 mg de sulfato ferroso equivalente
a 10 mg de Fe, como la cantidad de Fe que contenía la capsula es muy
pequeña, en lugar de usar 2.5 ml como primera muestra, tomamos 5 ml;
para la segunda muestra tomamos 2.5 ml.

• Para la muestra uno podemos observar el resultado obtenido a partir de


la ecuación de regresión de la grafica de masas de Fe vs la absorbancia,
el resultado obtenido fue de 5.26 mg de cobre, este valor es menor a la
cantidad de Fe reportado en la capsula

• Para la muestra 2 obtuvimos un resultado por encima del valor


reportado, el cual fue de 10.048, esto se pudo deber a un mal preparado
en muestra.

• Debido a que el empaque de la capsula indico que esta tenía un


contenido de Fe menor a 15 mg (10 mg) procedimos a diluir 2.5 ml de la
solución en vez de 1.25 ml. Al determinar el pH de la solución de la
capsula, pudimos darnos cuenta de que había que ajustarlo hasta llegar
a pH 4. Después de añadirle aproximadamente 60 gotas de NaOH 3 M de
10 en 10, llegamos a un pH de 5, por lo que tuvimos que corregirlo con
una solución de HCl 0.6 M hasta llegar a un pH de 4.12.

Cuestionario:

1. ¿Por qué se añade la solución amortiguadora?


Se acostumbra a añadir la solución amortiguadora, para compensar la
alteración del pH durante la práctica, ya que se debe trabajar en un rango de 2
a 9.

2. ¿Cuál es la función de la hidroquinona en el método?


Actúa como un agente reductor, el cual convierte al hierro férrico presente en
la muestra a hierro ferroso: Fe3+ a Fe2+. Esto ocurre debido a que el Fe3+ no
presenta absorbancia a esa longitud de onda.

3. ¿Para qué se utiliza en este método la solución de 1-10 fenantrolina?


EI hierro ferroso reaccionara con la fenantrolina, formándose un complejo
fenan-trolina-ferroso, de color naranja. La formación del complejo es
cuantitativa, el color que desarrolla es muy estable y se cumple la ley de Beer.

4. ¿Por qué es necesario subir el pH de la solución de la tableta tratada con


HCl?
Esto se debe a la necesidad del complejo de permanecer en un rango de pH de
2 a 9 para que la reacción del complejo sea estable y la intensidad del color
no cambie.

5. ¿Para qué se dejan reposar las soluciones por 10 minutos?


Para que se forme el complejo y se pueda apreciar el color rojo del complejo
ya formado.

6. ¿Son adecuados los valores de la pendiente, intercepto y coeficiente de


correlación? ¿Por qué?
Si, ya que la línea que se obtuvo por regresión lineal pasa por encima de todos
los puntos experimentales, por lo que los valores de la pendiente son
adecuados. El coeficiente de correlacion es cercano a 1 por lo que también
indica que son adecuados.

7. Si una de las capsulas contiene 33 mg de FeSO4 ¿Cuántos mg de Hierro


contendría?
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE YUCATÁN

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

LICENCIATURA EN QUÍMICA INDUSTRIAL

LABORATORIO DE MÉTODOS INSTRUMENTALES

PRÁCTICA 4. DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMETRICA DE


HIERRO EN COMPLEMENTOS VITAMINICOS

KARERINA CAMARA SEGURA

TATIANA SUAREZ MENDOZA

JAHDIEL ALANIZ SOBERANIZ

JESUS BURGOS

PROFESORA: MIMÍ VARGAS


Miercoles, 18 de marzo de 2009