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LANASEVE Recuento de Staphylococcus aureus coagulasa positiva

Elaborado por: Jefe de Sección Revisado por: Encargada de Calidad de Sección

Rige a partir de: 20/09/10 Versión 01

Código: IA-MBA-PT- 014 Página 1 de 5

Aprobado por: Jefe de Sección

1. Objetivo Disponer de un método para realizar el recuento de Staphylococcus aureus coagulasa positiva 2. Alcance Para aplicar en muestras de alimentos. 3. Responsabilidad y autoridad Jefe de Sección: debe velar por el cumplimiento de las normas establecidas en este procedimiento. Analistas de laboratorio: deben realizar el ensayo según lo descrito en este procedimiento. 4. Definiciones No aplica 5. Abreviaturas y/o Siglas ufc: unidad formadora de colonia 6. Referencias y/o Bibliografía AOAC Oficial Method 2003.07: 3M TM PetrifilmTM Staph Express Count Plate Method for the Enumeration of Staphylococcus aureus in Selected Types of Processed and Prepared Foods AOAC Oficial Method 2003.08: 3MTM PetrifilmTM Staph Express Count Plate Method for the Enumeration of Staphylococcus aureus in Selected Dairy Foods AOAC Oficial Method 2003.11: 3M TM PetrifilmTM Staph Express Count Plate Method for the Enumeration of Staphylococcus aureus in Selected Types of Meat, Seafood, and Poultry Instrucciones Petrifilm Recuento Staph Express IA-MBA-PE-009-RE- 008 Hoja de trabajo IA-MBA-PE-012-RE-014 Control interno para análisis de Staphylococcus aureus IA-MBA-PE-015 Control de calidad de reactivos IA-MBA-PO-004 Control de Equipo

Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada

7.3 Medios de cultivo y reactivos Placas de Petrifilm 3M Recuento Staph Express Buffer Butterfield Caldo infusión cerebro corazón Plasma de conejo 7.2.1 Fundamento Teórico Las placas Petrifilm Recuento Staph Express es un medio de cultivo deshidratado listo para usar.2.2.4 Cepas de referencia Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Normativo Propiedad del SENASA.aureus.LANASEVE Recuento de Staphylococcus aureus coagulasa positiva Elaborado por: Jefe de Sección Revisado por: Encargada de Calidad de Sección Rige a partir de: 20/09/10 Versión 01 Código: IA-MBA-PT.2 Materiales Bolsas plásticas para stomacher 7 ½ x 11 ¾ pulg (ancho x largo) con cierre de alambre Pipetas estériles de 1 ml o 2 ml. el medio modificado de Baird Parker contiene un cromógeno en la placa el cual es selectivo y permite diferenciar a S. Esparcidor plano de Petrifilm 7. el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada .2 Equipo.1 Equipo Balanza sensibilidad ± 0. Descripción del procedimiento 7.014 Página 2 de 5 Aprobado por: Jefe de Sección 7.1 g Contador de Colonias Quebec Incubador 35 °C± 1 °C Stomacher Vortex 7.2. Posteriormente las colonias se les realiza una prueba de coagulación con plasma de conejo. reactivos y medios de cultivo 7. materiales .

Esperar por 1 minuto para permitir que solidifique el gel. contando el número de colonias en uno o más cuadros representativos y obtener el promedio. levantar la lámina superior y tomar una colonia del gel e inocular un tubo de 3 ml de caldo infusión.7 7.3. 7.15 Incubar el tubo a 35 °C por 24 horas.014 Página 3 de 5 Aprobado por: Jefe de Sección 7. Agregar 225 ml de buffer Butterfield para realizar una dilución 1/10 (10 -1) Homogenizar en stomacher por 2 minutos. 7.3.3.3. 7. a 35 °C ± 1 °C por 24 ± 2 horas (Se puede colocar hasta 20 placas de Petrifilm una sobre otra. Hacer diluciones seriadas 10-2 hasta 10-5 Sembrar estas diluciones.3.2 7.3.9 Contar las colonias rojo-violetas. No contar las colonias azul-verdosas. se debe tomar el.14 A las colonias sospechosas (colonias rojo-violetas) realizar la prueba de coagulasa. Dentro de los 10 minutos posteriores a la inoculación de las placas.3. dilución y la fecha del análisis Poner las placas en una superficie plana y lisa.8 Colocar el esparcidor plano en el centro de la placa y presionar suavemente para distribuir la muestra de manera uniforme.1 7. 7. Dejar caer la lámina superior suavemente 7.10 Seleccionar las placas que tengan de 25 a 250 colonias típicas.3 Procedimiento 7.3.3.3. 7.3 7.3.5 7.LANASEVE Recuento de Staphylococcus aureus coagulasa positiva Elaborado por: Jefe de Sección Revisado por: Encargada de Calidad de Sección Rige a partir de: 20/09/10 Versión 01 Código: IA-MBA-PT.3.4 7.3. 7.3. multiplicar dicho número por 20 para obtener el recuento total por placa. resultado de la dilución menor.3. Levantar la lámina superior y colocar 1 ml de la dilución en el centro de la placa de Petrifilm Staph Express sin hacer burbujas.6 En una bolsa de stomacher estéril. Normativo Propiedad del SENASA. pesar 25 gramos de la muestra. tocar suavemente la superficie de la placa con la pipeta para depositar la última gota. rotular con la identificación de la muestra.13 Si se observa un área de crecimiento rosado en toda la placa indica que a la muestra debe de realizarse más diluciones. 7.12 Si solo se obtienen placas con recuentos menores a 25 colonias. el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada .11 Se puede realizar estimaciones en placas con más de 150 colonias. incubar en posición horizontal con el lado transparente hacia arriba.

1 7. 7.2 Se deben usar cultivos de referencia de S.5 cm dentro de la muestra.2 7.1 7.4 Prueba coagulasa 7. Si no hay presencia de colonias típicas.008 Hoja de trabajo Si el conteo es entre 25 a 250 ufc.014 Página 4 de 5 Aprobado por: Jefe de Sección NOTA: a) Durante el pipeteo se debe ajustar el volumen poniendo la punta de la pipeta en contacto con la pared del contenedor y no dentro de la muestra. el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada .3 Agregar 0.6.6. reportar con dos cifras significativas. reportar el número de colonias contadas por mililitro o gramo por el recíproco de la dilución.4.3 ml de plasma de conejo en un tubo de prueba de 10 x 75 mm e incubar a 35 °C o 37 °C.5. reportar como menos de 1 x 10 1 ufc/g o ufc/ml 7.4.1 ml del cultivo de caldo infusión cerebro corazón a 0.epidermidis como control negativo La concentración del inóculo de los controles positivos debe estar aproximadamente entre 100 a 1000 ufc /ml. c) Se debe agitar los tubos en vortex por 15 segundos antes de hacer cada dilución y antes de tomar la alícuota para realizar el análisis.4.5.2 7. 7.6. registrar los resultados en IA-MBA-PE-012-RE-014 Control interno para análisis de Staphylococcus aureus 7.3 El resultado obtenido se registra en el formulario IA-MBA-PE-009-RE.6.3 Cada lote de plasma de conejo se controla con las cepas de referencia de acuerdo al procedimiento IA-MBA-PE-015 Control de calidad de reactivos. Control de Calidad 7. Examinar el tubo después de 4 horas a 6 horas de incubación.aureus como control positivo y S .5. Normativo Propiedad del SENASA.1 7. Considerar la prueba de coagulasa positiva si el volumen del coágulo ocupa más de la mitad del volumen original de líquido. b) La pipeta se debe insertar no más de 2. si la prueba es negativa reexaminar a las 24 horas de incubación.5 Reporte de resultado 7.LANASEVE Recuento de Staphylococcus aureus coagulasa positiva Elaborado por: Jefe de Sección Revisado por: Encargada de Calidad de Sección Rige a partir de: 20/09/10 Versión 01 Código: IA-MBA-PT.

Anexos No aplica Normativo Propiedad del SENASA. el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada .014 Página 5 de 5 Aprobado por: Jefe de Sección 7. 8. se debe mantener el registro de la temperatura óptima del equipo.LANASEVE Recuento de Staphylococcus aureus coagulasa positiva Elaborado por: Jefe de Sección Revisado por: Encargada de Calidad de Sección Rige a partir de: 20/09/10 Versión 01 Código: IA-MBA-PT.7 Puntos Críticos de Control Control de temperatura de la incubadora. así como las medidas correctivas en caso de alguna variable según IA-MBA-PO-004 Control de Equipo.