CROMATOGRAFÍA DE GASES.

Sólida. Crom. Gas-sólido. Fase estacionaria. Cromatografía de Gases. Fase móvil. Gas. Líquida. Crom. Gas-líquido.

ProfJLS-UMSNH-FQFB

1940

“CGS” rudimentaria CGL propuesta (Martin y Synge) Separación de ácidos orgánicos por CGL: primer cromatógrafo (Martin y James)

1950

Primer equipo comercial (Griffin & George) Detector por Densidad de Gas (Martin y James) Detector por Ionización de llama (McWillian y Dewar) Detector por Captura de Eletrones (Lovelock y Lipsky)

1960

Columnas Capilares (Golay)

Premio Nobel en 1952ProfJLS-UMSNH-FQFB a A. J. P. Martin y R. L. M. Synge.

Direction of mobile-phase flow
A+ B Concentration of solute in mobile phase B Concentration of solute in stationary phase A A B

Detector Chromatogram

Time

Inject

B

A

B

0

Fraction of bed length

1

Fig. 1.3. Schematic representation of the chromatografic process. From Miller, J. M., Chromatography: concepts and Contrasts, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1987, p. 7. Reproduced courtesy of John WileyProfJLS-UMSNH-FQFB & Sons, Inc.

Cromatógrafo de Gases. 2 6

1 5 3 4

1 - Reservorio de Gas y Controles de Vacío / Presión. 2 - Inyector (Vaporizador) de muestra. 3 - Columna Cromatográfica y horno cromatógrafico. 4 - Detector. 5 - Eletrónica de Tratamiento (Amplificador) de Señal. ProfJLS-UMSNH-FQFB 6 - Registro de la Señal (Registrador o Computador).

FASE MÓVIL EN CROMATOGRAFÍA DE GASES. La fase móvil en CG, NO interacciona con la muestra apenas la acarrea através de la columna. Usualmente es referida como GAS DE ARRASTE O ACARREADOR. Requisitos: INERTE: No debe reaccionar con la muestra, fase estacionária o con la superfícies del instrumento. PURO: Debe estar exento de impurezas que puedan degradar la fase estacionaria.
Impurezas típicas en gases y sus efectos:

H2O, O2 Hidrocarburos

oxida / hidroliza algunas FE incompatibles con DCE. Ruído, “algunos derivados no ProfJLS-UMSNH-FQFB presentan señal en FID”.

Nitrógeno. Hidrógeno. Argón. ProfJLS-UMSNH-FQFB .Gas acarreador (Fase móvil): Helio.

Pureza.995 %.999 %. Ultrapuro. Precio ($.Especificaciones y precios del Helio. 99. 99. Alta pureza. 280. 55. US). ProfJLS-UMSNH-FQFB .9999 %. Grado investigación. Calidad. 99. 140.

H2 FID ECD N2 .Requisitos: COSTO: Gases de elevada pureza pueden ser muy caros. H2 N2. A = 99.999 % (5. Selección de Gases de Arrastre en Función del Detector: TCD He .0) COSTO C A B PUREZA COMPATIBLE CON EL DETECTOR Cada detector demanda un gas de arraste específico para un mejor funcionamiento.9999 % (6.0) C = 99. Ar + 5% CH4 ProfJLS-UMSNH-FQFB .5) B = 99.995 % (4.

Alimentación del Gas de Arraste (Fase móvil): Componentes necesarios de una línea de gas: Controladores de vacío / presión de gas. ProfJLS-UMSNH-FQFB . Dispositivos para purificación de gas (“traps”).

ProfJLS-UMSNH-FQFB .Medidores de Flujo.

Medidor de Vacío (Rotámetro) . ProfJLS-UMSNH-FQFB .Cilindro de Gas.“Traps” para eliminar impurezas de gas. 4 . 6 .Regulador de Presión Primario.Regulador de Presión Secundario.Regulador de Vacío (Controlador Diferencial de Flujo). 2 . 3 4 2 1 6 5 1 . Nota: Tubos y Conexiones: Acero Inox o Cobre.Cromatógrafo de Gases. 3 . 5 .

Dispositivos de Inyección de muestra: Los dispositivos para inyección (INYECTORES o VAPORIZADORES) deben proveer medios de introducción INSTANTÁNEA de muestra a la columna cromatográfica. t=0 Inyección instantánea: t=x t=0 Inyección lenta: t=x ProfJLS-UMSNH-FQFB .

Partes del inyector: • Septa evita la perdida y descomposición de muestra. multicapa. azul). teflón. blanco. (estándar. El volumen inyectado es determinado por el volumen del puerto de inyección. • Linner (inserto de vidrio). ProfJLS-UMSNH-FQFB . Diferentes capacidades y usos (250-1000 µL). no reacciona con los compuestos. reduce fugas. vaporización de la muestra. gris.

Liner ProfJLS-UMSNH-FQFB .

• Ferrula. • Sello de oro y washer.Partes del inyector: •Lana de vidrio. filtra (septa. ProfJLS-UMSNH-FQFB . grafito (libera sustancias). volatiliza compuestos homogéneamente. aísla el sistema contra las fugas. vespel (muy duro). sellan el sistema. compuestos pesados).

ProfJLS-UMSNH-FQFB . • Para columna empacada con purga de septum. • Inyector on column con EPC. • Capilar con/sin división de flujo. •Columna empacada y purgada con EPC.tipos de inyector: • Para columna. •Inyector capilar con/sin división de flujo con EPC. • Capilar con división de flujo únicamente.

ProfJLS-UMSNH-FQFB .Corte transversal de un Inyector.

Punta de la columna cromatográfica. 2 .Inyector “on-column” Convencional: 2 1 3 4 1 . .Septa (silicona).Alimentación de gás de arraste. ProfJLS-UMSNH-FQFB 4 . 3 .Bloque metálico.

Inyección “on-column” de líquidos.Punta de aguja de microjeringa es introducida al início de la columna. 1 2 3 1 . 2 .Muestra inyectada y vaporizada instantáneamente al início de la columna. ProfJLS-UMSNH-FQFB 3 . .“Plug” de vapor de la muestra forzado por el gás de arraste a fluir por la columna.

inyección rápida. calibración con estándares. metálicas.Inyector SPLIT: • Análisis de componentes mayoritarios. ProfJLS-UMSNH-FQFB . • Vaporización en el inyector muy rápida. • Requiere vaporización gas acarreador-muestra. • Split = 20-600:1. • Excelente resolución y forma de los picos. muestras sucias. • Uso mínimo de volumen por inyección (1 µL). • Puede ser usada con columnas de sílice fundida. vidrio. • T inj = T col max + 20 ºC.

• Requiere septum purge (5 mL/min). ProfJLS-UMSNH-FQFB . • T inj = PEB solvente + 40 ºC. o trazas. • Vaporización en el inyector lenta.Inyector SPLITLESS: • Análisis de componentes diluidos compuestos térmicamente lábiles. Volumen de muestra de 2-10 µL. Requiere dilución: solvente/muestra ≥ 104:1.

• Equipos auxiliares de muestreo (purga y trampa. Dispositivos de muestreo. • Inyección a través de válvulas (Válvulas de muestreo de gases. Muestreo de líquidos.Introducción de la muestra: • Inyección con jeringa (manual ó automática). Muestreo de sólidos. headspace). ProfJLS-UMSNH-FQFB . Muestreo de gases. Válvulas de muestreo de líquidos).

Inyector Automático con bandeja para 100 muestras. ProfJLS-UMSNH-FQFB .

Headspace Sampler ProfJLS-UMSNH-FQFB .

Microjeringa de 10 µ L: cuerpo (pirex) émbolo aguja (inox 316) Microjeringa de 1 µ L (sección ampliada): cuerpo aguja guía Muestra ProfJLS-UMSNH-FQFB . LÍQUIDOS Capacidades típicas: 1 µL. 5 µL y 10 µL.Microjeringas para Inyección.

.Parámetros de Inyección..25 mm Sólidos: convencionalmente se disuelven en un solvente adecuado y se inyecta en ProfJLS-UMSNH-FQFB solución. 20 µL 0..2 mm (1/4”) capilar ∅ = 0. 0. Regla General: Tinj = 20-50 ºC encima de la temperatura de ebullición del componente menos volátil. VOLUMEN INYECTADO Depende del tipo de columna y del estado físico de la muestra COLUMNA Muestras Líquidas 0.1 ml ... 50 mL 0. TEMPERATURA DEL INYECTOR Debe ser suficientemente elevada para que la muestra se vaporize inmediatamente.01 µL ... sin descomposición. .2 µL .. 3 µL Muestras Gaseosas 0.001 ml .1 mL empaquetada ∅ = 3.

• Se toma una alícuota del gas headspace que está por encima de la muestra con una jeringa para gases u otro medio. • La muestra se coloca en un baño a temperatura constante hasta alcanzar el equilibrio térmico. • La muestra del gas head space es analizada usando un GC estándar. ProfJLS-UMSNH-FQFB . Headspace.Introducción de la muestra: Equipos auxiliares de muestreo.

tela. • Muestras sólidas: volátiles en cartón.Introducción de la muestra: Equipos auxiliares de muestreo. • Muestras con alto contenido de agua. es calentado e inyectado al GC. • Muestras que contienen compuestos con alto puntos de ebullición que no son de nuestro interés. • Muestras contaminadas: benceno/yodo. benceno/agua residual. ProfJLS-UMSNH-FQFB . Headspace. etc. • Una porción de gas está en equilibrio con la muestra en un vial sellado.

5-300 m L.25-0. Fase líquida: Columnas. Capilares: SiO2 recub.35 mm id.Soporte: Empacadas: Metálicas. Cromosorb P. C22. vidrio. Líquido no volátil. (0. . ProfJLS-UMSNH-FQFB Fase líquida: Naturaleza polimérica. Sterchamol. Poliimida. 2-20 m L. (1-8 mm id.

ProfJLS-UMSNH-FQFB .

Estabilidad térmica. Baja viscosidad. Inercia química (caracterítica de disolvente). ProfJLS-UMSNH-FQFB . Baja volatilidad.Fase líquida estacionaria: Selectividad (separación eficiente.

ProfJLS-UMSNH-FQFB . Columna empacada.Soporte sólido Fase líquida Columna capilar.

1 a 0. EMPAQUETADA ∅ = 3 a 6 mm L = 0.Columnas: Definiciones Básicas.5 m a 5 m Rellena con sólido pulverizado (FE sólida o FE líquida depositada sobre las partículas de relleno) ProfJLS-UMSNH-FQFB CAPILAR ∅ = 0.5 mm L = 5 m a 100 m Paredes internas recubiertas con un filme fino (fracción de µ m) de FE líquida o sólida .

• Longitud. • Tipo de columna. cantidad. etc.). • Tipo de muestra (mezcla. • Fase estacionaria (según tipo de muestra). • Diámetro interno de la columna (según tipo de muestra).Selección de la columna. ProfJLS-UMSNH-FQFB . • Espesor de la fase estacionaria (según tipo de muestra).

ProfJLS-UMSNH-FQFB . Hay una gran variedad de columnas (fases estacionarias) que se pueden conseguir de diferente características (longitud. Para darse una idea más clara del número de columnas o fases estacionarias que existen en el mercado. diferente diámetro.Seleccionar la mejor columna capilar para un análisis puede ser una tarea incierta y algunas veces difícil.) y de diferentes fabricantes. etc. se enlistaran en las aplicaciones.

Estructura química del analito. Temperatura de la columna. Además del intercambio con la FE. p0 = func.Temperatura de la Columna. ProfJLS-UMSNH-FQFB . el tiempo que un analito demora para recorrer la columna depende de su PRESIÓN DE VAPOR (p0). Temperatura De la columna Presión de vapor Velocidad de migración ANALITO ELUYE MÁS RAPIDA-MENTE (MENOR RETENCIÓN).

Control confiable de temperatura de la columna es esencial para obtener uma buena separación em GC. ProfJLS-UMSNH-FQFB TEMPERATURA DE COLUMNA .Temperatura de la columna.

TEMPERATURA UNIFORME EN SU INTERIOR Sistemas de ventilación interna muy eficientes para manter la temperatura homogénea en todo horno.Horno del Cromatógrafo de Gases. Características Deseables de un Horno: AMPLIA RANGO DE TEMPERATURA DE USO Por lo menos de Tambiente a 400 ºC. Sistemas criogénicos (T < Tambiente) pueden ser necesários en casos especiales. ProfJLS-UMSNH-FQFB . TEMPERATURA INDEPENDIENTE DE LOS DEMAS MÓDULOS No deBe ser afectado por la temperatura del inyector y detector.

TEMPERATURA ESTABLE Y REPRODUCIBLE La temperatura debe ser mantenida con exactitud y presición de ± 0. CALENTAMIENTO Y ENFRIAMENTO RÁPIDO Importante tanto en análisis de rutina y durante un desenvolvimento de metodologías analíticas nuevas.1°C. En cromatógrafos modernos (después de 1980). el control de temperatura del horno es totalmente operado por microprocessadores.Características Deseables de un Horno: FÁCIL ACCESO DE LA COLUMNA Debe tener un soporte para esta. ProfJLS-UMSNH-FQFB .

La temperatura isotérmica más alta está determinada por: El límite de temperatura máximo de la fase estacionaria.Separación isotérmica en GC. La estabilidad de la muestra. La temperatura isotérmica más baja está determinada por: La paciencia del operador. ProfJLS-UMSNH-FQFB . El tiempo de retención de los primeros componenetes. Excesivo ensanchamiento de los picos más tardíos. El límite de temperatura más bajo de la fase líquida.

Establecer la temperatura del horno deseada. Establecer la velocidad de calentamiento en cero. Establecer la temperatura del detector. Establecer el tiempo inicial para determinar el tiempo de corrida para un análisis. ProfJLS-UMSNH-FQFB .La temperatura isotérmica nos permitirá: Establecer la temperatura de inyección.

ProfJLS-UMSNH-FQFB .Programación de la Temperatura. Componentes menos volátiles demoran al eluir. saliendo como picos mal definidos. Mezclas complejas (constituyentes con volatilidades muy diferentes) separadas ISOTERMICAMENTE: TCOL BAJA: Componentes más volátiles son separados.

TCOL ALTA: Componentes más volátiles no son separados. Componentes menos volátiles eluyen más rapidamente. ProfJLS-UMSNH-FQFB .

ProfJLS-UMSNH-FQFB . La temperatura del horno pode ser variada linearmente durante una separación: Se consigue buena separación de los componentes de la muestra en menor tiempo.Programación Linear de Temperatura.

Disminucución de la velocidad lineal con aumento de la temperatura en sistemas de inyección capilar. ProfJLS-UMSNH-FQFB .Operación programada de temperatura: Hay mayor separación de los compuestos. Produce picos más definidos. sobre todo para mezclas complejas. Reduce el tiempo de análisis. Pruduce mejor precisión cuantitativa. Aumenta la cantidad de sangrado de la columna (deriva en la línea base).

La viscosidad de un gas aumenta con la temperatura lo que ocasiona desviación de la línea base. ProfJLS-UMSNH-FQFB . Debido a un aumento de la volatilización de la FE líquida.Problemas con la temperatura del horno.

Parámetros de una programación de temperatura: TEMPERATURA TINI Temperatura Inicial TFIN Temperatura Final tINI TIempo Isotérmico Inicial tFIN TIempo Final do Programa R Velocidade de Aquecimento TFIN R TINI tINI TIEMPO tFIN ProfJLS-UMSNH-FQFB .

ProfJLS-UMSNH-FQFB .Detectores en cromatografía de gases. generando una señal con el paso de substancias que no son gas de arraste. Dispositivos que examinan continuamente el material eluido.

Constante dieléctrica. TCD. Calor de absorción. IR. ECD. Foto-ionización. Rápido escaneo de UV. FID. Conductividad de flama.Detectores en cromatografía de gases. Densidad de gas. Argón. D) E) Sección transversal. Emisión de flama. EMD. Helio. . ProfJLS-UMSNH-FQFB MS. Ionización de rayos-β: A) B) C) . Emisión de microondas.

volátiles. análisis del aire). algunas determinaciones son: Análisis en la industria química. Compuestos quirales en aceites esenciales. Análisis ambientales (hidrocarburos. semivolátiles. Análisis alimenticios y sabores. Las aplicaciones son muy amplias. pesticidas. Industria petroquímica.APLICACIONES DE CROMATOGRAFÍA DE GASES. Industria farmacéutica. Investigación. Drogas de abuso. herbicidas. fragancias. ProfJLS-UMSNH-FQFB .

hace posible el acoplamiento MS. Alta exactitud en análisis cuantitativo. “Barato”. muestra típicamente mL. Sensibilidad. No destructiva (depende del detector).VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE CROMATOGRAFÍA DE GASES. Requiere poca. IR. fácilmente detecta ppm. Eficiente. Rentable y relativamente simple. VENTAJAS: Análisis rápidos. típicamente en minutos. UV. mL. ProfJLS-UMSNH-FQFB . mg. ppb y en ocasiones ppt (GC-MS). proporciona alta resolución.

ProfJLS-UMSNH-FQFB . para confirmación de la identidad del pico. Regularmente difícil para muestras grandes o muestras preparativas. No conveniente para muestras térmicamente lábiles. Requiere espectroscopía. generalmente MS.DESVENTAJAS: Limitado a muestras volátiles.

8 8 8 .8 2 1 6 .9 1 1 3 .5 8 3 0 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 5 .0 3 1 5 .0 0 1 4 .6 7 1 0 .4 9 1 4 . D( * ) A b u n d a n c e 5 7 9 5 9 0 8 5 8 0 7 5 7 0 6 5 6 0 5 5 5 0 4 5 4 0 3 5 3 0 2 5 2 0 1 5 1 0 5 0 m /z > 5 2 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 9 9 1 1 3 1 1 2 2 6 7 1 4 1 1 5 5 1 6 9 1 8 3 1 8 0 1 9 8 2 0 7 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 5 3 2 6 0 8 5 7 1 1 6 0 ProfJLS-UMSNH-FQFB .5 4 1 3 .0 0 7 .3 4 1 4 .3 8 1 1 0 .D A b u n d a n ce 1 e + 0 7 9 0 0 0 0 0 0 8 0 0 0 0 0 0 7 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 5 0 0 0 0 0 0 4 0 0 0 0 0 0 6 .9 9 9 .0 0 S c a n 6 1 7 ( 6 .2 4 0 T im e > 4 .T IC :R A F A E S T A .3 1 1 2 .4 2 1 0 .0 0 6 .0 0 1 2 .0 0 6 . 6 0 6 m i n ) : R A F A E S T A .8 6 1 2 .1 9 5 .2 7 1 .

31 12.99 9.19 5.TIC :R A F A E S TA .00 6.27 14.86 10.88 8.00 14.54 13.49 10.58 3000000 2000000 1000000 5.00 6.00 ProfJLS-UMSNH-FQFB .67 10.00 14.42 12.34 12.D A bundance 1e+ 07 9000000 8000000 7000000 6000000 5000000 4000000 6.00 7.38 11.24 0 Tim e--> 4.82 16.91 13.03 15.

S ca n6 1 7( 6 .6 0 6m i n ) : R A F A E S T A .D ( * ) A b u n d a n ce 5 7 9 5 9 0 8 5 8 0 7 5 7 0 6 5 6 0 5 5 5 0 4 5 4 0 3 5 3 0 2 5 2 0 1 5 1 0 5 0 m /z > 5 2 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 9 9 1 1 3 1 1 2 2 6 7 1 4 1 1 5 5 1 6 9 1 8 3 1 8 0 1 9 8 2 0 7 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 5 3 2 6 0 8 5 7 1 1 6 0 ProfJLS-UMSNH-FQFB .

Agilent Technologies. (1997). Reverté. F. B. (Reimp-Oct-2004). Rice. Miller. Chapman-Hall (Third Edition-1998). Louis F. Stock and C. Fieser. (2001). Phytochemical Methods. Experimentos de Química Orgánica. J. McNair and James M. Basics of LC-MS. Harborne. Edit. B. Basic Gas Chromatography. R. Chromatographic Methods.Bibliografía Adicional para Métodos de separación. Wiley Inter-Science. Harold M. ProfJLS-UMSNH-FQFB .

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