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Resultados y Discusin * Tinciones simples: azul de metilenos

E.coli

S. aureos
Figura # 1: Tincin simple en Staphylococcus aureus, E.coli

En resultados demostrados en la (figura # 1) para todas las muestras no solo es posible observar nicamente la morfologa celular, adems la coloracin reflejada por las especies bacterianas utilizadas tiende a ser un azul bastante discreto o claro. Es adems resaltante la eficacia presentada por el colorante para lograr la tincin en los microorganismos en Staphylococcus aureus y E. coli, en cada uno de estos se aprecia la morfologa externa caracterstica y especfica de cada una de las especies tratadas, siendo estas formas bacilos y cocos. l proceso de tincin ocurre especficamente porque el azul de metileno es un colorante bsico que siente afinidad por los componentes del DNA celular, este ultimo presenta un carcter acido que le confieren los fosfatos constituyentes su estructura, de tal modo que al estar el DNA cubriendo gran parte del citoplasma bacteriano, al teir este podremos observar la clula en su totalidad. Esta tcnica tiene la desventaja de teir toda el rea de observacin, lo que es levemente lavado con agua destilada. La tcnica de tincin de frotis con azul de metileno es una tcnica que se basa en que muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos es el usado en esta sesin prctica, el azul de metileno.

* Tinciones diferenciales.

Bacillos negativos

Estafilococos positivos

Figura # 2: diferenciacin de tincin gram entre Bacillos y Estafilococos

Las diferencias estructurales entre las paredes celulares de las bacterias Gram (+) y Gram (-) son las responsables del desigual comportamiento de las clulas a la coloracin de Gram como se puede observar en la figura # 2. Especficamente, el detalle se centra en el peptidoglucano o murena, cuya estructura le confiere rigidez a la pared celular bacteriana (mayor proporcin de peptidoglucano para las Gram (+) (90%), al poseer una pared celular ms resistente no son susceptibles a la accin del solvente orgnico que para las Gram (-) (10%), que son susceptibles a la accin de dicho solvente. La pared celular de las bacterias Gram (+) y Gram (-) son permeables al cristal violeta. Pese a ello, la pared de las primeras no lo es al complejo cristal violeta-yodo formado en el interior de la clula. La safranina se utiliza como colorante de contraste, por lo que se pone de manifiesto slo en las bacterias Gram (-). Finalizado el protocolo, las Gram (+) se visualizan de color azul violceo, y las Gram (-) de color rojo o rosa. Conclusiones Las tinciones simples nos ayudan a reconocer y observar la morfologa y organizacin de las clulas entre ellas debido a los componentes de la clula con carga negativa positiva a discrepancia de las tinciones diferenciales permiten reconocer a un tipo de bacterias de otras segn el grosor y composicin de su membrana. La diferencia entre una muestra de microorganismos Gram (+) y Gram (-), es el color que obtienen al terminar el protocolo de tincin producto de las diferencias presentes entre las estructuras que componen su pared y membrana celular. Referencias Bibliogrficas

Brock y col. 2006. Biologa de los Microorganismos. 10ma edicin. Editorial Prentice Hall. Madrid, Espaa. Pg. 81, 412-413. Montiel, M. 2005. Practica # 6. Mtodos de coloracin de clulas bacterianas (I parte: Tinciones simples y diferenciales). Universidad del Zulia. Facultad Experimental de Ciencias. Departamento de Biologa Republica Bolivariana de Venezuela Universidad del Zulia Facultad Experimental de Ciencia Departamento de Biologa Laboratorio de Microbiologa Practica #8 Mtodos de coloracin de clulas bacterianas Parte I: Tinciones simples y diferenciales Harold Rondon. C.I: 19.989.313 Introduccin Los procedimientos que ponen de manifiesto diferencias entre las clulas bacterianas o en partes una clula se conoce como tincin y puede ser simple y diferencial, en la cual la simple consiste en inundar con un colorante cualquiera la lmina donde se tienen las bacterias, luego lavarlas con agua, y algunas clulas retendrn el colorante, por reaccin con el mismo, en cambio la diferencial usa varios colorantes son algo ms que elaboradas que la tcnica simple en la que las clulas se someten a una sola solucin colorante o reactivo colorante, (Montiel, M. 2005). Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por calor es lo ms corriente, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante, no se producen cambios estructurales en el protoplasma, (Brock y col. 2006). Si se desean observar las caractersticas morfolgicas de las bacterias, resulta sumamente til el utilizar las preparaciones fijas y teidas, debido a que estas permiten que las clulas se visualicen de mejor manera y con la tincin diferencial se puedan diferenciar las distintas especies por su coloracin. Este tipo de coloracin es sumamente importante, ya que discrimina entre un tipo de bacterias y otro de acuerdo con su susceptibilidad ante uno u otro colorante, (Montiel, M. 2005). Muchos colorantes utilizados presentan propiedades catinicas (cargados positivamente) y se combinan fuertemente con los componentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y polisacridos cidos. Entre los colorantes bsicos, incluyen el azul de metileno, cristal violeta y la safranina. Por otro lado, existen colorantes que presentan propiedades aninicas (cargados negativamente) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como las protenas (Brock y col. 2006).

Entre estos mtodos se encuentra la coloracin de Gram, el cual discrimina entre clulas gran (+) y clulas gran (-), es generalmente utilizado debido a que muchas de las clulas patgenas son del tipo gramnegativo, aparte de esta diferencia las clulas gran (+) son ms susceptibles a la penicilina y ms resistentes a la accin mecnica y exposicin a algunas enzimas que las gran (-). La forma en que se realiza este mtodo es aplicando cristal violeta a la laminilla, luego se aplica yodo como un mordiente, luego se lava con alcohol, para finalmente aadirle un colorante de contraste. En general, se obtienen bacterias de color rojo y violeta. Las clulas gran (-) pierden el cristal violeta durante el lavado, por lo tanto aparecen rojas ante el contraste de la safranina, las clulas gran (+) retienen el cristal violeta, por lo tanto se observan violeta profundo, (Brock y col. 2006). Objetivos Observar, identificar y clasificar las bacterias segn el mtodo de tinciones simples: Tincin con Azul de Metileno y tinciones diferenciales: Coloracin de Gram. Conocer los fundamentos de cada colorante y su relacin con la pared celular bacteriana. En el caso de las tinciones diferenciales de microorganismos, mostrar la diferencia entre una tincin positiva y una negativa.