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TECNOLOGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE ECATEPEC

Ingeniera Bioqumica

Mtodo de Elaboracin de un Bioinsecticida Contra las plaga insectvoras

Guerrero Chvez Arturo. Grupo:3551 Fecha de entrega: 02/08/2013

Vo.Bo. Dr(a). Garca Rivero Mayola Div. Ingeniera Qumica y Bioqumica

Gobierno del Estado de Mxico.

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Taller de Investigacin II

RESUMEN En los ltimos aos, varios sistemas agrcolas han sido seriamente afectados por plagas de insectos, que de ser en general una especie de importancia secundaria se ha convertido en un problema agrcola principal presente en todos los continentes. Aunque es difcil cuantificar su impacto sobre la produccin, las prdidas ocasionadas por las plagas de esta especie, equivalen a decenas y quizs cientos de millones de dlares. Adems de las prdidas de cultivos debe sumarse el aumento en los costos de produccin, debidos al uso de insecticidas qumicos. Varias especies de parasitoides, depredadores y hongos entomopatgenos han sido estudiadas con el fin de reducir estos costos y sin provocar el dao que causan los insecticidas qumicos a los suelos. Los hongos entomopatgenos tienen la particularidad de invadir a sus hospedantes a travs del tegumento por lo que se consideran de gran utilidad para el control de las poblaciones de insectos. Varios autores han apuntado la posibilidad de empleo de hongos como Paecilomyces fumosoroseus Aschersonia aleyrodis, Verticillium lecanii, Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae. Se pretende realizar de modo artesanal la produccin de un Bioinsecticida a base de un hongo llamado Besuveria bassiana, la cual ser sembrada en un medio solido en este caso arroz para la obtencin de esporas del dicho hongo para su aplicacin directa a los cultivos agrcolas. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Cul sera la solucin para el control de la plagas sin afectar el suelo? Una alternativa para el control de plagas es el uso de organismos entomopatgenos en este caso los hongos de Bauveria bassiana, los cuales tienen la capacidad de reducir las poblaciones de plagas agrcolas de una manera satisfactoria y econmica. De igual manera para reducir los efectos negativos de los insecticidas qumicos en el suelo y disminuir los problemas en las plagas, debido al desarrollo de resistencia a estos y a la destruccin de sus enemigos naturales (otros Insectos como arcnidos). HIPOTESIS. Elaboracin de un plaguicida biolgico que consistir de su elaboracin en un medio slido para la obtencin esporas producidas por hongos entomopatgeno llamado Bauveria bassiana para reducir la poblacin de plagas agrcolas.

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Objetivo General Se elaborara un Bioinsecticida a base de esporas Beauveria bassiana para el control de plagas agrcolas de modo artesanal y semi-industrial para reducir los costos en la utilizacin de insecticidas qumicos. Objetivos Especficos Elaboracin de esporas de Beauveria bassiana en un medio solido (arroz). Adaptar la produccin del Bioinsecticida a una manera artesanal para su fcil elaboracin y aplicacin a los campos de cultivo.

JUSTIFICACIN Debido a la ingestacin de insectos sobre distintos cultivos en el pas se generan cuantiosas prdidas econmicas, que han obligado a los agricultores a buscar medidas para eliminar a estos insectos, dndoles la posibilidad de exportar sus productos a mercados donde se pagan mejor por sus productos como Estados Unidos de Norteamrica y Asia. En estos pases las medidas de sanidad son ms rigurosas que en nuestro pas por lo que los productores deben cuidar aspectos que eviten residuos txicos sobre sus cultivos. Bauveria bassiana es un hongo entomopatgeno especfico para algunos insectos que atacan cultivos de algodn, aguacate, caf, chile, ctricos, flores, frambuesas, fresas, frjol, papa, pltano, tomate, jitomate, tabaco, soya y zarzamora. Este se puede aplicar como medida preventiva al ataque de plagas, evitando aspectos desagradables sobre frutos, o aplicarse directamente en cultivos siniestrados e inclusive en el producto cosechado con plaga. Las plagas agrcolas han sido controladas durante aos mediante el empleo de plaguicidas qumicos de fuerte impacto negativo sobre los organismos benficos presentes en el ambiente. Con el objetivo de promover y acelerar el uso de hongos en el control de plagas en los cultivos es necesario el desarrollo de formulaciones eficaces y estables que permitan su manejo y aplicacin en el campo. En este trabajo se presentan consideraciones para el desarrollo de productos de origen fungoso, los tipos de formulaciones en que pueden ser la forma de granulado y polvo humedecible que son las ms usada hasta estos momentos, en las que nos basaremos para la produccin artesanal de nuestro Bioinsecticida.

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ANTECEDENTES. En el mundo numerosos grupos de investigadores y empresas productoras se concentran en el desarrollo de productos comerciales a partir de hongos en forma de grnulos o polvo humedecible entre los que se citan Biofox C (F. oxysporium y F. moniliforme SIAPA, Italia), Mycotal (V. lecanii, Koppert, Holanda), Mycotrol GH (B. bassiana, Mycotech, USA), Green Muscle (M. flavoviride, CABI Bioscience, UK), DiTera (M. verrucaria, Valent (Sumitomo), USA, Japn) (Burges, 1998;Butt y Copping, 2000). Algunas formulaciones granuladas muy sencillas son las del hongo en arroz o arroz molido obtenidas mediante el proceso de produccin masiva del hongo. Otras como las de grnulos de aceite hidrogenado son utilizadas para conidios deB. Bassiana (Carballo, 1998). Se han evaluado formulaciones en grnulos de alginato usando agentes aumentadores como cscara de naranja seca molida. Existen, adems, procedimientos para la preparacin de formulaciones de micelio o conidios en grnulos de alginato (Carballo, 1998).

INTRODUCCIN. En Mxico y otros pases son frecuentes e importantes los daos que causan plagas de insectos que atacan a las plantas cultivadas (Alatorre y col., 2000). Para controlar este tipo de insectos se ha tenido que recurrir al uso de plaguicidas qumicos sintticos tales como los clorados, organofosforados y piretroides, los cuales fueron exitosos en el control de plagas en sus inicios, minimizando las prdidas de las cosechas. Sin embargo, como consecuencia de su uso inadecuado e indiscriminado, pronto aparecieron problemas de resistencia de los insectos hacia estos productos, as como un rpido crecimiento de las poblaciones de plagas secundarias y alteraciones ecolgicas, causando efectos indeseables en el medio ambiente y en la salud del ser humano. Esto ha ocasionado la prohibicin o restriccin de muchos insecticidas como el dieldrn, mirex, BHC, paratin etlico, toxafeno y DDT (Morales y col., 2009). Con el fin de minimizar estas consecuencias desfavorables, se ha propuesto disminuir el uso de los plaguicidas convencionales y desarrollar nuevas estrategias para un Manejo Integrado de Plagas (MIP), principalmente por medio del control biolgico siendo este un mtodo de control de plagas ms racional y respetuoso con el medio ambiente y acordes con la filosofa de desarrollo sustentable (Badii y col, 2006).

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El MIP es una alternativa para disminuir la dependencia en el uso de insecticidas qumicos sintticos. Se basa en las prcticas culturales con orientacin al control de plagas, la capacidad que tienen las plantas para tolerar o resistir sus daos y la accin de los factores naturales de mortalidad de las mismas, como lo son los parasitoides, depredadores y patgenos de insectos-plagas. Estas tres ltimas son la alternativa de control ms usada para sustituir el uso inadecuado de los insecticidas (Alatorre y col., 2000).

Marco Terico. El desarrollo y aplicacin de agentes de control biolgico de plagas adquiere una importancia relevante como una alternativa en el desarrollo de una agricultura sostenible que preserve los recursos naturales y el medio ambiente para las futuras generaciones. La aplicacin controlada en agro ecosistemas de organismos vivos o sus metabolitos para el control de plagas y enfermedades, implica el mejoramiento de los cultivos, al proteger las plantas del deterioro producido por agentes Fito patgenos En la naturaleza, los hongos entomopatgenos pueden eliminar o mantener las plagas en niveles que no ocasionan daos econmicos a los cultivos Estos hongos se encuentran en rastrojos de cultivos, estircol, en el suelo, las plantas; logrando un buen desarrollo en lugares frescos, hmedos y con poco sol. Constituyen, adems, el grupo de mayor importancia en el control biolgico de insectos plagas. Prcticamente, todos los insectos son susceptibles a algunas de las enfermedades causadas por hongos Se conocen aproximadamente 100 gneros y 700 especies de hongos entomopatgenos. Entre los gneros ms importantes estn: Metarhizium, Beauveria, Aschersonia, Entomophthora, Zoophthora, Erilla, Eryniopsis, Akanthomyces, Fusarium, Hirsutella, Hymenostilbe, Paecelomyces y Verticillium Para utilizar hongos entomopatgenos como insecticidas deben producirse cantidades masivas del hongo, el cual debe mantener su capacidad infectiva por un perodo de tiempo considerable. Los hongos se han reproducido para su uso como agentes biolgicos de plagas desde hace 100 aos, para lo cual se ha utilizado diferentes mtodos de reproduccin. Entre ellos, el uso de sustratos como arroz, trigo y medios lquidos mediante tcnicas ms sofisticadas

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La explotacin de los hongos para el control de plagas implica una amplia investigacin donde se involucran disciplinas como la patologa, ecologa, gentica, fisiologa, produccin masiva, formulacin y estrategias de aplicacin Una buena formulacin es la base para el xito de un bioplaguicida de origen microbiano; la posibilidad de obtener productos adecuados depende de las propias caractersticas del microorganismo y su relacin con los componentes de la formulacin (excipientes) y el ambiente de almacenamiento Para el desarrollo de nuevos productos de origen biolgico se deben tener en cuenta diferentes aspectos: primero definir un medio de cultivo ptimo y el mejor sistema para la obtencin masiva de inculo que permita una buena relacin costo rendimiento en la produccin; establecer ensayos de produccin a pequea escala; garantizar la estabilidad del producto y determinar las condiciones de almacenamiento; poder utilizar la maquinaria standard de cualquier explotacin agrcola para su aplicacin, y ser efectivo a unas dosis parecidas a las utilizadas para los agroqumicos as como bioensayos de laboratorio, invernadero y campo que confirmen la efectividad del producto una vez formulado El objetivo de una formulacin de hongos entomopatgeno es aumentar la estabilidad durante el almacenamiento y despus de la aplicacin. Las propiedades fsicas y biolgicas de la formulacin deben permanecer estables por un tiempo mnimo de 12 meses, pero es recomendable que se mantengan durante 18 meses para permitir su comercializacin. Adems de mejorar la adhesin a la cutcula del insecto; aumentar o mantener la virulencia y permitir su aplicacin con equipos de volumen ultra bajo En condiciones de laboratorio es difcil mantener la viabilidad de hongos entomopatgeno por mucho tiempo. De esta manera, formular un entomopatgeno consiste en adicionarle determinados compuestos que mejoran su desempeo en el campo, facilitando su manejo, aplicacin y permita su almacenamiento en condiciones que disminuyen el costo, con una prdida mnima de las cualidades del producto. Para ser formulado, la viabilidad del hongo no debe ser menor de 95 % y el contenido de humedad entre 4 - 6 %. Los materiales utilizados en la formulacin no deben tener actividad biolgica; ni afectar la actividad del hongo, deben ser inocuos al ambiente, presentar caractersticas fsicas adecuadas para mezclarse con los conidios; facilitar la aplicacin del producto y ser econmicamente rentables Existen varios tipos de formulaciones, el que una sustancia activa dada se presente de una forma u otra depender bsicamente de sus propiedades fisicoqumicas

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(solubilidad, tamao de partcula, densidad, fluidez), de la maquinaria de que dispone, el aplicador y de factores econmicos. La apreciacin que tiene el hombre acerca de los hongos que atacan insectos no est limitada al concepto moderno de su utilizacin para el control biolgico de plagas. Dos milenios atrs los chinos estaban conscientes de la momificacin de gusanos de seda por especies de Cordyceps e Isaria. Colocaban efiges de estos gusanos elaboradas en piedras preciosas y semipreciosas en la boca de sus bocas, para conferirles el mismo grado de inmortalidad. Las orugas infectadas por Cordyceps se utilizan en la medicina tradicional china, por lo menos desde hace mil aos, para el tratamiento de la adiccin al opio hasta su consumo como tnicos y aun como afrodisacos Hasta en la dcada de los noventas la mayor cantidad de investigaciones enfocadas al control biolgico se realizaban con bacterias y virus, aunque los hongos representan el grupo ms amplio de patgenos a insectos. Al parecer exista cierto rechazo a utilizar hongos entomopatgenos como biocontroladores. Debido a los factores ambientales que no favorecan el empleo exitoso y a las dificultades que se presentaban para su produccin a gran escala, junto con su formulacin adecuada como bioinsecticida. No obstante los hongos se han utilizado para el control de melazas desde 1950. Siendo producidos los primeros micoherbicidas a principios de la dcada de los ochenta en USA (Auld, 1991). Agostino Bassi (citado por Roberts y Humber, 1981) estableci la teora de los grmenes que provocaban en animales a mediados de la dcada de 1830, con sus estudios sobre las infecciones de Bauveria bassiana en larvas del gusano de seda. Bauveria bassiana es un candidato interesante para emplearse como bioinsecticida pues tiene ventajas con respecto a otros microorganismos como Bacillus thuringiensis (Bt.) y los virus: las cepas aisladas tiene un rango de hospederos amplio e infectan por invasin a travs de la cutcula, de tal forma que pueden atacar fidos, larvas de lepidpteros y colepteros, y otros insectos masticadores Este hongo se ha producido por fermentacin slida en Rusia, la repblica popular China y en el Brasil. La produccin de esporas de Beauveria bassiana por fermentacin en medio slido (FMS) representa una alternativa interesante para la obtencin de Bioinsecticida econmicamente efectivo. Los medios de cultivo utilizados son sencillos, consisten en residuos o productos agrcolas que pueden contener todo tipo de nutrientes necesarios para el desarrollo de los microorganismos, y pueden obtenerse a bajo costo cerca de las reas de

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aplicacin. Requieren pretratamientos simples frecuentemente es necesario molerlos para reducir el tamao de partcula.

Caractersticas del proceso de infeccin de B. bassiana


Usualmente invade a travs de la cutcula (exoesqueleto quitinoso) del insecto. Las unidades infecciosas casi siempre son esporas, que se unen a la superficie del integumento, germinan y penetran la cutcula. En algunos casos penetra a travs del tracto digestivo (Debach y Rosen, 1991). En el interior del insecto, B. bassiana se propaga y coloniza el hemolinfo. Roberts y Humber (1981) dividieron el proceso de infeccin en diez pasos: unin de las conidias a la cutcula del insecto, germinacin de las conidias en el insecto, penetracin de la cutcula, crecimiento del hongo en el hemolinfo, produccin de toxinas, muerte del hospedero, crecimiento micelar e invasin de todos los rganos del hospedero, salida de la hifas a travs de la cutcula, produccin de esporas, y dispersin de las esporas por el entorno La unin de las conidias a la cutcula de los insectos es el evento inicial en el establecimiento de la micosis. Cuando se produce el contacto las esporas se unen fuertemente a la epicutcula (superficie externa de la cutcula) mediante interacciones hidrfobas no especficas que juegan un papel fundamental en la adhesin (Boucias et al., 1988). La superficie exterior de la pared de las esporas y la epicutcula contienen los elementos determinantes para la unin. La superficie de las conidias de B. bassiana est cubierta de una capa bien organizada de haces entretejidos de fibras, compuestas fundamentalmente por carbohidratos que le confieren resistencia contra la deshidratacin, su hidrofobicidad caracterstica, y facilitan su dispersin en el aire (Boucias et al., 1988). Figura 1.

Figura 1.Estructura y composicin de la cutcula de insectos y forma de penetracin de hongos entomopatgenos (Montesinos, 2008).

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Los carbohidratos como -D-manosa -D-glucosa y -galactosamina y glicoprotenas como las lecitinas, presentas en la pared de las conidias, estn implicados en procesos de quimiotaxis, adhesin e infeccin (Hegedus et al.1992). Es probable que la formacin de estos carbohidratos pueda ser facilitada con la correcta formulacin del medio de cultivo utilizado en la produccin de esporas (Lane et al., 1991). En la fase de crecimiento micelar y produccin de esporas, el hongo invade prcticamente todos los rganos del insecto provocando su muerte. Si las condiciones de humedad y temperatura ambientales no son las adecuadas, el hongo permanece dentro del cadver que sirve como su reservorio. Cuando se restablecen las condiciones apropiadas el hongo emerge a travs de la cutcula y produce esporas (conidias), que se dispersan con las corrientes de aire o agua. En esta fase B. bassiana puede restablecer relaciones endofticas con diferentes plantas, colonizarlas sin daarlas o interactuar de forma especfica con estas, pues no es un hongo fitopatgeno. Se ha demostrado que este hongo puede colonizar plantas de maz a nivel de los verticilos, moverse por su sistema vascular de forma pasiva, y persistir en su interior por largos perodos. Esta capacidad puede aprovecharse para su utilizacin en el control de plagas. La produccin de toxinas es una caracterstica de la gran mayora de las especies de hongos entomopatgenos. Estas sustancias pueden, en muchos casos, originar la muerte del insecto debido a sus propiedades biocidas; adems actan como inhibidores de las reacciones de defensa del hospedante por alteraciones en los hemocitos y retraso en la agregacin de las clulas de la hemolinfa (Vey yGtz, 1986). Las toxinas que producen los hongos entomopatgenos pueden ser macromolculas proteicas o molculas de tamao medio a pequeo con bajo peso molecular (Roberts, 1981; Vey et al. 2001). Entre las toxinas producidas por hongosentomopatgenos destacan las destruxinas producidas por M. anisopliae como las ms estudiadas. La muerte del insecto puede resultar de una combinacin de factores incluyendo agotamiento de nutrientes, obstruccin fsica o invasin de rganos y Toxinas producidas por algunas especies de Hifomicetos entomopatgenos. Finalmente el hongo concluye su ciclo al colonizar externamente al cadver del insecto y producir y liberar al medio millones de conidias infectivas, que funcionarn como inculo secundario para infectar a otros individuos. Figura 2.
Figura 2. Faces de la colonizacin de Beauveria bassiana en una larva de lepidptera causante de la perdida de muchos cultivos de maz en el mundo.

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Tecnologas para producciones de hongos.


Tecnologas bsicas En el mundo se realizan desde muy puntuales y pequeas producciones de agentes de biocontrol como la tecnologa desarrollada sobre medio agarizado para la produccin de Phlebiopsis gigantea, hongo antagonista basidiomiceto del tambin basidiomiceto Heterobasidion annosum, que es el agente causal de la enfermedad que ms afecta la raz de las conferas en el hemisferio norte, hasta producciones a escala industrial como las desarrolladas por Mycotech Corporation que pueden llegar a varias toneladas de Beauveria bassiana anualmente. Los mtodos de produccin varan considerablemente. Muchos estn basados en fermentaciones sobre sustrato slido con granos de cereales donde el arroz es el ms universal. Otros usan sustratos no nutritivos como grnulos de arcilla. Algunos rinden conidios areos en la superficie de cultivos lquidos estticos. Otras tecnologas se desarrollan en tanques de fermentacin para obtener productos a base de micelio, blastosporas o conidios sumergidos. Las 4 formas de produccin fundamentales para hongos son:

1. Cultivos bifsicos, donde se desarrolla el inculo en cultivo lquido agitado (de forma rpida) o lquido esttico (ms lento) y luego se pasa al soporte slido. En los sistemas bifsicos siempre se debe optimizar el cultivo de la fase lquida para que promueva un rpido crecimiento del aislado. Es el ms usado a nivel mundial por obtenerse estructuras infectivas de alta calidad y acortarse el tiempo cuando la fase lquida se hace por cultivo lquido agitado. Son semiartesanales. 2. Cultivos sobre soporte slido, siendo una forma de produccin donde se requiere menos equipamiento y se realizan muchas operaciones manuales pero se obtiene estructuras infectivas de alta calidad a concentraciones altas. Son artesanales 3. Cultivos lquidos agitados o fermentaciones lquidas con un grado de automatizacin del proceso que puede ser muy alto, son muy rpidos, pero tienen como desventaja el que muchos aislados tienden a crecer como pellets miceliales discretos y/o forman abundantes blastosporas (esporas formadas propagadas por gemacin a partir de fragmentos de micelio originalmente), propgalos estos que no son apropiados por la baja estabilidad intrnseca y poseer per se baj o nulo poder infectivo. En estos sistemas se logra un ptimo aprovechamiento de los nutrientes. Pueden llegar hasta niveles industriales

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4. Cultivos lquidos estticos, los que constituyen una forma de produccin donde se requiere menos equipamiento y se realizan muchas operaciones manuales pero se obtiene estructuras infectivas de alta calidad a concentraciones bajas pues solamente hay formacin de estructuras deseadas en la interface lquido- gaseosa. Son artesanales Una forma especial de cultivo slido con tecnologa avanzada lo constituyen las fermentaciones en estado slido las que han dado la oportunidad a la industria de desarrollar producciones de bioplaguicidas en birreactores sellados con un grado alto de automatizacin, con principios similares a aquellos de la fermentacin lquida, lo que reduce costos de mano de obra y permite un control eficiente del proceso de produccin donde se logra biomasa de alto valor infectivo y ms resistente a condiciones ambientales adversas. En estos sistemas tambin se logra un ptimo aprovechamiento de los nutrientes pero la inversin de capital inicial es muy alta. Para los pases del tercer mundo esta tecnologa presenta menos posibilidades de aplicacin debido a las dificultades econmicas y el alto costo de capital de estos procesos automatizados. La presencia de mano de obra barata y un mercado que es regional y pequeo hace a los sistemas de produccin artesanales (baja tecnologa) viables econmicamente a pesar de requerir muchas operaciones manuales.

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Descripcin del proceso productivo artesanal (baja tecnologa).

CULTIVO INICIAL EN VIALES CON MEDIO AGARIZADO

INOCULACION E INCUBACION DE MEDIO SOLIDOO (PREINOCULO)

INOCULACION E INCUBACION DE SUSTRATO

SECADO

COSECHA

FORMULACION

ENVASADO

Figura 3. Diagrama de flujo para la elaboracin del Bioinsecticida.

Diagrama de flujo general del proceso de produccin de hongos por va artesanal. En los sistemas artesanales para la produccin de hongos se establecen de manera general los pasos enunciados en la Figura 3.

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METODOLOGA.
En toda produccin de bioplaguicidas microbianos se parte de un aislado con caractersticas deseadas como agente de biocontrol, el cual es conservado previamente y subcultivado durante el escalado. Los preinculos pueden desarrollarse sobre sustratos slidos (grano arroz, grano trigo, cscara de trigo, cscara de arroz, harina de maz, etc ) incluyendo los medios agarizados de cultivo o por cultivos lquido esttico o agitado (compuestos por combinaciones de materias primas carbonadas y nitrogenadas como melaza de caa de azcar, licor de maz, almidn de maz, sacarosa, extracto de levadura torula, extracto de levadura cervecera, etc.) siendo el objetivo fundamental la obtencin de una biomasa homognea. La relacin carbono (C): Nitrgenos (N) es esencial y de este balance en lo fundamental depender el que se logre la formacin de los propgulos deseados. En los hongos, se necesita que la fuente C est en exceso en el medio y el contenido de N sea el factor limitante del crecimiento, lo que desencadena el proceso esporulativo. Los inculos se preparan a partir de subcultivos de preinculos a una concentracin final en el sustrato inoculado de 10(5)-10(7) propgalos/g La eleccin de los sustratos sobre los que se realizar la inoculacin, previa esterilizacin, depender de la disponibilidad local y costo de estos as como de las caractersticas del aislado a reproducir. Se han usado cereales como agentes nutritivos (arroz, trigo, cscara de trigo, cscara de arroz, maz etc.) y como agentes inertes de soporte la vermiculita, grnulos de minerales arcillosos, tela, etc. Con el uso de sustratos inertes las soluciones nutritivas en los que estos se embeben pueden ser balanceados cuidadosamente para asegurar una casi completa utilizacin de los nutrientes y ac despliegan un papel clave tambin el balance C:N. El sustrato puede ser humedecido previa esterilizacin o previa inoculacin dependiendo del tipo de materia prima o combinacin de estas y ajustes realizados. Un exceso de humedad provocara baja disponibilidad de oxgeno y por ende pobre desarrollo del microorganismo. Adems compactara el substrato impidiendo una colonizacin total de su superficie. Por otro lado, una baja humedad podra inhibir el desarrollo del microorganismo al no poner la suficiente cantidad de nutrientes en solucin para ser usado por este adems de la poca resistencia a la desecacin que tienen los hongos en el periodo activo de crecimiento micelial.

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Durante la incubacin se debe regular el rgimen luz-oscuridad. La luz es estimulante en determinadas especies y aislados por lo que este parmetro es ajustable solamente a travs de la experimentacin. Cuando se obtiene la biomasa conidial ptima sobre toda la superficie del sustrato se pasa al proceso de secado para que los conidios permanezcan viables en almacenamiento por mayor tiempo. Este proceso se optimiza con deshumidificadores o aires acondicionados o acelerando la ventilacin con ventiladores lo que depende de las condiciones locales. Posterior al secado y previo al paso final de envasado en el flujo de produccin se realiza la cosecha. Es en este momento que comienza la etapa de formulacin donde se prepara una combinacin de ingredientes de forma que el principio activo (esporas) se mantenga estable, efectivo y fcil de aplicar. Durante todo el proceso la regulacin de la temperatura ambiental es esencial la que debe ser lo ms prxima posible a la temperatura ptima de desarrollo del microorganismo. Control de calidad del producto cosechado. El control de calidad del producto cosechado se realiza mediante la evaluacin de rendimiento en nmero de conidias por gramo de polvo cosechado y la viabilidad de las conidias (porcentaje de germinacin).Se considera de calidad aquel rendimiento que no sea inferior al rendimiento promedio de la cepa y que la viabilidad no sea menor al 95%. Si una cepa presenta un rendimiento muy bajo no debe utilizarse porque su rentabilidad sera muy baja. Cuando el rendimiento es muy bajo se debe a que la cepa es muy vieja y ha ido perdiendo sus caractersticas, por lo que se recomienda reactivarla en el insecto hospedante. Las evaluaciones de rendimiento (conidias por gramo de polvo) se deben realizar al momento de la cosecha y antes de la preparacin de la formulacin. Control de calidad de la preservacin en slica gel. El control de calidad del material preservado se inicia con la seleccin adecuada del cultivo puro, el cual debe ser reciente y debe presentar caractersticas de buen crecimiento, buena esporulacin y buen vigor. El proceso del control de calidad se efecta entre 5 y 6 das despus de la preservacin, con el objetivo de determinar el estado del cultivo. Si este se encuentra en mal estado, es necesario descartar todo el material preservado. Se siembran cristales de slica gel en un medio de cultivo con el propsito de observar el tipo de crecimiento del entomopatgeno y detectar la presencia de contaminantes (bacterias y hongos). Procedimiento para el control de calidad

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1. Anotar en un registro algunas caractersticas de coloracin de los cristales de slica gel, si contiene humedad, tubo muestreado, la fecha de preservacin anterior, etc. 2. De los tubos preservados se toman de 10 a 15 cristales de slica gel y se siembran en 2 a 3 cajas de Petri con PDA. 3. A las cajas de Petri se les coloca una etiqueta que lleva la informacin: la fecha del da del control de calidad, el cdigo de la cepa, la fecha de preservacin y nmero de la caja. 4. Posteriormente las cajas son colocadas en una incubadora o se dejan a temperatura ambiente. 5. Las cajas deben ser revisados tres d.as despus de la inoculacin para observar el tipo de crecimiento. El crecimiento del hongo debe ser caracterstico del aislamiento preservado.

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BIBLIOGRAFA

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Estudio de pre factibilidad para la instalacin de una planta productora de un Bioinsecticida por fermentacin slida a partir de Bauveria bassiana/cruz Aguilar Jess Fernndez Sandoval Lilia a., Jurez Martnez Nancy e., pedral Gonzlez Cintia 05 de diciembre de 2005/universidad autnoma metropolitana EVALUACIN DE CEPAS DE BEAUVERIA BASSIANA CONTRA DESCORTEZADORES (COLEOPTERA: SCOLYTIDAE) DEL GNERO IPS EN PLANTACIONES DE PINOS (PINUS CARIBAEA MORELET). Autores: Ren Alberto Lpez Castilla1, Enrique de Zayas 2, Antonio Fernndez Vera3 y Natividad Triguero Isasi1. HONGOS ENTOMOPATGENOS: IMPORTANTE HERRAMIENTA PARA EL CONTROL DE MOSCAS BLANCAS (HOMOPTERA: ALEYRODIDAE)/ Anas da Academia Pernambucana de Ciencia Agronmica, Recife, vols. 5 e 6, p.209242, 2008-2009. Manejo Integrado de Plagas (Costa Rica) No. 63 p. 9 5 - 1 0 3 , 2 0 0 1/Avances en el Fomento de Productos Fitosanitarios No-Sintticos/Arnulfo Monz.n1 METODOS ARTESANALES DE PRODUCCIN DE BIOPLAGUICIDAS A PARTIR DE HONGOS ENTOMOPATGENOS Y ANTAGONISTAS Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal (INISAV) Ciudad de La Habana, Cuba 2006

USO DE BIOINSECTICIDAS PARA EL CONTROL DE PLAGAS DE HORTALIZAS ENCOMUNIDADES RURALES/Cipriano Garca Gutirrez y Mara Berenice Gonzlez Maldonado/Ra Ximhai, enero-abril,

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