Está en la página 1de 17

CONTADOR HEMATOLOGICO 1. INTRODUCCION 1.1.

LA SANGRE

La sangre que circula por nuestro sistema contiene nutrientes, electrolitos, hormonas, vitaminas, anticuerpos, calor y oxgeno. Adems, a travs de ella se eliminan desperdicios y dixido de carbono. Nuestra sangre est compuesta por un 22% de elementos slidos y un 78% de agua. La cantidad total de sangre es un 8% del peso corporal. Los componentes de la sangre incluyen: Plasma: es la parte lquida de la sangre en la que estn suspendidas las clulas sanguneas Glbulos rojos (eritrocitos) Glbulos blancos (leucocitos) incluyendo: Linfocitos Monocitos Granulocitos, y stos ltimos a su vez incluyen:- Eosinfilos- BasfilosNeutrfilos Plaquetas (trombocitos)

FIGURA 1. COMPOSICION DE LA SANGRE

FUENTE:
http://www.googlsee.com.bo/imgres?imgurl=http://bp2.blogger.com/_n33qnlUE5Jc/SIDch9StfqI/AAAAAAAAARc/NPOlqcNzV5E/s4

00/circulacion15%2Bcomposicion%2Bde%2Bla%2Bsangre.gif&imgrefurl=http://saludmiguelschweiz.blogspot.com/2008/07/sistemacirculatorio.html&usg=__o0K1eRUF3j41VEM0Nz6L0Sabh1U=&h=224&w=400&sz=153&hl=es&start=3&zoom=1&um=1&itbs=1& tbnid=pvEmyND5JXp0uM:&tbnh=69&tbnw=124&prev=/search%3Fq%3Dcomposicion%2Bde%2Bla%2Bsangre%26um%3D1% 26hl%3Des%26biw%3D976%26bih%3D597%26tbm%3Disch&ei=8r5fTqyyPIi4tweS2dmjCg

1.2.

HEMATOLOGIA

Es el estudio cientfico de la sangre y los tejidos que la conforman (mdula sea, ganglios linfticos, bazo, etc.), donde el hemograma o cuadro hemtico es una de las pruebas ms solicitas al laboratorio clnico. Por tal motivo el Laboratorio Clnico Hematolgico cuenta con tecnologa avanzada en esta prueba, al incorporar auto-analizadores de ltima generacin que le permiten a la comunidad mdica contar con nuevos parmetros, en particular el ancho de distribucin de los eritrocitos, hemoglobina reticulocitaria, el ancho de distribucin de hemoglobina y el recuento de reticulocitos, aspectos de mayor relevancia desde el punto de vista clnico, convirtindose en una herramienta de rutina que permite tener pruebas cada vez ms exactas, ms precisas a un costo razonable y, sobre todo, de mayor utilidad clnica.

1.3. Estos

PARAMETROS MEDIDOS POR LOS ANALIZADORES HEMATOLOGICOS instrumentos estudian la cantidad, concentracin, porcentaje relativo y

algunas otras caractersticas de las clulas sanguneas. Por eso se les llama habitualmente contadores. Algunos parmetros son medidos y otros son calculados a partir de los medidos. Los analizadores ms simples informan 8 parmetros y los ms sofisticados, ms de 20, algunos de los cuales estn listados en la Tabla 1. La caracterstica bsica que miden los contadores hematolgicos es la coincentracin de clulas, es decir la cantidad de clulas por unidad de volumen, usualmente, microlitros (l). Tambin se mide el tamao de las clulas. As es posible saber el volumen medio de los glbulos rojos o MCV (Volumen Medio Celular) y el volumen medio de las plaquetas MPV (Volumen Medio Plaquetario). Conociendo el volumen medio y la cantidad glbulos rojos se calcula el hematocrito

o Hct, que es la relacin del volumen celular total al volumen de la muestra. Expresa qu parte de una muestra de sangre, son clulas. Est determinado principalmente por los RBC (Globulos Rojos) porque son las clulas mayoritarias. Hct en % = (MCV en fl . RBC en millones ) / 10. Normalmente: 90 . 5 / 10 = 45

TABLA 1 PARMETROS BSICOS DETERMINADOS POR LOS ANALIZADORES HEMATOLGICOS

Nota: Todas estas cifras presentan variaciones segn sexo y edad.

FUENTE: Simini, Franco. Ingeniera Biomdica perspectivas desde el Uruguay 1 Ed. Central de impresiones. Montevideo Uruguay 2007. Pg. 227

2. PRINCIPIO DE FUNCIONAMIENTO DE LOS CONTADORES HEMATOLOGICOS 2.1. CONTADORES HEMATOLGICOS

No existe un mtodo nico para contar clulas, lo cual implica que hay en el mercado varios modelos de contadores hematolgicos y cada uno de ellos realiza su funcin de una manera determinada; aunque, como es lgico, los parmetros que miden y los resultados de sus mediciones s son los mismos. FIGURA 2. CONTADOR HEMATOLOGICO

FUENTE: http://www.lmnoccidente.cl/content/equipos.asp 2.2. QU DEBE HACER UN CONTADOR HEMATOLGICO?

Un contador hematolgico debe contar, como mnimo, la serie blanca (glbulos blancos) y la serie roja (glbulos rojos). Es decir, el total de rojos y el total de blancos, sin hacer completa distincin entre las poblaciones de clulas que componen cada una de las series. A esto se le llama CBC (Complete Blood Count). Aparte de esta cuenta, un contador hematolgico tambin debe proporcionarnos la cuenta de toda la serie blanca; es decir, diferenciacin entre los componentes de la poblacin blanca. Esto es lo que se llama Modo Diff (White Blood Differential Diferencial).

3. MTODOS DE MEDICION HEMATOLGICA A pesar de la cantidad de analizadores hemticos disponibles de fabricantes diferentes y con los distintos grados de sofisticacin y complejidad, para el funcionamiento se utilizan sobre todo dos metodos bsicos: la impedancia electrnica (resistencia) y la dispersin ptica. En el equipamiento hemtico actual con frecuencia se emplea la dispersin ptica, que utiliza luz lser y no lser.

FIGURA 3. PRINCIPIO DE IMPEDANCIA ELECTRONICA PARA EL RECUENTO CELULAR.

FUENTE: http://www.ifcc.org/div/pdf/trabajos/Automatizacion_del_hemograma_Nilda.pdf

1. Resistencia a CC: Detecta la variacin de resistencia a CC de un corto canal u orificio por el que circula una corriente constante, cuando pasan por l clulas individuales. 2. Citometra de flujo: Detecta las deflexiones de un haz de luz Lser cuando pasan clulas individuales frente al mismo. Trataremos ambos mtodos ms adelante. Para evaluar la capacidad de transporte de oxgeno es importante conocer la concentracin de Hemoglobina o Hgb. Esta se mide por fotometra de absorcin, a una nica longitud de onda cercana a 550 nm y se expresa en gramos por decilitro. Otros valores calculados, en relacin a la Hgb son la MCH y la MCHC.

TABLA 2 PARMETROS ADICIONALES DETERMINADOS POR LOS ANALIZADORES HEMATOLGICOS

FUENTE: Simini, Franco. Ingeniera Biomdica perspectivas desde el Uruguay 1 Ed. Central de impresiones. Montevideo Uruguay 2007. Pg. 228 La mayora de los parmetros adicionales (Tabla 2) resultan de clasificar los WBC (Globulos Blancos) segn sus caractersticas morfolgicas. Segn su tamao, es posible dividirlos solamente en tres grupos: neutrfilos, linfocitos y medios. Los medios agrupan un conjunto de clulas de tamao intermedio entre los neutrfilos y los linfocitos. Es la mejor clasificacin que se puede lograr con el mtodo de Resistencia a CC. Para completar la clasificacin es necesario examinar visualmente (por el operador) un frotis de sangre en un microscopio. En cambio, los instrumentos que analizan los WBC con Citometra de flujo estudian el tamao celular y su densidad. As, pueden discriminarlos en 5 grupos y no se requiere examen microscpico, salvo ante dudas de los resultados.

3.1. MTODO DE RESISTENCIA A CC Es el mtodo ms ampliamente utilizado y el de menor costo. Detecta la variacin de resistencia de un orificio inmerso en una solucin salina conductora, por el que circula una CC constante, al ser atravesado por clulas individuales. Cuando una clula (que no es conductora), pasa por el orificio, su volumen desplaza un volumen equivalente de solucin conductora, causando una cada de la conductividad del orificio o aumento de su resistencia a la CC. La variacin de resistencia es proporcional a la variacin del voltaje de salida de la fuente de corriente constante y proporcional al volumen celular. La Figura 1 ilustra el principio.

FIGURA 4 VARIACIN DE RESISTENCIA DE UN ORIFICIO INMERSO EN UNA SOLUCIN

FUENTE: Simini, Franco. Ingeniera Biomdica perspectivas desde el Uruguay 1 Ed. Central de impresiones. Montevideo Uruguay 2007. Pg. 229

3.1.1. Cmara de Conteo por Resistencia a CC La cmara de conteo est formada por dos espacios, A y B (Figura 5), llenos de una solucin salina conductora. Los espacios estn unidos por un pequeo orificio de 60 a 100 um de dimetro. La solucin contiene un volumen predeterminado exacto de

sangre, disuelto en agua con sal a una concentracin isotnica con respecto al liquido intracelular. De no ser as las clulas se hincharan o. El grado de disolucin es tal que estadsticamente sea difcil que por el orificio pasen dos clulas al mismo tiempo, aunque puede ocurrir. El dimetro del orificio es en relacin al dimetro de las mayores clulas que pasan por l, como el de un aro de basketball a una pelota de tenis. Hay un borne de una fuente de corriente constante en cada espacio. Entre los bornes circula una corriente constante que pasa por el orificio o abertura. La mayor parte de la resistencia elctrica est dada en el orificio. Cuando no pasan clulas la corriente permanece en un valor basal. Cuando pasan clulas la resistencia del orificio aumenta en proporcin al volumen celular y para mantener la corriente constante, la fuente eleva el voltaje de salida. Cada clula produce as un pulso de voltaje cuya amplitud es proporcional a su volumen. El nmero de pulsos de un rango de amplitudes corresponde a la cantidad de clulas de un tipo que pasaron. Mediante procesamiento de las seales, en forma analgica y digital, se separan los pulsos para clasificar y contar las clulas de cada tipo. Tpicamente un contador hematolgico clasifica los WBC, segn su volumen, en unos 500 tamaos distintos. Para ello define canales de tamaos en registros de un sector de RAM que se van incrementando durante el conteo, con cada clula que corresponde a cada tamao. Con el conjunto de canales se elabora un histograma de volumen vs. cantidad. Se hace lo mismo con los RBC/PLT. El histograma de RBC/ PLT (PLT = Plaquetas)se divide en dos grandes partes. Clulas con volmenes menores a 20fl son consideradas como PLTs y mayores de 36fl como RBCs.

FIGURA 5 CAMARA DE CONTEO POR RESISTENCIA

FUENTE: Simini, Franco. Ingeniera Biomdica perspectivas desde el Uruguay 1 Ed. Central de impresiones. Montevideo Uruguay 2007. Pg. 230 Dos clulas que pudieran coincidir al pasar por el orificio generan un pulso muy ancho y/o de excesiva amplitud. El procesamiento de seales lo reconoce y no lo cuenta como clula. Los contadores hematolgicos tienen dos de las cmaras descritas, una para contar WBCs y otra para contar RBCs y PLTs. Esto se hace as porque aproximadamente de los linfocitos tienen un tamao similar a los RBCs. 3.1.2. Diluciones Necesarias para Conteo por Resistencia a CC Para poder contar y clasificar clulas sanguneas por el mtodo de Resistencia de CC es necesario previamente, tratar y diluir la muestra de sangre en una forma apropiada. Diferentes equipos lo hacen en forma distinta, pero el proceso es similar. Describiremos aqu el de un instrumento tpico. El proceso es como sigue e ilustra la Figura 6 La muestra de sangre contiene EDTA para evitar la coagulacin. El instrumento aspira 135 l de sangre, de los que separa exactamente 28 l en un segmento de tubo en forma de asa. Los diluye agregndole 6000 l de una solucin (diluyente), isotnica con el interior celular. La dilucin 1:215 contiene RBCs, WBCs y PLTs. Para poder contar y medir el tamao de los WBCs hay que eliminar antes los RBCs. Esto se logra mediante el agregado de un agente ( lisgeno) que destruye las

membranas de los RBCs y PLTs pero no la de los WBCs. La dilucin en este punto o 1ra dilucin es de 1:246. 350 l de la misma pasan a travs de un orificio, hecho con Lser, en un rub. Al pasar, cada clula genera un pulso cuya amplitud es proporcional a su volumen. Al destruir las membranas de los RBCs, la hemoglobina que contiene se vierte a la solucin y se diluye en ella. As es posible medirla por fotometra. La fuente de luz y el fotodiodo en la Figura 6, indican la medida de hemoglobina. La va ptica de sta medicin pasa a travs de la cmara de WBC misma. De la dilucin 1:215 se tomaron 500 l, de los que exactamente 35 l fueron separados en un asa. A ellos se le agregan 6000 l de diluyente con lo que se logra una dilucin de 1:172 o 2da dilucin. Esta contiene RBCs, WBCs y PLTs y se va a utilizar para medir RBCs y PLTs. Los WBCs presentes pueden ignorarse, dado que su concentracin es unas 1000 veces menor que la de los RBCs y por su tamao, el instrumento no los confundir con PLTs. El tiempo de lectura en cada cmara es de 10 a 20 s, constantes en cada cmara y en cada instrumento. La capacidad de trabajo tpica de un contador hematolgico es de unas 60 muestras por hora.

FIGURA 6 DILUCIONES DE LA MUESTRA ANTES DE CONTAR SUS CLULAS POR RESISTENCIA

FUENTE: Simini, Franco. Ingeniera Biomdica perspectivas desde el Uruguay 1 Ed. Central de impresiones. Montevideo Uruguay 2007. Pg. 231

3.2. MTODO DE CITOMETRA DE FLUJO Mtodo utilizado para contar y clasificar los WBCs (Globulos Blancos) en 5 grupos. Este mtodo detecta el volumen celular y la densidad de las estructuras intracelulares.

FIGURA 7 CITOMETRIA DE FLUJO

FUENTE:
http://www.google.com.bo/imgres?imgurl=http://www.cnb.csic.es/~fotonica/Photonic_en/Rev iew/C_flujo001.GIF&imgrefurl=http://www.cnb.csic.es/~fotonica/Photonic_en/Review/citomet ria_de_flujo.htm

3.2.1. FUNDAMENTO DE FUNCIONAMIENTO

Un volumen predeterminado y exacto de solucin con clulas en suspensin pasan frente a la luz de un Lser semiconductor. Cuando cada clula individual pasa frente al haz de luz, ste se dispersa en varios ngulos. Diferentes instrumentos recogen la luz dispersada en dos o ms rangos de ngulos de inters. El receptor Analiza la luz dispersada en un ngulo bajo (1-6) y en un ngulo alto (8-20). La membrana celular causa dispersin en ngulo bajo y las estructuras intracelulares, ms densas, lo hacen en ngulo alto.

FIGURA 7 DISPERSION DE LUZ LASER

FUENTE: Simini, Franco. Ingeniera Biomdica perspectivas desde el Uruguay 1 Ed. Central de impresiones. Montevideo Uruguay 2007. Pg. 231 Como se observa en la figura, la dispersin de la luz Lser se da en ngulos bajos (izquierda) y ngulos altos (derecha )al incidir sobre una clula. 3.2.2. PREPARACIN DE LA MUESTRA Antes de aplicar el mtodo, la muestra de sangre debe ser preparada. Inicialmente es disuelta en una proporcin adecuada y luego tratada con un agente lisgeno para disolver los RBCs. La solucin es entonces dividida en dos partes, a cada una de las cuales se le aplica un reactivo diferente que causa un cambio morfolgico en las clulas. Un volumen predeterminado y exacto de cada una se har pasar separadamente por la celda de flujo. Para alinear las clulas de forma de que pasen en fila por el haz de luz se utiliza la tcnica de enfoque hidrodinmico. 3.2.2.1. Enfoque Hidrodinmico

En ste, la solucin con las clulas es inyectada en una celda de flujo (cmara cnica) rodeada de una vaina de lquido transparente, libre de partculas. La disposicin de las estructuras de la celda, la relacin de las presiones y de viscosidades de los lquidos, permiten lograr el alineamiento de las clulas.

FIGURA 8 CAMARA DIDRODINMICA

FUENTE: http://web.udl.es/dept/medicina/sedaicmf/sedai/camara.gif De cada solucin, la informacin de ngulo bajo (representando tamao celular) y la de ngulo alto (representando densidad de estructuras intracelulares) son combinadas en un dispersograma (Scattergram). Cada punto corresponde a una clula y su posicin, a sus caractersticas. Cada conglomerado de puntos corresponde entonces a una familia celular. FIGURA 8 DISPERSOGRAMAS NG. ALTO VS NG. BAJO

FUENTE: Simini, Franco. Ingeniera Biomdica perspectivas desde el Uruguay 1 Ed. Central de impresiones. Montevideo Uruguay 2007. Pg. 234 4. COMPONENETES DE UN CONTADOR HEMATOLOGICO Los contadores hematologicos basicamente contan de los siguientes componentes: Aspirador Diluidor Disopositivo de medida Transductor Discriminador Lector Impresor.

FIGURA 9: COMPONENTES DE UN CONTADOR HEMATOLOGICOS

FUENTE:
http://books.google.com.bo/books?id=4OQXmnBnjH8C&pg=PA299&lpg=PA299&dq=analizador es+hematologico&source=bl&ots=5J1O0lymMw&sig=VMdlomDDySB3YJhUlT774vHzokA&hl=e s&ei=_dNjTq64Os6btwex2KyXCg&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=12&ved=0CGMQ6 AEwCw#v=onepage&q&f=true

4.1. Aspirador Diluidor El aspirador diluidor es el componente del contador hematologico que toma el especimen y lo diluye para reducir la concentracion de las celulas sanguineas.

4.2. Dispositivo de medida Es la cmara donde se cuentan realmente las clulas sanguneas (cmara de medida o de lectura). Su diseo depende del mtodo de recuento utilizado por cada modelo de contador. Puede basarse en un sistema de deteccin celular por medida de la impedancia o en sistemas pticos de deteccin celular. En los contadores electrnicos ms avanzados, una vlvula de cermica reparte la muestra hacia distintas cmaras de medida. Cada cmara de medida est especialmente diseada para el recuento de un tipo celular (glbulos rojos, leucocito s o plaquetas) o para ]a determinacin de hemoglobina. 4.3. Transductor Transforma las seales, procedentes del dispositivo de medida, en impulsos elctricos. Suele ser un fotomultiplicador. 4.4. Discriminador Diferencia los impulsos elctricos generados por cada uno de los tipos de clulas sanguneas. 4.5. Lector - Impresor Recoge los datos obtenidos, los procesa y los proyecta en una pantalla. Imprime en papel los resultados conseguidos. 5. BIBLIOGRAFA SIMINI, FRANCO. Ingeniera Biomdica, perspectivas desde el Uruguay 1 Ed. Central de impresiones. Montevideo Uruguay 2007.

JOS MANUEL GONZLEZ DE BUITRAGO. Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico 2da. Ed. Elsevier Espaa, 2004

http://www.citometriadeflujo.com/HTML/manual.html http://www.revistaciencias.com/publicaciones/EEEFuFVpEViYvxbfZt.php http://web.udl.es/dept/medicina/sedaicmf/sedai/camara.gif http://www.scribd.com/doc/52183721/Contadores-Hematologicos http://www.ifcc.org/div/pdf/trabajos/Automatizacion_del_hemograma_Nilda.pdf