HOMOLOGACIN DE LA HERRAMIENTA DE DIAGNSTICO Carlos Ramn Bautista Garfias CENID-PAVET, INIFAP

CONSIDERACIONES SOBRE LAS PRUEBAS DE DIAGNSTICO

* CARACTERSTICAS DEL PARSITO * PATOGENIA DE LA ENFERMEDAD QUE PROVOCA * EL POSIBLE TIPO DE RESPUESTA INMUNITARIA DE ACUERDO CON LA ESPECIE ANIMAL AFECTADA * CARACTERSTICAS DE LA PRUEBA * CARACTERSTICAS DEL ANTGENO UTILIZADO (PRUEBAS INMUNOLGICAS)

PRUEBAS DE DIAGNSTICO CONFIABLES

DETECCIN DEL PARSITO

* FROTIS SANGUNEO TEIDO
Babesia abes a b bigemina ge a Babesia abes a bo bovis s

DETECCIN DEL PARSITO

* NECROPSIA PARASITOLGICA

PRUEBAS INMUNOLGICAS: INMUNOLGICAS DETECCIN DE ANTICUERPOS ANTI-PARSITO

PRUEBAS DE INMUNODIAGNSTICO CLASIFICACIN DE LAS REACCIONES ANTGENO-ANTICUERPO

* PRIMARIAS (Ocurren en minutos) * SECUNDARIAS (Ocurren en das) * TERCIARIAS S (Se (S llevan a cabo in vivo)

DINMICA DE LA RESPUESTA INMUNE ADAPTATIVA

CRITERIOS PARA LA SELECCIN DE PRUEBAS DE DIAGNSTICO CONFIABLES

* SENSIBILIDAD * ESPECIFICIDAD * FACILIDAD/SIMPLICIDAD PARA LLEVAR A CABO * RAPIDEZ * ECONOMA * CONFIABILIDAD

SENSIBILIDAD a) ) Capacidad C id d de d una prueba b para detectar d t t la l cantidad tid d ms pequea de Anticuerpo o Antgeno que pueda ser detectada b) Habilidad de una prueba para detectar reacciones positivas con exactitud
Sensibilidad = No. de animales parasitados, positivos a la prueba N t No. total t ld de animales i l parasitados it d
X 100 (%)

ESPECIFICIDAD a) Capacidad de una prueba para detectar reacciones negativas correctamente

Especificidad = No. de animales No parasitados, negativos a la prueba N t No. total t ld de animales i l No N parasitados it d
X 100 (%)

PRUEBA DE HEMOAGLUTINACIN PASIVA

SUEROS DE OVINOS INFECTADOS CON Fasciola hepatica

PRUEBA DE INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

Juan Mosqueda

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA DE INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

PARSITO
Antgenos Antcuerpos primarios Acs marcados

LUZ UV

Juan Mosqueda

INMUNOENSAYO ENZIMTICO (ELISA)

BLOQUEO DE ESPACIOS NO OCUPADOS

INMUNOENSAYO ENZIMTICO (ELISA) VARIANTES

Paciente nmero Dilucin de Sue ero

Amibiasis - Humanos

Dot-ELISA T. cruzi

DIFUSIN EN GEL-ELISA (DIG-ELISA)

DIG-ELISA F. hepatica p

PRUEBAS MOLECULARES: DETECCIN DE ADN

Regin por ser copiada

Desnaturalizacin por calor

Recocido del primer Extensin del primer

Ciclo # 2

Ciclo # 3

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR). Los primers (cebadores) estn de color verde

Juan Mosqueda

DIAGNSTICO CLNICO

HEMOGLOBINURIA EN BABESIOSIS

PERFIL INMUNOLGICO POR MEDIO DE INMUNOELECTROTRANSFERENCIA (IET) (WESTERN BLOT)

INMUNOELECTROTRANSFERENCIA (IET, WESTERN BLOT)

ETAPA I Electroforesis en gel de la mezcla de antgenos

Gel Papel de Nitrocelulosa

ETAPA II Manchas en el papel de Nitrocelulosa t oce u osa Fije las placas juntas

Esponja

ETAPA III Revele el papel de NC, utilizando un radioinmunoanlisis o una prueba enzimtica

Cada lnea contiene un antgeno especfico que ha provocado la formacin de un anticuerpo

FASES EN EL DESARROLLO DE PRUEBAS OPTIMIZADAS

1. LABORATORIO a) ) Entrenamiento 2. PRUEBA DE CAMPO a) Entrenamiento 3. TRANSFERENCIA DE TECNOLOGA 4. IMPLEMENTACIN

PROPUESTA

ANTECEDENTE: AMPAVE 1989

MANUAL: DIAGNSTICO PRCTICO DE HEMOPARSITOS Y HELMINTOS DE RUMIANTES

1. Implicaciones de la Epidemiologa en el diagnstico de helmintos y h hemoparsitos it 2. Microscopa 3. Coprologa diagnstica de helmintos y protozoarios del aparato digestivo 4 Cultivo e identificacin larvaria de nematodos del tracto gastroentrico 4. 5. Necropsia e Identificacin de helmintos del tracto gastroentrico de rumiantes 6 Evaluacin in vivo de antihelmnticos en rumiantes 6. 7. Diagnstico de nematodos del tracto gastroentrico resistentes a los antihelmnticos 8 Hematologa diagnstica 8. 9. Diagnstico inmunolgico y molecular de las principales helmintiasis en rumiantes 10. Diagnstico de la infeccin por Babesia bovis y B. bigemina por medio de la prueba de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) 11. Extraccin de ADN de hemoparsitos 12. Diagnstico g de la infeccin por p Babesia bovis y B. bigemina g por medio p de variantes de la Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) 13. Soluciones empleadas en el diagnstico Parasitolgico 14. Diagnstico de Tricomonosis bovina 15. Miscelnea: Diagnstico serolgico de las Infestaciones por Oestrus ovis.