Funcionamiento del ADN, la historia de su descubrimiento e identificacin.

Breve Historia cientfica Gregor Mendel describe en 1866 los mecanismos de la herencia en sus experimentos con guisantes. El bioqumico suizo Friedrich Miescher descubre el ADN en el ncleo de las clulas, en 1868. En 1909 el trmino gen se usa por primera vez. 1943: O. T. Avery, M. McCarty y C.M. Mac Leod demuestran que el ADN transfiere caractersticas hereditarias. En 1944 se identifica el ADN como el material de la herencia. Fin de la dcada del 40: E. L. Tatun y J. Lederberg establece que los genes contienen la informacin necesaria para la produccin de protenas 1951: M. Wilkins y R. Franklin obtienen e interpretan las primeras imgenes de un cristal de ADN, a travs de la difraccin con rayos x. Francis Crick y James Watson describen la estructura del ADN en 1953, por lo que ganan el Nobel. 1954: J.F. Enders y T. H. Weller logran cultivar el virus de poliomielitis en una probeta. Severo Ochoa y Arthur Krnberg dan en 1955 los primeros pasos hacia la interpretacin del cdigo gentico, por lo que son galardonados con el Nobel. Identificados 23 pares de cromosomas en el ser humano en 1956. 1957: A. Kornberg identifica la enzima que duplica la doble hlice del ADN. 1960: Descubren el ARN mensajero, el transfiere informacin contenida en el ADN hasta el aparato encargado de producir las protenas. 1961: F. Jacob y J. Monod proponen un modelo de regulacin de los genes basados en ciertas protenas.

1962: J. Watson y F. Click junto a M. Wilkins son los poseedores del premio Nobel, por la determinacin de la estructura del ADN. 1965: Por primera vez se cultivan ovocitos humanos hasta que alcanzaron su madurez. 1966: G. Khorana y N. Niremberg descifran el lenguaje del cdigo gentico. Dos aos mas tarde, reciben el Premio Nobel por su descubrimiento. 1967: Se descubre la enzima que suelda las molculas del ADN. Cientficos de la Universidad de Harvard aslan el primer gen en 1969. Es de una bacteria. 1970: G. Khorana realiza una sntesis de la forma qumica del primer gen. H. Smith y K. Wilcox descubren enzimas de restriccin. 1972: Se realizan implantaciones en el tero materno de vulos fecundados en probetas (Gran Bretaa). 1974: Nace el R.A.C (Recombinan DNA Advisory Committe) con el objeto de definirla las directrices de la manipulacin de organismos y molculas. 1975: Desarrollan un mtodo para secuenciar ADN. C. Milstein y G. Khler crean los primeros hibridomas, clulas derivadas de la fusin de clulas tumolares y linfocitos de ratn, especificas contra genes. En Estados Unidos se funda en 1976 Genentech, la primera empresa de ingeniera gentica. Se produce la primer protena humana recombinada. 1977: Clonacin del primer gen defectuoso, se decodifica el ADN completo del virus phi-X174. Tiene nueve genes en un cromosoma. El gen de la insulina humana se clona en 1978. 1980: La Genetech realiza con tcnicas de ingeniera gentica una hormona que ayuda la retencin de calcio en los riones. 1982: R. Palmiter y R. Brinster crean el primer animal transgnico. Calgene clona el gen responsable de la resistencia de un herbicida en plantas manipuladas genticamente. 1983: K. Mullis, pone en prctica la tcnica de la polimerasa que permite multiplicar las secuencias de ADN. El ingls A. Jeffreys descubre fragmentos que sirven como verdaderas huellas digitales moleculares.

Se crean las primeras plantas transgnicas en 1984. En 1986 se autorizan las pruebas de la vacuna de la hepatitis B, obtenida por ingeniera gentica. 1987: T. Stuart y P. Leder crean un ratn que contiene un gen congnito. 1988: Comienzo el Proyecto Genoma Humano, con el fin de mapear los genes. 1989: Se identific un gen en el cromosoma 7. 1990: En Estados Unidos se realiza el primer tratamiento de terapia gentica. El Proyecto Genoma Humano arrranca. 1993: Identifican el gen que produce la Corea de Huntington. Un tomate genticamente modificado sale a la venta en California en 1994. La oveja Dolly, el primer mamfero clonado, nace el 5 de julio de 1996 en Escocia. Ser sacrificada el 14 de febrero de 2003. Secuenciado el genoma de la levadura de la cerveza en 1996. En febrero de 2001 se publica el mapa del genoma humano. El descubrimiento del ADN. Hasta mediados del siglo 20 no se sospechaba que el cido disoxirribonucleico, ADN, fuera la molcula capaz de asegurar la transmisin de los caracteres hereditarios de clula a clula, generacin tras generacin. Su limitada variedad qumica no permita suponer que poseyera la versatilidad y ductilidad necesarias para almacenar la informacin gentica de los seres vivos. En 1869 un bilogo suizo Johann Friedrich Miesscher, utilizo primero alcohol caliente y luego una pepsina enzimatica, que separa la membrana celular y el citoplasma de la clula, el cientfico quera aislar el ncleo celular, concretamente en los ncleos de las clulas del pus obtenidas de los vendajes quirrgicos desechados y en la esperma del salmn, someti a este material a una fuerza centrifuga para aislar a los ncleos del resto y luego someti solo a los ncleos a un anlisis qumico. De esta manera Miescher identifico a un nuevo grupo de substancias celulares a las que denomino nuclenas, observo la presencia de fsforo, luego Richard Altmann las identifico como cidos y les dio el nombre de cidos nucleicos. Robert Feulgen, en 1914, describi un mtodo para revelar por tincin el ADN, basado en el colorante fucsina. Se encontr, utilizando este mtodo, la

presencia de ADN en el ncleo de todas las clulas eucariotas, especficamente en los cromosomas. Durante los aos 20, el bioqumico P.A. Levene analizo los componentes del ADN, los cidos nucleicos y encontr que contena cuatro bases nitrogenadas: citosina y timina (pirimidinas), adenina y guanina (purinas); el azcar desoxirribosa; y un grupo fosfato. Tambin demostr que se encontraban unidas en el orden fosfato-azcar-base, formando lo que denomino un nucletido. Levene tambin sugiri que los nucletidos se encontraban unidos por los fosfatos formando el ADN. Sin embargo, Levene pens que se trataban de cadenas cortas y que las bases se repetan en un orden determinado. En el ao 1928 Frederick Griffith investigando una enfermedad infecciosa mortal, la neumona, estudi las diferencias entre una cepa de la bacteria Streptococcus peumoniae que produca la enfermedad y otra que no la causaba. La cepa que causaba la enfermedad estaba rodeada de una cpsula (tambin se la conoce como cepa S, del ingls smooth, o sea lisa, que es el aspecto de la colonia en las placas de Petri). La otra cepa (la R, de rugosa, que es el aspecto de la colonia en la placa de Petri) no tiene cpsula y no causa neumona. Griffith inyect las diferentes cepas de la bacteria en ratones. La cepa S mataba a los ratones mientras que la cepa R no lo haca. Luego comprob que la cepa S, muerta por calentamiento, no causaba neumona cuando se la inyectaba. Sin embargo cuando combinaba la cepa S muerta por calentamiento, con la cepa R viva, es decir con componentes individuales que no mata a los ratones e inyectaba la mezcla a los ratones, los ratones contraan la neumona y moran. Las bacterias que se aislaban de los ratones muertos posean cpsula y, cuando se las inyectaba, mataban otros ratones. Frederick Griffith fue capaz de inducir la transformacin de una cepa no patognica Streptococcus pneumoniae en patognica. Griffith postul la existencia de un factor de transformacin como responsable de este fenmeno.

El experimento de Hershey-Chase, el ADN es el material gentico. En 1952 Alfred Hershey y Martha Chase realizaron una serie de experimentos destinados a dilucidar si el ADN o las protenas era el material hereditario. Marcando el ADN y las protenas con istopos radiactivos en un cultivo de un virus, se poda seguir el camino de las protenas y del ADN en un experimento, demostrando cul de ellos entraba en la bacteria. Ese sera el material hereditario (factor transformador de Griffith). Dado que el ADN contiene fsforo (P) pero no azufre (S), ellos marcaron el ADN con fsforo32 radioactivo. Por otra parte, las protenas no contienen P pero si S, y por lo tanto se marcaron con azufre-35. Hershey y Chase encontraron que el S-35 queda fuera de la clula mientras que el P-32 se lo encontraba en el interior, indicando que el ADN era el soporte fsico de la herencia.

El descubrimiento de la estructura del ADN. Rosalin Franklin utiliz una tcnica llamada difraccin de rayos X para fotografiar a la molcula del ADN, esta tcnica puede crear imgenes de pequeas estructuras como molculas, porque la longitud de onda de la radiacin X es tan chica como la separacin entre tomos, producindose reflexiones en los mismos. Los rayos X pasan a travs del ADN se reflejan a su paso, se dispersan o se difractan en diferentes direcciones, cuando los rayos X salen del conjunto llevan un modelo del mismo que impresionan una pelcula fotogrfica. Franklin dirigi los rayos a una fibra suspendida verticalmente de un espesor de un pelo, que contiene millones de filamentos de la forma B o mojada del ADN del timo (glndula endocrina de los vertebrados, que participa en la funcin inmunitaria a travs de los linfocitos T) de un becerro, descubierta por Franklin, la forma B del ADN, es la que se encuentra en las clulas vivientes.

James Watson y Francis Crick El 28 de febrero de 1953, Francis Crick entr en el pub Eagle de Cambridge, Inglaterra, y anunci que l y James Watson haban "encontrado el secreto de la vida." Al menos, eso es lo que Watson recuerda; el recuerdo de Crick es distinto. Las palabras exactas no importan tanto porque la verdad es que lo haban hecho. Ms temprano aquel da, los dos cientficos haban unido pieza por pieza la solucin de un problema que los investigadores de todo el mundo se apresuraban en encontrar. Haban construido un modelo de cido desoxirribonucleico (ADN) que demostraba por su propia estructura cmo el ADN poda ser todo lo que ellos fehacientemente crean que era: el portador del cdigo gentico y, por lo tanto, la molcula clave de la herencia, la biologa del desarrollo y la evolucin. Watson y Crick no eran necesariamente los cientficos ms brillantes del momento (aunque s eran brillantes y mucho). No tenan la

mayor experiencia; sus experimentos en esta rea de la ciencia eran, de hecho, prcticamente inexistentes. No tenan el mejor equipo. Ni siquiera saban mucho de bioqumica, pero a pesar de estas contrariedades, hicieron un descubrimiento que, en el medio siglo siguiente, ha transformado la ciencia, la medicina y gran parte de la vida moderna -aunque su impacto completo est todava por llegar. La historia sobre cmo esta singular pareja resolvi el misterio ms bsico de la biologa molecular es un recordatorio de que las mentes brillantes y una formacin de primera no son necesariamente suficientes para penetrar en los secretos de la naturaleza. Tambin se necesita resistencia, tenacidad y mucha suerte y, como Watson prob inadvertidamente en 1968 con su xito de ventas "La Doble Hlice", su controvertida versin del descubrimiento. Ellos Eligiendo los datos ms relevantes de un cmulo de informacin y analizando con recortes de cartn y modelos de alambre y metal, fueron capaces de develar la estructura de la doble hlice de la molcula del cido desoxirribonucleico, ADN, y formularon los principios de almacenamiento y transmisin de la informacin hereditaria. Este hallazgo les vali el premio Nobel, que compartieron con M.H.F. Wilkins. El siguiente dibujo es original de Watson y Crick y fue tomado del artculo publicado en la revista Nature,

Al ver las imgenes de Rosalin Franklin, Watson y Francis Crick pudieron determinar la estructura del ADN. Diversos fundamentos de las leyes de la difraccin deben aplicarse para deducir la estructura molecular. La letra X. Las leyes de la difraccin establecen que cuando los rayos X se mueven a travs una forma helicoidal, se difractan en ngulos perpendiculares a la hlice, creando una forma en letras en el modelo fotografiado. Watson inmediatamente reconoci este detalle de la estructura helicoidal en el modelo, aunque no vio de inmediato la otra hlice.

Los diamantes. Arriba y debajo de la X central y a los costados de la misma, hay cuatro formas casi regulares que recuerdan a formas de diamantes. A los expertos en esta tcnica les dice que la forma en letra X se repite arriba y abajo del cuerpo central de la X, indicando una continuacin de la hlice. Tambin se conoce que la estructura diamante proviene de una serie regular, a lo largo del eje molecular, de los grupos azcar fosfato del que est formando la espina dorsal del ADN. Finalmente ellos pensaron que el color blanco claro de los diamantes superior e inferior, en oposicin a los diamantes ms oscuros de cada lado, indican que la espina dorsal azcar fosfato estn afuera de la molcula y las bases adentro.

La repeticin del modelo de las X, es una indicacin de la mirada de fibras de ADN, fotografiadas al mismo tiempo,

Lneas. Las lneas o franjas, que se ven en la fotografa, resultan de la dispersin de los rayos X por las secciones de la hlice , cuando los rayos X entran en contacto con las secciones de la hlice la dispersin produce franjas horizontales. Las mediciones realizadas sobre la base de este anlisis revelan las medidas de esta estructura,

La estructura del ADN. Cada molcula de ADN est constituida por dos cadenas o bandas formadas por un elevado nmero de compuestos qumicos llamados nucletidos. Estas cadenas forman una especie de escalera retorcida que se llama doble hlice. Cada nucletido est formado por tres unidades: una molcula de azcar llamada desoxirribosa, un grupo fosfato y uno de cuatro posibles compuestos nitrogenados llamados bases: adenina (abreviada como A), guanina (G), timina (T) y citosina (C).La siguiente figura ilustra las tres unidades, en el dibujo que est a la izquierda, la bolita roja es oxigeno, la violeta es fosforo, la verde es carbono, la blanca es hidrogeno y la azul es nitrogeno.

La molcula de desoxirribosa ocupa el centro del nucletido y est flanqueada por un grupo fosfato a un lado y una base al otro. El grupo fosfato est a su vez unido a la desoxirribosa del nucletido adyacente de la cadena,en el siguiente dibujo se ilustra la union del grupo fosfato y la desoxirribosa,en esta ultima los atomos de carbono no fueron escritos para simplificar el dibujo,

Estas subunidades enlazadas desoxirribosa-fosfato forman los lados de la escalera; las bases estn enfrentadas por parejas, mirando hacia el interior y forman los travesaos. Los nucletidos de cada una de las dos cadenas que forman el ADN establecen una asociacin especfica con los correspondientes de la otra cadena. Debido a la afinidad qumica entre las bases, los nucletidos que contienen adenina se acoplan siempre con los que contienen timina, y los que contienen citosina con los que contienen guanina. Las bases complementarias se unen entre s por enlaces qumicos dbiles llamados puentes de hidrgeno.El siguiente esquema muestra lo descripto en forma muy ilustrativa,el enlace debil,puente de hidrogeno se lo representa en lineas punteadas,

Dogma central de la biologa: Flujo de la informacin gentica El siguiente dibujo es muy esquemtico y nos muestra como se realiza el proceso, donde el creador de la protena se denomina ribosoma,

En el siguiente dibujo, se describe lo mismo con ms detalle, la trascripcin del ADN al ARN y a la protena, este proceso es el fundamento de la biologa molecular y es representado por cuatro etapas importantes. 1) El ADN replica su informacin en un proceso que implica muchas enzimas. 2) Sntesis del ARN mensajero (ARN m). 3) En las clulas eucariotas el ARN m es procesado y migra del ncleo al citoplasma. 4) El ARN mensajero lleva la informacin del cdigo a los ribosomas, Los ribosomas son orgnulos sin membrana, slo visibles al microscopio electrnico debido a su reducido tamao ,29 nm en clulas procariotas y 32 nm en las eucariotas. Su funcin es ensamblar protenas a partir de la informacin gentica que le llega del ADN transcrita en forma de ARN mensajero (ARNm).