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Esterilizacin de Equipos, Medios de Cultivo y Aire

Esterilizacin
Operacin destinada a eliminar todas las formas de vivas por destruccin o remocin

Objetivo: Evitar efectos adversos de la presencia de organismos extraos al proceso que pueden producir: v competencia por los nutrientes v produccin de compuestos que interfieran la produccin de productos de inters (inhibicin, modificacin)

Existen otros procesos, como tratamientos de agua residuales que necesitan que los efluentes se encuentren libre de m.o.

Recordatorio

1.

Esterilizacin: Erradicacin, remocin, destruccin o inactivacin de todo tipo de vida, de tal manera que las clulas remanentes no puedan reproducirse, es decir, una eliminacin de la capacidad de reproduccin.

2.

Desinfeccin: Remocin, destruccin o inactivacin de esas clulas que podran causar deterioro en el medio (no todas las clulas).

3.

Pasteurizacin: Remocin, destruccin o inactivacin de todo los patgenos viables naturales por medio de tratamiento trmico tanto para slidos como lquidos.

Qu se debe esterilizar e un proceso de fermentacin? 1. 2. Fermentador Equipos accesorios


a. Mangueras b. Electrodos c. Agitadores

d. Filtros

3. 4.

Medio de cultivo Aire que circula por el fermentador


a. Entrada b. Salida

Mtodos
Agentes Fsicos Esterilizacin
Calor Hmedo (vapor) Calor Seco Filtracin Radiacin Mecnicos

Agentes Qumicos Desinfeccin


b -propiolactona Oxido de etileno (en medio frio) Fenol o compuestos fenlicos (Crestol, ortofenil fenol) Alcoholes: Etanol, Metanol Halgenos: Hipoclorito, Cloroaminas.

Uso de Agentes Qumicos

v No se utiliza para medios de cultivos, pues puede permanecer e inhabilitar el crecimiento de los m.o. vCloracin que requiere de etapas posteriores para eliminar el cloro: ozonificacin. v No se utiliza ampliamente dado que la mayora de los desinfectantes tienen baja accin.

Ejemplo: XIDO DE ETILENO


Proceso a baja temperatura 30 a 60c. El xido en forma de gas o lquido acta por accin qumica. Buena penetracin en plsticos y gomas. Agente muy eficaz Muy til para materiales termosensibles. Es txico. Los materiales requieren aireacin posterior por 12 h. El ciclo dura 90 minutos. Es inflamable y reactivo. Es caro

Uso de Agentes Fsicos


Mtodo Calor Hmedo (Vapor) Condiciones 121C (250F) 15 psi 15 minutos Aplicacin Medios cultivos Lquidos Equipos (inyeccin de vapor) Caractersticas / Accin Barato y eficiente Rpida accin destructiva Destruye todas las formas vegetativas y las esporas de levaduras y bacterias. Se produce la desnaturalizacin y coagulacin de las protenas bacterianas. Ms caro que el calor hmedo y ms lento, (mo son ms resistentes al calor seco) La muerte de los mo se produce por desecacin, desnaturalizacin de las proteinas, lesiones por oxidacin y efectos txicos por el aumento en los niveles de electrolitos en las clulas

Calor Seco

30 minutos para 180C 60 o 120 minutos para 160C

Material de vidrio Slidos Utensilios

Uso de Agentes Fsicos


Mtodo Filtracin Condiciones 0,2 mm Aplicacin medios de cultivo, materiales lbiles al calor (vitaminas) aire Caractersticas / Accin Filtros que consisten en discos de celulosa que son descartables y caros. Filtros de membranas con discos porosos de steres de celulosa Vibraciones de sonido de alta frecuencia rompen clulas por desnaturalizacin de las cadenas de DNA. Poco utilizado Ambientes Superficies La longitud de onda bactericida ms efectiva es de 240 a 280 nm, la cual corresponde a la mxima absorcin del ADN, y por lo tanto a su dao irreversible. La radiacin UV produce la apareacin anormal de las bases de la cadena

Mecnicos

Vibracin Ultrasonido Centrifugacin a alta velocidad Ultravioleta Rayos X

Radiacin

Cintica de destruccin de microorganismos por calor


v La muerte de microorganismos como consecuencia de un tratamiento a altas temperaturas sigue una cintica primer orden:

v Integrando entre los lmites donde No es el nmero de organismos viables presentes inicialmente y N es nmero viable, la ecuacin de velocidad de muerte ser:

N = N 0 exp( -kt )

N = N 0 exp( -kt )

Cintica de destruccin de microorganismos por calor


En Industria (procesamiento de alimentos) es usual usar el parmetro D en vez de k Se define el valor D como el tiempo necesario para que el nmero de supervivientes caiga al 10% del valor inicial (o, lo que es lo mismo, para que el logaritmo del nmero de supervivientes se reduzca en una unidad).

N = 1 y N0 = 10
La relacin entre D y k es

2.303 D= k

la magnitud de D es tiempo

Cintica de destruccin de microorganismos por calor


k = constante de velocidad de destruccin, que depende de la temperatura segn la ecuacin de Arrhenius:
A = constante E = energa de activacin R = Constante general de los gases T = Temperatura en grados Kelvin

Ejemplo: Energa de activacin para la destruccin de esporas de: B. Stearothermophilus B subtilis C. Botulinum Vitamina C 71.1 kcal/mol 76 kcal/mol 82 kcal/mol 23,1 kcal /mol

Esterilizacin HTST Esterilizacin UHT

Esterilizacin de aire por filtracin En fermentadores se necesita suministrar aire a velocidades del orden de 0.5 vvm (volumenes de aire por volumen de fermentador por minuto). Ejemplo: fermentacin aireada para produccin de antibitico Utilizar calor seco resulta impracticable. La concentracin estndar de m.o en el aire es del orden de 103 a 104 m.o/m3. Los mtodos ms utilizados para realizar una esterilizacin del aire son:

Filtros profundos Filtros de membrana (absolutos)

Filtros profundos Son filtros que se encuentran rellenos de algodn (hidrfobo) o de lana de vidrio (glass wool) No se comprimen mucho No retienen humedad No es combustible.

El principio de estos filtros es que se produzca un contacto entre los m.o. y la fibra, este contacto puede ser de diferentes tipos: 1.- Intercepcin directa 2.- Impacto por inercia 3.- Flujo turbulento del aire 4.- Movimientos Browniano (Difusin) 5.- Atraccin electrosttica

Filtros profundos El decaimiento del nmero de m.o depender de la profundidad del lecho, resultando una variacin de primer orden.

No ln N = kL L
No, NL: Nmero de m.o a la entrada y salida, respectivamente. A mayores escalas, generalmente se utilizan filtros de 1 a 2 metros.

Eficiencia Se define la eficiencia de un filtro, h , en base al largo necesario para alcanzar el x% de remocin de m.o. Generalmente se calcula para 90% de remocin. As: Lh= (No NL )/No Lh= 1 NL /No Lh= 1- exp (-k*L) Si se desea una eficiencia del 90% se reporta L90%

Filtros de membrana (absolutos) Son membranas que tienen un determinado tamao de poros, pero resulta prcticamente imposible construir un filtro para aire donde el tamao de poros este controlado. Generalmente oscilan entre 0.5-1.0 mm y 0.22-0.45 mm. Diversos materiales en base a polmeros de (carboximetilcelulosa, CMC) o vinlicos (Polivinilalcohol, PVA) Ventaja: gran eficiencia Ddesventaja: corta vida til fuentes de aire deben estar libres de aceite. celulosa