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Cuadro comparativo procariotas -eucariotas

cido teicoico
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cido teicoico de las bacterias Micrococcaceae Los cidos teicoicos son polmeros de glicerol o ribitol unidos mediante enlaces fosfodister. Estos cidos se encuentran en la pared celular de las bacterias Gram-positivas, tales como Staphylococci, Streptococci, Bacillus, Clostridium, Corynebacterium y Listeria, extendindose sobre la superficie de la capa de peptidoglicano. Los cidos teicoicos son polmeros de un polialcohol (glicerol o ribitol).

Caractersticas
Los cidos teicoicos no se presentan entre las bacterias Gram-negativas. Se pueden enlazar bien covalentemente al cido N-acetilmurmico de la capa de peptidoglicano o bien unirse a los lpidos presentes en la membrana citoplasmtica. Las unidades combinadas compuestas de cidos teicoicos y lpidos se denominan cidos lipoteicoicos. Los cidos teicoicos estn cargados negativamente y por lo tanto contribuyen a la carga negativa de la pared celular Gram-positiva. Tambin pueden proporcionar soporte estructural a la pared celular.

Propiedades funcionales de los cidos teicoicos


1. Da factor de antigenidad. 2. Controla el transito de algunos cationes como el Mg++. 3. Regula la actividad de los auto lisosomas, por lo que controlan la autolisis. 4. Fomenta la adherencia bacteriana a epitelios

La Pared bacteriana

El fenmeno de plasmlisis | La tincin de Gram | Estructura Qumica | La pared celular Gram positiva | La pared celular Gram negativa | Accin de la lisozima y de la penicilina | La membrana externa | Glosario | Enlaces | Autoevaluacin: 1, 2, 3

Cubiertas superficiales
Las cubiertas que rodean la clula bacteriana se han identificado por medio de tcnicas de tincin en microscopa ptica y electrnica, y tcnicas de aislamiento y caracterizacin bioqumica de los componentes celulares. Las principales cubiertas son: cpsulas y limos la pared celular de las bacterias Gram-positivas la pared celular de las bacterias Gram-negativas la membrana plasmtica los mesosomas (invaginacin de la membrana plasmtica) La relacin topogrfica entre la pared celular y la membrana plasmtica se observa en la microfotografa electrnica de Micrococcus lysodeikticus (A) y de Bacteroides melaninogenicus (B).

A. Microfotografa electrnica de la bacteria Gram positiva Micrococcus lysodeikticus mostrando B.


la gruesa capa de peptidoglicano que conforma la pared celular ( cw), por debajo de ella la membrana plasmtica (cm), un mesosoma(m), y el nucleoide (n). Clula bacteriana procesada mostrando la lnea de fractura entre la membrana citoplasmtica (m.i.) y la pared celular (m.e.). Barra = 1 m.

Tanto las bacterias Gram positivas como las Gram negativas poseen una pared celular de peptidoglicanos que les confieren su forma caracterstica y les provee de proteccin mecnica. Dos grupos de bacterias carecen de pared celular: los Mycoplasma que poseen solamente membrana celular las formas L derivadas de bacterias que perdieron su habilidad de sintetizar su pared celular

MET de Mycoplasma La pared celular bacteriana rodea al protoplasto. La pared bacteriana es permeable a las sales y a muchas sustancias de bajo peso molecular. No es rgida sino elstica como el "cuero" de una pelota de ftbol, el protoplasto bacteriano confiere una cierta rigidez al conjunto protoplasto + pared que lo rodea, derivada de su presin interna o turgencia (al igual que la cmara hinchada de la pelota). La presin interna del protoplasto esta determinada osmticamente. Se debe tener en cuenta que la membrana citoplasmtica es la verdadera barrera osmtica (es semipermeable y controla la entrada y salida de sustancias a la clula).

La pared celular y la plasmlisis

La semipermeabilidad de la membrana citoplasmtica y la permeabilidad de la pared celular originan, entre otros, el fenmeno de plasmlisis. Este fenmeno se observa cuando la tonicidad del medio externo es mayor que la del protoplasto (medio hipertnico) en estas condiciones el agua sale del protoplasto y este se encoge por lo que la membrana citoplasmtica se separa de la pared.

La pared celular y la coloracin de Gram


La pared celular es responsable de lo que le sucede al colorante utilizado en la Tincin de Gram (1884). La propiedad de teirse o no de violeta oscuro (Gram positivas o Gram negativas) por esta coloracin es un criterio de clasificacin importante correlacionable con otras propiedades bacterianas. Unos pocos organismos son Gram-variables. Tanto las Gram-positivas como las Gram-negativas captan la misma cantidad de cristal violeta (CV) e iodo (I). El complejo CV-I sin embargo es atrapado dentro de la clula Gram positiva por la deshidratacin y la reduccin del tamao de los poros de la pared resultante del proceso de lavado con solvente. En contraste en las Gram negativas la fina (y probablemente discontinua) capa de peptidoglicano no impide la extraccin por el solvente del complejo. Avala lo antedicho el hecho que, si despus de su tincin se tratan con lisozima bacterias Gram positivas, se ve que los protoplastos siguen teidos, pero pierden el colorante si se los trata con alcohol. Esto indica que el colorante es fijado a nivel del protoplasto, y que la pared celular de las bacterias Gram positivas es la que impide la extraccin del colorante. Corroborando esta suposicin se observa que cuando Bacillus subtilis emerge de su espora su pared celular esta "inmadura" y se comporta como Gram negativa. Cuando la pared celular adquiere su estructura final pasa a ser Gram positiva.

La pared bacteriana: Estructura Qumica

El esqueleto de la pared celular bacteriana est constituido por un heteropolmero, el peptidoglicano murena. El mismo, y las enzimas que intervienen en su sntesis, son una caracterstica general de todas las eubacterias. Las arqueobacterias no poseen murena.

Esta macromolcula esta formada por una secuencia alternante de N-acetilglucosamina (NAG) y el cido N-acetilmurmico (NAM) unidos mediante enlaces -1,4. La cadena es recta y no ramificada, constituyendo la estructura bsica de la pared celular (su "backbone"). El cido N-acetilmurmico es un ter resultante de la unin del oxhidrilo del C3 de la molcula de N-acetil-glucosamina con el oxhidrilo del cido lctico. El grupo cido del lctico enlaza con una pequea cadena peptdica. Entre los aminocidos tpicos de esta cadena se encuentran la L-alanina, cido D-glutmico, cido m-diaminopimlico o la L-lisina o D-alanina. Los diaminocidos al tener dos grupos amino pueden formar enlaces peptdicos con aminocidos dicarboxlicos de otra cadena. A travs de estas uniones peptdicas se unen entre s las cadenas de heteropolmeros formando una molcula gigante, el sculo de murena.

Representacin esquemtica de los peptidoglicanos

Debemos destacar lo siguiente:


Las formas D de la Alanina y del cido glutmico no se presentan en las protenas de los eucariotas. Tampoco en dichas protenas se encuentra el cido mdiaminopimlico. La secuencia alternante de N-acetilglucosamina y Nacetilmurmico no se encuentra en eucariotas Estas caractersticas estructurales hacen que las bacterias (al igual que con la diferencia en los ribosomas) presenten un "taln de Aquiles" susceptible de ser utilizado en su contra por los frmacos de la terapia medica. Los agentes teraputicos que actan en el mbito de la pared celular bacteriana y tienen como "blanco" las enzimas involucradas en su sntesis son en gran medida inocuos para el organismo eucariota sometido a una agresin bacteriana (las "balas mgicas" visualizadas por Paul Erlich).

La pared celular de las bacterias Gram positivas


Sus principales caractersticas son: La red de murena esta muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas Los aminocidos implicados varan de una especie a otra. La constitucin del esqueleto es caracterstica de la especie y constituye una buen parmetro taxonmico Es frecuente la presencia de los aminocidos L-diaminopimlico o de lisina Los poliscaridos estn unidos por enlaces covalentes (en el caso de tenerlos) Su

contenido proteico es bajo. En ella se encuentran cidos teicoicos

La pared celular de las bacterias Gram negativas


La red de murena presenta una sola capa La constitucin del saco de murena es igual en todas las bacterias Gram negativas. Contiene siempre nicamente meso-diaminopimlico Nunca contiene lisina No se encuentran puentes interpeptdicos. Se encuentran grandes cantidades de lipoprotenas y lipopolisacridos que representan hasta el 80 % del peso seco de la pared celular. Para mantener la estabilidad de las capas de lipopolisacridos es necesario el in Ca++. En las bacterias Gram negativas la capa de murena puede ser atacada por la lisozima cuando se las trata con EDTA (Etilen-diamino-tetractico). Este agente, al quelar el Ca++ libera una parte de los lipopolisacridos y permite la accin de la enzima.. Hasta ahora no han podido demostrarse cidos teicoicos.

Accin de la lisozima y la penicilina


Un viejo refrn dice que Dios llama a la puerta de un hombre solo una vez en la vida. No es el caso de Sir Alexander Fleming a la de l llamo dos veces (o ms), aunque es necesario coincidir que no es suficiente con el llamado, amn de l, es necesario escuchar y responder. Segn se cuenta el descubrimiento de la lisozima tuvo lugar cuando las lagrimas de un nio (que estaba en el laboratorio donde trabajaba Fleming), caen en un tubo y aclaran una suspensin Micrococcus lysodeikticus, que, hoy se sabe, es la bacteria mas sensible a la lisozima, ma siii.... Este hecho esta un poco menos difundido que la novelesca historia de la espora de Penicilium que entro por la ventana del laboratorio de Fleming, cayo en una placa de Petri y al crecer puso de manifiesto la accin bactericida del antibitico que llamo penicilina....( Florey y Chain en Oxford la aislaron, dieron las pautas de su produccin industrial y al hacerlo pusieron en marcha la era de los antibiticos, por ello, Fleming , Florey y Chain recibieron el premio Nobel en 1945 ) La lisozima descubierta en 1922, es una enzima que rompe el enlace beta glucosdico de la murena. Se la encuentra en el lquido lagrimal, secreciones

nasales y en la clara de huevo. Tambin se la ha aislado de bacterias y bacterifagos. La accin de la lisozima se pone en evidencia por un aclaramiento rpido de una suspensin bacteriana, Micrococcus lysodeikticus ya se lisa con 1 ug de lisozima / ml. Para lisar otras bacterias p.e Bacillus megaterium se necesitan 50 ug / ml . La capa de murena de muchas bacterias Gram negativas solo es atacada por la lisozima cuando se aade EDTA (Etilen-diamino-tetractico). El mecanismo de lisis es el siguiente: la destruccin de la pared celular deja al protoplasma de las bacterias rodeado nicamente por la membrana celular ("protoplasto"), lo cual convierte a la bacteria en un organismo extraordinariamente sensible a las variaciones de tonicidad del medio, esta es la base del fenmeno de aclaracin que tiene lugar luego de la accin de la lisozima, cuando la solucin es hipotnica.

Los protoplastos son estables en medios hipertnicos e isotnicos; en medios hipotnicos, tal lo sealado, estallan y dejan restos de membrana citoplasmtica llamados "fantasmas" (ghosts). El proceso de sntesis de la pared celular comienza en el citoplasma bacteriano, a partir de N-acetilglucosamina-1-fosfato que se une al UDP (uridin difosfato).

El UDP se combina con la N-acetilglucosamina-1-fosfato, para dar UDP-Nacetilglucosamina que primero forma el ter lctico y luego en sucesivos pasos enzimticos se unen al mismo los cinco aminocidos para formar el Nacetilmurmico.

En el siguiente paso, que ocurre en el mbito de la membrana citoplasmtica la molcula que es hidrfila cambia a lipfila, lo cual facilita su transporte, por el cambio del UDP por undecaprenil-fosfato y el agregado de un pentapptido de glicina a nivel de la L-lisina En la siguiente fase, en el mbito de la pared celular, se produce la transglucosidacin y formacin del enlace beta alargando de esta manera la molcula. Los enlaces transversales entre molculas del polmero se produce por transpeptidacin, se libera una D-alanina y el grupo carboxilo se une a un grupo amino de la lisina de otro oligopptido, tambin se libera el undecaprenil-fosfato. La penicilina interfiere en este ultimo paso, es decir impide la unin transversal o puente interpeptdico pero no la elongacin del polmero. De la misma manera actan las cefalosporinas, vancomicina, bacitracina y cicloserina. Debe notarse que la sntesis de la pared no se realiza cuando no hay lisina disponible o cuando se impide la racemizacin de la L-alanina y por lo tanto la disponibilidad de la Dalanina por efecto de la c-clicoserina (oxamicina).

La membrana externa

En la bacterias Gram negativas se observa por fuera del saco de murena una capa semejante a la membrana celular por lo que se ha dado en llamarla membrana externa, es de composicin compleja y en ella intervienen fosfolpidos, protenas y lipopolisacridos. Cumple funciones mecnicas y fisiolgicas. En esta bicapa lipdica (compuesta por el lpido A del lipopolisacrido en su parte externa y los fosfolpidos en la interna) se encuentran protenas que la atraviesan en todo su espesor y que delimitan poros (por eso se denominan porinas) hidrfilos que permiten el paso de sustancias hidrfilas de bajo peso molecular. No se encontraron sistemas de transporte activo. La membrana externa se encuentra unida al peptidoglicano a travs de la protena conocida como lipoprotena de Braun cuya parte lipdica se encuentra en la membrana y la protena unida covalentemente a la murena. de la membrana. La membrana externa tiene unos puntos de contacto con la membrana interna que se denominan uniones de Bayer y que se supone son importantes en el transporte a travs de la membrana. ESPACIO PERIPLSMICO

En las bacterias Gram negativas el espacio que va desde membrana plasmtica a membrana externa (ver figura abajo) se denomina espacio periplsmico, tiene aparentemente una consistencia gelatinosa. En numerosas bacterias contiene abundantes enzimas, por ejemplo aquellas que inician la degradacin de substratos como la glucosa, o la transformacin de compuestos inorgnicos como los nitratos. Tambin se encuentran las depolimerasas que actan sobre los biopolmeros (proteasas, polisacaridasas, nucleasas y otros). Otras enzimas importantes presentes en el espacio periplsmico son las blactamasas responsables de la destruccin de los antibiticos b-lactmicos y, por tanto, de la resistencia de ciertas bacterias a ellos. Asimismo se encuentran all sensores qumicos destinados a detectar variaciones ambientales. Algunas de estas enzimas estn libres y otras ligadas a la membrana citoplasmtica. En las bacterias Gram-positivas no hay, en realidad, espacio periplsmico; pero pareciera que la parte ms interna del peptidoglicano puede desarrollar una funcin similar reteniendo mediante fuerzas electrostticas molculas de enzimas equivalentes a las periplsmicas de las Gram-negativas.

Los lipopolisacridos
Los lipopolisacridos con una estructura caracterstica se encuentran en la capa externa, a diferencia de la membrana plasmtica los forman: La parte glucosdica corresponde a dos molcula de N-acetilglucosamina (es, para ponerlo en un nombre mas largo una glucosaminadisacrido, es la estructura equivalente al

glicerol de los fosfolpidos) sus grupos hidroxilos estn esterificados por cidos grasos C12, C16, C18, que al ser hidrofbicos se orientan hacia el interior. Se lo conoce como lpido A unida a ellas y proyectndose al exterior se encuentra una cadena glicosdica.

Esta cadena posee una zona central R y a ella le sigue extermamente la cadenas heteropolisacrida O- especifica que representa a los antgenos somticos. La funcin del lipopolisacrido en las bacterias es la de incapacitar las defensas del husped, proporcionar carga negativa a la superficie de la membrana y estabilizarla. Constituyen una de las endotoxinas ms activas de las bacterias, son fuente de origen de fiebre, diarrea y provocan una fuerte respuesta inmune, siendo uno de los agentes responsables del llamado shock endotxi producido cuando las clulas del sistema inmune entran en contacto con l. Tienen gran importancia en el diagnstico bacteriolgico y en la identificacin de infecciones. Distintas cepas se diferencian entre s por las llamadas cadenas laterales O especficas ya sealadas, hecho que puede ponerse de manifiesto por mtodos inmunolgicos. Las clulas bacterianas crecen sobre agar generalmente como colonias lisas y brillantes denominadas formas S (por smooth= lisos); la superficie regular contiene mucha agua debido a la presencia de las cadenas polisacridas Oespecficas. Estas formas lisas mutan espontneamente a formas que crecen como colonias planas y rugosas, denominadas formas R (por rough = rugoso). Cuando invaden un organismo, la presencia de esas cadenas de poliscaridos dan a las bacterias S una ventaja selectiva al ser ms resistentes a la fagocitosis por los leucocitos y por ello ms virulentas. Hasta que el hospedador no forme anticuerpos y stos se unan a los poliscaridos, las bacterias no son atacables, la gran variedad de polisacridos Oespecficos en bacterias patgenas puede deberse a una seleccin de tipos Oantignicos (mutantes) nuevos cada vez; tienen por tanto una ventaja en el desarrollo, porque el hospedador no puede disponer simultneamente de los anticuerpos contra cientos de antgenos

Pared Celular A diferencia de las clulas eucariotas, la sofisticacin de una bacteria est en sus envolturas. La pared celular se encuentra por fuera de la membrana citoplasmtica. Es una pared celular rgida, que est presente en todas las bacterias, con excepcin de los micoplasmas. La estructura y funcin de la pared celular es tan especial que constituye una caracterstica distintiva de las procariotas, que no posee ningn otro ser vivo. La pared celular desarrolla

funciones vitales para la bacteria. La presencia de pared protege a la bacteria de la diferencia de presin osmtica entre el medio interno de la bacteria y el medio externo. De no existir la pared, la bacteria estallara. Funciona adems como una barrera para sustancias txicas qumicas y biolgicas presentes en el medio externo. La rigidez de la pared celular es la que proporciona la forma a la bacteria. Existen dos tipos de pared bacteriana, que pueden diferenciarse por sus caractersticas tintoriales. A principios del siglo XX el dans Hans Christian Gram utiliz por primera vez un mtodo de tincin que permiti dividir a las bacterias en dos grupos:

aquellas capaces de retener el colorante cristal violeta luego de la decoloracin con alcohol-acetona: Gram positivas aquellas que pierden el colorante por decoloracin: Gram negativas

Todas las bacterias pueden asignarse a un grupo o a otro de acuerdo a cmo aparezcan despus de la tincin, con excepciones: 1-las micobacterias, que tienen una estructura que responde a las de los Gram (+), pero que no se tie porque su pared tiene un alto contenido de lpidos 2-los treponemas, que tienen una estructura de pared de Gram (-), pero que no pueden ser observados porque son tan finos que caen debajo del lmite de resolucin del microscopio ptico 3-los micoplasmas, que carecen de pared celular La pared celular est compuesta por un polmero mixto denominado peptidoglicano, glucopptido o murena. Esta polmero esta formado por una cadena lineal de dos aminoazcares alternados, N-acetilglucosamina y cido N-acetilmurmico. A cada residuo de cido murmico se halla ligado un tetrapptido compuesto de D y L-aminocidos alternados. Aproximadamente un tercio de los tetrapptidos presentes intervienen en la unin lateral entre cadenas adyacentes de murena. Algunas de estas cadenas tetrapeptdicas se unen entre s por medio de otros pptidos cortos que forman puentes cruzados entre las cadenas de aminocidos. Las cadenas de murena unidas por esos puentes peptdicos resulta en una supermolcula gigante nica que envuelve a la bacteria y forma la slida y rgida pared.

Pared

celular

en

las

bacterias

Gram

positivas

La pared celular de las Gram (+) es ms gruesa que la de los Gram (-). La pared clulas de los Gram (+) contiene dos componentes fundamentales, el peptidoglicano, descripto anteriormente y cidos teicoicos. Los cidos teicoicos estn formados por polmeros de glicerol fosfato o ribitol fosfato con sustituyentes laterales (azcares simples, aminoazcares y aminocidos). Cerca del 50% de la pared bacteriana est compuesta por cidos teicoicos y stos pueden unirse a los residuos del cido acetilmurmico del peptidoglicano. Una importante cantidad de cidos teicoicos se hallan unidos a glicolpidos de la membrana citoplasmtica, por lo que se los llama cidos lipoteicoicos. Estos cidos parecen participar en el anclaje de la pared celular a la membrana citoplasmtica. Los cidos teicoicos se encuentran slo en las bacterias Gram (+) y constituyen los mayores determinantes antignicos que definen la individualidad inmunolgica de esas bacterias. Existe una variedad de otras molculas que pueden formar parte de la pared celular de los Gram (+), aunque se encuentran en pequea cantidad. Algunas son polisacridos, como los polisacridos de Streptococcus, que definen la especificidad de grupo. Otras son protenas,

como la protena M del Streptococcus del grupo A o la protena A del Staphylococcus aureus. Pared celular en las bacterias Gram negativas

El espesor de la pared celular de una bacteria Gram (-) es considerablemente menor que el de una Gram (+) y estructuralmente dichas paredes tiene poca similitud entre s. La cantidad de murena es mucho menor en los Gram (-), pero igualmente forma una fina pero muy resistente monocapa que protege a la bacteria de la baja osmolaridad exterior y le da su forma, como ocurre con los Gram (+). La pared celular de los Gram (-) carece de cidos teicoicos. Slo unas pocas cadenas de murena estn unidas a otras cadenas paralelas por medio de los tetrapptidos y son suficientes como para formar una nica malla de murena. El resto de las cadenas permanecen sueltas y sumergidas en un fluido que contiene agua y molculas libres, para formar un gel periplsmico, que aparece a ambos lados, exterior e interior de la fina pared celular. El descubrimiento y la textura de este gel periplsmico ha modificado el concepto que se tena de la estructura de las envolturas de un Gram (-) y de la presencia del antes llamado espacio periplsmico. Este no es un espacio lleno de fluido, sino que es un verdadero gel que define al llamado periplasma. As, el periplasma contiene a la molcula nica de peptidoglicano y contiene protenas en solucin. Estas protenas son enzimas con distintas funciones, como fosfatasa alcalina, enzimas inactivadotas de antibiticos y otras protenas relacionadas al transporte activo de solutos hacia el interior de la bacteria. El tratamiento de una bacteria Gram (-) con lisozima o con ciertos antibiticos de la familia de las penicilinas, en un medio isotnico con el citosol bacteriano, genera unas formas esferoidales que han perdido parte pero no todas sus envolturas. Estas estructuras se denominan esferoplastos y pueden llegar a replicarse in Vitro. Cuando lo hacen, bajo condiciones especiales, se obtiene lo que se denomina formas L de una bacteria. Las formas L cuando son transferidas a un medio adecuado, pueden regenerar la bacteria Gram (-) de la que provinieron. Membrana externa: por fuera del periplasma se encuentra una estructura exclusiva de las bacterias Gram (-) denominada membrana externa. Parece una bicapa lipdica similar a cualquier membrana biolgica, pero su estructura es asimtrica y su composicin es diferente a la de las membranas de otros organismos vivos. La semicapa interior est compuesta por fosfolpidos, pero la exterior est compuesta por lipopolisacrdo (LPS). Este LPS tiene actividad de endotoxina y es altamente txico para el ser humano y otros mamferos. El LPS est formado por: 1-el lpido A, un fosfolpidos que contiene glucosamina en vez de glicerol 2-un polisacrido no especfico, que posee una estructura conservada entre especies relacionadas de bacterias G (-) 3-las cadenas laterales del polisacrido, que definen al antgeno somtico O. este es el antgeno mas abundante sobre la superficie de toda bacteria G(-). En gran medida la asimetra de la membrana externa radica en que el LPS slo se halla en el lado exterior de la bicapa. La membrana externa no contiene la diversidad de protenas que contiene la membrana citoplasmtica, pero las pocas que estn presentes lo estn en gran cantidad. Adems de las porinas, que son protenas que forman poros en la membrana externa, a travs de los cuales

las bacterias G(-) incorporan pequeas molculas hidroflicas por difusin; existe una protena llamada lipoprotena de Braun, o simplemente lipoprotena, que es la protena mas abundante en las bacterias G(-)

En esta imagen se observan bacilos Gram negativos (izq) y cocos Gram positivos (der) Membrana Citoplasmtica La membrana citoplasmtica de una bacteria es a primera vista una bicapa lipdica que recuerda a la membrana de las clulas eucariotas y que est formada por fosfolpidos y protenas. Sin embargo existen marcadas diferencias entre ellas: 1- la membrana citoplasmtica de las bacterias es excepcionalmente rica en protenas, un 70% del peso seco son protenas, y no contiene esteroles (a excepcin de los micoplasmas, que s contienen) 2- la membrana citoplasmtica presenta repliegues hacia el interior del citoplasma, conocidos como mesosomas. Hay dos tipos de mesosomas, de acuerdo a su funcin;

los mesosomas de tabique intervienen en la formacin de paredes transversas en la divisin celular,

los mesosomas laterales en los que se concentran citocromos y otras enzimas de la cadena respiratoria.

3- el cromosoma bacteriano est firmemente adherido a la membrana citoplasmtica, la que participa en la segregacin de las cromtides hijas durante la divisin celular, en forma anloga a lo que el aparato mittico durante la meiosis de las clulas eucariotas 4- la membrana citoplasmtica es el sitio en donde se sintetizan el ADN, los polmeros que componen la pared celular y los lpidos de membrana 5- la membrana citoplasmtica contiene todo el sistema de transporte de electrones de la clula, semejante a lo que ocurre en las mitocondrias de una clula eucariota 6- la membrana citoplasmtica contiene las protenas receptoras que funcionan en el movimiento dirigido o quimiotaxis de la bacteria hacia nutrientes solubles. Adems, de la misma manera que la membrana celular de las clulas eucariotas, la membrana citoplasmtica de las bacterias cumple funciones de barrera permeable selectiva y participa en la secrecin de protenas hacia el exterior, tales como las exotoxinas, capaces de producir enfermedad. Como puede verse, la membrana citoplasmtica de las bacterias es el equivalente funcional de la mayora de las organelas de una clula eucariota.

Las membranas celulares de los Gram (+) y los Gram (-) son bastante parecidas, excepto que la de las Gram (-) poseen lo que se conoce como uniones de Bayer que son regiones e donde se ponen en contacto las membranas citoplasmtica y la membrana externa. No se sabe a ciencia cierta si las uniones de Bayer existen en la clula viva, algunos autores

sostienen que tales uniones seran un artefacto que se produce durante el procesamiento de las muestras para la microscopa electrnica.

esquema de una bacteria G(-) que muestra la unin de Bayer Citoplasma El interior de una bacteria es increblemente simple, cuando se lo compara con el interior de una clula eucariota. Contiene el citoplasma o citosol, en donde pueden identificarse por microscopa electrnica dos regiones, una fibrosa, que contiene el nucleoide, y otra granular, abarrotada de ribosomas. El citosol de algunas bacterias de gran tamao contiene grnulos con material nutritivo de depsito conocidos como grnulos de reserva. Los que con ms frecuencia se observan contienen glucgeno o polimetafosfato. Un ejemplo son los grnulos metacromticos de Babes-Ernst o grnulos de volutita, presentes en Corynebacterium diphteriae, Yersinia pestis y otras especies. Nucleoide Es una regin del citoplasma en donde se halla condensado el ADN que compone el nico cromosoma bacteriano, sin que exista una membrana nuclear delimitante. El cromosoma se duplica previamente a la divisin celular, que se lleva a cabo por fisin binaria. Muchas bacterias contienen plsmidos, que son estructuras de ADN circular de doble cadena, separadas del cromosoma, y que contiene informacin gentica extracromosmica. Estos se caracterizan por duplicarse independientemente del DNA cromosmico. poseen informacin gentica importante para las bacterias. Por ejemplo, los genes que codifican para las protenas que las hace resistentes a los antibiticos estn, frecuentemente, en los plsmidos. Hay algunos plsmidos integrativos, es decir, que tienen la capacidad de insertarse en el cromosoma bacteriano. Estos rompen momentneamente el cromosoma y se sitan en su

interior, con lo cual, automticamente la maquinaria celular tambin reproduce el plsmido. Cuando ese plsmido se ha insertado se les da el nombre de episoma. Ribosomas Son partculas constituidas por RNA y protenas. El ribosoma bacteriano 70s consta de dos subunidades, pero es ms pequeo que el de las clulas eucariotas. Es el lugar de sntesis de las protenas, y el gran nmero de ribosomas refleja la importancia de esta funcin en la clula bacteriana. Se han encontrado algunas diferencias funcionales entre los ribosomas de las bacterias y los de las clulas eucariotas, tales diferencias han permitido encontrar compuestos con actividad antibitica que actan sobre el ribosoma bacteriano y no sobre el humano.

Nutricin bacteriana
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CONCEPTOS BSICOS
Cualquier ser vivo, por su actividad vital (crecimiento, mantenimiento y reproduccin) requiere continuos aportes de energa para reponer las prdidas y, para que todo el sistema pueda funcionar. La nutricin es el proceso por el que los seres vivos toman del medio donde habitan las sustancias qumicas que necesitan

para crecer. Dichas sustancias se denominan nutrientes, y se requieren para los dos objetivos que comprende el metabolismo: 1. fines energticos o catabolismo (reacciones de mantenimiento) 2. fines biosintticos o anabolismo (reacciones plsticas ). Las biosntesis de nuevos componentes celulares son procesos que requieren energa procedente del medio ambiente. Anteriormente sealamos los principales modos de captacin y obtencin de energa existentes en las bacterias. El estudio de la nutricin microbiana se puede desglosar en varios apartados: as, podemos considerar los tipos de nutrientes requeridos, los aspectos cuantitativos, e incluso podemos abordar los aspectos ambientales (en cuyo caso entramos dentro del campo de la Ecofisiologa). Igualmente podemos estudiar la aplicacin prctica de la nutricin bacteriana, que se plasma sobre todo en el diseo de medios de cultivo para manejar los microorganismos en el laboratorio. Es importante tener claros desde el principio una serie de conceptos y nomenclaturas relacionados con los principales tipos de nutricin bacteriana. Puesto que, como acabamos de ver, la nutricin presenta un aspecto de aprovisionamiento de energa y otro de suministro de materiales para la sntesis celular, podemos hablar de dos "clasificaciones" de tipos de nutricin: Desde el punto de vista de los fines de aprovisionamiento de energa, las bacterias se pueden dividir en: 1. litotrofas (del griego lithos = piedra): son aquellas que slo requieren sustancias inorgnicas sencillas (SH2 , S0, NH3, NO2-, Fe, etc.). 2. organotrofas: requieren compuestos orgnicos (hidratos de carbono, hidrocarburos, lpidos, protenas, ......). Desde el punto de vista biosinttico (o sea, para sus necesidades plsticas o de crecimiento), las bacterias se pueden dividir en: 1. auttrofas: crecen sintetizando sus materiales a partir de sustancias inorgnicas sencillas. Ahora bien, habitualmente el concepto de autotrofa se limita a la capacidad de utilizar una fuente inorgnica de carbono, a saber, el CO2. 2. hetertrofas: su fuente de carbono es orgnica (si bien otros elementos distintos del C pueden ser captados en forma inorgnica). Otros conceptos: auttrofas estrictas: son aquellas bacterias incapaces de crecer usando materia orgnica como fuente de carbono.

mixtrofas son aquellas bacterias con metabolismo energtico littrofo, pero requieren sustancias orgnicas como nutrientes para su metabolismo biosinttico. Sean auttrofas o hetertrofas, todas las bacterias necesitan captar una serie de elementos qumicos, que se pueden clasificar (segn las cantidades en que son requeridos) como macronutrientes (C, H, O, N, P, S, K, Mg) micronutrientes o elementos traza (Co, Cu, Zn, Mo...) En la naturaleza, estos elementos se encuentran combinados, formando parte de sustancias orgnicas y/o inorgnicas. Algunos de los nutrientes sern incorporados para construir macromolculas y estructuras celulares; otros solo sirven para la produccin de energa, y no se incorporan directamente como material celular; finalmente, otros pueden ejercer ambos papeles. El mundo bacteriano, como conjunto, exhibe una gigantesca versatilidad metablica de uso de nutrientes: desde auttrofos que obtienen su carbono por reduccin del CO2 y los dems elementos a partir de fuentes igualmente inorgnicas, hasta hetertrofos capaces de usar amplia gama de fuentes orgnicas de carbono. A su vez, dentro de los hetertrofos, podemos encontrar muchos tipos de nutricin muy distintos, desde bacterias metilotrofas que slo usan metano o metanol como fuente de carbono y energa, hasta los muy verstiles Pseudomonas, que pueden recurrir a degradar ms de 100 tipos de fuentes de C, incluyendo sustancias tan "exticas" como hidrocarburos alifticos y cclicos. De cualquier modo, entre los hetertrofos, una de las fuentes ms tpicas de carbono consiste en glucosa. En los hetertrofos- organotrofos, los sustratos carbonados (con un nivel de oxidacin no muy distinto del material celular -CH2O-) entran simultneamente al: metabolismo energtico (o catabolismo, donde la fuente de C se transforma en CO2, o en CO2 junto con otras sustancias no totalmente oxidadas); metabolismo plstico (anabolismo = biosntesis de nuevo material celular). Aunque dentro del mundo de los procariotas se encuentre tanta variedad de nutriciones, las bacterias que pueden nutrirse solamente de sustancias inorgnicas sencillas (H2O, CO2, N2, NO3--, NH3, SO4=, fosfatos, etc.) son minora, pero sus procesos metablicos son muy interesantes. De hecho, existen tipos metablicos que slo han evolucionado en procariotas.

Como paradigma de esto citaremos los microorganismos quimioauttrofos (o quimiolitoauttrofos): obtienen su energa de la oxidacin de sustancias inorgnicas sencillas, el carbono procede del CO2, y el resto de elementos a partir de sales inorgnicas, por lo que pueden vivir en soluciones de sales minerales. Lo habitual, sin embargo, es que muchas bacterias recurran, siempre que puedan, a tomar del medio ciertos compuestos ms complejos, ya que carecen de ciertas rutas biosintticas.

CLASES DE NUTRIENTES
Podemos clasificar los nutrientes en las siguientes categoras: 1. universales: agua, CO2, fosfatos y sales minerales; 2. particulares 3. factores de crecimiento

NUTRIENTES UNIVERSALES
El agua Las bacterias necesitan grandes cantidades de agua. De hecho, salvo excepciones, se pueden considerar como organismos acuticos. Requieren cierto grado de humedad para crecer. Desde el punto de vista de sus posibles papeles, el agua es: el principal constituyente del protoplasto bacteriano; el medio universal donde ocurren las reacciones biolgicas; un reactante en exceso (es decir, un producto resultante de algunas reacciones bioqumicas). Las fuentes de agua pueden ser: endgena: procedente de procesos de oxido-reduccin; exgena (la ms importante): procedente del medio, y que difunde a travs de las membranas. Ahora bien, no toda el agua de un ambiente est disponible para la bacteria: Existen determinadas sustancias y superficies que absorben y adsorben (respectivamente), de modo ms o menos intenso, molculas de agua, dejndolas inasequibles a la bacteria.

Los solutos disueltos en agua (p. ej. , sales, azcares) tienen afinidad por las molculas de H2O que los rodean, por lo que stas tampoco estarn a disposicin del microorganismo. La disponibilidad de agua se mide por un parmetro llamado actividad de agua o potencial de agua, indicativo del agua libre, y que se expresa como aW= PS/PW donde PS es la presin parcial de vapor de agua en la solucin problema y PW es la presin parcial de vapor del agua destilada. Cmo medir el potencial de agua de un medio lquido determinado? Se mide la humedad relativa del aire que hay encima del medio (en frascos), y este valor se refiere al valor de 100, que es la humedad del aire encima del agua destilada. O sea, la aW = humedad relativa/100). Las bacterias tienen valores de aW normalmente entre 0.90 y 0.99. Bacterias de hbitats oligotrficos (como Caulobacter, Spirillum) tienen aW cercanos a 1. Bacterias como Escherichia y Streptococcus, que viven en sangre y fluidos corporales, tienen aW de alrededor de 0.995. Bacterias marinas como ciertos Vibrio y Pseudomonas encuentran valores de 0.980. Ciertos bacilos Gram-positivos que resisten mejor la sequedad poseen valores de 0.950. En el extremo de resistencia encontramos ciertas bacterias xerfilas, capaces de vivir a aW muy bajos (en torno a 0.75). Muchas de estas bacterias viven de hecho en medios acuosos, pero donde gran parte del agua no est disponible por las razones arriba citadas: bacterias halfilas extremas, como la arqueobacteria Halobacterium, que habita lagunas hipersalinas; bacterias (y sobre todo, ciertos microorganismos eucariticos como levaduras) sacarfilas, que viven en jugos y zumos con altas concentraciones de azcares. El anhdrido carbnico (CO2) El anhdrido carbnico es requerido por todo tipo de bacterias: Las auttrofas lo requieren como fuente de carbono, y lo reducen usando como fuente de energa la luz (en el caso de las fotoauttrofas) u oxidaciones de

determinadas sustancias inorgnicas (los quimioautolitotrofos). Las arqueobacterias metanognicas pueden usar el CO2 como aceptor de los electrones procedentes de la oxidacin del H2, proceso por el que obtienen su energa: CO2 + 4H2 ---------> CH4 + 2H2O ( DG'0<0) Los hetertrofos, aunque no usan el CO2 como fuente de C ni como aceptor de electrones, necesitan pequeas cantidades para las carboxilaciones en determinadas rutas anablicas y catablicas. El origen del CO2 puede ser: endgeno: procedente de descarboxilaciones que ocurren al degradar la fuente orgnica de carbono; exgeno: el CO2 de la atmsfera o disuelto en las soluciones acuosas. Normalmente, las bacterias crecen a la concentracin de CO2 atmosfrico (0.03%), pero algunas bacterias (Neisseria, Brucella), cuando se aslan por primera vez, requieren atmsferas enriquecidas, con 5-10% de CO2. Ello parece deberse a que poseen alguna enzima con baja afinidad hacia el CO2; sin embargo, tras varios subcultivos, suelen adaptarse a crecer a tensiones normales. Fsforo

Suele requerirse en forma de fosfatos, sea orgnicos o inorgnicos. Las bacterias que pueden usar los fosfatos orgnicos (merced a la posesin de fosfatasas) no dependen absolutamente de ellos, ya que pueden recurrir igualmente a los fosfatos inorgnicos. Los fosfatos orgnicos son hidrolizados por fosfatasas extracelulares o (en las Gram-negativas) periplsmicas (p.ej., la fosfatasa alcalina). El fsforo se usa principalmente para la sntesis de los cidos nucleicos y los fosfolpidos, pero aparece tambin en coenzimas y en protenas. Sales minerales

Las sales minerales son la fuente de aniones (p. ej. el Cl-) y de cationes para la clula. Los siguientes cationes, concretamente, se necesitan en cantidades relativamente grandes: K+, Mg++, Ca++, Fe++. El in potasio (K+):

El in potasio interviene en la activacin de una variedad de enzimas, incluyendo las que participan en la sntesis de protenas. En Gram-positivas est asociado con los cidos teicoicos de la pared. El in magnesio (Mg++): estabiliza ribosomas, membranas y cidos nucleicos; como cofactor en muchas reacciones, especialmente las que implican transferencia de grupos fosfato. Por ejemplo, en las reacciones que requieren ATP, el Mg++ puede unir la enzima al sustrato durante el mecanismo de accin de la primera. Participa de las clorofilas y bacterioclorofilas de bacterias fotosintticas. El in calcio (Ca++): es un cofactor de ciertas enzimas, como proteinasas. El hierro (principalmente como in ferroso, Fe++) suele estar acomplejado en la naturaleza, formando sales insolubles. Las bacterias disponen de una serie de molculas, denominadas siderforos, capaces de captar ese hierro. El hierro: participa en muchas molculas implicadas en procesos de respiracin, como citocromos y ferroprotenas no hmicas (protenas con Fe-S); interviene como cofactor en ciertas enzimas. forma parte de los magnetosomas, de los cuales depende el comportamiento magnetotctico capacidad de orientarse en el campo magntico de ciertas bacterias. Se encuentra bajo la forma de magnetita (xido de hierro ferromagntico) Fe3O4 Aparte de estos iones que se requieren en cantidades relativamente grandes, las bacterias necesitan minsculas cantidades de otros elementos (oligoelementos), a los que tambin se denomina como micronutrientes o elementos traza. El manganeso (Mn++) es un cofactor de ciertas enzimas, y a veces puede sustituir al Mg++. El cobalto (Co++) se requiere casi exclusivamente para la vitamina B12 (de hecho, si suministramos esta vitamina al medio, la bacteria se vuelve independiente del Co++ libre). El zinc interviene en la estabilizacin de complejos enzimticos como las ADN- y ARN-polimerasas. El molibdeno participa en las llamadas molibdoflavoprotenas, implicadas en la asimilacin de nitratos. Por otro lado, participa como cofactor, junto con el Fe, en el complejo nitrogenasa de las bacterias fijadoras de N2 atmosfrico. El nquel participa en hidrogenasas, enzimas que captan o liberan H2.

NUTRIENTES PARTICULARES
Se trata de elementos que pueden ser cubiertos de modo muy distinto, dependiendo del tipo de bacteria que consideremos. Concretamente, los elementos N y S (que requieren todos los seres vivos) pueden ser captados por las bacterias de modos muy distintos, dependiendo de sus capacidades biosintticas. Tanto el N como el S se encuentran en la clula en estado reducido: el radical -NH2 forma parte de los aminocidos (que a su vez son los sillares de las protenas) y de las bases nitrogenadas (que participan en los cidos nucleicos y en algunas coenzimas); el radical -SH interviene en determinados aminocidos y en coenzimas como la CoA. En qu formas qumicas entran N y S a las bacterias? La mayora de bacterias fotosintticas y muchas heterotrofas asimilan estos elementos en forma combinada inorgnica oxidada: como NO3--, merced a la actuacin secuencial de nitrato- reductasas y nitritoreductasas asimilatorias como SO4=. Este sulfato se activa con ATP, y luego se reduce hasta sulfito y finalmente sulfhdrico, que ya tiene el estado de reduccin adecuado para la incorporacin del S. Muchas bacterias hetertrofas pueden usar alguna forma reducida: de N inorgnico: amonio (NH4+) de S inorgnico: sulfuros (S=, SH-) de N orgnico: aminocidos, pptidos de S orgnico: cistena. Muchas de las bacterias que pueden usar amonio como nica fuente de nitrgeno tambin pueden usar nitratos.

FIJACIN DE NITRGENO
La atmsfera contiene enormes cantidades de nitrgeno no combinado (libre) en estado gaseoso: el nitrgeno molecular o dinitrgeno (N2), que procede de microorganismos denitrificantes (vase el captulo 15). Sin embargo, esta gran

reserva slo puede servir de fuente de nitrgeno a ciertos procariotas, las llamadas bacterias fijadoras de nitrgeno o diazotrofos. Esta notable capacidad bioqumica no ha evolucionado en eucariotas. (Lo ms a que ha llegado la evolucin es a seleccionar ciertos tipos de asociaciones simbiticas entre procariotas diazotrofos y ciertos eucariotas). En una poca todo el nitrgeno de los seres vivos fue procesado por estas bacterias, que toman el nitrgeno atmosfrico (N2) y lo modifican en manera tal que pueden ser utilizados por los organismos vivos como nitratos o amonaco NH3.

Desarrollo de un ndulo en una raz de ciertas plantas (en general leguminosas) donde viven bacterias en simbiosis con ella

Va metablica que fija el nitrgeno atmosfrico N2, y lo convierte en amonaco NH3

La fijacin del N2, es un proceso de reduccin que convierte el nitrgeno molecular en amoniaco, segn la siguiente ecuacin: N2 + 8H+ + 8e + 18 ATP -->2NH3 + H2 + 18 (ADP + Pi) Esta reaccin est catalizada por un complejo enzimtico denominado nitrogenasa o dinitrogenasa, que consta de dos componentes: Componente I o nitrogenasa propiamente dicha; posee un cofactor de hierro y molibdeno (FeMoCo) que forma parte del centro activo. Por ello, a este

componente tambin se le conoce como molibdoferroprotena. (En realidad existen dos copias del cofactor, cuya estequiometra es MoFe7S9-homocitrato) Componente II o nitrogenasa- reductasa, que posee tomos de Fe acomplejados con S de determinadas cistenas (por lo que este componente se denomina a veces ferroprotena). Dos cosas llaman la atencin de la ecuacin anterior: Obsrvese que la reaccin requiere un gran aporte de energa en forma de al menos 18 ATP (en ocasiones puede llegar a 24 ATP). Ello se debe a que el dinitrgeno (N=N) es una molcula extremadamente inerte (su energa de disociacin es de 940 kJ), y su reduccin precisa una gran energa de activacin para transferirle 6 electrones. Parte de la actividad nitrogenasa (as como ATP y electrones) "se pierden" en reducir dos iones H+ hasta H2. Se desconoce la razn de este "despilfarro", pero se sabe que es un efecto intrnseco de este complejo enzimtico. Los electrones para la reduccin llegan al complejo por medio de una ferredoxina, que los transfiere al componente II, que queda reducido al tiempo que por cada dos electrones transferidos se hidroliza una molcula de ATP. La nitrogenasareductasa reducida se asocia entonces con la nitrogenasa (=componente I), y le transfiere los electrones. Una vez reducida la molibdoferroprotena, sta transfiere los electrones (y los protones) al N2, hasta convertirlo en dos molculas de amoniaco. (El centro activo es FeMoCo). Un aspecto muy importante del complejo nitrogenasa es su extrema sensibilidad al oxgeno, de modo que queda rpida e irreversiblemente inactivado por este gas. Ahora bien, esto no significa que la capacidad de diazotrofa est relegada a bacterias anaerobias, ya que, la evolucin ha "inventado" distintas estrategias para proteger a la nitrogenasa en fijadores aerobios como las cianobacterias que han confinado el sistema al interior de clulas con gruesas paredes (los heterocistos). Debido a lo "caro" que resulta fijar nitrgeno, no es extrao comprobar que este proceso est regulado de forma muy estricta ante la presencia en el medio de fuentes combinadas de nitrgeno (nitratos, amonio, aminocidos): la actividad nitrogenasa se ve inhibida ante la presencia de N combinado; ante N combinado, se reprime la transcripcin de los genes codificadores de la nitrogenasa y dems funciones relacionadas (genes nif, fijadores de nitrgeno). La nitrogenasa es una enzima relativamente "inespecfica", ya que puede reducir otras pequeas molculas provistas de triples enlaces, como cianuros (N=C-) y acetileno (HC=CH). La reduccin de acetileno a etileno sirve de base al mtodo

ms usual de medir la actividad nitrogenasa, el llamado ensayo de reduccin del acetileno, que se registra mediante aparatos de cromatografa gaseosa.

FACTORES DE CRECIMIENTO
Los factores de crecimiento son molculas orgnicas especficas que, en muy pequea cantidad, algunas bacterias necesitan para crecer. Salvo excepciones no tienen funcin plstica (no son sillares de macromolculas) ni sirven como fuente de energa. Suelen ser coenzimas o sus precursores, vitaminas, que determinadas bacterias no pueden fabricar por s mismas, al carecer de parte o toda de una ruta biosinttica. Ejemplos: las bacterias del gnero Brucella requieren como factores de crecimiento en sus medios de cultivo la biotina, niacina, tiamina y cido pantotnico. Haemophilus necesita suplementos de grupos hemo y piridn-nucletidos. En la siguiente tabla se muestran algunas de las vitaminas y cofactores requeridos por algunas bacterias: Factor o vitamina p-aminobenzoico (PABA) cido flico Biotina Cobalamina (vitamina B12) Niacina (cido nicotnico) Riboflavina cido pantotnico Tiamina (vitamina B1) Complejo B6 (piridoxal, piridoxamina) Grupo Vitamina K, quinonas Funciones principales Precursor del cido flico Metabolismo de compuestos C1, transferencia de grupos metilo. Biosntesis de cidos grasos; fijacin de CO2 Reduccin y transferencia de compuestos C1; sntesis de desoxirribosa Precursor del NAD; transferencia de electrones en reacciones redox Precursor de FAD y FMN Precursor de la CoA Descarboxilaciones; transcetolasas Transformaciones de aminocidos y cetocidos Transportadores de electrones (ubiquinonas)

MEDIOS DE CULTIVO Y CONDICIONES DE CRECIMIENTO

El conocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el laboratorio. Como acabamos de ver, en general, todos los microorganismos tienen parecidos requerimientos de macro- y micronutrientes, aunque ha quedado claro que la forma en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y otras, as como la cantidad relativa de cada nutriente. Los microbilogos, en su trabajo cotidiano, estn acostumbrados a manejar multitud de "recetas" o frmulas correspondientes a muchos tipos de medios de cultivo. Un medio de cultivo es una solucin acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un coloide en estado de gel) en la que estn presentes todas las sustancias necesarias para el crecimiento de un (os) determinado (s) microorganismo (s). Los medios de cultivo se pueden clasificar, en primera instancia, en tres grandes tipos: 1) Medios complejos o indefinidos: su composicin qumica exacta se desconoce, ya que son el producto de realizar infusiones y extractos de materiales naturales complejos: Ejemplos: Extracto de carne Extracto de levadura Autolizado de levadura Peptona de carne o de soja Digeridos de casena (de la leche). Digeridos de embrin de semilla de algodn Con ellos se logra un tipo de medio rico nutricionalmente, aunque indefinido qumicamente. Si lo que pretendemos simplemente es obtener un buen crecimiento bacteriano, este tipo de medios es ideal, ya que su confeccin es fcil y rpida (basta pesar una cierta cantidad del extracto desecado, suministrado por casas comerciales, disolverlo en agua y esterilizar en autoclave, antes de inocular e incubar la bacteria con la que queramos trabajar). Estos medios contienen fuentes variadas de C y N orgnicos, sales minerales y micronutrientes. Sin embargo, con ellos no podemos tener un control nutricional preciso, ya que desconocemos la composicin qumica y proporcin exacta de los distintos nutrientes. 2) Medios sintticos o definidos: se obtienen disolviendo en agua destilada cantidades concretas de distintas sustancias qumicas puras, orgnicas y/o inorgnicas. La composicin concreta de un medio sinttico depender de la bacteria que queramos cultivar: lgicamente, un medio definido para una bacteria con grandes capacidades biosintticas ser ms sencillo que el medio definido de otra bacteria con menores posibilidades biosintticas.

3) En tercer lugar, podemos fabricar un tipo de medio "mezcla" de los anteriores, denominado medio semisinttico: llevan algunas sustancias qumicas cuya naturaleza y cantidad conocemos, junto con sustancias de naturaleza y composicin indefinidas. Cualquiera que sea el tipo de medio, de los tres que acabamos de citar, podemos elaborar dos tipos de "versiones", segn su estado aparente: medios lquidos medios slidos: derivan de los lquidos simplemente aadiendo a la solucin nutritiva un coloide en estado de gel, que solidifica (da consistencia) a esta solucin. En los primeros tiempos de la Bacteriologa slo se conoca como sustancia gelificante incorporable a los medios la gelatina. Sin embargo, presenta muchos inconvenientes, ya que funde a 25oC (por encima de esta temperatura el medio se licua), y adems, muchas bacterias presentan gelatinasas que hidrolizan la gelatina. El gelificante ms usado es el agar-agar, extrado de algas rojas (p. ej. Gelidium), del cual existen versiones ms o menos purificadas (las ms puras estn ms enriquecidas en el polisacrido agarosa; son las que se emplean para los medios definidos, con objeto de evitar la introduccin de sustancias "contaminantes" inadvertidas que falseen las interpretaciones sobre el comportamiento nutricional de la bacteria). El agar presenta la gran ventaja de que una vez gelificado, no funde hasta cerca de los 100 oC, lo que permite su uso para la inmensa mayora de bacterias, que son mesfilas. Para cultivar ciertas bacterias (sobre todo los quimioauttrofos) se suele recurrir a un gelificante inorgnico, el silicagel o gel de slice. Finalmente, introduciremos otra serie de conceptos relativos a medios de cultivo, que al igual que los anteriores, sern tratados con la suficiente amplitud en las sesiones de clases prcticas:

Concentracin de iones hidrgeno El establecimiento de un pH inicial ptimo y en muchos casos su mantenimiento durante el crecimiento es de gran importancia, sobre todo para aquellos microorganismos que a pesar de producir cidos no los toleran. La mayora de los microorganismos desarrolla a pH 7 (Alcaligenes, Pseudomonas), tan solo unos pocos lo hacen a valores de pH bajos por lo cual se denominan acido tolerantes (Lactobacillus, Acetobacter) o realmente acidfilas (Thiobacillus, Sulfolobus, Helicobacter) que medran a pH alrededor de 2, la figura que sigue muestra un esquema de distribucin de preferencias de algunas bacterias.

Temperatura: Los microorganismos presentan distintos comportamiento en cuanto a temperatura requerida para su incubacin. La mayora de las bacterias del agua o del suelo son mesfilas crecen entre 20 oC y 42 oC. Otros comportamientos en referencia la temperatura son: psicrfilo, por debajo de 20 oC; termfilo: entre 40 y 70 oC; termfilos extremos: por encima de los 70 oC; hipertermfilos: por encima de

80 y 100 oC. La figura muestra algunos ejemplos de bacterias que crecen a diferentes temperaturas.

RELACIONES DE LAS BACTERIAS CON EL OXGENO


Dependen en buena medida de la disponibilidad de las enzimas eliminadoras de perxidos y superxidos. Veamos los tipos de bacterias segn sus relaciones con el oxgeno: Bacterias aerobias: Necesitan O2 para crecer, ya que lo usan (al menos en algunas ocasiones) como aceptor final de electrones para la captacin de energa qumica. Algunos aerobios requieren para crecer tensiones de oxgeno inferiores a la atmosfrica (del 2 al 10% de O2, en lugar del 20%). A estas bacterias se las califica como microaerfilas. Algunas microaerfilas lo son permanentemente (microaerfilas estrictas). Otras se comportan como microaerfilas slo cuando crecen usando determinadas fuentes de energa qumica o de nitrgeno (microaerfilas condicionales). Bacterias anaerobias: Son aquellas que pueden crecer en ausencia de oxgeno, debido a que pueden usar aceptores finales distintos del oxgeno, o porque poseen metabolismo estrictamente fermentativo. Anaerobias estrictas: El oxgeno les resulta txico ya que carecen de catalasa y peroxidasa. Por lo tanto, no pueden eliminar los productos nocivos resultantes del oxgeno. (Por ejemplo, las especies de Clostridium, y las arqueobacterias metanognicas). Anaerobias aerotolerantes: Al igual que las anteriores, presentan un metabolismo energtico anaerobio, pero soportan el oxgeno debido a que poseen enzimas detoxificadores. Ejemplos tpicos son las bacterias del cido lctico, como Streptococcus, Leuconostoc, Lactobacillus). Tambin se les llama anaerobios indiferentes. Anaerobios facultativos: Pueden realizar metabolismo energtico aerobio o anaerobio, dependiendo del ambiente y la disponibilidad de aceptores finales de electrones. Ejemplos son las enterobacterias como Escherichia coli.

Algunos tipos de medios de cultivo


Medios selectivos son aquellos que permiten seleccionar un tipo (o unos pocos tipos) de microorganismos. En el laboratorio se emplean mucho medios selectivos

slidos que incorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas bacterias, pero permiten el crecimiento de otras. (P. ej. medios que llevan violeta cristal inhiben el crecimiento de bacterias Gram-positivas). Medios diferenciales son aquellos que permiten distinguir a simple vista dos o ms tipos de bacterias en funcin de su distinto comportamiento respecto de algn nutriente del medio. Ese comportamiento diferencial se traduce normalmente en un viraje de color de una sustancia indicadora presente en el medio. Ejemplos: en el medio EMB (eosina-azul de metileno) ciertos tipos metablicos de bacterias producen cambios de color y precipitacin de sales cuando producen cidos por fermentacin de ciertas fuentes de carbono. El medio llamado agar-sangre lleva un 5% de sangre de caballo o carnero, lo cual revela la capacidad (y el tipo) de hemlisis de ciertas bacterias. Algunos medios son simultneamente selectivos y diferenciales. P. ej., el agar de MacConkey, que el alumno manejar en los prcticos. Se trata de un medio de color rosado y transparente, que posee, entre otras sustancias, lactosa, peptonas, el colorante vital rojo neutro, sales biliares y violeta cristal. Este medio es selectivo contra muchas bacterias Gram-positivas debido al violeta cristal, y tambin contraselecciona muchas Gram-negativas debido a las sales biliares (que son agentes tensioactivos que desorganizan muchas membranas externas). En cambio, las Enterobacterias estn evolutivamente adaptadas a soportar sales biliares en su hbitat natural (el intestino de vertebrados superiores), y pueden crecer en este medio. En su faceta de medio diferencial, el agar MacConkey permite visualizar dos tipos de Enterobacterias segn que puedan o no fermentar la lactosa, con produccin de cidos. Las bacterias fermentadoras de lactosa (Lac+), excretan al medio gran cantidad de cidos orgnicos, lo que provoca que sus colonias, y sus alrededores aparezcan de color rojo intenso, debido al viraje del rojo neutro; adems, se forma un halo turbio a cierta distancia de estas colonias, fenmeno ocasionado por la precipitacin de las sales biliares inducida por la acidez. En cambio, las bacterias Lac-, al no poder usar la lactosa, recurren como fuente de C a las peptonas, a las que desaminan: incorporan el esqueleto carbonado, excretando iones NH4+, que alcalinizan el medio de cultivo, lo cual se traduce en que el indicador rojo neutro vira a amarillo. Cultivos sobre soporte slido inerte Desde hace un tiempo estamos utilizando en la ctedra un soporte poroso inerte las "perlitas" material que tiene la caracterstica de ser barato, fcilmente

esterilizable y con una gran capacidad de retencin de lquidos en sus oquedades lo cual permite variados cultivos.

Microscopa Electrnica de Barrido (EMB) de levaduras cultivadas sobre "perlitas"

Microscopa Electrnica de Barrido (EMB) de Mucor sp. cultivado sobre "perlitas

EL ANABOLISMO Y EL CATABOLISMO

En los seres vivos hay dos tipos principales de procesos metablicos, como dos caminos diferentes; en uno se construye y en el otro se descompone, se degrada. Estos procesos se llaman anabolismo y catabolismo, y estn relacionados entre s. Los procesos anablicos son procesos metablicos de construccin, en los que se obtienen molculas grandes a partir de otras ms pequeas. En estos procesos se consume energa. Los seres vivos utilizan

estas reacciones para formar, por ejemplo, protenas a partir de aminocidos. Mediante los procesos anablicos se crean las molculas necesarias para formar nuevas clulas. Los procesos catablicos son procesos metablicos de degradacin, en los que las molculas grandes, que proceden de los alimentos o de las propias reservas del organismo, se transforman en otras ms pequeas. En los procesos catablicos se produce energa. Una parte de esta energa no es utilizada directamente por las clulas, sino que se almacena formando unas molculas especiales. Estas molculas contienen mucha energa y se utilizan cuando el organismo las necesita. En el catabolismo se produce, por ejemplo, la energa que tus clulas musculares utilizan para contraerse, la que se emplea para mantener la temperatura de tu cuerpo, o la que se consume en los procesos anablicos.